İlköğretim İnsan Fibroblastlar türetilmesi için Cilt Punch Biyopsi Eksplantın Kültür

Merhaba.Cilt Biyopsi İşleme video eğitimine hoş geldiniz. Gerekli Malzemeleri doku kültürü başlığına yerleştirerek başlayın. Kaputa giren tüm nesnelere %70 etanol püskürtülmeli ve silinmeli, PI numarası, tarih, baş harfler ve ortam türü ile her duvara bir mililitre %0.1 jelatin ile bir plaka etiketlenmeli, tabanın jelatin ile kaplandığından emin olmak için plakayı döndürün.

Kullanmadan önce Plakayı bir saat bekletin. İlk adım, biyopsinin tüpten kesme kabına aktarılmasıdır. Bir kesme kabı, biyopsinin diseke edileceği 10 santimetrelik bir Petri plakasının kapağıdır.

Kesme kabının ortasına 1,5 mililitre DMEM %20 FBS ekleyin. Medyayı merkezden yayın. Burada cilt biyopsisini görebilirsiniz.

Bir sonraki adım, biyopsiyi tüpten kesme kabının ortasına aktarmaktır. Steril forseps kullanarak cilt biyopsi parçasını merkeze yerleştirin. Bunu yaparken dikkatli olun, steriliteyi korumak esastır.

Kesme kabını kapatın ve laminer akış başlığındaki diseksiyon mikroskobuna aktarın. Bir sonraki adım, biyopsiyi 12 ila 18 eşit büyüklükte parçaya ayırmaktır. Neşterleri dikkatli kullanın.

Hazır olduğunuzda biyopsiyi ortaya çıkarın. Biyopsiyi sabitlemek için bir neşter kullanın. İkinci neşteri tek yönlü dilimleme hareketiyle yukarı ve aşağı hareket ettirin.

Biyopsiyi yarıya bölün. 12 ila 18 parça elde edene kadar her parçayı ikiye bölmeye devam edin. Her bir biyopsi parçasının ideal boyutu, inverted mikroskobun sol oküler objektifinde mikrometrenin yaklaşık %70 ila 80'ini kaplar.

Mikrometre Sayısının %50'sinden daha küçük parçalardan kaçının. 12 ila 18 parça olduğundan emin olmak için. Bir sonraki adım doku kültürü başlığının içinde yapılacaktır.

Kesme kabını örtün ve tekrar dokuya aktarın. Altı kuyulu plakadan kültür davlumbazı aspire jelatini, her birine 700 mikrolitre DMEM% 20 FBS ekleyin. Medyayı kabın yan duvarına karşı eklemek iyi bir uygulamadır.

Kuyunun ince bir ortam filmi ile kaplandığından emin olun. Forseps kullanmak, altılı duvarın her birine iki ila üç biyopsi parçası oynar. Kuyu plakası.

Parçaların duvarın altına yapışmasını sağlamak için bir dokunma veya kaydırma hareketi kullanın. Forsepsten sıkışmış biyopsi parçalarını çıkarmak için bir neşter kullanılabilir. Bu plaka üzerinde büyüyecek hücreler sıfır geçişinde olacaktır.

Plakanın sonunda böyle görünmesi gerekir. İşte ters mikroskop altındaki parçalardan biri. Bu, birinci gün yapılan cilt biyopsisidir.

Genellikle bir ila üç gün içinde ek görürsünüz. Keratinositler bir hafta içinde ortaya çıkmaya başlar. Fibroblastlar iki hafta içinde görülebilir.

Bazen keratinositler gözlenmez. Genellikle fibroblastların iltifat haline gelmesi ve paketlenmeye hazır hale gelmesi üç hafta sürer.