Name: Drosophila melanogaster Kondisyon Eğitim Protokolü ve Boyuna Performans Tahliller (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Öğrenin Drosophila melanogaster için dayanıklılık eğitim protokolü ve tırmanma performansı analizleri. Bu yöntem genetik manipülasyon çalışmalarında egzersizin hareketlilik üzerindeki etkilerini değerlendirmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma NHLBI gelen RW için bir hibe ile desteklenmiştir.

1. Power Tower Kurulumu ve İşletilmesi <ol><li> Güç Tower bir tabloya kelepçelenir kontrplak bir dikdörtgen parça üzerine yerleştirilir. Grainger A 4.5 rpm vites motor dört 2 &quot;x6&quot; panoları ve bir ¾ inç kontrplak levha üzerine oturmaktadır. Motor, bir AC / DC hız kontrol, sigorta ve bir açma-kapama düğmesi / bir kavşaktan kutuya birlikte kablolu. </li><li> Motoru soğutmak için çapında bir delik 3 inç kontrplak dikey ½ inç parça halinde kesilir. Bir tarafta, bir 3-inch fan kontrplak takılır, ve diğer yandan, bir 3-inch çaplı metal silindiri monte edilir. </li><li> Ucuna monte edilmiş bir silindir ile bir ölçüye dönen kol motora bağlanmıştır. Motor ve ekli kolu bir kapı menteşesi ile kontrplak bağlı bir bükük ¾ inç kare tüp stokunun bir tarafı bastırarak, saat yönünde çevirin. Bir tekerlek bu directl olduğu platformda karşı rulo izin vermek için bir platform altında tüp stok üst tarafındadırYukarıda y. </li><li> Kol tüpü stoku bir ucunu iter ve iki düzey platformu (Şekil 1D) yükselterek, diğer ucunu kaldırır. Kol silindir tüp stok temizler zaman kol (Şekil 1F) geri platformu bırakarak, başlangıç ​​pozisyonuna geri dönmek için izin verir. </li><li> Platformları kontrplak üstüne yerleştirilir ve vida gözleri üzerine kanca olan bungee kabloları tarafından teminat altına alınmıştır raflar oluşur. Platformları parantez ile kontrplak bağlı olan çekmece sürgü boyunca yukarı ve aşağı doğru kaydırın. </li><li> Flakon raflar yerleştirilir ve bungee kabloları ile yerinde tutulur bir kare ızgara ekran yardımıyla sabitlenir. </li><li> Bir Strafor yastık damla şok kırmak için platform altına yerleştirilir. </li><li> Motor gücü tam bir dönme süresi 15 saniyeden uzun olacak şekilde ayarlanır. </li></ol> 2. Egzersiz protokolü <ol><li> Sinekler% 50 nem ve 12 saatlik aydınlık / karanlık döngüsünde ile bir 25 ° C inkübatöründe içinde muhafaza edilir. Both egzersiz eğitimi ve egzersiz kapasitesinin değerlendirilmesi 25 ° C sıcaklık kontrollü odada yapılmaktadır. </li><li> Sinekler birbirinden 1-2 gün içinde toplandı ve yaş-eşleştirilir. 240 sinekler minimum dayanıklılık ve negatif geotaxis (tırmanma) yeteneği, egzersiz eğitiminin etkilerini yansıtan iki fizyolojik göstergeleri boyuna izlenmesi için gereklidir. Boyuna izleme kohort arasındaki varyasyonun karıştırıcı etkisi olmaksızın, her bir grup için başlangıç ​​değerlerine göre bağlı değişim izolasyonu sağlar. Gerektiği gibi ek deneyler için sinekler alınmalıdır. </li><li> Toplanmasından sonra, sineklerin icra edilmeyecektir egzersiz rejimi ve 120 kontrol sinek, maruz kalacağı 120 deneysel sinekler, ayrılır. Sinekler, her uçar 20 şişe içinde depolanır. Deneysel sineklerin şişeleri firma selüloz asetat Flugs ve kontrol flakon (unexercised) ile takıldığını sinekler yumuşak bir sünger tapalar, w ile takılıhich Power Tower sırasında sinekler hareketsiz aşağı itilmiş olabilir. Kendi adaptif boyutu flakon altına yakın kolayca yerleştirilmesini sağlar çünkü Sünger immobilizasyon için kullanılır. Yumuşak bir sünger malzeme de daha sağlam Flugs kaynaklanan yaralanmaları azaltır. </li><li> Power Tower sinekler depolanır ve boş şişeler içinde icra edildiği sinekler daha yumuşak bir iniş ile sağlamaktadır gıda, 5 mL içeren flakon icra edilir. Bir eğitim oturumu sırasında çoğu zaman yemek sinekler gözlemlemek olmasa da gıda tipik olarak,% 10 sukroz,% 10 maya, su ve% 2 agar oluşmaktadır. Boş şişeleri eğitim sırasında kullanılması halinde, rahatsızlıklar yaşayabilirsiniz sinekler yüzdesi giderek artmaktadır. </li><li> Güç Tower 25 &#39;de muhafaza edilmektedir sıcaklık kontrollü bir odaya ° C&#39;de işletilmektedir Deneysel sinekler Power Tower yerleştirilir ve tırmanmak için yapılır. Kontrol sinekler de Power Tower yerleştirilir, ancak sünger stoper v içine doğru itilirsinekler üzerinde ial yaklaşık 3 mm hareketi sınırlamak amacıyla. Bu grup egzersiz ilgisiz Power Tower herhangi bir etkileri için bir kontrol olarak hizmet vermektedir. Bazı oda hala manevra kabiliyeti bu sinekler için var olmasına karşın, sürekli olarak bu şartlar altında sinekler çok az çalıştırmak ve egzersiz fizyolojik bir tepki göstermek değil gözlemledim. Ayrıca tüm azından Güç kulesinin üstüne değildir ek bir kontrol grubu dahil edilmesi arzu edilebilir. </li><li> Sinekler rampalı bir programı (Şekil 2) kullanılarak, her hafta beş gün üst üste icra edilir. Haftada bir sırasında sinekler seans başına 2.5 saat 2 saat oturum başına, bir hafta iki icra edildiği ve seans başına 3 saat boyunca haftada üç. Diğer rejimler test edilmiş olsa da, bu protokol genotipler arasında ve farklı koşullar altında tutarlı sonuçlar üretir. Bu protokol, ancak, belirli bir deneme uygun olabilecek olası varyasyonları geniş bir dizi tabidir. </li></ol>3. Egzersiz ve lokomotor Yorgunluk <ol><li> Dayanıklılık egzersiz sırasında yorgunluk zaman belirli bir kohort egzersiz kapasitesini onaylamak ve / veya ölçmek için yararlı fizyolojik bir göstergesidir. Yorulma deneyleri eğitimi Deneylerde kullanılan edilecektir kohortlarında boylamasına gerçekleştirilebilir. Tahliller eğitimi protokolü ya da her ikisinin tamamlanmasından sonra, eğitim öncesinde ya da gerçekleştirilebilir. Eğitim sırasında artan ilerleme grafik isteniyorsa diğer ara zaman noktaları eklenebilir. Yorulma assay ayrıca, diyet değiştirme (Şekil 3B) olarak eğitimi protokolü, başka tedavilere cevap olarak egzersiz dayanıklılık ölçmek için kullanılabilir. </li><li> Eğitim yer alıyor değilken Yorulma deneyleri bir günde yapılmalıdır. Deney ve kontrol Hem sineklerin 20 her flakonlarda Power Tower yerleştirilir ve yorgun kadar tırmanmaya yapılır. Yorgunluk davranış tırmanma ile negatif geotaxis uyarıcıya yanıt vermek için başarısızlık olarak kabul edilmektedir. Yorgunluk behavior görsel gözlem tarafından atılırsa. </li><li> 5 veya daha az sinek arka arkaya dört damla için daha yüksek 2 inç tırmanmak mümkün olduğunda sineklerin bir şişe &quot;yorgun&quot; olarak kabul edilir. Hala çalışırken yorgunluk şişeleri Güç Tower kaldırılır ve çıkarılması süresi kaydedilmektedir. Kaldırma Times iç içe geçmiş bir histogram olarak, ya da bir &quot;time-to-başarısızlık&quot; komplo olarak çizilebilir. Bir &quot;süre-başarısızlık&quot; komplo Şekil 3B görüldüğü gibi verilerin bir örneği çizilmiştir. </li><li> Flakon 10 saat en fazla 10 dakika aralıklarla (Şekil 3B) izlenmektedir. </li></ol> 4. Egzersiz, Yaş ve lokomotor Yetenek <ol><li> Bu eğitim protokolü bağlı çalışan davranışı dayandığından, eğitim etkileri miktarlarının için birincil test uzunlamasına eğitim sırasında hızı ortalama çalışan değişimi ölçmektir. Eğitim sırasında, icra ve unexercised sineklerin 120-sinek kohortlarında olumsuz geotaxis uyarana tepki için günlük test edilir. HALKA teknik dGargano ve ark escribed. (2005) sineklerin tırmanma yeteneği 12 ölçmek için kullanılır. Kısaca, bu tekniğin olumsuz geotaxis indüksiyonu sonrası tanımlanmış bir süre boyunca uçan bir şişe ile tırmandı ortalama yükseklik ölçer. Tanımlanmış bir süre boyunca yükseldi yüksekliği hızı tırmanma eşdeğerdir. Ölçümler günün çalıştırdıktan sonra yorgunluktan komplikasyonları önlemek amacıyla günlük antrenman için makine üzerinde sinekler yerleştirmeden önce yapılır. </li><li> Standart protokolde, sinekler üç hafta olmak üzere toplam icra edildiği ve tırmanma yeteneği beş hafta olmak üzere toplam incelenir: (Şekil 2) egzersiz kesilmesinden sonra egzersiz eğitimi ve iki hafta boyunca üç hafta. Bu deneyci mobilite üzerine egzersizin etkisi programı kesilmesinden sonra devam edip grafik sağlar. </li><li> Her bir grupta günlük HALKA performansı dört fotoğraf yeteneği tırmanma analizi için kullanılmıştır. Altı şişeleri her fotoğraf dahil edilir. Negatif geotaxis uyarılan, ve bir kullananzamanlı kamera, fotoğraf saniye belirli sayıda ardından çekilir. Bu deneysel koşullarına bağlı olarak değiştirilebilir olmakla beraber, tipik olarak iki saniye kullanımı. Her fotoğraf için, her şişe eşit yükseklikte dört parçaya bölünür ve görüntü işleme yazılımı her anında onu ayrılan süre içinde ulaştı kadranda dayalı bir puan atamak için kullanılır. Üst kadranda, 4 puan alabilmeniz için tırmanmaya Sinekler sonraki en yüksek kadranda uçar 3 almak, bir 2 alırsınız en yüksek ikinci kadranda uçar ve en düşük kadranda sinekler 1 alırsınız. Tüm alt kısmında kapalı tırmanmaya değil Sineklerin 0 puan verilir. </li><li> Verilen bir fotoğrafını her şişe için, bir &quot;tırmanma indisi&quot; ki şişe içinde hepsi sineklerin skorlar ortalama tarafından üretilir. Dört fotoğraflarından Her flakon Kullanıcı endeksleri o gün için son bir tırmanma indeks vermek için ortalaması alınır. </li><li> Tüm negatif geotaxis deneyler uzunlamasına yapılmaktadır. Sonuçlar normalize t vardıryeteneği tırmanış sırasında kohort varyasyon etkisini azaltmak ve egzersiz sonucu bir kohort Kullanıcı tırmanma kapasitesi göreli boylamasına değişikliği vurgulamak amacıyla ilk &quot;egzersiz öncesi&quot; puan o. İlk puanı ilk üç gün tırmanış endeksleri ortalaması ile belirlenir ve 1 değeri atanır. Daha sonraki çalışmalarda daha sonra başlangıç ​​endeksi bir yüzdesi olarak ifade edilir. </li></ol> 5.. Temsilcisi Sonuçlar Yabani tip sinekler gibi yaşı beş haftalık (Şekil 3A) arasında uzunlamasına HALKA tayinlerde yansıyan, eğitim bittikten sonra devam ederse tırmanma yeteneği bir azalma yaşa bağlı azalma olan bir dayanıklılık protokolü yanıt. Negatif geotaxis Bu gecikmiş düşüş yabani tip egzersiz yanıt normal meydana emin olmak için, pozitif kontrol olarak hizmet verebilir standart bir fenotipik bir yanıttır. Bu, verilerin bir dizi örnek olarak sunulmuştur nasıl Güç T tarafından egzersiz indüksiyonuOwer programı bir davranış giriş olarak kullanılabilir. Bu etkiyi modüle çeşitli genetik ve çevresel faktörlerin yeteneği daha sonra değerlendirilebilir. Bunun tersine, aynı zamanda, çeşitli güç Tower deney tasarımı bir çıkış olarak kullanılabilir. Örneğin, genotipine, diyet, veya diğer koşullara çeşitlendirilebilir. Sonra, egzersiz fizyolojisi bu farklılıkların etkisi Power Tower kullanılarak test edilebilir. Burada, bu yaklaşımın bir örneğini gösterir. Diyetlerine sakaroz değişen bir yüzde ile uçar artan dayanıklılık kapasitesi (Şekil 3B) ile korele yorgunluk, artan sakkaroz içeriğe kez test edildiğinde. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3786/3786fig1.jpg" /> Şekil 1.. Power Tower İşletilmesi. Bu bükük kare tüp ile temas kadar bağlı rulo ile (AC) motorlu bükülmüş kol saat yönünde dönmektedir. (D, E) kolu bükük kare tüp iter<html> , Asansör sinek şişeleri ile dolu olduğu platformda neden olur. (F) kol gibi platformu sinekler şişenin dibine dönmek için zorlayarak, geri düşmek için izin verilen tüp temizler. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3786/3786fig2.jpg" /> Şekil 2. Egzersiz Protokolü önerdi. Eğitim protokolü tabi uçar giderek 30 dakika her hafta ilk 2 saat arasında egzersiz süresi artar üç hafta süren rampalı rejimi altında her hafta beş gün için egzersiz yapılır. Standart analizler öncesi yorgunluk testleri içerir ve hafta ile 5. hafta 1 egzersiz programı ve HALKA deneyleri takip. Tüm testler negatif kontrol olarak unexercised sineklerin sayısı eşit iki kez yapılmaktadır. Araştırmacılar tarafından belirlendiği şekilde, çeşitli fizyolojik veya biyokimyasal yapılabilir. 3786fig3.jpg &quot;/&gt; Şekil 3. Dayanıklılık egzersiz hareketlilik birden yönlerini değiştirir. (A) HALKA deneyleri erkek Y 1 W 67C23 kohortlarında tek bir çift de çağlar boyunca uzunlamasına yapılmıştır. Yaştaki, genetik özdeş icra ve unexercised kontrolü sinekler ortalama tırmanışı hız için günlük ölçüldü. Sonuçlar ölçüm ilk üç günü boyunca ortalama tırmanma yüksekliği normalize bir tırmanma endeksi olarak ifade edilir. Egzersiz eğitilmiş sinekler yaş (2-yönlü ANOVA, p &lt;0.005) arasında yaştaki unexercised kardeşleri ile karşılaştırıldığında olumsuz geotaxis yeteneğinde bir azalma yaşa bağlı düşüş gösterdi. (B) Yorgunluk Testler 8 saat boyunca yürütülen yaştaki kadın Canton S sinekler yorgunluk (Log-rank, p &lt;0.0001) zamanında diyet sakaroz içeriğinin bir etkisi gösterilememiştir. Deney öncesinde, sinekler% 10 ağırlık / hacim maya konsantrasyonu ve değişen bir yüzde ile, bir maya / sukroz / agar diyetle beslendidiyet sakaroz. 20 sinekler her beş şişe Her diyet için test edildi. Grafik hala belirli bir zaman noktasında çalışan beş veya daha fazla sinekler kaç şişe görüntüler. Bu sonuçlar en az beş sineklerin olumsuz geotaxis uyaranlara cevap vermeye devam zaman bir nokta olarak tanımlanan bir flakon için &quot;başarısız&quot; bir yaşam (veya başarısızlık zamanı) eğrisi gibi istatistiksel ve grafiksel olarak tedavi edilebilir. Birçok olası çalışma tasarımları ve istatistiksel tedaviler yapılabilir ve veri işleme ve ölçüm bireysel amaçlar uyacak şekilde özel gerektiğini unutmayın.

<ol><li>Wild, S., Roglic, G., Green, A., Sicree, R., King, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Prevalence+of+Diabetes%3A+Estimates+for+the+year+2000+and+projections+for+2030%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Global Prevalence of Diabetes: Estimates for the year 2000 and projections for 2030.</a> Diabetes Care. 25, 1047-1053 (2004).</li>
<li>Flegal, K. M., Carroll, M. D., Ogden, L. C., Johnson, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+and+Trends+in+Obesity+Among+US+Adults%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Prevalence and Trends in Obesity Among US Adults.</a> JAMA. 288, 1723-1727 (1999).</li>
<li>Hubert, H. B., Feinleib, M., McNamar, P. M., Castelli, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity+as+an+Independent+Risk+Factor+for+Cardiovascular+Disease%3A+A+26-year+Follow-up+of+Participants+in+the+Framingham+Heart+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Obesity as an Independent Risk Factor for Cardiovascular Disease: A 26-year Follow-up of Participants in the Framingham Heart Study.</a> Circulation. 67, 698-977 (1983).</li>
<li>Ross, R., Dagnone, D., Jones, P. J. H., Smith, H., Paddags, A., Hudson, R., Janssen, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+in+obesity+and+related+comorbid+conditions+after+diet-induced+weight+loss+or+exercise-induced+weight+loss+in+med+%C3%A2%E2%82%AC%E2%80%9C+A+randomized%2C+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Reduction in obesity and related comorbid conditions after diet-induced weight loss or exercise-induced weight loss in med â€“ A randomized, controlled trial.</a> Annals of Internal Medicine. 133, 92-103 (2000).</li>
<li>Goodyea, L. J., Kahn, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise+Glucose+Transport%2C+and+Insulin+Sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Exercise Glucose Transport, and Insulin Sensitivity.</a> Annual Review of Medicine. 49, 235-261 (1998).</li>
<li>Linke, A., Adams, V., Schulze, P. D., Erbs, S., Gielen, S., Fiehn, E., Mobius-Winkler, S., Schubert, A., Schuler, G., Hambrecht, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidative+Effects+of+Exercise+Training+in+Patients+With+Chronic+Heart+Failure%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Antioxidative Effects of Exercise Training in Patients With Chronic Heart Failure.</a> Circulation. 111, 1763-1763 (2005).</li>
<li>Kemi, O. J., Ellingsen, O., Smith, G. L., Wisloff, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise-induced+changes+in+calcium+handling+in+left+ventricular+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioscience%22%5BJournal%5D)">Exercise-induced changes in calcium handling in left ventricular cardiomyocytes.</a> Frontiers in Bioscience. 13, 356-368 (2008).</li>
<li>Wang, H., Hiatt, W. R., Barstow, T. J., Brass, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationships+between+muscle+mitochondrial+enzyme+activity+and+oxidative+capacity+in+man%3A+alterations+with+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Relationships between muscle mitochondrial enzyme activity and oxidative capacity in man: alterations with disease.</a> Eur. J. Appl. Physiol. 80, 22-27 (1999).</li>
<li>Wu, Z., Puigserver, P., Andersson, U., Zhang, C., Adelmant, G., Mootha, V., Troy, A., Cinti, S., Lowell, B., Scarpulla, R. C., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+Controlling+Mitochondrial+Biogenesis+and+Respiration+through+the+Thermogenic+Coactivator+PGC-1%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mechanisms Controlling Mitochondrial Biogenesis and Respiration through the Thermogenic Coactivator PGC-1.</a> Cell. 98, 115-124 (1999).</li>
<li>Goto, M., Terada, S., Kato, M., Katoh, M., Yokozeki, T., Tabata, I., Shimokawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cDNA+Cloning+and+mRNA+Analysis+of+PGC-1+in+Epirtrochlearis+Muscle+in+Swimming-Exercised+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">cDNA Cloning and mRNA Analysis of PGC-1 in Epirtrochlearis Muscle in Swimming-Exercised Rats.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. , 274-350 (2000).</li>
<li>Piazza, N., Gosangi, B., Devilla, S., Arking, R., Wessells, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise-Training+in+Young+Drosophila+melanogaster+Reduces+Age-Related+Decline+in+Mobility+and+Cardiac+Performance%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Exercise-Training in Young Drosophila melanogaster Reduces Age-Related Decline in Mobility and Cardiac Performance.</a> PLoS ONE. 4, e5886-e5886 (2009).</li>
<li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+iterative+negative+geotaxis+%28RING%29%3A+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Exp Gerontol. 40, 386-395 (2005).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Burada sunulan genel bir protokol sonrasında antrenmanlara fizyolojik etkileri belgeleyen başarılı olmuştur. Ancak, bu protokolde çeşitli alanlarda, özellikle deneysel ihtiyaçlarınıza göre değişiklik tabidir. Örneğin, nöbetleri ve eğitim ve sayıda uzunluğu potansiyel programı daha az ya da çok zor olarak istenen olmak üzere farklı şekillerde olabilir. Negatif geotaxis yeteneği ölçüldüğü kabın yüksekliği belgelenmelidir iyileştirilmesi için kullanılabilir alanını artırmak üzere değiştirilebilir. Hız tırmanma kantitatif otomasyonunu çeşitli yöntemler uygulanabilir. Prensip olarak, arka plan sinek ayırt yeteneğine sahip herhangi bir yazılım programı veri toplama işlemi hızlandırmak için kullanılabilir. Protokolünün bazı yönleri ise, büyük bir dikkatle sadece modifiye edilmelidir. Örneğin, ön deneyler kuvvetli haftada kalanı en az bir gün daha Göstrm kolaylaştırmak için eğilimi göstermektediramansız günlük egzersiz daha ovement. Buna ek olarak, sirkadiyen ritimler ve sıcaklık soğukkanlıdırlar hayvanların hareketleri etkiler bilinmektedir. Eğitim gerçekleşir o günün zaman sirkadiyen ritim karıştırıcı etkileri olasılığını önlemek için, çeşitli olabilir, ama her zaman karşılaştırma altında belli gruplar içinde tutarlı olmalıdır. Sıcaklık kontrolü de önemlidir ve biz ev egzersiz donanımları için sabit sıcaklıkta özel bir oda öneririz. Son olarak, erkeklerde ve kadınlarda egzersiz kapasitesi verimlilik ve cinsiyet farklılıkları karıştırıcı etkilerin önlenmesi için potansiyel olarak, ayrı ayrı ve yetiştirilen ölçülmelidir. Bu metodoloji Potansiyel uygulamaları yalnızca araştırmacı hayal gücü ile sınırlıdır. Ön çalışma olarak, üç geniş uygulamalarda bu yöntem kullanılmaktadır adres: <ol><li> Çağlar boyunca vahşi tip biyoloji çeşitli yönlerine ilişkin dayanıklılık egzersiz etkisini ölçmek için. </li><li> TBelirli mutant fenotipleri dayanıklılık egzersiz etkisini ölçmek o. </li><li> Egzersizin yararları yürütmek için gerekli olan genetik faktörler için taranması için </li></ol> Bu uygulamaların her biri belirli bir olasılıklar çeşitli kapsar. Bizim ön tecrübeye dayanarak, mutant fenotipleri bu diyete göre değişir kadar egzersiz düzeyi ile değişebilir eğilimindedir. Daha iyi bir diyet, egzersiz fizyolojisi ve yaşlanma arasındaki ilişkiyi anlamak için omurgasız modellerin kullanımı belki de bu protokolün en önemli genel bir uygulamadır.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Dayton Redüktörlü </td><td> Grainger </td><td> 1LRA6A </td><td></td></tr><tr><td> Raco Elektrik Kutusu </td><td> Grainger </td><td> 5A052 </td><td></td></tr><tr><td> Raco Kapak </td><td> Grainger </td><td> 5A053 </td><td></td></tr><tr><td> Cooper Bussmann Sigorta </td><td> Grainger </td><td> 6F043 </td><td></td></tr><tr><td> Cooper Bussmann Sigorta Tutucu </td><td> Grainger </td><td> 1DD33 </td><td></td></tr><tr><td> Carling Teknolojileri Anahtarı </td><td> Grainger </td><td> 2X464 </td><td></td></tr><tr><td> Dayton Kontrol, AC / DC Hız </td><td> Grainger </td><td> 4X796 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> Dar Plastik şişeler için Flugs </td><td> Genesee Bilimsel </td><td> 49-102 </td><td></td></tr></tbody></table>

drosophila melanogaster kondisyon eğitim protokolü ve boyuna performans tahliller

Endurance Training Protocol and Longitudinal Performance Assays for Drosophila melanogaster

Modern tıp araştırmacıları karşılaştığı en önemli sorunlardan biri, diyabet ve 1-3 kardiyovasküler hastalık gibi ilişkili bozukluklarda sonucu artış, obezite kabaran seviyeleridir. Bu ilişkili sağlık sorunlarının bir araştırma önemli bir konu faydalı bir müdahale olarak dayanıklılık egzersiz rolü kapsar. Egzersiz, aşırı vücut yağ 4 azalma dahil olmak üzere birçok faydalı sonuçlar, pahalı olmayan, non-invazif girişim olan anti-inflamatuar ve antioksidan yanıtları 6, 7 ve kardiyomiyositler geliştirilmiş kasılma kapasitesini arttırmış, iskelet kası 5 insülin duyarlılığı arttı. Düşük yoğunluklu egzersiz önemli bir ara 9,10 olarak transkripsiyonel koaktivatör PGC1-α ile, insanlarda, farelerde ve 8 mitokondriyal aktivitesi ve biyogenezi arttırdığı bilinmektedir. Despite pek çok önemli yaşa bağlı hastalıklarla mücadele için bir araç olarak egzersiz önemini, geniş uzunlamasına genetik çalışmalar kısa ömürlü bir genetik modeli türleri için bir dayanıklılık antrenmanı protokol eksikliği engellemektedir edilmiştir. Birlikte ömrünün kısa ve ucuz bakım Drosophila ile kullanılabilir genetik araçları, çeşitli, bu genetik mekanizmalar daha fazla çalışma için cazip bir model haline getiriyor. Bu göz önüne aldığımızda biz büyük ölçekli Drosophila melanogaster 11 egzersiz eğitimi için Power Tower olarak bilinen yeni bir cihaz, geliştirdik. Power Tower tekrar tekrar hızlı bir tırmanma ikna etmek için sinekler &#39;içgüdüsel olumsuz geotaxis davranışı kullanır. Her zaman makinesi asansörleri, keser, sineklerin platformu, sinekler tırmanmaya indüklenir. Sinekler gibi uzun makine çalıştırma veya onlar da cevap yorgun olana kadar olduğu gibi yanıt vermeye devam. Böylece, araştırmacı s sağlamak için bu makineyi kullanabiliryaştaki ve genetik olarak özdeş sinekler büyük sayılardaki imultaneous eğitim. Ayrıca, eğitim sırasında sinek kohortlarında boyuna ilerlemeyi izlemek için yararlı ilgili deneyleri açıklar.

Biz, önemli bir genetik modeli türleri için ilk dayanıklılık eğitimi protokolü açıklamak<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Ve mobilite aşağıdaki eğitim gelişmeler grafik birkaç testleri özetlemektedir.

Drosophila melanogaster Kondisyon Eğitim Protokolü ve Boyuna Performans Tahliller

Modern tıp araştırmacılarının karşı karşıya olduğu en acil sorunlardan biri, beraberindeki ilişkili bozukluklardaki artışla birlikte, obezite seviyelerinin hızla yükselmesidir...

Aşağıdaki deneyin amacı, yeni bir dayanıklılık egzersiz programı kullanarak Dsof ve Melanogaster'ı eğitmek ve egzersiz eğitiminin etkilerini değerlendirmektir. Bu işlem, sineklerin içsel tırmanma tepkisini tekrarlı olarak aktive ederek onlara bir antrenman seansı yaptıran ve birkaç sinek tüpünü art arda kaldırıp düşüren otomatik bir cihaz kullanılarak gerçekleştirilir. Sinekler, üç haftalık bir eğitim süreci boyunca, günde iki ila üç saat arasında değişen kademeli bir programla eğitilir.Ardından, egzersizin etkilerini ölçmek amacıyla sinekler çeşitli davranışsal testlere tabi tutulur. Sonuçlar, hızla tetiklenen negatif geotaksi veya halka testi ile ölçüldüğünde, egzersiz yapan sineklerin daha hızlı tırmandığını göstermektedir. Bu tekniğin, diğer hayvanlarda dayanıklılık eğitimi gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, drosophila genetiğinin manipülasyonu için mevcut olan kapsamlı araç koleksiyonudur.Dayanıklılık egzersizi çalışmasında, bu yönteme dair ilk fikri birçok tekli negatif geotaksi deneyi yürütürken edindik. Sineklerin ne kadar süre tırmanmaya devam edebileceğini ve bu yolla onlara dayanıklılık eğitimi verip veremeyeceğimizi merak ettik. Güç kulesi, bir masaya sabitlenmiş dikdörtgen bir kontrplak parçası üzerine inşa edilmiştir.Dakikada 4,5 devir. Dişli motor, birkaç tahta üzerine yerleştirilmiştir ve bir hız kontrol cihazına, bir sigortaya ve bir güç anahtarına bağlanmıştır. Bir bağlantı kutusu içinde, metal bir tüp içinde tutulan üç inçlik bir fan, soğutma amacıyla motora yönlendirilmiştir.Motora, üzerinde bir makara bulunan döner bir kol bağlıdır. Motor ve kol döndüğünde, kontrplak üzerine sabitlenmiş bükülmüş bir çubuğun bir tarafını aşağı doğru itmektedir. Çubuğun diğer tarafında bir kap menteşesi bulunmakta ve bir platform üzerinde yuvarlanabilmesi için buraya bir tekerlek takılmıştır.Motor döndükçe yukarı ve aşağı hareket eder; motorun gücü, tam bir rotasyonel periyodun 15 saniye süreceği şekilde ayarlanmıştır. Platform üzerine, sinek tüp rafları bungee kordonlarla tutturulmuştur ve bu raflara yerleştirilen tüpler, yine platforma sabitlenmiş bir ekranla güvence altına alınmıştır. Platform, bungee kordonlar aracılığıyla standart çekmece rayları boyunca yukarı ve aşağı kayabilmektedir ve bir strafor minder, düşüş sırasındaki şoku sönümler. Güç kulesi, hayvanların yetiştirildiği koşullarla uyumlu olması için sıcaklığı kontrollü bir odada çalıştırılır.Bir egzersiz deneyi yürütmek için, dayanıklılığın ve negatif geo ekseninin veya tırmanma yeteneğinin boylamsal izlemi amacıyla yaşları eşleştirilmiş en az 240 erkek sineğe ihtiyaç vardır. Sinekleri her şişede 20'şerli popülasyonlar halinde tutun. Şişeleri, bir grubun egzersiz yapacağı iki eşit büyüklükte gruba ayırın; egzersiz grubunun şişeleri fluglar ile kapatılmalı, kontrol grubu ise sünger tıpalar ile kapatılmalıdır.Süngerin adaptif boyutu, flakonun tabanına yakın bir yere kolayca yerleştirilmesine olanak tanıdığı için immobilizasyon amacıyla kullanılır. Ayrıca, daha yumuşak sünger malzemesi, daha sert tıkaçların neden olduğu yaralanmaları azaltır. Yiyecek flakonları, testten önce gün aşırı değiştirilmelidir.Eğitim sırasında, boş tüpler kullanıldığında çok daha fazla sineğin eğitime bağlı yaralanmalar yaşaması nedeniyle, sinekler yemli tüplerde tutulur. Kontrol grubundaki sineklerin bulunduğu tüpler güç kulesine yerleştirilirken, sünger tıkaçlarını yem seviyesinin yaklaşık üç milimetre üzerine kadar bastırarak sineklerin hareket alanı kısıtlanmalıdır.Tutarlı sonuçlar için hareketle ilgili işlemler gerçekleştirin. Her iki sinek grubunu, seans başına harcanan süreyi üç haftalık bir dönem boyunca günde iki saatten üç saate çıkaran kademeli bir program kullanarak, haftanın ardışık beş günü boyunca test edin. Elbette, herhangi bir rejim de uygulanabilir.Üç haftalık süreç boyunca uygulama, günün saati ve analiz yöntemlerinde tutarlılık sağlanması esastır. Dikkatli planlama ve ön uygulama prosedürleri, hata ve yorgunluk olasılığını azaltır. Analizler, eğitim rejimi öncesinde, sonrasında veya sırasında sinekler üzerinde boylamsal olarak gerçekleştirilebilir.Çevresel bir değişkene karşı daha güvenli bir yanıtı değerlendirmek için de kullanılabilir. Yorgunluk analizini, eğitimin yapılmadığı bir günde gerçekleştirin. Günün başlangıcında, her iki sinek grubunu da güç kulesine yükleyin.Cihazı çalıştırın ve her tüpü 10 dakikada bir gözlemleyin. Eğer art arda dört ölçümde, bir tüpteki beş veya daha az sinek iki inçten daha yükseğe tırmanırsa, o sinek grubu yorgun kabul edilir. Yorgun sinekleri cihaz hala çalışırken güç kulesinden çıkarın ve çıkarıldıkları zamanı kaydedin.Tüm tüpleri maksimum 10 saat boyunca gözlemleyin ve sonuçları derleyin. Nicelleştirme için bir analiz. Eğitimin etkileri, eğitim rejimi boyunca ve sonrasında gerçekleştirilebilen günlük koşu hızı ölçümüdür.Eğitimin uzun vadeli etkisini ölçmek için. Tırmanma hızı veya halka analizini başlatmak için öncelikle sinekleri yeni boş viallere aktarın ve altı vialden oluşan bir sırayı bir vial rafına yerleştirin. Vialleri rafa sabitlemek için rulo yapılmış bant parçaları kullanılır.Ardından rafı, tüplerin eşit şekilde aydınlatılmasını sağlayacak bir röntgen görüntüleme kutusu gibi bir ışık kaynağının önüne yerleştirin. Şimdi, her bir tüpteki sineğin konumunun görünür olacağı şekilde rafı fotoğraflamak için bir kamera kurun. Daha sonra, tüm sinekleri tüplerin dibine düşürmek için altı tüpe hafifçe vurun ve zaman ayarlı bir fotoğraf çekin.Sineklerin tamamı sersemledikten iki saniye sonra. Eğer kameranın flaşı kullanılıyorsa, bu işlem tutarlı bir şekilde uygulanmalıdır. Güç kulesine geçmeden önce, her bir tüp seti için bu işlemi dört kez tekrarlayın.Verileri analiz etmek için, flakonun üst ve alt sınırlarını belirlemek amacıyla her bir fotoğrafı yazılım kullanarak ayrı ayrı puanlayın. Ardından, her bir sineğin tırmanma yüksekliğini ölçün. Daha sonra tırmanma yüksekliklerini Excel'e kopyalayın.Her flakon içindeki her sineğe, bulundukları kuadratın yüksekliğine göre sıfırdan dörde kadar bir puan verilir. En yüksek kuadrata tırmananlara dört, hiç tırmanmayanlara ise sıfır puan verilir. Her flakon için 20 sineğin her birinin puanını hesaplayın ve kohortun ortalama puanını belirleyin.Buna tırmanma indeksi denir. Veri analizi için, her kohortun o günkü dört tırmanma indeksinin ortalaması kullanılır. Görüntü işleme yazılımı mevcut değilse, boş flakonların üzerine kadran çizgileri çizilebilir ve sinekler manuel olarak kadran değerlerine atanabilir; tipleme yapılan sinekler, tırmanma yeteneğindeki yaşa bağlı azalmanın daha düşük olduğu bir dayanıklılık protokolüne yanıt vermiştir.Bu durum, beş haftalık yaş boyunca gerçekleştirilen boylamsal halka deneylerinde yansıtıldığı üzere, eğitimin sona ermesinin ardından da devam etmiştir. Bu nedenle, power tower programı ile egzersiz indüksiyonu davranışsal bir girdi olarak kullanılabilir ve genetik veya çevresel faktörlerin bu etkiyi modüle etme kapasitesi değerlendirilebilir. Aksine, power tower bir çıktı olarak da kullanılabilir.Örneğin, diyetlerinde farklı oranlarda sükroz bulunan sineklerin yorgunluk süreleri test edildiğinde, sükroz içeriğindeki artışın dayanıklılık kapasitesindeki artışla korelasyon gösterdiği belirlenmiştir. Bu prosedür uygulanırken, tüm sinek kohortlarının yaşlarının eşleştirildiğinden ve yöntemlerin deney süresince tutarlı bir şekilde uygulandığından emin olmak önemlidir.Bu videoyu izledikten sonra, herhangi bir genotipe sahip sineklerin dayanıklılık eğitiminin nasıl yapılacağı ve nasıl değerlendirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

endurance-training-protocol-longitudinal-performance-assays-for

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Yetişkin Drosophila melanogaster Locomotion Yüksek Çözünürlüklü Video Takip

Bu video, sinek hareketini ölçmek için basit bir yöntemi açıklar ve gerçekleştirilen tırmanma testini gösterir. Sinek tırmanma testi, negatif bir jeotaksi tepkisine dayanan genel bir motor fonksiyon testidir.

Sinek Tırmanma Deneyi: Drosophila melanogaster'de Genel Hareketi Test Etmek İçin Bir Yöntem

Bilim adamları, farklı deneysel koşulların sineklerin ömrünü nasıl etkilediğini ölçmek ve deneysel sonuçları ölçmek için süreçte hayatta kalma eğrileri oluşturmak için Drosophila yaşam süresi protokolünü kullanır. Numune protokolü, değişen konsantrasyonlarda endokrin bozucu kimyasallara veya 17-α-etinilestradiol (EE2) gibi EDC'lere maruz kalmanın uzun ömür üzerindeki etkilerini incelemek için uygulanan testi içerir.

Drosophila melanogaster için Yaşam Süresi Protokolü: Sinek Uzun Ömürlülüğündeki Farklılıkları Belirlemek için Hayatta Kalma Eğrileri Oluşturma

Drosophila melanogaster yiyecek arama yolu uzunluğu testi için ayrıntılı bir protokol sağlıyoruz. Test hayvanlarının hazırlanmasını ve işlenmesini, testin nasıl gerçekleştirileceğini ve verilerin nasıl analiz edileceğini tartışıyoruz.

için yiyecek arama yolu uzunluğu Protokolü<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Larva

Dönen egzersiz miktar sistem (istekler) Drosophila melanogaster egzersiz aynı anda faaliyet hayvanlar tarafından gerçekleştirilen miktarını ölçme sırasında rotasyon yoluyla teşvik edebilirsiniz. Burada, faaliyet düzeylerine dönüş egzersiz tedavileri REQS. kullanarak karşılaşan hayvanların ölçmek nasıl ayrıntılı bir noktası noktası protokol...

Drosophila melanogaster dönen egzersiz miktar sistem (istekler) kullanarak ölçüm egzersiz seviyelerinde

TreadWheel dönme hareketi yavaşça yetişkin Drosophila melanogaster alıştırmada uçar doğuştan gelen, negatif geotaxis sömürerek ikna etmek için kullanır. Metabolik sağlık değerlendirmek için egzersiz ve genotip, cinsiyet ve diyet ve fizyolojik ve moleküler deneyleri üzerindeki etkileri gibi faktörler arasındaki etkileşimler çözümlenmesi için sağlar.

TreadWheel: Aralığı eğitim protokolü yavaşça indüklenen egzersiz Drosophila melanogaster için

Endokrin parçalayıcı kimyasalları (EDCs), organizmalar ve doğal ortamlar için ciddi bir sorun oluşturmaktadır. Drosophila melanogaster EDC efektleri içinde vivo çalışmak için ideal bir model temsil eder. Burada, Drosophila endokrin bozulması araştırmak için yöntemler mevcut, fitabet üzerinde EDC etkileri ele, fertilite, gelişimsel zamanlama, ve sinek ömrü.

Drosophila melanogaster endokrin bozulma test yöntemleri

Drosophila melanogaster'da nörodejenerasyon gösteren mutantlar için ekrana ileri genetik bir yaklaşım kullanarak bir protokol sunuyoruz. Bu bir tırmanma tahlil, Histoloji analizi, gen haritalama ve sonuçta nörokoruma süreci ile ilgili yeni genler belirlemek için DNA sıralaması içerir.

In vivo Ileri genetik ekran Drosophila melanogaster yeni Nörokoruyucu genler tanımlamak için

Bu protokolün amacı, meyve sineği Drosophila için uçuş egzersizi sağlamaktır. Temsili sonuçlar, uçuş egzersiz eğitiminin artan aerobik kapasite ve yüksek yağlı bir diyete direnç ile sonuçlandığını göstermektedir.

FLEX: Meyve sineği Drosophila için uçuş tatbikatı eğitim protokolü

Ters genetik yaklaşımlar sivrisinek vektör patojenler için hangi genlerin altta ya direncini belirlemek için son derece yararlı olduğu kanıtlanmıştır. Bu video protokolü Dimopoulos laboratuar tarafından dsRNA Anofel gambiae sivrisinekler, sıtma paraziti limanın içine enjekte etmek için kullanılan bir yöntem gösteriyor. Enjeksiyon kurulum ve toraks içine enjekte dsRNA manipüle tekniği gösterilmiştir.

Yetişkin Sivrisinekler (A. gambiae) RNAi Tahliller için protokol

Öğrenin Drosophila melanogaster için dayanıklılık eğitim protokolü ve tırmanma performansı analizleri. Bu yöntem genetik manipülasyon çalışmalarında egzersizin hareketlilik üzerindeki etkilerini değerlendirmeyi sağlar.

Drosophila melanogaster Kondisyon Eğitim Protokolü ve Boyuna Performans Tahliller

Daha fazla video keşfet