Name: Kemirgen Medial entorinal Korteksin dorsal-ventral Örgütü Soruşturma parasagital Dilimleri hazırlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Öğrenin medial entorinal korteksin dorsal-ventral organizasyonunu fare beyin kesitleri ve patch clamp kayıtlarıyla incelemeyi. Bu yöntem navigasyon ve hafıza mekanizmalarını araştırmada araştırmacılara yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Onların destek için aşağıdaki teşekkür şunlardır: Federal Burs Komisyonu Birleşik Krallık finansman (HP), EPSRC (HP), BBSRC (MFN) ve Avrupa Birliği Marie Curie Eylemleri (MFN).

1. Parasagital Dilim Hazırlık 1.1 hemisferdeki dışarı parçalara ayır Tüm hayvan deneyleri yerel etik inceleme ve ulusal düzenlemelere uymak. Burada tarif edilen deneyler söz konusu olduğunda, çalışma İngiltere Hayvanlar (Scientific Procedures) Act 1986 uygundur. Biz rutin beyin çıkarmadan önce fare euthanize için anestezi olmadan servikal dislokasyon kullanın. Alternatif olarak, fare ölümcül anestetize olabilir, ancak bu durumda anestezik tercih nöronal özelliklerini etkiler olmadığını belirlemek için gerekli olabilir. Fareden beyin çıkarın ve soğuk hemen yer (4-8 ° C) yapay beyin omurilik sıvısı (ACSF) (çözüm bileşimleri için bkz. Tablo 1) kesme carbogen (% 95 O 2,% 5 CO 2) ile doygunluğa kabarmış. Üç dakika maksimum sonra, dikkatlice c beyin kaldırmakestere kesme ACSF bir spatula kullanarak ve hafifçe kesme ACSF (Şekil 1A) ile nemlendirilmiş filtre kağıdı üzerine dik bir pozisyonda (yukarı bakacak şekilde sırt tarafında) yerleştirin. Hemisferlerin montaj doğru kolaylaştırmak için, MEC (beyinin kaudal aşırı yer) etkilemeden mümkün olduğunca serebellumun kaldırmak ve koronal planda kesitler ile beyinin rostral üçüncü kaldırmak için bir jilet veya neşter kullanın (Şekil 1B). Bölümü tam orta hat (Şekil 1C) dikey düzlemi boyunca olduğu özen beyin, Hemisect. Bir buçuk dakika kabarmış kesme ACSF için hemisferlerin dönün. 1.2 vibratome üzerinde hemisfer monte Montaj öncesi, vibratome bıçağın kesme kenarı yatay ile 20 derece açılı olduğundan emin olun ( <sTrong&gt; Şekil 1D). Montaj yüzeyine yaklaşık vibratome bıçağa superglue paralel sığ bir şerit, bir hemisfer genişliği yapmak ve yeterince uzun iki hemisfer uçtan uca karşılamak için. Onun medial yüzeyi spatula dayanmaktadır ve dorsal ölçüde mikrotom bıçağı doğru bakacak şekilde fiziksel etkileri en aza indirmek için bakımı, spatula ve pozisyon ile kesme ACSF her yarımkürede kaldırın. Yavaşça her hemisfer medial yüzeyi mikrotom tabanına paralel olmasını sağlamak için özen superglue şeridi üzerine her yarımkürede kaydırın. Biz en iyi sonuç için her yarımkürenin dorsal yüzeyine paralel olması ve vibratome bıçak (Şekil 1D) bakmalıdır bulduk. Dilimleme sırasında hazırlanması 1,3 Bakım Hemen montaj soğuk kesme ACSF (- 8 ° C&#39;de 4) daldırın hemisferlerin ardından. Sıcaklık koruyundilimleme prosedür boyunca e ve carbogen doygunluk. Kesme odacık içinde çözelti doğrudan soğutma ve köpürme pratik değildir, periyodik taze soğutulmuş ve kabarmış çözeltisi ile haznesindeki kesme ACSF çözeltisi takviye. 1.4 Kesme bölümler Eğer (Şekil 1F) (lateral yüzeyinden genelde ~ 1mm aşağı) MEC lateral en ölçüde bulana kadar bir vibratome kullanarak, sagital düzlemde her iki yarımkürede gelen korteks kaldırın. Kesikler içinde geri bıçak sürükleyerek, maruz kalınan doku zarar vermemek için ~ 200 mikron vibratome bıçak kaldırın arasında. MEC medial dereceye ulaşıncaya kadar aynı anda (Şekil 1D de gösterildiği gibi dizilmiş iseler aynı anda kesilir hem de) her iki yarımkürede 400 mikron parasagital bölümleri kesmek. Bu, bir t-ventro kaudal eğrisi etrafında kalın beyaz bir bant yokluğu ile tespit edilebilirO hipokampus (dış kapsül), onun rostral sınır dışbükey şekil ve açısal dorso-kaudal &#39;köşe&#39;. Şekil 1E MEC lateral parasagital düzlemde hipokampusun dairesel bir görünüm göstermektedir. Şekil 1F-G göstermek dilimleme zaman MEC içindeki bölümlerde farklı yanal-medial pozisyonlarda nasıl görüneceğini. Daha medial pozisyonlarda hipokampusun gittikçe fasulye biçimli bir görünüm unutmayın. Her yarımkürede genellikle MEC içeren iki veya üç 400 mikron kalınlığında dilimler verir. 1.5 inkübe dilimleri Her kesim hemen sonra 35 ° C&#39;de su banyosunda muhafaza carbogen doymuş standart ACSF dilimleri yerleştirin Dilimler dilimleme sonra ACSF yaklaşık 15 dakika boyunca 35 ° C&#39;de inkübe edilir izin tamam olmaktadır. Su banyosundan dilim tutucu çıkarın ve l boyunca oda sıcaklığında carbogen ile kabarcıklar devamdoğusunda 45 dakika. 2. Örnek parasagital Dilim Deneyi Bu hazırlık kullanarak tipik bir deney MEC katman II stellat hücrelerin elektrofizyolojik yapmaktır. 2.1 Optimize optikler Kayıttan önce, kondenser dilim düzlemi (Koehler aydınlatma) odaklanma ve yüksek büyütme (örneğin 40x) objektif altında merkezli emin olun. Faiz 2.2 belirlenmesi hücreleri Düşük bir büyütme MEC (Şekil 2A-B) içinde yaklaşık kayıt bölgesi belirlemek için (örneğin 4x) objektif kullanın. Bu bölgede canlı hücreler (Şekil 2C-D) tanımlamak için yüksek büyütme amacı geçin. Bir örnek olarak, kabul edilen tabaka II stellat hücreleri görsel olarak benzer olan poligonal bir çap veya oval şekil ve birden fazla primer dendritler tarafından tanımlananter, ve dendrit 2,13,14 apikal tek bir büyük çaplı olmaması. Onlar küçük gruplar 2,9 (Şekil 2C-D) görünür genellikle bol ve nerede onlar güvenilir Layer I / II sınır kenarında tanımlanır. Böyle internöronlardan ve piramidal hücreleri gibi diğer hücre tipleri de tanımlanabilir olmalıdır. Bu noktada deneyler kaydedildi nöron sinaptik girişleri aktive zar potansiyeli ya da tespit nöronlar gelen akım membran ve elektrik veya optogenetic yöntemler kaydetmek için tam hücre yama-kelepçe kullanılarak, örneğin gerçekleştirilebilir. Nöron kimlik kaydedilen nöronun elektrofizyolojik özelliklerinden ve hücre içi çözüm içinde floresan etiketler dahil doğrulanabilir. 3. Dorso-ventral eksen boyunca Yer ölçün 3.1 Görüntü ilgi yeri ve çevresindeki dilim Bir recor pozisyonunu belirlemek içindorsal-ventral eksen boyunca ded nöron, ilk görüntüyü dilim ve çevresindeki alanların MEC bölgeye düşük bir büyütme hedefi kullanın. Bir görüntü (Şekil 3A) veya yinelenen bir görüntüsünü ilgi konum etrafında parlak bir daire bırakmak alan iris diyafram aşağı atlama tarafından kayıt elektrot içeren örneğin tarafından ilgi konumu, işaretleyin. Yinelenen sonra kayıt konumu ve çevresi (Şekil 3B) ilk görüntü üzerine yerleştirilebilir görüntüsü içinde kayıt konumunu saptamak için. Up görüntüleri MEC dorsal sınırına bir ventral kayıt yerden alanı kapsayacak şekilde gerekli olabilir 3 ayrı düşük büyütme (4x) için. Bu görüntüler daha sonra mesafe ölçümleri (Şekil 3) alınabilir bir görüntü sağlamak için görüntü işleme yazılımı kullanılarak dikilen edilebilir. Nöron kimliği ve konumu daha da doğrulama dahil edilerek kayıt takip yapılabilirgibi hücre içi çözüm içinde ve daha sonra kayıt 2 takiben doku uygun işleme kullanarak biocytin veya Alexa boyalar olarak inaktif işaretleri. 3.2 MEC dorsal sınırında kurulması MEC dorsal sınır dorsal-ventral pozisyonu ölçmek için hangi uygun bir dönüm noktası sağlar. MEC ventral sınır olarak iyi tanımlanmış değildir. Şekil 4 farklı medial-lateral pozisyonlarda Nissl lekeli dilimler tanımlanan MEC hücresel yerlerinden DIC aydınlatma altında nasıl göründüğünü göstermektedir. Şekil 4, bir dairesel hipokampus (Şekil 4, (i)) ve tabaka I (Şekil 4, (iv)) Yanal entorinal Cortex (LEC) içeren parasagital dilimleri ile ilişkili bir parasubicular çıkıntı eksikliği gösterir. Şekil 4 M.Ö. ME içeren tipik bir dilim göstermekC. DIC ışıklı dilimleri içinde önde gelen karanlık dorsal Parasubicular / entorinal sınır bölge sırt kısmı parasubiculum bir alanı içerir. Parasubiculum alanı açıkça kolon (iii) karşılık gelen görüntüleri Nissl boyama ile ortaya çıkar. MEC (4B ve 4C kolonu (iv) &#39;te siyah oklar) dorsal sınır tabakası I (4B ve 4C kolonu (iv) içinde kırmızı oklar) içine kadar dışarı doğru çıkıntı yapan parasubicular hücrelerinin grubuna ventral olup. Şekil 4B ve 4C kolonlar (ii) ve Nissl bölümlerde MEC dorsal sınır DIC dilim koyu Parasubicular / entorinal sınır bölgenin dorsal kenarına ventral bir yere karşılık gelen, (iii) gösterir (karşılaştırılması siyah oklar). Sınır konumu (aynı zamanda ref. 14) DIC görüntüleri ve karşılaştırma referans görüntüler tahmin edilebilir. Moleküler belirteçleri ile dorsal MEC sınırın Geleceği doğrulama bu tahminin doğruluğunu artıracaktır. Biz tha dikkatt referans bölümleri boyandı, ve etiketli nöronlar, morfolojik tanımlama için işlenir bölümlerde ciddi daralma tabi olabilir. DIC ve referans bölümlerde önemli noktalara göre mutlak uzaklıkların karşılaştırılması bu nedenle ilk ölçüm ve büzülme için düzeltme (örneğin ref 2) gerektirir. 3.3 mesafeleri kalibre ve ölçmek Mesafe dönüşüm oranı: görüntülerinde mesafe kolay ölçümü kolaylaştırmak için, bir pikselin kurmak için resmi bir başvuru kılavuzuna aynı düşük büyütmeli objektif kullanın. Bir grafik programı kullanarak MEC ile kontur boyunca ilgi konuma MEC dorsal sınırından piksel mesafeyi ölçün ve mikron mesafe (Şekil 5A) piksel mesafesi dönüştürebilirsiniz. Nöronlar gibi biocytin gibi bir kalem ile doldurulur, sonra kaydedilen nöron yerini daha sonra da (örneğin ref 2) uygun işleme tarafından kurtarılabilir. 4. Representative Sonuçlar Şekil 5A bir örnek düşük büyütme (4x) üst üste kaydedilen nöronlar ve ölçüm kılavuzların konumları ile kayıt sonra parasagital dilim, kompozit görüntü gösterir. İşaretli dorsal ve ventral stellat hücrelerinden kayıtlar Şekil 5B &#39;de gösterilmiştir. Bu kayıtlar hücrelerinin kimliğini belirlemek ve MEC layer II stellat hücreler elektriksel özellikleri dorsal ve ventral yerlerde nasıl farklı göstermek için yardımcı olur. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3802/3802fig1.jpg" /> Şekil 1.. Parasagital dilimleri hazırlanması. Filtre kağıdı üzerinde yukarı bakacak şekilde sırt tarafında dinlenme A Whole beyin ACSF. B kesme ile nemlendirilmiş C Hemisected beyin beyincik ve rostral üçüncü çıkarıldıktan sonra&gt; Beyin. D paralel ACSF kesim öncesinde dalma için vibratome bıçak kenar kesme ve LEC içeren bölüm. E Görünüm dilimleme için esnasında yapıştırıcı şerit üzerinde hemisferlerin monte Doku daha ileri bir 400 mikron (yüzeyi gösterildiği üzere medyal 400 um olan çıkarıldıktan sonra MEC arasında &#39;yanal&#39; kısmının yanal doku çıkarılmasından sonra prosedürü dilimleme ve standart bir parasagital MEC dilim için henüz yeterince medyal değildir. F görünümü . (F)) 400 mikron parasagital dilim sonra MEC bir &#39;orta&#39; parçası G Görünüm kesilmiştir sırasıyla anatomik, c belirten EF HI Schematics:. beyincik, L: Lateral entorinal korteks (LEC), m: Medial entorinal Cortex (MEC), h: hipokampus, portakal: dış kapsül, mavi: Korpus kallosum, camgöbeği: dentat girus, green: CA3 ve CA1. (H siyah ok) sadece MEC içeren dilimler halinde ise, sınır lineer olabilir (kırmızı I ok) veya içbükey (J kırmızı ok) LEC içeren dilimler halinde hipokampüsün rostral sınır görünümü içbükey olduğunu. Renkli anatomik yerlerinden yaklaşık şekiller Allen Beyin Atlası (ek açıklamaları elde edilmiştir <a href="http://mouse.brain-map.org/atlas/ARA/Sagittal/browser.html">http://mouse.brain-map.org/atlas/ARA/Sagittal/browser.html</a> ). <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3802/3802fig2.jpg" /> Şekil 2. DIC aydınlatma altında MEC layer II hücrelerinin belirlenmesi. Bir para Bir Örnek kompozit görüntü<html> düşük büyütmede sagital beyin kesit (4x). Ayrı görüntüleri uyumlu ve dikkat dağıtıcı kenarları ve vinyet kaldırmak için harmanlanmış edilmiştir. Önemli dönüm alanda saat: hipokampus, m:.. Yüksek büyütmede sağ kenarına yakın koyu dikey çizgi olarak görünür, MEC C MEC katman II layer II (içeren bireysel bir düşük büyütme (4x) görüntüden MEC B Kırp DIC aydınlatma ile 40x). Görüntü birkaç görüntülerin bir uyum ve harmanlanmış karmaşıktır. Hücrelerin yoğun merkezi &#39;Sütun&#39; layer II sağlıklı olası yıldızsı hücreleri ve internöronlardan bir grup gösteren Katman II. D Tek yüksek büyütme DIC görüntüdür. Burada gösterildiği gibi, hücreler genellikle katmanı I / II sınırında gruplar meydana Stellate. Piramidal hücreler yakın Katman II / III sınır bulunabilir eğilimindedir. AC noktalı hatları sırasıyla BD miktarını göstermektedir. Ölçek çubukları: A ve B 500 um, C ve D 100 mikron in. Şekil 3 &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/3802/3802fig3.jpg &quot;/&gt; Şekil 3. Ilgi yerleri dorsal-ventral pozisyonu Ölçme. Bir Bağlantısızlar düşük büyütme (4x) ilgi yeri (bir kayıt elektrot ucu ile işaretlenmiş) ve karanlık entorinal / Parasubicular sınır bölgesi dönüm (dorsal sınır kurmak için kullanılan arasındaki MEC tüm dorso-ventral ölçüde dahil görüntüleri MEC ile -. A ve B gibi) bkz. Şekil 4 ama bir alan iris diyafram (düşük opacity ile kaplanmış) yerine ilgi konumunu işaretlemek için bir kayıt elektrodu durdurulabilir ile üst üste görüntü dahil. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3802/3802fig4.jpg" /> Şekil 4. Parasagital dilim DIC görüntülerden MEC dorsal sınır tahmin. Entorinal Cortex gelen AC parasagital bölümler (medial lateral). DIC ve Nissl bölümlerde farklı mikrofon gelmektedire AC sütun: (i).. Tüm parasagital dilim (400 mikron kalınlığında) (uyumlu ve düşük büyütme (4x) görüntülerin karışımlı kompozit) AC sütun (ii): karakteristik koyu Parasubicular / entorinal sınır bölgesi ile entorinal korteks Yakın Her görüntünün üst alan. AC kolon (iii) Nissl lekeli dilimleri (kalınlığı 40 mikron) farklı bir fareden AC (ii) görüntüleri ile uyumlu. Hücrelerinin koyu, yoğun bir tabaka tabaka II. Karşılaştırma kolonlar (ii) ve (iii) Nissl boyanan hücrelerin DIC görüntü görünümünü gösterir AC kolonu (iv):. Nissl boyanmış kesitler gösterdiler. B ve C sütunu (iv) parasubiculum (DIC resimlerde koyu Parasubicular / entorinal sınır bölgenin dorsal kısım) ve dorsal MEC hücreleri hücreleri içerir. B (iv) ve C (iv) katman derinliklerine uzanan parasubicular hücrelerinin büyük dorsal yama I (kırmızı oklar) kolayca görülebilir. Bu yamalar ventral kenarı dorsal bo tekabülMEC of order (siyah oklar). A (iv) parasubicular yama dilim standart bir parasagital MEC dilim hazırlanması için çok yanal olduğunu belirten yoktur. Tüm panelleri, siyah oklar MEC dorsal sınır gösterir. Gri oklar MEC yaklaşık ventral sınır göstermektedir. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/3802/3802fig5.jpg" /> Şekil 5. Temsilci sonuçlanır. Şekil 3&#39;te görüntünün bir kısmının harmanlanmıştır ve kırpılır. A, bir hücre dorsal ve ventral hücrenin pozisyonları sırasıyla, yeşil ve mavi dolu daireler ile gösterilir. Siyah ok MEC tahmini dorsal sınırını ve beyaz noktalı çizgiyle derin tabakalar halinde uzatılır. Katı beyaz çizgi MEC dorsal sınırından ön yerleşimli hücreye mesafenin piksel ölçümü alındığı boyunca kontur yolu gösteren bir kılavuzdur. Ölçek çubuğu: 500 mikron B Elektro.hücrelerinden fizyolojik izleri Soldan sağa A&#39;da belirtilen - giriş direnci hesaplamak için kullanılan geçerli adımları için eşik altı yanıtları, büyük bir pozitif akım adım, başak ayrıntılı yanıt spiking.

<ol><li>O'Donnell, C., Nolan, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+of+synaptic+responses%3A+an+organizing+principle+for+optimization+of+neural+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Tuning of synaptic responses: an organizing principle for optimization of neural circuits.</a> Trends Neurosci. 34, 51-60 (2011).</li>
<li>Garden, D. L. F., Dodson, P. D., O'Donnell, C., White, M. D., Nolan, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+of+synaptic+integration+in+the+medial+entorhinal+cortex+to+the+organization+of+grid+cell+firing+fields%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Tuning of synaptic integration in the medial entorhinal cortex to the organization of grid cell firing fields.</a> Neuron. 60, 875-889 (2008).</li>
<li>Kuba, H., Yamada, R., Fukui, I., Ohmori, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tonotopic+specialization+of+auditory+coincidence+detection+in+nucleus+laminaris+of+the+chick%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Tonotopic specialization of auditory coincidence detection in nucleus laminaris of the chick.</a> Journal of Neuroscience. 25, 1924-1934 (2005).</li>
<li>Hafting, T., Fyhn, M., Molden, S., Moser, M. -B., Moser, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microstructure+of+a+spatial+map+in+the+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Microstructure of a spatial map in the entorhinal cortex.</a> Nature. 436, 801-806 (2005).</li>
<li>Sargolini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conjunctive+representation+of+position%2C+direction%2C+and+velocity+in+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Conjunctive representation of position, direction, and velocity in entorhinal cortex.</a> Science. 312, 758-762 (2006).</li>
<li>Fyhn, M., Hafting, T., Witter, M. P., Moser, E. I., Moser, M. -B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Grid+cells+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Grid cells in mice.</a> Hippocampus. 18, 1230-1238 (2008).</li>
<li>Giocomo, L. M., Zilli, E. A., Fransén, E., Hasselmo, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+frequency+of+subthreshold+oscillations+scales+with+entorhinal+grid+cell+field+spacing%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Temporal frequency of subthreshold oscillations scales with entorhinal grid cell field spacing.</a> Science. 315, 1719-1722 (2007).</li>
<li>Giocomo, L. M., Hasselmo, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+constants+of+h+current+in+layer+II+stellate+cells+differ+along+the+dorsal+to+ventral+axis+of+medial+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Time constants of h current in layer II stellate cells differ along the dorsal to ventral axis of medial entorhinal cortex.</a> Journal of Neuroscience. 28, 9414-9425 (2008).</li>
<li>Burgalossi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microcircuits+of+functionally+identified+neurons+in+the+rat+medial+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Microcircuits of functionally identified neurons in the rat medial entorhinal cortex.</a> Neuron. 70, 773-786 (2011).</li>
<li>Dodson, P. D., Pastoll, H., Nolan, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dorsal-ventral+organization+of+theta-like+activity+intrinsic+to+entorhinal+stellate+neurons+is+mediated+by+differences+in+stochastic+current+fluctuations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol.+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Dorsal-ventral organization of theta-like activity intrinsic to entorhinal stellate neurons is mediated by differences in stochastic current fluctuations.</a> J. Physiol. (Lond). 589, 2993-3008 (2011).</li>
<li>Nolan, M., Dudman, J., Dodson, P., Santoro, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HCN1+channels+control+resting+and+active+integrative+properties+of+stellate+cells+from+layer+II+of+the+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">HCN1 channels control resting and active integrative properties of stellate cells from layer II of the entorhinal cortex.</a> Journal of Neuroscience. 27, (2007).</li>
<li>Boehlen, A., Heinemann, U., Erchova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+range+of+intrinsic+frequencies+represented+by+medial+entorhinal+cortex+stellate+cells+extends+with+age%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The range of intrinsic frequencies represented by medial entorhinal cortex stellate cells extends with age.</a> Journal of Neuroscience. 30, 4585-4589 (2010).</li>
<li>Klink, R., Alonso, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+characteristics+of+layer+II+projection+neurons+in+the+rat+medial+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Morphological characteristics of layer II projection neurons in the rat medial entorhinal cortex.</a> Hippocampus. 7, 571-583 (1997).</li>
<li>van Groen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entorhinal+cortex+of+the+mouse%3A+cytoarchitectonical+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Entorhinal cortex of the mouse: cytoarchitectonical organization.</a> Hippocampus. 11, 397-407 (2001).</li>
<li>Dolorfo, C. L., Amaral, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entorhinal+cortex+of+the+rat%3A+organization+of+intrinsic+connections%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Entorhinal cortex of the rat: organization of intrinsic connections.</a> The Journal of Comparative Neurology. 398, 49-82 (1998).</li>
</ol>

Ifşa şey yok.

Biz burada ayrıntılı olarak MEC dorsal-ventral ölçüde koruyan bir parasagital dilim hazırlık üretmek için bir prosedür tarif ettiğim bir dorsal-ventral organizasyonu takip MEC devre özelliklerinin incelenmesi kolaylaştırmak için. Kritik adımlar Hayvan beyni kaldırılıyor. Beyin makamlara baskı önlemek için özellikle dikkat edin. Bu, hızlı bir şekilde kaldırılması beyin daha önemlidir. Dilimleme. Dilim sık...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Kesme ACSF (mM) </td><td> Standart ACSF (mM) </td><td> İç çözeltisi (mM) </td><td> CASNumber </td><td> Tedarikçi Katalog Numarası </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 86 </td><td> 124 </td><td></td><td> 7647-14-5 </td><td> Sigma S9888 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 1.2 </td><td> 1.2 </td><td></td><td> 13472-35-0 </td><td> Sigma 71.505 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 2.5 </td><td> 2.5 </td><td> 10 </td><td> 7447-40-7 </td><td> Sigma P3911 </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> 25 </td><td> 25 </td><td></td><td> 144-55-8 </td><td> Fischer S/4240 </td></tr><tr><td> Glikoz </td><td> 25 </td><td> 20 </td><td></td><td> 50-99-7 </td><td> Sigma G5767 </td></tr><tr><td> Sakaroz </td><td> 75 </td><td></td><td></td><td> 57-50-1 </td><td> Sigma S5016 </td></tr><tr><td> CaCl 2 </td><td> 0.5 </td><td> 2 </td><td></td><td> 10043-52-4 </td><td> VWR 190464K </td></tr><tr><td> MgCl2 </td><td> 7 </td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 7786-30-3 </td><td> Sigma 63020 </td></tr><tr><td> K Glukonat </td><td></td><td></td><td> 130 </td><td> 299-27-4 </td><td> Sigma G4500 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td></td><td></td><td> 10 </td><td> 7365-45-9 </td><td> Sigma H3375 </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 0.1 </td><td> 67-42-5 </td><td> Sigma E4378 </td></tr><tr><td> Na 2 ATP </td><td></td><td></td><td> 2 </td><td> 34369-07-8 </td><td> Sigma A7699 </td></tr><tr><td> Na 2 GTP </td><td></td><td></td><td> 0.3 </td><td> 36051-31-7 </td><td> Sigma G8877 </td></tr><tr><td> NaPhospho-Creatine </td><td></td><td></td><td> 10 </td><td> 19333-65-4 </td><td> Sigma P7936 </td></tr><tr><td> Biocytin (isteğe bağlı) </td><td></td><td></td><td> 2.7 </td><td> 576-19-2 </td><td&gt; Sigma B4261 </td></tr></tbody></table> Tablo 1. ACSF, standart ACSF ve K-Glukonat iç çözüm tarifleri Kesme.

kemirgen medial entorinal korteksin dorsal-ventral Örgütü soruşturma parasagital dilimleri hazırlanması

Preparation of Parasagittal Slices for the Investigation of Dorsal-ventral Organization of the Rodent Medial Entorhinal Cortex

Beyinde Hesaplama bunların sinaptik girişlerine uygun yanıt nöronlar dayanır. Nöronlar da tamamlayıcı ve sinaptik girişleri nasıl tepki belirlemek membran iyon kanallarının dağılımı farklıdır. Bununla birlikte, bu hücresel özellikleri ve hayvanlar davranmaya nöronal fonksiyonu arasındaki ilişki iyi anlaşılmış değildir. Bu sorunun bir yaklaşım onlar kodlamak bilgi veya hesaplamalar üzerine tek tek nöronları haritaların konumu da 1 yürütmek hangi topografik düzenlenen nöral devrelerin araştırmaktır. Bu yaklaşımı kullanarak deneyler duyusal ve bilişsel devrelerin 2,3 bilgi kodlama yatan sinaptik yanıtları ayarı için ilkeleri öneririz. Medial entorinal korteks (MEC) dorsal-ventral eksen boyunca mekansal temsilleri topografik organizasyonu hücresel mekanizmaları ve hesaplamalar arasındaki ilişkiler kurmak için bir fırsat sağlar iuzaysal algı için mportant. Kemirgen MEC katman II Nöronlar kullanarak konumu alanlarını 4-6 atış ızgara gibi kodlayın. Giderek daha ventral pozisyonlarda nöronlar için bu mesafe daha büyük 1 m artar ise MEC dorsal pozisyonlarda bulunan nöronlar için bir ızgara oluşturur tek tek atış alanları arasındaki mesafe 30 cm sırasını üzerindedir. Çeşitli çalışmalar bu hücresel özellikleri mekansal hesaplama 2,7-10 için önemli olduğunu öne sürerek, ızgara pişirme alanları arasındaki boşluk gibi, ayrıca dorsal-ventral konumuna göre farklılık, bu MEC katman II nöronların hücresel özellikleri ortaya koymuştur. Burada MEC nöronların biyofiziksel ve anatomik özellikleri topografik organizasyon MEC sağlayan soruşturmanın dorsal-ventral ölçüde korumak beyin dilimleri ile hazırlanması ve elektrofizyolojik kayıt için prosedürler açıklanmaktadır. Tespit n dorsal-ventral pozisyonuBu dilim tam dorsal-ventral konumu için referans noktaları kurmak zor olduğu gibi anatomik göre eurons, MEC 7,8,11,12 yatay dilim kullanan protokollerde doğru kurmak zor. Bizim tarif ettiğimiz işlemler MEC yanı sıra moleküler geçişlerini 2,10 görselleştirilmesi dorsal-ventral eksen boyunca kaydedilen hücrelerin yerini doğru ve tutarlı ölçüm sağlar. Prosedürler erişkin farelerde (&gt; 28 gün) ile kullanılmak üzere geliştirilmiş ve başarıyla 1,5 yaşına fareler ile istihdam edilmiştir. Ayarlamalar ile de daha küçük olan farelere veya diğer kemirgen türleri ile kullanılabilir. Hazırlanması ve ölçüm standart bir sistem bu bölgedeki hücresel mikrodevreler özelliklerinin sistematik olarak incelenmesi yardımcı olacaktır.

Biz medial entorinal korteks (MEC) dorsal-ventral eksen korumak beyin dilimleri ile hazırlanması ve elektrofizyolojik kayıt için prosedürler açıklanmaktadır. Konumu nöral kodlama MEC içinde dorsal-ventral organizasyonu aşağıdaki Çünkü, bu işlemler navigasyon ve bellek için önemli hücresel mekanizmaların incelenmesi kolaylaştırmak.

Kemirgen Medial entorinal Korteksin dorsal-ventral Örgütü Soruşturma parasagital Dilimleri hazırlanması

Beyindeki hesaplama, nöronların sinaptik girdilerine uygun şekilde yanıt vermesine dayanır. Nöronlar, ... bileşimleri ve dağılımları açısından farklılık gösterirler.

Aşağıdaki deneyin genel amacı, medial enter RH korteksindeki nöronların sinaptik ve entegratif özelliklerinin topografik organizasyonunu incelemektir. Bu, dorsal ventral düzlemde yönlendirilmiş medial enter RH korteks dilimleri hazırlanarak gerçekleştirilir. İkinci adım olarak, sinaptik ve entegratif özelliklerini araştırmak amacıyla mento RH korteks nöronlarından patch clamp kayıtları alınır.Ardından, elektrofizyolojik olarak ölçülen özelliklerin dorsal ventral organizasyonunu değerlendirmek için kaydedilen nöronun konumu belirlenir. Giriş direnci, membran zaman sabiti ve aksiyon potansiyeli eşiği ölçümlerine dayanarak, ikinci tabakadaki stellat hücrelerin intrinsik özelliklerinin topografik organizasyonunu gösteren sonuçlar elde edilir. Prosedürü laboratuvarımdan lisansüstü öğrencisi Hugh Pastel gerçekleştirecektir. Bu tekniğin, yatay yönlendirilmiş beyin kesitleri gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, kaydedilen nöronun insular korteksin dorsal ventral ekseni boyunca olan konumunun doğru bir şekilde kaydedilebilmesidir.Bu prosedüre başlamak için, beyni fareden çıkarın ve hemen soğuk kesim solüsyonuna yerleştirin. Karbogen ile havalandırılmış yapay serebrospinal sıvı. Üç da

preparation-parasagittal-slices-for-investigation-dorsal-ventral

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Video, fare yavrusu beyinlerinden kollikülo-talamokortikal beyin dilimlerinin hazırlanışını göstermektedir. İzole edilmiş bir beyin, işaretli bir slayt üzerinde hizalanır ve işitsel orta beyin ile ön beyni aynı düzlemde hizalamak için belirli bir açıyla kesilir. Beyin daha sonra bir vibratom kullanılarak dilimlenir ve ana işitme, orta beyin ve ön beyin yapılarını içeren dilimler, koruma için bir tutma odasına aktarılır.

Bir Fare Yavrusu Beyninden Kollikülo-Talamokortikal Dilimlerin Hazırlanması

Bu video, hipokampal lif yollarının bütünlüğünü korumaya odaklanarak, farelerden yatay hipokampal beyin dilimleri hazırlamak için ayrıntılı bir protokol göstermektedir. İşlem, beynin dikkatlice ikiye bölünmesini ve sabitlenmesini, dilimleme için bir vibratom kullanılmasını ve karbojene bir sıvı ile optimal doku koşullarının korunmasını içerir, bu da daha fazla deney için hazır hipokampal beyin dilimleri ile sonuçlanır.

Yatay Fare Hipokampal Beyin Dilimlerinin Elde Edilmesi

Video, fare beyinlerinden medial talamus-anterior singulat korteks (MT-ACC) dilimlerinin hazırlanışını göstermektedir. Bir farenin beyni disseke edilir, MT-ACC yolunu ortaya çıkarmak için kesikler yapılır ve bir vibratom kullanılarak dilimler oluşturulur. MT-ACC dilimleri daha sonra oksijenli yapay beyin omurilik sıvısında tutulur.

Fare Beyinlerinden Medial Talamus-Anterior Singulat Korteks Dilimlerinin Üretilmesi

Video, fare beyin dilimlerindeki retinogenikülat ve kortikojenikülat sinapsların elektrofizyolojik kaydını açıklar. Dorsal lateral genikülat çekirdeği (dLGN) içeren dilimler bir kayıt odasına yerleştirilir. Retinal ganglion hücrelerini (RGC'ler) uyarmak ve retinogenikülat sinapsları araştırmak için optik kanal üzerine veya kortikal nöronları uyarmak ve kortikogenikülat sinapsları araştırmak için nükleus reticularis talami'ye uyarıcı bir pipet yerleştirilir. Stimülasyon üzerine, RGC'ler ve...

Fare Beyin Dilimlerinde Retinogenikülat ve Kortikogenikülat Sinapsların Elektrofizyolojik Bir Çalışması

Bu video, kortikal uyarıcı piramidal nöronlarda ışıkla aktive olan katyon kanallarını eksprese eden transgenik bir fareden alınan koronal kortikal dilimlerde iktal olayların indüksiyonunu göstermektedir. Dilim bir kayıt odasına yerleştirilir ve yüzeysel kortikal tabakaya bir kayıt elektrodu yerleştirilir. Potasyum kanallarını tıkayan nöbet indükleyici bir ilaçla perfüzyon üzerine, nöronlar hipereksitabl hale gelir ve spontan iktal olaylar oluşturur. İsteğe bağlı iktal olaylar oluşturmak için,...

Fare Beyni Kortikal Dilimlerinde Spontan ve İsteğe Bağlı İktal Olayların Üretilmesi

Biz retina yüzeyine paralel kesit düzlemi ile erişkin memeli retina yatay dilim hazırlık geliştirdi. nonradially odaklı retinal nöronların dendritik alanları patch-kelepçe ve görüntüleme teknikleri ile sinyal işleme çalışma izin kesilmiş değil.

Elektrofizyolojik Çalışmalar Yetişkin Fare Retina Yatay Dilimleri hazırlanması

Bu makalede, düzleştirilmiş teğet bölümleri memeli cortices elde etmek ve histochemical kullanarak kortikal modülleri ve immunohistokimyasal yöntemleri görselleştirmek için detaylı bir metodoloji.

Görselleştirme düzleştirilmiş memeli Cortices'deki kortikal modülleri

Burada, lateral genikulat çekirdeğini içeren akut beyin dilimleri ve retinogeniculate ve kortikogeniculate sinenler fonksiyonunun elektrofizyolojik incelenmesi için protokoller sunuyoruz. Bu protokol, aynı akut beyin dilimleri içinde yüksek salınımı ve düşük salınımı olasılığı ile sinaps incelemek için etkili bir yol sağlar.

Retinogeniculate ve Kortikogeniculate SYNAPSE fonksiyonunun elektrofizyolojik Incelemeleri

Bu makale, farelerde yatay hipokampal beyin dilimleri elde etmek için sistematik bir protokolü tanımlamayı amaçlamaktadır. Bu metodolojinin amacı, dentat girus ile ilgili nörolojik süreçleri değerlendirmek için perforant yol ve yosunlu lif yolu gibi hipokampal lif yollarının bütünlüğünü korumaktır.

Fare Beyninin Yatay Hipokampal Dilimleri

Farelerin dorsal-ara hipokampusundan akut dilimler hazırlamak için bir protokol sunuyoruz. Bu transversal preparatı, kayıtların kalitesi ve kaydedilen nöronların morfolojik özelliklerinin korunması açısından koronal dilimleme ile karşılaştırıyoruz.

Yetişkin Farelerin Dentat Girusunda Tüm Hücre Kaydı ve Nöronal Rekonstrüksiyon için Dorsal Hipokampustan Akut Dilimlerin Hazırlanması

Öğrenin medial entorinal korteksin dorsal-ventral organizasyonunu fare beyin kesitleri ve patch clamp kayıtlarıyla incelemeyi. Bu yöntem navigasyon ve hafıza mekanizmalarını araştırmada araştırmacılara yardımcı olur.

Kemirgen Medial entorinal Korteksin dorsal-ventral Örgütü Soruşturma parasagital Dilimleri hazırlanması

Daha fazla video keşfet