Name: Moxi Z Mini Otomatik Hücre Sayacı Kullanımı Memeli Hücre Sayımı, Hücre Boyutu ve Hücre Sağlık Belirlenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-21T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 16 s
Description: Öğrenin, Moxi Z mini otomatik hücre sayacı ile memeli hücrelerini hızlı ve doğru şekilde sayma, boyutlandırma ve sağlık durumunu değerlendirme yöntemini. Coulter prensibi ve mikroakışkan teknolojisi kullanan bu sistem, sekiz saniyede güvenilir sonuçlar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Numunelerin Hazırlanması <ol><li> Hücre yoğunluğu aleti (3000 ila 500,000 hücre / mL Tip M kaset için, ya da 3.000 ila 2.500.000 hücre / S kaset tipi için mL) çalışma aralığı içinde kalacak biçimde ORFLO seyreltici ya da uygun bir seyreltici ile hücre süspansiyonu ile seyreltilir. </li><li> 01:20 (M Tipi kaset) veya 1:5 seyreltme (Type S kaset) için seyreltme 1:5 bir seyreltme en memeli hücre hatları için tavsiye edilir, ancak uygun seyreltme hücre tipi ve tohum yoğunluğu bağlıdır. Doğru bir sayım için gerekli hacmi yaklaşık 75 uL olup. </li></ol> 2. Koşu Örnekleri <ol><li> Güç düğmesine basarak ve Ana ekranda görüntülenir tarafından Moxi Z çevirin. </li><li> Tepsiye bastırın ve Moxi Z. Pipet 75μL örnek ... ekranı göreceksiniz içine bir kaset yerleştirin. </li><li> Kaset doldurma portu (mavi oval bir 75 uL örnek PipetiHangi kasetinin ucu bağlı olarak 1 ya da 2, etiketli) alet içine yerleştirilmiştir. Bunlar, 2 testleri için de kullanılabilir atılabilir kasetleri, bulunmaktadır. Not: Yeri ucu iyi ön dudak altında yakalanan böylece ~ 45 ° açıyla de, doğrudan yükleme içine pipet. Dağıtma zaman, kaset girmek için hava cepleri neden olabilecek şekilde vakumla sıvı dozaj arasında &quot;ileri&quot; alın değildir olması önemlidir. Bu dağıtım sırasında oldukça üzerinde sıvı formunda küçük bir boncuk (iyi giriş boyutu) olması tavsiye edilir. </li><li> Çoğu memeli hücre sayımı için, başlamak için ekranın herhangi bir yerine dokunun. Çok küçük parçacıklar (4 ila 8 mikron M Tipi ve 3-8 mikron Type S için ortalama çapı ortalama çapı) sayma için Moxi Z Küçük Parçacık modunda çalıştırılabilir. Not: kaset tipi ekran üstündeki siyah çubuk endikedir. Bu modda, Moxi Z varsayılan olarak 2 ila 10 um çapı ölçekli ayarlar ve sayımı u gerçekleştirirküçük hücrelerin saptanması için optimize edilmiş parametreler şarkı. BURAYA TOUCH testi başlatmak ve bu modda çalıştırmak için Küçük Parçacık Modu düğmesine (siyah kare) tuşuna basın. </li><li> Moxi Z testi başlayacak ve hücre sayımı sonuçları yaklaşık 8 saniye (M tipi kaset) veya 15 saniye (Type S kaset) içinde tamamlanmış olacaktır. </li><li> Eğri Uydurma MVI ve hesaplamaları otomatik olarak başlayacak ve sadece birkaç saniye ek gerektirir. Uygun bir formda bulunduğunda, sonuçlar daha sonra otomatik olarak ekranda görüntülenir. </li><li> Ayırıcı varsayılan kazanım modu yapmak için, Eğri Ayırıcı moduna geçiş yapmak için Kont düğmesine Fit basın. </li><li> Bu noktada, kaset ünitesi çıkarılabilir. </li></ol> 3. Veri Yönetimi <ol><li> AutoMode ölçekleme kapalıysa, sonuçlar başlangıçta bir eğri uyum 2-34 m çaplı ölçeği (M Tipi kaset) üzerinde sayısı veya 2-26 μ için görüntülenirm (Type S kaset). Otomatik mod ölçekleme açıksa, o Moxi Z otomatik olarak tüm eğri-fit verileri görüntülenir sağlarken eğrisi-fit nüfusun genişliği en yakın aralığında yatay eksen (x ekseni) dönüşebilecek. </li><li> AutoMode ölçekleme elle yüksek çözünürlükte sonuçlarını görüntülemek için, kapalı ise, 2-26 mikron simgesini (M Tipi) veya 2-18 mikron simgesini (Type S) dokunun. Not: Kaset tipi ekranın sol üst kısmında mavi kutu içinde gösterilir. Eğri yetenekleri gibi görsel verilerin nüansları ayırmak için kullanıcının yeteneğinde iyileştirmek için küçük parçacıkların hücreleri veya sayma takdirde önerilir. </li><li> Yatay çözünürlük artan üzerine, ölçekleme düğmesini dinamik olarak mümkün olan x-ekseni ölçeği aralıkları arasında bisiklet sağlamak için ayarlar: 2-34, 2-26, 2-18, ve M Tipi kaset için 2-10 mikron veya 2 Type S kaset için -26, 2-18 ve 2-10 mikron. Bu özellik sadece availa olduğunuhemen bir hücre sayımı takip ble. </li><li> Eğri-fit veya kapı bölge için sayın bilgileri (hücre / ml) histogramın sol tarafında küçük siyah bir kutu görüntülenir. Ortalama hücre boyutu bilgi histogramın sağ tarafında küçük siyah kutu görüntülenir. </li><li> MVI değeri histogramın sağ üst köşesinde mavi bir kutu görüntülenir. Test küçük parçacık modunda çalıştırmak ise, MVI geçerli değildir ve &quot;MVI = SPM&quot; olarak gösterilir. Hücrelerin konsantrasyonuna MVI çalışma aralığı, &quot;Aralığı MVI = yetersiz&quot; bir mesajın dışındaysa Ek olarak gösterilir. </li><li> Mevcut histogram kaydetmek için, Bitti simgesine dokunun. Bu XXX ilgili test sayıdır &quot;Test XXX&quot; bir isim ile verileri kaydeder. </li><li> Elle kapısı histogram için, Curve Fit sayımı sonuçları düğmesine geçiş yapmak için dokunun. Bu Ayırıcı varsayılan satın mod yapar. Sonra inci kapıları ayarlamak veya dokunun her mavi yolluk işaretleyici kaydırınince kapısı ayarlamaları için e sağ ve sol ok (bu mavi yolluk işaretleyici dokunulduğunda görünür) işaretleri arasında sadece hücre sayılır. Histogram dikey ölçeğini otomatik olarak eğri-fit nüfus genlik göre tartılır. Bu dikey ölçeğini ayarlamak için, histogram bölgede tokatlamak ekranı aşağı veya yukarı. </li><li> Eğri sığdırma modu ekranına geri dönme ve eğri uygun modu, varsayılan toplama modu yapmak için Gated Sayım sonuçları düğmesine dokunun. </li><li> Sonra sonuçları kaydetmek ve Ana ekrana geri dönmek için Done simgesine basın. Sonuçlarını silmek için, kalıcı test sonuçlarını silmek için her zaman Sil simgesine basın. </li></ol> 4. Daha önce Edinsel Veri Analizi <ol><li> Kaydedilmiş bir testi açmak için, Ana ekranda Histogram simgesine basın. </li><li> Dokuz kaydedilen histogramlarına simgeleri ekranda görüntülenir.Ilgi testi için uygun simgesine basın veya daha fazla test sonuçlarını görüntülemek için ikonlar Aşağı Page Up veya Page basın. </li><li> Her histogram kaydettiğiniz nasıl bağlı olarak, Curve Fit Kont modu veya Gated Sayısı modunda da açılacaktır. Gated Kont modunda, yolluk belirteçler bağımsız olarak her mavi yolluk işaretleyici kaydırarak istenilen şekilde yerleştirilebilir. Otomatik Kapı istenen tepe üzerine dokunarak. Gated Kont ve Curve Fit Kont modları arasında geçiş yapmak için dokunun. </li><li> Histogramın dikey ölçeğini ayarlamak için Yakınlaştırma ve Unzoom simgeleri basın. Dikey ölçek dikey olarak da aşağı yukarı ekran (artırmak için) veya (azaltmak için) bir parmak swiping tarafından değiştirilebilir. </li><li> Sürekli test sonuçlarını silmek için Sil simgesine basın. </li><li> Için Done simgesine basıntest sonuçları kapatın ve Ana ekrana geri dönmek. (Not: Yakınlaştırılmış görünümü kaydedilmez.) </li></ol> 5.. PC&#39;ye veri aktarma <ol><li> Veri, bir PC veya Mac için Moxi Z USB kablosu takarak Orflo Moxichart uygulamasını kullanarak bir PC veya USB aktarım yoluyla aktarılabilir. Bluetooth transferi için (MoxiChart), ilk Moxi Z biriminin Ana ekranda Bluetooth simgesini basarak cihazı Bluetooth kimliğini belirlemek. </li><li> Bilgisayarda, MoxiChart uygulamasını açın ve sağ üst köşede Bluetooth simgesini tıklayın. Sonra, Moxi Z Bluetooth kimliği karşılık cihaz seçin ve yüklenen dosyalar için hedef klasörü seçin. </li><li> Moxichart otomatik Bluetooth bağlantısı ile belirtilen dizine tüm dosyaları transfer olacak. </li><li> Bluetooth (MoxiChart) veya USB tarafından aktarılan dosyaları analy açılıp edilebilironlar biçimlendirilmiş, çünkü MoxiChart uygulama ile doğrudan zed veya. csv dosyaları, doğrudan ek / özel analiz için Microsoft Excel veya diğer veri analiz programları açılabilir. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar Moxi Z hassas ve kesin değerlendirmek için, HEK-293 hücreleri, HeLa hücreleri, CHO-K1, maya, Jurkat E6-1 hücreleri, PC12, ve sayım 0-500,000 hücreleri arasında değişen konsantrasyonlarda sahip boncuk süspansiyonlar hassas kalibre / mL (Tip M kaset) ve 0-2-2.5e 6 hücre / ml (Tip S kaset) sayıldı ve tüm memeli hücrelerinin Amerikan Tip Kültür Koleksiyonundan (ATCC) elde edildi, bir Coulter Z2 ve Moxi Z. ile karşılaştırıldı ve kültür olarak daha önce 7-11 nitelendirdi. Kısaca, hücreler RPMI 1640 (Jurkat E6-1, PC12), MEM (HEK-293, HeLa) hücreler veya F12K (CHO-K1) hücrelerin çekirdek ortam ile 75 mm 2 doku kültür şişeleri içinde süspansiyon içerisinde kültüre edildi. Tüm medya ile tamamlanıyor% 10 fetal sığır serumu ve 100 U penicillin/100 mikrogram Streptomisin. Flasks% 5 CO2 ile 37 ° C &#39;de bir inkübatör muhafaza edildi. Hücreler 3 gün boyunca her pasajlanmağa devam edildi. Maya hücreleri (X5, C. albicans, Vin 13) bağışlanan ve hemen olarak verilmiştir kullanılmıştır. M Tipi kaset veri ve Type S kaset için ~ 2-2.5e 6 hücre / ml için ~ 500.000 hücre / ml İlk örnek konsantrasyonları Coulter Z2 kullanılarak oluşturuldu. Müteakip teorik konsantrasyon seviyesi fizyolojik tamponlar (ISOTON II ya da Hank&#39;in dengeli tuz çözeltisi) ile seri seyreltiler vasıtasıyla hazırlandı. Her konsantrasyondaki, aynı örnekleri her iki sistem ile ölçüldü ve birbirlerine karşı çizilmiştir. Şekil 2&#39;de görüldüğü gibi, güçlü bir doğrusal ilişki vardı (M Tipi r 2&gt; 0,9886, Type S r 2&gt; 0,9781) tüm örnekler için sayımları arasında. Konsantrasyonlar da Moxi Z ve Z2 her ikisi ile teorik / beklenen hücre konsantrasyonları ile karşılaştırılmıştır ( <strong&gt; Şekil 3) ve daha göstermiştir güçlü bir doğrusal ilişki (M Tipi r 2&gt; 0,9758, Type S r 2&gt; 0,9774). Hassas değerlendirmek için, HEK-293 ve HeLa hücre sayımı Coulter Z2, Moxi Z, ve bir hemasitometre ile yapıldı. CV 200,000-300,000 hücre / ml aralığında 5 ayrı sayıları ile ölçülür ile Moxi Z (M Tipi kaset), Coulter Z2 ve hemasitometre kullanarak hücre sayıları varyasyon ortalama katsayısı (CV, n = 19) hesaplandı. Moxi Z küçük ortalama CV (Şekil 4) Z2 ile karşılaştırılabilir ve Coulter tabanlı sayma teknolojileri ile sadece ulaşılabilir hassasiyet yüksek düzeyde temsilcisidir. Moxi Z enstrüman boyutlandırma satın hassas, hassas kalibre polistiren boncuklar ölçümü yoluyla sonraki değerlendirildi. Moxi Z ortalama parçacık boyutu ölçümleri (n = 5) üretici rapor boyutları karşı grafiğe geçirildi. Görülebileceği gibi in Şekil 5, Moxi Z ölçümleri sürekli bir yüksek doğrusal korelasyon (r 2 = 0,9989) ile üretici değerler eşleştirilir. Boyutu ve sayısı bilgileri ötesinde, Moxi Z bir rapor Moxi Canlılık Endeksi (MVI) değeri ile memeli hücre kültürü bir sağlık reaktif gerektirmeyen, genel bir değerlendirme sağlar. Bu indeks toplam parçacık sayımı ile ilgili olarak ilgi popülasyonda hücrelerin sayısının oranı, bir elde edilir. MVI ölçüm yetenekleri göstermek için, MVI değerleri (M Tipi kaset) standart manuel ve flow sitometri ölü / canlı ölçüm teknikleri ile karşılaştırıldı. Ölü (&lt;% 10 canlı) HEK-293 ve HeLa hücre popülasyonları 37 seyreltici (ISOTON II, Beckman Coulter) içeren bir besin içermeyen, sodyum florür ° C&#39;de canlı hücrelerin gecede inkübasyonlar yoluyla oluşturulan Kontrollü teorik canlılık düzeyleri canlı ve ölü hücreleri ratiometrically karıştırma bilinen konsantrasyonları tarafından hazırlanmıştır. Resulting çözümler hemositometre sayıları ve akış sitometresi ölçümleri ile her iki nüsha halinde canlılık düzeyleri incelendi. Hemasitometre ölçümler% 0.1 Tripan mavi bir çözelti ve hücrelerin geleneksel bir 50/50 karışım kullanılarak yapılmıştır. Flow sitometri ölçümleri Viacount reaktif ve üretici tarafından belirtilen protokol (Merck) kullanarak bir Guava PCA sitometresi (Merck) kullanılarak yapıldı. Şekil 6&#39;da gösterildiği gibi, HEK hücreleri ve HeLa hücreleri &quot;için analog bir hemasitometre canlılığı yüzdelere MVI verilerin lineer bir formda&quot; Pearson katsayısı değerlerinin (R 2) = 0,9937 ve r 2 = 0,9728, sırasıyla, R 2 idi. Bu sonuçlar, bu yaklaşım bir sitometresi veya hemositometre kullanılarak elde edilen canlı / ölü ölçümleri üstünlügümüz hücre canlılığı geniş bir yelpazesinde kültür sağlık bilgileri sağladığını göstermiştir. Tablolar ve Şekiller (Dittami ve ark, 2011). 15: Şekil 1.. İnce film Coulter Sayma: Elektrik akımı ince-film kaseti Hücre Algılama Bölgesi geçirilir. Hücreleri CSZ aracılığıyla tek bir dosya akışı gibi, voltaj anlık artışlar Moxi Z. ile ölçülür <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3842/3842fig2.jpg" /> Şekil 2. Moxi Z sayıları Coulter Z2 sayıları karşılaştırılabilir. Hücre ve boncuk süspansiyonların Özdeş sayıları bir Coulter Z2 ve Moxi Z. hem kullanılarak sayıldı Moxi Z sayıları sayısı değerleri (n = 3-4) Ortalamalı göre çizildi Coulter ilgili Z2 sayımı ve doğrusallaştırma r 2 değerleri tespit edilmiştir. A) M Tipi kaset - 0 konsantrasyon aralığı - 500.000 hücre / ml. B) Type S kaset - 0 konsantrasyon aralığı - 2-2.5e 6 / ml.Error Barlar işaret ± 1 standart sapma. Şekil 3. Moxi Z konsantrasyonu ölçümleri teorik hücre konsantrasyonları vs. A) Type M kaset - Teorik konsantrasyonu değerlerinin bir başlangıç ​​500,000 hücre / ml numunesinin seri seyreltiler hazırlandı B) Type S kaset -. 2.5e 6 hücre / ml örnek - Teorik konsantrasyonu değerlerinin bir ilk 2 seri seyreltiler hazırlandı. Hata Barlar ± 1 standart sapma gösterir. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3842/3842fig4.jpg" /> Şekil 4. Coulter Z2, Moxi Z (M Tipi kaset) ve hemositometre için Değişim Katsayısı. Her yaklaşım için HEK-293 ve HeLa hücre sayıları varyasyon ortalama katsayısı (CV, n = 19) ayrı 5 ölçülen özgeçmişleri ile hesaplandı 300.000 hücre / ml aralığı - 200.000 içinde HEK-293 ve HeLa Hücreleri sayar. Hata Barlar ± 1 standart sapma gösterir. Şekil 5. Moxi Z-Moxi Z kullanılarak partikül boyutu ölçüm Hassas boncuk büyüklüğü ölçülür (M Tipi kaset) vs üreticisi boncuk boyutu bildirdi. Hata Barlar ± 1 standart sapma gösterir. <img alt="Şekil 6" src="/files/ftp_upload/3842/3842fig6.jpg" /> 6 Şekil. MVI kullanarak Kültür Sağlık Değerlendirmesi - Bir hemasitometre kullanarak görsel, tripan-mavi lekeli canlılığı sayımları karşı MVI ölçümler (M Tipi kaset) ve Guava PCA Viacount canlılığının karşılaştırılması.

<ol><li>Fernyhough, M. E., Helterline, D. L., Vierck, J. L., Hill, R. A., Dodson, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coulter+counter+use+in+the+enumeration+of+muscle+and+fat+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Cell.+Sci%22%5BJournal%5D)">Coulter counter use in the enumeration of muscle and fat stem cells.</a> Methods. Cell. Sci. 25, 221-225 (2003).</li>
<li>Blades, A. N., Flavell, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observations+on+the+use+of+the+Coulter+model+D+electronic+cell+counter+in+clinical+haematology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Observations on the use of the Coulter model D electronic cell counter in clinical haematology.</a> J. Clin. Pathol. 16, 158-163 (1963).</li>
<li>Morris, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Particle+Size+Analysis+of+Beer+Solids+using+a+Coulter+Counter%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Inst.+Brew%22%5BJournal%5D)">Particle Size Analysis of Beer Solids using a Coulter Counter.</a> J. Inst. Brew. 90, 162-166 (1984).</li>
<li>Marth, E. H. Electronic Somatic Cell Counting Procedure. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarth%2C+EH+%22Standard+Methods+for+the+Examination+of+Dairy+Products%22">Standard Methods for the Examination of Dairy Products</a>. , Amer. Publ. Health Assoc., Inc. 134-140 (1978).</li>
<li>Parks, L. R., Jurbergs, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Number+and+size+distribution+of+particles+in+cellulosic+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Polym.+Sci%22%5BJournal%5D)">Number and size distribution of particles in cellulosic solutions.</a> J. Appl. Polym. Sci. 11, 193-199 (1960).</li>
<li>Davis, R. E., Green, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automatic+platelet+counting+with+the+Couler+particle+counter%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Automatic platelet counting with the Couler particle counter.</a> J. Clin. Pathol. 20, 777-779 (1967).</li>
<li>Dittami, G. D., Rabbitt, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrically+evoking+and+electrochemically+resolving+quantal+release+on+a+microchip%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Electrically evoking and electrochemically resolving quantal release on a microchip.</a> Lab on a Chip. 10, 30-35 (2010).</li>
<li>Nahreini, P., Hanson, A., Prasad, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-yield+production+of+recombinant+antibody+fragments+in+HEK-293+cells+using+sodium+butyrate%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechiques%22%5BJournal%5D)">High-yield production of recombinant antibody fragments in HEK-293 cells using sodium butyrate.</a> BioTechiques. 34, 968-972 (2003).</li>
<li>Escuyer, V., Collier, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anthrax+Protective+Antigen+Interacts+with+a+Specific+Receptor+on+the+surface+of+CHO-K1+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Anthrax Protective Antigen Interacts with a Specific Receptor on the surface of CHO-K1 Cells.</a> Infection and Immunity. 59, 3381-3386 (1991).</li>
<li>Isaacs, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Borrelia+bugdorferi+bind+to+epithelial+cell+proteoglycans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Borrelia bugdorferi bind to epithelial cell proteoglycans.</a> J. Clin. Invest. 93, 809-819 (1994).</li>
<li>Saito, Y., Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+selenoprotein+P+as+a+selenium+supply+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Characterization of selenoprotein P as a selenium supply protein.</a> Eur. J. Biochem. 269, 5746-5751 (2002).</li>
<li>Kataoka, S., Tsuruo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physician+Education%3A+Apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncologist%22%5BJournal%5D)">Physician Education: Apoptosis.</a> Oncologist. 1, 399-401 (1996).</li>
<li>Liegler, T. J., Hyun, W., Yen, T. S., Stites, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+quantification+of+live%2C+apoptotic%2C+and+necrotic+human+peripheral+lymphocytes+by+single-laser+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Diagn.+Lab+Immunol%22%5BJournal%5D)">Detection and quantification of live, apoptotic, and necrotic human peripheral lymphocytes by single-laser flow cytometry.</a> Clin. Diagn. Lab Immunol. 2, 369-376 (1995).</li>
<li>Sheridan, J. W., Bishop, C. J., Simmons, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biophysical+and+morphological+correlates+of+kinetic+change+and+death+in+a+starved+human+melanoma+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Sci%22%5BJournal%5D)">Biophysical and morphological correlates of kinetic change and death in a starved human melanoma cell line.</a> J. Cell. Sci. 49, 119-137 (1981).</li>
<li>Dittami, G. M., Rabbitt, R. D., Ayliffe, H. E. ORFLO Moxi Z: Revolutionizing electronic cell count accuracy and cell viability estimates through curve fitting. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDittami%2C+GM+%22Life+Science+Magazine%2C+VWR+International%22">Life Science Magazine, VWR International</a>. , Forthcoming (2011).</li>
</ol>

Gregory M. Dittami ve HE Ayliffe Orflo Teknolojileri, dizayn, üretir ve satar Moxi Z. Richard D. Rabbitt Orflo Teknolojileri ödenen danışmanlık uzmanlığı, part-time sağladığı şirket çalışanlarıdır. Bu makalenin Üretim ve Serbest Giriş Orflo Teknolojileri tarafından desteklenmektedir.

Alttaki uygulaması Coulter yaklaşımı ölçümlerin genel doğruluk son derece belirleyici olabilir. Kritik bir bölgede iki veya daha fazla hücre aynı anda diyafram geçiyor ve tek bir elektrik olayı olarak ölçülür &quot;tesadüf olaylar&quot; için ham hücre sayımları düzeltmedir. &quot;Tesadüf olaylar&quot; hücre boyutu ve kümelenme derecesi (Davis ve ark 1967) 6 dahil olmak üzere bir dizi faktöre bağlı olarak değişir hata katkıda bulunur. Sonuç olarak, herhangi bir örnek için gerekli rastlantısal düzeltme yaygın olarak hücre / partikül tipleri arasında ve daha da özdeş hücre tipleri farklı kültür arasında değişen, önceden tahmin edilemeyen. Coulter tarafından ilk yayınlarında köklü teori, kurulan, gözlemlenen olaylar ve ampirik belirlenmiş, parçacık özel düzeltme faktörü, z sayısına göre ham sayıları bir logaritmik ayarlaması uygulama içerir. Doğru düzgün t sayımları ile elde edilebilir ikenkendi düzeltme algoritması, bu hücre tiplerinin ve doğru bir değeri tahmininde karşılık gelen zorluğu arasındaki z değerleri büyük farklılıklar bağlı olarak, pratik uygulanabilirliği sınırlıdır. Burada, rastlantısal düzeltme algoritması ile birlikte Moxi Z eğri tarafından tanımlanan &quot;gerçek&quot; hücre sayısı kullanılarak, Moxi Z dinamik gerçek konsantrasyonları elde etmek tesadüf düzeltir. 500.000 hücre / ml (M Tipi kaset) ve 3000 - 2 - 2.5e-6 hücre / ml (Type S kaset) high-end Coulter Z2 kullanılarak elde edilen sonuçlar karşılaştırıldığında, Moxi Z 0 bir konsantrasyon aralığında karşılaştırılabilir sayımları üretilen . Ayrıca, Moxi Z sayısında varyasyon benzer bir düşük katsayısı ve altın standart, hücre sayımı yılında Coulter-teknik karakteristik parçacık boyutlandırma bir hassasiyet ile bu sayı doğruluğu ulaşır. Ayrıca, burada sunulan veriler Moxi Z değerli bilgiler sağlayabilir göstermektedirHücre kültürlerinin genel sağlığı ile ilgili. Moxi Z bu kültürün sağlık değerlendirmesi belirlemek için özel bir yazılım algoritması ile eğri yaklaşımı yararlanır. Ayırmak gibi blebbing gibi hücre ölümü ile ilişkili morfolojik değişiklikler, ve hacimsel çarpıtmalar (Kataoka ve Tsuruo 1996, Liegler ve ark 1995, Sheridan ve ark 1981) 12-14, mümkün Moxi-Z arasındaki impedimetric farklılıkları ayırt etmek için yapmak popülasyonları ve ölü hücre / enkaz nüfus yaşıyor. MVI parçacık enkaz göreceli katkıları, büzüşmüş nekrotik hücreler ve ilgi eğrisi takılan hücre popülasyonunu belirlemek için kültür / tanecik boyut dağılımı analiz tarafından üretilir. MVI değeri böylece toplam partikül nüfus profiline göre kümil potasyum başlatıcısı varlığında nüfus sayımları nüfusu dizin veya oranlı metrik ölçü yansıtır. Bu değer daha sonra algoritmik-ayarlanabilir dayalı nüfus istatistikleri ve ampirik gözlemler olduğunu. Because MVI geleneksel bir boyama yaklaşımlar başka parametrelerle bakar, bu teknikler ayna beklenmez fakat bunun yerine bir hücre kültürünün sağlığı ile ilgili önemli bir görünümü, özellikle bir alternatif döküntüleri ve kirletici maddeleri mikrobiyal ile ilgili olarak, sağlar. Özetle, Moxi-Z hücre sayacı patentli bir ince-film sensör teknolojisi ile birlikte Coulter İlke ve eğri yazılım algoritmaları kullanarak hassas, tekrarlanabilir hücre sayısının deneyleri, hücre boyutunu ve hücre sağlığı sağlayan ultra küçük benchtop araçtır . 8 saniyede, - çapı 25 mikron (34 mikron 2 dinamik aralık -) M Tipi kaseti ile 4 arasında değişen parçacıklar sayma yeteneğine sahiptir. 15 saniye içinde, - çapı 20 mikron (26 mikron 2 dinamik aralık -) Type S kaset ile 3 arasında değişen parçacıklar sayma yeteneğine sahiptir. Dahası, Moxi-Z reaktiflerin kullanımı olmaksızın sağlık değerlendirmelerinin gerçekleştirir. Bu, daha az emek inte varnsive ve manuel sayım daha çok özneldir. Standart Coulter sayımı karşılaştırıldığında, Moxi, önemli ölçüde daha küçük daha hızlı, daha fazla bilgi sağlayan önemli ölçüde daha az bakım gerektirir, kullanımı kolay ve maliyetinin bir kısmını olduğunu.

<table border="1" ><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> ORFLO Dilüent </td><td> ORFLO </td><td> MXA006 </td><td></td></tr><tr><td> Kaset Dispenser </td><td> ORFLO </td><td></td><td> Uygun dağıtım için 25 kasetler kadar Mağazaları </td></tr><tr><td> USB Kablosu </td><td> ORFLO </td><td></td><td> PC / Mac veya güç adaptörü cihazı bağlar </td></tr><tr><td> Güç Adaptörü (ABD ve AB modelleri) </td><td> ORFLO </td><td></td><td> AC prizine USB kablosunu </td></tr><tr><td> USB Flash Sürücü </td><td> ORFLO </td><td></td><td> Mağazalar Moxi Z yazılımı ve kullanım kılavuzu </td></tr><tr><td> Kalibrasyon Kontrol Boncuk </td><td> ORFLO </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Elektronik Kalibrasyon Kaset </td><td> ORFLO </td><td></td><td> Doğru sistem operasyon ve kalibrasyon doğrulama için elektronik kaset </td></tr></tbody></table>

moxi z mini otomatik hücre sayacı kullanımı memeli hücre sayımı, hücre boyutu ve hücre sağlık belirlenmesi

Determination of Mammalian Cell Counts, Cell Size and Cell Health Using the Moxi Z Mini Automated Cell Counter

Parçacık ve hücre sayımı rutin hücre kültürü, hematolojik analizi, ve endüstriyel kontrol 1-5 dahil olmak üzere çeşitli uygulamalar için kullanılır. Hücre / partikül sayma teknolojileri kritik bir atılım 50 yılda önce Wallace Coulter tarafından Coulter tekniğinin geliştirilmesi idi. Teknik bir mikron büyüklüğünde diyafram boyunca bir elektrik alan uygulama içerir ve hidrodinamik delikten tek parçacıklar duruluyor. Parçacıklar tarafından diyafram çıkan tıkanıklığı, doğrudan ve kesin hücre boyutu / hacim ile korele edilebilir elektrik empedansı ölçülebilir bir değişiklik verir. - Hücre / parçacık sayma kriter olarak yaklaşımın tanınma, partikül boyut ve sayıları olağanüstü hassasiyet ve doğruluk kaynaklanıyor, özellikle de el ve görüntüleme dayalı teknolojiler (75 karşı Coulter sayaçlar için% 98 sipariş doğrulukları karşılaştırıldığında manuel ve görüntü tabanlı sistemler için% 80). Buhücre sayımı için görüntüleme-temelli yaklaşımlar aksine, Coulter Tekniği hassas hacimsel bilgi hesaplayarak dramatik enkaz ve kümeleme gelen sayım girişim azaltır hücre / parçacıkların bir gerçek üç boyutlu (3-D) ölçümü yapar, aslında atfedilebilir hücreler / partikülleri ile ilgili. Genel olarak bu diğer sayma teknikleri 6 daha doğru, daha az sıkıcı, daha az zaman alıcı ve daha az öznel anlamda hücrelerin numaralandırma ve boyutlandırma için bir yol sağlar. Hücre sayımı yılında Coulter tekniğin önem kazanmasına rağmen, rutin biyolojik çalışmalarda yaygın kullanımı nedeniyle geleneksel araçların maliyeti ve büyüklüğü için engelleyici olmuştur. Bir daha az pahalı Coulter bazlı aleti imal edilmiş olmasına rağmen, iki ya da daha fazla hücre diyafram geçmekte ve eş zamanlı olarak tespit edildiği &quot;tesadüf olaylar&quot; için düzeltme içindeki daha pahalı benzerleri ile karşılaştırıldığında, bu sınırlamaları vardır. AnotheMevcut Coulter teknolojileri ile r sınırlama hücre örneklerinin genel sağlık ölçümleri eksikliğidir. Sonuç olarak, ek teknikler genellikle Coulter hücre canlılığını değerlendirmek için sayma ile birlikte kullanılması gerekir. Canlılığı değerlendirme geleneksel yöntemlerle hücre boyama ve / veya böyle bir akış sitometresinin kadar pahalı ve hantal ekipman kullanımı gerektiren bu yana bu deneysel kurulum süresi ve maliyetini uzanır. Burada anlatılan Moxi Z Mini otomatik hücre sayıcı, etkinleştirmek için bir ince-film sensör teknolojisi ile Coulter İlke doğruluğunu birleştiren ultra-küçük benchtop araçtır boyutlandırma ve 3-25 mikron arasında değişen parçacıklar sayma, bağlı hassas hücre sayımı kaset kullanılabilir. 25 mikron (dinamik aralığı 2 - - 34 mikron) M tipi kaset 4 ortalama çaplı partiküllerin hesaplamak için kullanılabilir, ve Type S kaset ile parçacıklar ve 3 arasında ortalama çapı hesaplamak için kullanılabilir - 20 mikron (dinamik çaldıe 2 - 26 mikron). Sistemin bir hacimsel ölçüm yöntemi kullanır yana, 4-25 mikron 34 bir hücre hacmi aralığına karşılık gelen - 8,180 fL ve 3 - 20 mikron 14 bir hücre hacmi aralığına karşılık gelen - 4200 fL, ilgili olduğunda Küresel olmayan parçacıklar olarak ölçülmüştür. Moxi Z kullanılarak memeli hücre sayımı gerçekleştirmek için, sayılmasına hücreleri birinci ORFLO ya da benzer bir seyreltici madde ile seyreltilir. Bir hücre sayımı kaset alet sokulur ve örnek kaset portuna yüklenir. Hücrelerin binlerce 8-15 saniye içinde ince-film membran bir &quot;Hücre Algılama Zone&quot; (CSZ) aracılığıyla Tek dosya çekilir. Run ardından, enstrüman sayısı ilgi popülasyonda hücre sayısının oranı belirleyerek genel kültür sağlık bir değerlendirmesi ile birlikte tesadüfen olay düzeltme sağlamak için özel bir yazılım algoritması ile birlikte eğri özel kullanır parçacıklar. Toplam tanecik sayısı dahil olmak üzeree çekmiş ve ölü hücreleri, hem de diğer artıkları ve kirletici bozuldu. Sonuçlar gerektiği gibi el ile ayarlanabilir geçitleri ile otomatik bir eğri ile uyum histogram format, sunulmuştur. Ek kültür sağlık bilgileri sağlarken Sonuçta, Moxi Z, bir Coulter Z2, günümüzde altın standart karşılaştırılabilir bir kesinlik ve doğruluk ile sayım sağlar. Ayrıca önemli ölçüde daha kolay operasyon ve bakım ile daha küçük ayak izi, ve karşılaştırılabilir teknolojilerin maliyetinin bir kısmını, daha az zamanda bu sonuçları elde ediyor.

Moxi Z minyatür otomatik hücre sayıcı patentli ince film sensör teknolojisi ve boyutlandırma gerçekleştirmek için özel bir yazılım algoritması ve parçacıkların geniş bir ebat aralığında sayma gibi kümil potasyum başlatıcısı varlığında genel sağlık belirlemek için Coulter İlke birleştiren yeni bir enstrümandır memeli hücre kültürleri. Bu protokol, hücre kültürlerinin sağlık sayma ve değerlendirme için bir aracın kullanılması açıklanmaktadır.

Moxi Z Mini Otomatik Hücre Sayacı Kullanımı Memeli Hücre Sayımı, Hücre Boyutu ve Hücre Sağlık Belirlenmesi

Parçacık ve hücre sayımı; rutin hücre kültürü, hematolojik analizler ve endüstriyel kontroller dahil olmak üzere çeşitli uygulamalar için kullanılır1-5. Bir ...

Mxi Z Mini otomatik hücre sayıcı, yüksek doğrulukta hücre ve partikül sayımı gerçekleştiren ultra küçük boyutlu bir masaüstü cihazdır. Altın standart olan TER prensibini, patentli bir ince film sensör teknolojisiyle birleştirir. Mxi Z ile birlikte kullanılan kasetler, hücre sayımlarını elde etmek için tasarlanmış hassas mikroakışkan sensörlerdir.Cihazın ön kısmına bir kaset yerleştirilir ve örnek portuna 75 µL örnek yüklenir. Çalışma başladığında, hücreler kasetin ince film membranındaki bir hücre algılama bölgesinden tek sıra halinde çekilir ve algılama bölgesinden geçerken örnek başına binlerce hücre sayılır. Her birinin kesin hacmi, bir empedans ölçümü ile belirlenir.Sekiz saniye sonra, tüm partikül popülasyonuna ait yüksek çözünürlüklü eksiksiz bir histogram ile birlikte hücre konsantrasyonu, ortalama hücre boyutu ve hücre sağlık indeksi görüntülenir. Örnekta, örnek verileri daha sonra analiz edilebilir ve cihazın kendisine kaydedilebilir veya Bluetooth ya da USB aracılığıyla bir Mac veya PC'ye aktarılabilir. Bu tekniğin hemositometreler veya görüntü tabanlı otomatik hücre sayıcılar gibi diğer sistemlere göre temel avantajı, görüntü tabanlı sistemlerdeki %75 ila %80'lik orana kıyasla %95'ten daha yüksek doğruluk ve kesinlikle çok daha güvenilir olmasıdır.Ayrıca hücre boyutunu ölçer, çok daha hızlıdır ve sübjektif değildir. Bu yöntem, milyonlarca hücre sayımı için idealdir. Geniş dinamik aralığı sayesinde çok çeşitli hücre sayım uygulamalarına uygulanabilir.Bu tür uygulamalar arasında beyaz kan hücresi sayımları, kırmızı kan hücreleri, protozoalar, algler ve mayalar yer alır. Bu deneye, taze ayrıştırılmış HEK 2 93 hücre süspansiyonunu, tüm akış dilüenti veya PBS gibi fizyolojik iletkenliğe sahip bir ortamda uygun konsantrasyona seyrelterek başlayın. Hücre kümelenmesini en aza indirmek için nazikçe triture edin ve ünitenin güç kaynağından çekildiğinden emin olun.Ardından, güç düğmesine basarak mxi Z'yi açın; ana ekran görüntülenecektir. Mxi Z, hassas mikroakışkan sensörler olan tek kullanımlık M veya S tipi kasetler kullanır. Her kasetin üzerinde, mavi ovalle belirtilmiş ve bir veya iki şeklinde etiketlenmiş iki yükleme portu bulunur.Her bir kaset iki test için kullanılabilir. M tipi kasetlerin çalışma aralığı mililitre başına 3000 ila 500.000 hücredir. S tipi kasetlerin aralığı ise mililitre başına 3000 ila 2,5 milyon hücredir.Tepsinin aşağı bastırın ve örneğin homojenliğini sağlamak için bir kaseti yerleştirip birkaç kez yavaşça ters çevirin. Ardından 75 µL örnek pipetleyin. Pipeti 45 derecelik bir açıyla tutarak pipet ucunu örnek portuna sıkıca yerleştirin ve örneğin tamamının verildiğinden emin olarak, tek bir pürüzsüz hareketle örneği porta boşaltın.Sayımı başlatmak için ekranda belirlenmiş daireye veya küçük partikül modu kutusu dışındaki herhangi bir yere dokunun. mxi Z testi başlatacak ve hücre sayım sonuçları sekiz saniye içinde tamamlanacaktır. Tip M kaset ile sonuçlar, ilgilenilen tek hücre popülasyonuna uyan ve toplam sayımı çakışmalar için düzelten tescilli bir eğri uydurma algoritmasıyla otomatik olarak görüntülenir.Birden fazla partikülün veya kümenin hücre algılama bölgesinden aynı anda geçtiği olaylar veya olaylar. Bu çakışma olaylarının eğri uyum alanının sağ tarafında, yani dışında kaldığına dikkat edin; ancak bunlar yine de toplam sayımlara dahil edilir. Uygun bir uyum bulunduğunda, tüm örnek popülasyonunun yüksek çözünürlüklü bir histogramı; hücre konsantrasyonu, ortalama çap ve ortalama hacimle ilgili sayısal değerlerle birlikte görüntülenir.Ek olarak, genel kültür sağlığının bir göstergesi olarak bir moxie popülasyon indeksi veya MPI değeri verilir. Histogramın en solundaki sayımlar normaldir ve sistem hassasiyetini ve olası örnek kalıntı sayımlarını optimize etmek için ayarlanmış sistem taban gürültü eşiğini temsil eder. Örnek çalıştırma tamamlandığında, kaseti üniteden çıkarın, kaydetmek ve ana ekrana dönmek için "done" (tamamlandı) seçeneğini seçin.Görsel bir gösterge, numunenin çalıştırıldığını onaylar. İkinci bir numune çalıştırılacaksa, kaseti çevirin ve üniteye yerleştirin. Normal moddaki bir çalıştırmayı takiben sonuçlar; M tipi kaset için 4 ila 34 mikron, S tipi kaset için ise 3 ila 26 mikronluk bir boyut ölçeğinde eğri uydurma sayımı için görüntülenir. x eksenini 4 ila 26 mikron olarak yeniden ölçeklendirmek için yeniden ölçeklendirme simgesine dokunun.X ekseni ölçeğini sırasıyla; 4 ila 18 mikron, 4 ila 10 mikron ve tekrar 4 ila 34 mikron olacak şekilde değiştirmek için yeniden ölçekleme simgesine ardışık olarak basın. İstenirse eğriye uydurma moduna geri dönün. Mevcut analiz için test numarası, histogramın üst kısmındaki yeşil bir kutuda görüntülenir.Veriler test numarası olarak kaydedilecektir; histogramın manuel olarak kapılamasına (gating) olanak tanıyan kapılama modunu açıp kapatmak için kapılama simgesine dokunun. Bu işlem, kapılamayı varsayılan veri toplama modu haline getirir. Kapılar, soldaki ve sağdaki mavi kapılama işaretçilerini kaydırarak veya herhangi bir işaretçiye dokunup ardından beliren ok tuşlarıyla onları kademeli olarak hareket ettirerek değiştirilebilir.Görüntülenen sayımlar ve ortalama boyutlandırma bilgileri, yalnızca kapılama aralığındaki partiküllerden hesaplanır. Sonuçları kaydetmek ve ana ekrana dönmek için tamam simgesine basın. Kaydedilmiş bir testi açmak için ana ekrandaki histogram simgesine basın.Kaydedilmiş dokuz adede kadar histogramın simgesi aynı anda görüntülenecektir; sayfa aşağı veya sayfa yukarı tuşuna dokunun ya da ekranı yukarı veya aşağı kaydırın. Gerektiğinde daha fazla test sonucunu görüntülemek için ilgilenilen testin simgesini seçin. Her histogram, ya eğri uydurma modunda ya da kapılamalı modda açılacaktır.Kaydedilme şekline bağlı olarak, test için kullanılan kaset tipi (M veya S) ekranın sol üst köşesinde belirtilecektir. Kaydedildi. Histogramlar ayrıca gating ve eğri uydurma modları arasında değiştirilebilir; istenen piki otomatik olarak belirlemek için touch (dokunma) özelliğini kullanın. Bu işlem, seçilen pik için optimum gating konumlarını ayarlar.Bu özellik, özellikle çoklu pik durumları için kullanışlıdır. İlgi duyulan bir piki belirtmek için, histogramın Y eksenindeki sayım ölçeğini ayarlamak amacıyla yakınlaştırma ve uzaklaştırma ok simgelerine basın. Dikey ölçek, parmağın pik üzerinde yukarıya doğru kaydırılmasıyla azaltılabilir veya aşağıya doğru kaydırılmasıyla artırılabilir; bu testi kapatıp ana ekrana dönmek için geri simgesine basın.Veriler, moxie chart uygulaması kullanılarak bir Mac veya PC'ye aktarılabilir. Bunun için öncelikle Moxie Z ünitesinin ana ekranındaki Bluetooth simgesine basın. Ünite Bluetooth kimliğini bildirecektir; bilgisayarda moxie chart uygulamasını açın ve sağ üst köşedeki Bluetooth simgesine tıklayın.Ardından, Bluetooth'a ek olarak Z'nin Bluetooth kimliğine karşılık gelen cihazı ve yüklenen dosyalar için seçilen hedef klasörü seçin. Verileri Mxi Z'den bir bilgisayara aktarmanın bir başka yolu da bir USB kablosu kullanmak ve cihazı normal bir USB aygıtı olarak işlemektir. Veri dosyaları söz konusu olduğunda, bir USB aracılığıyla bağlanan Mxi Z ünitesinden gelen veri dosyaları bilgisayardaki herhangi bir dizine kopyalanabilir.Dosyalar doğrudan Mxi Charles uygulamasıyla açılıp analiz edilebilir veya CSV formatında oldukları için, Mxi Z'deki sayım sonuçlarını elde edilenlerle karşılaştırmak amacıyla müşteri analizi için doğrudan Microsoft Excel'de veya diğer veri analiz programlarında açılabilir. Hassas kalibre edilmiş boncukların ve memeli hücrelerin özdeş süspansiyonlarını saymak için her iki yöntem kullanılmıştır. Çapları 6 ile 15,6 mikron arasında değişen dört farklı boyutta boncuk ve ayrıca birkaç farklı hücre hattı test edilmiştir.Burada görülebileceği gibi, üç ila dört sayımın ortalaması grafiğe aktarılmıştır. Elde edilen sayımlar neredeyse aynıdır; bu da Moxie Z'nin, Mxi Z kullanılarak doğru şekilde değerlendirilebilen konsantrasyon aralığını göstermek amacıyla geniş bir boyut yelpazesinde doğru sayımlar yapabildiğini belirtmektedir. Aynı boncuklar ve hücreler, tip M kaset için başlangıçta mililitre başına 500,000 hücre, tip S için ise yaklaşık olarak mililitre başına 2.5 milyon hücre olacak şekilde seri olarak seyreltilmiştir. Ardından, burada gösterildiği gibi, teorik hücre konsantrasyonları elde edilen sayımlara karşı grafiğe aktarılmıştır. Ölçülen konsantrasyonlar, teorik hücre konsantrasyonlarıyla eşleşmiş olup; her bir kasetin dinamik aralığı boyunca, tip M kasetler için mililitre başına 3000 ila 500,000 hücre ve tip S kasetler için mililitre başına 3000 ila 2.5 milyon hücre arasında doğru sayım yapıldığını kanıtlamıştır. Elde edilen sonuçların değişkenliğini incelemek için, mililitre başına 200,000 ila 300,000 hücre aralığındaki HEK 293 ve HELOC hücrelerinin beş ayrı sayımı; call to Z two, Moxi Z ve hemositometre kullanılarak gerçekleştirilmiştir.Bu grafikte görülebileceği üzere, varyasyon katsayısının ortalaması Z two ve mxi Z'de benzer seviyelerdeyken, hemo sitometreninkinden çok daha düşük çıkmıştır; bu durum Mxi Z'nin tekrarlanabilirliğinin Z two ile benzer olduğunu ve hemo sitometreinkinden daha üstün olduğunu göstermektedir. Parçacık boyutunu belirlemede Mxi Z'nin hassasiyetini kanıtlamak için, Mxi Z kullanılarak üretilmiş boncuklar ölçülmüştür. Her boncuk boyutu için beş ölçüm yapılmış, bunların ortalaması alınmış ve üretici tarafından bildirilen boncuk boyutuna karşı grafiğe dökülmüştür. Mxi Z, boncukları üretici tarafından bildirilen boyutlarda ölçmüştür.mxi Z'nin kültürü değerlendirme kapasitesini göstermek için R kare değeri 0,9989 olarak belirlenmiştir. Özdeş ölü hücre eklemesi, HEK ve hela hücre hazırlıkları için hücre sağlığı indeksi ölçümleri Mxi Z kullanılarak kaydedilmiş ve karşılaştırma amacıyla aynı örneğin görsel tripan mavisi dışlama sonuçlarındaki hemotoma canlılık yüzdesi veya akış sitometresi guava PCA sonuçları ile karşılaştırılmıştır. Örneklerin canlılık ölçümleri, burada görüldüğü gibi grafik üzerinde de gösterilmiştir.Mxi Z kullanılarak elde edilen HGK ve LAR hücreleri için hesaplanan canlılık değerleri, sırasıyla 0,9937 ve 0,9728 r kare değerleri ile Trypan blue dışlama yöntemi kullanılarak elde edilen canlılık ölçümleriyle benzerlik göstermiştir. Elde edilen veriler ayrıca, flow sitometre ile guava PCA kullanılarak elde edilen verilerle de kıyaslanabilir olup; EK hücreleri için 0,9724 ve hela hücreleri için 0,9585 R kare değerlerine sahiptir. Bazı durumlarda hücre sağlık indeksi standart canlılık yaklaşımlarıyla uyumlu olsa da, bu yöntem sağlık değerlendirmesi için tamamen yeni ve farklı bir tekniktir ve sonuç olarak her zaman eski tekniklerle özdeş olmayabilir.Bu videoyu izledikten sonra, bu prosedürü uygularken hücre sağlığı, hücre boyutu ve hücre sayısı bilgilerini nasıl kolayca elde edebileceğiniz konusunda iyi bir anlayış kazanmış olmalısınız. Hücre yoğunluğunun doğru aralıkta olduğundan emin olmak önemlidir.

determination-mammalian-cell-counts-cell-size-cell-health-using-moxi

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Scepter Hücre Sayıcı, hücre sayımı, hücre çap ve hacim izlemek ve hücresel popülasyonların sağlık ve kalite kontrol etmek için kullanılan bir kültürden diğerine kullanılabilir bir el otomatik bir cihazdır.

Hücre Kültürü sırasında Hücre Sayısını Belirleme Scepter Hücre Sayıcı

Bu makale, iki yeni açık kaynaklı ImageJ eklentisi aracılığıyla hemositometre ve migrasyon/invazyon mikrograflarının miktar tayinini açıklamaktadır: Hücre Konsantrasyonu Hesaplayıcısı ve migrasyon tahlili Sayacı.  Ayrıca, görüntü alma ve kalibrasyon protokollerini açıklar ve eklentilerin giriş gereksinimlerini ayrıntılı olarak tartışır.

ImageJ Eklentileri Kullanma Hücre Sayım Usul Otomatik Niceleme ve Analizi

T-lenfosit mitogenezine blastojenik transformasyon eşlik eder, bunun üzerine hücre hacmi hücre bölünmesinden önce genişler. Burada, hücre çaplarını ölçme yeteneğine sahip otomatik bir hücre sayacı kullanarak T lenfositlerinde blastogenezi ölçmek için bir yöntem açıklıyoruz.

Bağışıklık ilaçlarının tanımlanmasında T lenfositlerinde mitojen kaynaklı blastojenez hızlı bir şekilde belirlenmesini

Objektif-ücretsiz video mikroskobu hücre kültürleri doğrudan kuluçka makinesi içinde izlemek sağlar. Burada biz almak ve kültürlü HeLa hücreleri 2,7 gün uzun edinimi çözümlemek için kullanılan tam iletişim kuralı tanımlamak, 2.2 x 10 bir veri kümesi için önde gelen6 ölçümleri tek hücre morfolojisi ve 10584 hücre döngüsü izler.

Dinamik için objektif-ücretsiz Video mikroskobu ve kantitatif analiz yapisan hücre kültürü

Bir foto-optik in situ mikroskopi cihazı doğrudan hücre süspansiyon tek hücrelerin boyutunu izlemek için geliştirilmiştir. Gerçek zamanlı ölçüm, foto-optik sterilize edilebilir probun otomatik görüntü analizine dahil edilerek gerçekleştirilir. Morfolojik değişiklikler büyüme durumuna ve yetiştirme koşullarına bağımlılıkla birlikte ortaya çıkmaktadır.

In Situ Biyoproseslerde Tek Hücreli Morfolojinin Gerçek Zamanlı Tayini İçin Mikroskopi

İn vitro mikronükleus tahlil genotoksisite ve sitotoksisite değerlendirmek için iyi kurulan bir yöntemdir ama manuel mikroskobik kullanarak tahlil Puanlama zahmetli ve subjektif ve inter-scorer değişkenlik muzdariptir. Bu yazıda, multispektral görüntüleme akışı sitometrisi kullanılarak testin tam otomatik bir sürümünü gerçekleştirmek için geliştirilen protokol açıklanmaktadır.

Multispectral görüntüleme akışı sitometrisi kullanarak In vitro micronucleus assay gerçekleştirmek için otomatik bir yöntem

Genellikle kültürlü hücreler üzerinde bileşiklerin bir dizi potansiyel sitotoksisite değerlendirmek için gereklidir. Burada, 96-iyi formatında toksik bileşikler için güvenilir bir tarama stratejisi açıklar.

Düşük-Orta Throughput'ta Kültürlü Memeli Hücrelerinde Hücre Büyümesini ve SağkalımLarını Etkileyen Bileşikleri Belirleme Stratejisi

Burada, in vitro mammosphere öz-yenileme nicel tahsin sonuçlarının uygulanması ve yorumlanması açıklanmaktadır.

Murine Mammosphere Kültürlerde Kendini Yenileme Nin Niceliği

Gerçek zamanlı hücre metabolik akısı testi, pH ve oksijen sensörlerini kullanarak mitokondriyal ve glikolitik adenozin trifosfat üretimine karşılık gelen oksijen tüketim oranını ve hücre dışı asitleşme oranını ölçer. Bu yazıda osteoblastların enerji durumunu ve hücresel biyoenerjetik durumun karakterizasyonu ve yorumlanmasını anlamak için bir yöntem açıklanmaktadır.

Osteoblast Biyoenerjetik Teknolojilerini İzlemek için Gerçek Zamanlı Hücre Metabolik Akı Analizörünü Kullanma

Koloni oluşturan birimlerin (CFU) belirlenmesi, görünür koloniler oluşturması haftalar sürebilen Mycobacterium tuberculosis de dahil olmak üzere bakterilerin miktarını belirlemek için altın standart tekniktir. Burada, artan zaman verimliliği, azaltılmış laboratuvar alanı ve reaktif maliyeti ve orta ve yüksek verimli deneylere ölçeklenebilirlik ile CFU belirleme için bir mikro-CFU'yu açıklıyoruz.

Tüberküloza Karşı Aşıların Etkinlik Değerlendirmesi için Mikro Koloni Oluşturan Birim Testi

Öğrenin, Moxi Z mini otomatik hücre sayacı ile memeli hücrelerini hızlı ve doğru şekilde sayma, boyutlandırma ve sağlık durumunu değerlendirme yöntemini. Coulter prensibi ve mikroakışkan teknolojisi kullanan bu sistem, sekiz saniyede güvenilir sonuçlar sunar.

Moxi Z Mini Otomatik Hücre Sayacı Kullanımı Memeli Hücre Sayımı, Hücre Boyutu ve Hücre Sağlık Belirlenmesi

Daha fazla video keşfet