Name: Tüm Kan enoksaparin Antikoagülan Etkinliğinin Rapid Point-of-Care Assay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: Öğrenin, enoksaparin antikoagülan etkinliğini heparinaz kullanarak hızlı bir nokta-bakım testiyle değerlendirin. Bu yöntem, böbrek yetmezliği olan hastalarda ilaç düzeylerini belirlemeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Soruşturmalar sadece departman ve kurumsal kaynakların desteği ile yürütülmüştür. Koagülasyon cihazı (Hemochron 801) üretici yükümlülüğü olmaksızın kiralandı. Tahlil kartuşları perakende pahasına satın alınmıştır. Video tanıtım rakam Sanderink, ark güncellenmiştir. 12 video ikinci rakam (heparinase sindirim süresi elbette) Inchiosa ark izni ile yapıldı. 1

1. Heparinase Sulandırma <ol><li> Liyofilize heparinase bir saflaştırılmış protein 1 ug içeren şişeler içine (Siemens, Newark, Delaware, DadeHepzyme REF B4240-10), ticari olarak elde edilir. Protein tuzlu 0.25 ml (% 0.9 NaCI) içinde çözülür. </li></ol> 2. Kan Örnekleri Koleksiyonu <ol><li> Vacutainer tüpleri (; Franklin Lakes, NJ Becton-Dickinson), tamponlu; İki kan örnekleri sodyum sitrat (3,2% 0,3 ml 0.109M) içine vakum ile çizilmiş tüpler hem enoksaparin bilinen bir konsantrasyon ile önceden çivili vardır; kan hacmi 2.7 ml çizilen. Toplam içeriği daha sonra 3.0 ml &#39;dir. </li></ol> 3. Heparinase Sindirim <ol><li> Bir şırınga (; şişeye% 80 ve yaklaşık 0.2 ml 0.8 ug protein) aspire edilebilir heparinase şişenin tüm içeriği, bir Vacutainer tüpüne aktarılır; tuzlu 0.2 ml (% 0.9 NaCl) ilave edilir basel olarak hizmet veren ikinci tüp,enoksaparin etkisi eliminasyon öncesi ine devlet. </li><li> Her iki Vacutainer tüplere, 5 dakikalık bir süre için Hemochron aparat termostatlı bir kuyu içine yerleştirilir. (Heparinase ile 5 dakika sindirim süresi yeterliliği, önceden yayınlanmış çalışma kurulmuştur. 1) </li></ol> 4. Pıhtılaşma Tahliller <ol><li> Heparinase inkübasyon sonunda, kan 2.0 ml tahlil kartuş için transfer edilir. MAA tüp durumda, pıhtılaşma başlatmak için 250 mM CaCl2, 0.1 ml ile önceden doldurulur. Ticari aPTT tahlil kartuş (A104) antikoagulan olarak sodyum sitrat içeren Vacutainer tüplere içine çekilmiş edildiği tam kan pıhtılaşma başlatmak için tasarlanmıştır. </li><li> Hemochron cihaz kan pıhtılaşmasının tamamlanmasını sinyaller ve saniye cinsinden pıhtılaşma kez korur. Pıhtılaşma ti ile bölünmüş heparinase ile tedavi edilen örnek ve baz örnek arasındaki pıhtılaşma zamanlarda farklılıkme temel örnek için, enoksaparin giderilmesi sonucu yüzde azalma elde edilir. Aşağıda tartışıldığı gibi, kuvvetli lineer bir anti-Xa chromgenic tahlili ile ölçülen enoksaparin konsantrasyonu ile korelasyon için yüzde pıhtılaşma zaman içinde azalmasına ve tam kan örnekleri içinde çivili enoksaparin konsantrasyonu yanı sıra arasındaki ilişki için elde edilmiştir aktivite. Enoksaparin konsantrasyon Anti-Xa deneyleri iki aşamalı bir kromojenik tahlil için bir ticari kit (; Aniara, Mason, OH BIOPHEN) ile yapılmıştır. </li></ol>

<ol><li>Inchiosa, M. A. J. r, Pothula, S., Kubal, K., Sanchala, V. T., Navarro, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+development+of+a+point-of-care+assay+of+enoxaparin+anticoagulant+activity+in+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Thromb.+Thrombolysis%22%5BJournal%5D)">Toward development of a point-of-care assay of enoxaparin anticoagulant activity in whole blood.</a> J. Thromb. Thrombolysis. 32, 47-53 (2011).</li>
<li>Despotis, G. J., Filos, K. S., Levine, V., Alsoufiev, A., Spitznagel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aprotinin+prolongs+activated+and+nonactivated+whole+blood+clotting+time+and+potentiates+the+effect+of+heparin+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth.+Analg%22%5BJournal%5D)">Aprotinin prolongs activated and nonactivated whole blood clotting time and potentiates the effect of heparin in vitro.</a> Anesth. Analg. 82, 1126-1131 (1996).</li>
<li>Pothula, S., Inchiosa, M. A. Jr, Sanchala, V. T., Sarabu, M., Inchiosa, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+effect+of+protamine+excess+on+blood+coagulation+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">In vitro effect of protamine excess on blood coagulation assays.</a> Anesth Analg. 96, SCA39(2010).</li>
<li>Inchiosa, M. Jr, Pothula, S., Sanchala, V., Kubal, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+low+plasma+levels+of+low+molecular+weight+heparin%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Detection of low plasma levels of low molecular weight heparin.</a> Anesth Analg. 102, SCA10(2010).</li>
<li>Gogarten, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+new+antithrombotic+drugs+on+regional+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Anaesthesiol%22%5BJournal%5D)">The influence of new antithrombotic drugs on regional anesthesia.</a> Curr. Opin. Anaesthesiol. 19, 545-550 (2006).</li>
<li>Gouin-Thibault, I., Pautas, E., Siguret, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+profile+of+different+low-molecular+weight+heparins+used+at+therapeutic+dose%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Saf%22%5BJournal%5D)">Safety profile of different low-molecular weight heparins used at therapeutic dose.</a> Drug Saf. 28, 333-349 (2005).</li>
<li>Bazinet, A., Almanric, K., Brunet, C., Turcotte, I., Martineau, J., Caron, S., Blais, N., Lalonde, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dosage+of+enoxaparin+among+obese+and+renal+impairment+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb.+Res%22%5BJournal%5D)">Dosage of enoxaparin among obese and renal impairment patients.</a> Thromb. Res. 116, 41-50 (2005).</li>
<li>El Rouby, S., Cohen, M., Gonzales, A., Hoppensteadt, D., Lee, T., Zucker, M. L., Khalid, K., LaDuca, F. M., Fareed, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+a+HEMOCHRON+JR.+HEMONOXTM+point+of+care+test+in+monitoring+the+anticoagulant+effect+of+enoxaparin+during+interventional+coronary+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Thromb.+Thrombolysis%22%5BJournal%5D)">The use of a HEMOCHRON JR. HEMONOXTM point of care test in monitoring the anticoagulant effect of enoxaparin during interventional coronary procedures.</a> J. Thromb. Thrombolysis. 21, 137-145 (2006).</li>
<li>Yang, V. C., Bernstein, H., Cooney, C. L., Kadam, J. C., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+the+anticoagulant+activities+of+the+low+molecular+weight+heparin+fractions+and+fragments+with+flavobacterial+heparinase%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Removal of the anticoagulant activities of the low molecular weight heparin fractions and fragments with flavobacterial heparinase.</a> Thromb Res. 44, 599-610 (1986).</li>
<li>Maddineni, J., Walenga, J. M., Jeske, W. P., Hoppensteadt, D. A., Fareed, J., Wahi, R., Bick, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Product+individuality+of+commercially+available+low-molecular-weight+heparins+and+their+generic+versions%3A+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Applied+Thrombosis%2FHemostasis%22%5BJournal%5D)">Product individuality of commercially available low-molecular-weight heparins and their generic versions: therapeutic implications.</a> Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 12, 267-276 (2006).</li>
<li>Wijnhoven, T. J., van de Westerlo, E. M., Smits, N. C., Lensen, J. F., Rops, A. L., vander Vlag, J., Berden, J. H., vanden Heuvel, L. P., van Kuppevelt, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+anticoagulant+heparinoids+by+immunoprofiling%5BTitle%5D)+AND+%22Glycoconj.+J%22%5BJournal%5D)">Characterization of anticoagulant heparinoids by immunoprofiling.</a> Glycoconj. J. 25, 177-185 (2008).</li>
<li>Sanderink, G. -J. C. M., Guimart, C. G., Ozoux, M. -L., Jariwala, N. U., Shukla, U. A., Boutouyrie, B. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+and+pharmacodynamics+of+the+prophylactic+dose+of+enoxaparin+once+daily+over+4+days+in+patients+with+renal+impairment%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb.+Res%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics and pharmacodynamics of the prophylactic dose of enoxaparin once daily over 4 days in patients with renal impairment.</a> Thromb. Res. 105, 225-231 (2002).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa etmek başka bir şey var.

Enoksaparin etkinliğinin Bu testte kanama veya hematom gelişme bir görevli riski olan bir invaziv prosedürü yerine göreli güvenliği belirlemek için önemli bir seçenek olarak hizmet verebilir. Epidural enjeksiyonu kabul ediliyor, bu önem olurdu. Kılavuzlarının çoğunluğu enoksaparin ve invaziv bir prosedür başlama enjeksiyonu arasındaki 12 saatlik bir bekleme süresi önerilir 5 Böbrek yetmezliği, obezite ve gebelik enoksaparin dozaj gereksinimlerini etkileyebilir 6,7 deneyi 10 gün içinde tamamlanabilir beri.. - dk dönemde, o venöz tromboembolizm gelişme riski olan hastalarda antikoagülasyon yeterliliği hakkında bilgi sağlayacak bir klinik veya doktor ofisinde, ayrıca kullanılabilir. Gerektiğinde Hemen doz ayarlamaları, tesis edilebilir. Plazmadaki enoksaparin konsantrasyonu bir kromojenik ile ölçülebilirpıhtılaşma faktörü Xa inhibisyonu derecesinin ssay. Ancak, bu sadece konsantrasyon değil, özellikle bireysel hastalar arasında geniş çapta değişmektedir onun antikoagülan etkinliği. 6-8 verir Çalışmalarımız tek enoksaparin ile gerçekleştirilmiştir. Ancak, bu tahlil heparinase I. Bu zaten dalteparin, NADROPARİN ve tinzaparin için geçerli olduğu bilinmektedir indirgenir herhangi LMWH için uygulanabilir olduğu tahmin edilebilir. 9-11 Bu özellikleri ile ilgili olarak tahlil tasarlanmış Hemochron pıhtılaşma zamanı enstrüman. Cihaz nispeten ucuzdur, aynı zamanda, tek kullanımlık kan toplama tüpleri, heparinase ampul ve tahlil kartuşları bir hasta için bir analiz yaklaşık 15 $ tamamlamak için. Böylece, çeşitli klinik ortamlarda antikoagülan durumunu izlemek için uygun olması beklenir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Hepzyme </td><td> Iletkenlik birimi </td><td> B4240 </td><td> heparinase I </td></tr><tr><td> &quot;MAA&quot; Kartuş </td><td> Technidyne </td><td> FTK-ACT </td><td> kaolen kaldırılması suretiyle modifiye </td></tr><tr><td> aPTT kartuşu </td><td> Technidyne </td><td> A104 </td><td></td></tr></tbody></table>

tüm kan enoksaparin antikoagülan etkinliğinin rapid point-of-care assay

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

Bir hastanın kan etkili bir şekilde düşük molekül ağırlıklı heparin (LMWH), enoksaparin ile antikoagüle olduğu için derecesinin saptanması için bir klinik deneme için bir ihtiyaç vardır. Bu hızla tespit edilebilir eğer önemli olacağını nerede acil klinik durumlar da vardır. Mevcut tahlil Bunu gerçekleştirmek için tasarlanmıştır. Biz sadece enoksaparin konsantrasyonu bilinen çivili edildi insan kan numunelerinin tahlil. Bu tahlil maddenin esas teşkil eden bir özelliği heparinase ile hareketsizlik tamamlamak indirgenmesi yoluyla bir hastanın kan örneği içinde enoksaparin etkinliğinin ölçümü olup. Enoksaparin ile çivili edildi; iki Vacutainer tüplere kan örnekleri (Franklin Lakes, NJ Becton Dickenson-); içine çekildi bir numune, 37 ° C&#39;de 5 dakika için heparinase ile sindirildi, diğer numune ölçüldü ve başlangıç ​​noktası antikoagüle durumu temsil etmektedir. Heparinase işleme tabi tutulmuş numunede pıhtılaşma süresinin yüzde kısalık, b ile karşılaştırıldığındaaseline devlet, enoksaparin antikoagülan katkı vermiştir. Biz pıhtılaşma kez ölçümleri (Uluslararası Technidyne Corp, Edison, NJ) için taşınabilir, pille çalışan Hemochron 801 aparatlar kullandı. Cihaz 2 termostatik olarak kontrol edilen (37 ° C) tahlil kuyulardaki sahiptir. Biz cihazın üreticisinden kullanılabilir olan tahlil kartuşları iki tip deneyleri yapılmıştır. Bir kartuş duyarlılığını artırmak için modifiye edildi. Bu etkinleştiriciler gibi, sadece boru ve cam yüzeyi ve belki de tespit mıknatıs bırakarak, damıtık su ile durulama yoluyla geniş FTK-ACT kartuşunun kaolin kaldırılır. Biz bu minimal aktif assay (MAA) denir. Minimal aktif testinin kullanımı bize ve diğerleri tarafından araştırılmıştır. 2-4 çalışılmıştır ikinci kartuş bir aktive parsiyel tromboplastin zamanı (aPTT) assay (A104) idi. Bu üretici tarafından sağlanan olarak kullanılmıştır. Alet wer termostatlı bir kuyuE heparinase sindirim ve pıhtılaşma testleri hem kullanılmaktadır. Test 10 dakika içinde tamamlanabilir. MAA testi tipik klinik konsantrasyon aralığında enoksaparin heparinase sindirim sonra pıhtılaşma zamanı sağlam değişiklikler saptandı. 0.2 At kan örneği ml başına enoksaparin anti-Xa IU, heparinase sindirim pıhtılaşma zamanı içinde% 9.8 &#39;lik bir ortalama düşüş (20.4 sn) neden olduğu; enoksaparin ml başına 1.0 IU az% 41.4 azalma (148.8 sn) vardı. Bu rapor sadece testinin deneysel uygulama sunuyor; klinik bir ortamda onun değerini hala kurulmalıdır.

Şekil 1 enoksaparin çivili konsantrasyonları (ml başına 0.2, 0.4 ve 1.0 anti-Xa IU) bir dizi için heparinase ile enoksaparin eleme sonrasında pıhtılaşma zamanında oranında azalma arasındaki ilişkiler için sonuçlar sunuyor. Sonuçlar MAA ve aPTT tahlil kartuşlarının sunulmaktadır. Anti-Xa aktivitesi kromojenik tahlil dan enoksaparin ölçülen konsantrasyonlar, aynı zamanda her bir arsa absis olarak dahil edilmiştir. Şekil 2, anti-Xa aktivitesi kromojenik ölçümü vs pıhtılaşma süresi içinde yüzde düşüş olarak aynı veri grafikleri göstermektedir. Yüksek istatistiksel anlamlar ile güçlü lineer korelasyon, dört ilişkileri bulunmuştur. <img src="/files/ftp_upload/3852/3852fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. Enoksaparin Contr bakım tespitler noktasındaheparinase ile inkübasyondan sonra pıhtılaşma zamanı yüzde değişim (kısalma) esas çivili tam kan pıhtılaşma kere ibution. Çivili enoksaparin konsantrasyonları tam kan eklenir ve ölçülen anti-Xa plazma konsantrasyonları (parantez içinde ± SE, ortalama) her bir grafik absis olarak yerleştirilir. Pıhtılaşma kez tüm yüzde değişiklikleri birkaç saniye içinde pıhtılaşma süresi ortalama kısalması ile birlikte, araç veya SE olarak sunulmuştur. Aynı hastaya ikinci veri kesik çizgiler ile birbirine bağlanmıştır. Arsa olarak bir yıldız işareti ile tespit edilen dört hasta için veriler A (MAA sonuçlar) arsa B dört hastada (aPTT denemeleri) aynıdır. Bulgular, tek tayin temsil eder. Pearson korelasyon katsayıları r = 0.869 (p = 1,9 x 10 -5) ve r = 0,916 (p = 2,8 x 10 -5) sırasıyla MAA ve aPTTassay ile ilişkiler için,. Inchiosa ark izniyle yayınlanmıştır. 1 . Şekil 2 Şekil 1A ve B de gösterildiği gibi nokta-of-bakım tayinlerde pıhtılaşma zamanlarına yüzde değişiklikler için sonuçlar plazma anti-faktör Xa konsantrasyonlarına karşı çizilen A, MAA sonuçları;. B, aPTT ölçülür. Bulgular, tek bir pıhtılaşma süresi deneyler, anti-faktör Xa konsantrasyonları tek tayin gelmektedir. Pearson korelasyon katsayıları r = 0.910 idi (p = 2.5 x 10 -6) ve r = 0.922 (p = 2,0 x 10 -5) sırasıyla Inchiosa ark izniyle yayınlanmıştır MAA ve aPTT testi ile ilişkiler için,. 1

Düşük molekül ağırlıklı heparin, enoksaparin tarafından kan pıhtılaşma inhibisyonunun hızlı bir nicel tahlil gösterilmesi. Enoksaparin katkısı heparinase ile sindirim yoluyla nüfuzunu kaldırarak tarafından değerlendirilir. Testin A dolgun açıklaması bizim yayınlanan yazıda ayrıntılı.<sup&gt; 1</sup&gt; Denemesi halen klinik onayı gerekiyor.

Tüm Kan enoksaparin Antikoagülan Etkinliğinin Rapid Point-of-Care Assay

Bir hastanın kanının ... tarafından ne ölçüde etkili bir şekilde antikoagüle edildiğini belirlemek için klinik bir analize ihtiyaç vardır.

Giriş olarak, burada insan deneklerde düşük molekül ağırlıklı heparin Enoxaparin'in plazma düzeylerinin zaman seyri üzerine yayınlanmış çalışmalara atıfta bulunuyoruz. Bugün, düşük molekül ağırlıklı heparin için hızlı bir hasta başı analiz yöntemine ilişkin sonuçlarımızı sunuyoruz. Bu çalışmadaki ilgili madde Enoxaparin'dir.Bu slaytta gösterilen sonuçlar, ilacı kronik olarak günde bir kez, günlük 40 miligram dozunda alan hastalardaki plazma konsantrasyonunu ve son uygulamadan sonraki zaman seyri boyunca gerçekleşen azalmayı göstermektedir; burada, uygulamadan yaklaşık dört saat sonra 0,4 IU/mL'lik bir pik konsantrasyona ulaşıldığı ve bu seviyenin ilacın terapötik aralığında olduğu görülebilir. Bunun yanı sıra, özellikle dikkat çeken bir nokta da uygulamadan 12 saat sonra ne kadar miktarın kaldığıdır; çünkü kanama riski oluşturabilecek özellikle invaziv bazı prosedürler gerçekleştirilmeden önce, düşük molekül ağırlıklı heparinlerin (bu durumda Enoksaparin) uygulanmasından sonra en az 12 saat beklenmesi gerektiğine dair klinik olarak kabul görmüş bir kılavuz bulunmaktadır. Bu süre sonunda hala net bir şekilde tespit edilebilir miktarda ilacın mevcut olması bizim için ilgi çekicidir ve göstereceğimiz üzere bazı çalışmalarımızda bu konuya odaklandık.Sender ve arkadaşları tarafından bu çalışmada sunulan bir diğer gerçek de, böbrek yetmezliği olan bireylerin ilaç seviyelerinin tüm süreç boyunca önemli ölçüde daha yüksek olduğudur; böylece 12 saatlik kılavuzun, böbrek yetmezliği olan bir hastada veya bilindiği üzere hamile bir kadında veya obez hastalarda oldukça yetersiz kalabileceğini görmekteyiz. New York Medical College'da bu projede yer alan araştırmacıları tanıtmak isterim. Benim adım Mario Osa.Burada farmakoloji profesörüyüm. Ben New York Tıp Koleji'nden Klinik Anesteziyoloji doçenti Dr. Surya Patula. Benim adım Keshar Kal.Üçüncü sınıf tıp öğrencisiyim. Bu, söz konusu analizler için kullandığımız düzenektir. Düzenek, Omicron Corporation tarafından üretilmiştir.Cihaz hem şebeke elektriğiyle hem de pil ile çalıştırılabilir, bu yönüyle gerçek anlamda hasta başı (point-of-care) bir kullanım sunar. Cihaz, termostatik kontrollü iki bölmeye sahiptir ve bu bölmeleri, hem asıl analize hazırlık aşamasındaki numune ön inkübasyonu hem de koagülasyon analizinin kendisi için kullanıyoruz. Analizin temel bir özelliği, yüksek derecede saflaştırılmış, ticari olarak temin edilebilen bir heparinaz preparatının kullanılmasıdır.Bunu Siemens şirketinden satın aldık. Oldukça stabil bir formda sağlanmaktadır ve salinde veya herhangi bir sulu çözeltide kolayca çözünür. Heparin ACE kullanımı, hastanın bazal koagülasyon değerini elde etmemize olanak tanıdığı için yaklaşımımızda özellikle değerlidir.Heparin etkisinin bulunmadığı durumlarda, heparinaz, düşük moleküler ağırlıklı heparini ve fraksiyone edilmemiş heparini tamamen degrade edebilir; ancak buradaki temel amacımız, düşük moleküler ağırlıklı heparini inaktif hale gelene kadar degrade etmek ve herhangi bir heparin etkisi olmaksızın pıhtılaşma süresi için bir değer elde etmektir. Burada gösterdiğimiz, düşük moleküler ağırlıklı heparinin (bu örnekte Enoxaparin) heparinaz tarafından degrade edilmesinin zaman seyridir. Veriler, bazal kesim süresinin yüzdesi olarak grafiklenmiştir; böylece burada, bir anti 10 oranında eklenen Enoxaparin'i görmekteyiz.ML başına A uluslararası birimi, kanın pıhtılaşma süresinde yaklaşık %50'lik bir uzamaya neden olur. Daha sonra, 37 °C'de heparinaz ile farklı inkübasyon sürelerinden sonra, bazal pıhtılaşma sürelerinin geri kazanılması için gereken süreyi gözlemliyoruz. Diğer bir ifadeyle, Enoksaparin'in tamamen etkisiz hale gelene kadar degradasyonunu inceliyoruz.Antikoagülan etki açısından, bunun henüz bir buçuk dakika içinde gerçekleştiğini görüyoruz. Bazal pıhtılaşma süresinde esasen %100'lük bir geri dönüş söz konusudur. Bu zaman seyri incelendikten sonra, pıhtılaşma süresi ölçümü öncesinde kanın standart ön inkübasyonu olarak beş dakikalık inkübasyon süresini kullanmaya karar verdik.Bu hasta başı testi için kullanılan analiz tüpleri, üreticiden alındığı halinden hafifçe modifiye edilmiştir. Bu tüpler başlangıçta, aktive edilmiş pıhtılaşma süresinin ölçümü için kullanılan bir aktivatör olan kaolin içeriyordu. Tüpü aktivatör olmadan kullandığımızda, duyarlılığının oldukça önemli ölçüde arttığını tespit ettik.Sadece tüpün cam yüzeyinin ve belki de mıknatısın aktivasyona neden olabilecek tek kaynak olduğunu düşündüğümüz için bunu minimal aktivasyonlu assay olarak adlandırdık. Mıknatıs, otomatik assay'in temel parçasıdır. Bu tüpler tüp kuyucukları içinde döner ve mıknatıs, hareket kaybına yol açacak yoğunlukta bir pıhtı tarafından hapsedildiğinde, bu durum tespit edilir ve koagülasyonun tamamlandığını bildirir.Ayrıca analizi, omicron aktifleşmiş parsiyel tromboplastin zamanı kartuşunu kullanarak inceledik. Analiz aynı şekilde yürütülmektedir. Bu sistemde biraz daha fazla aktivasyon mevcuttur.İlk adımımız, flakon içinde aldığımız lily heparinazı yeniden çözmektir. Flakona 0,25 ml salin ekliyoruz ve ardından tam çözünme için yaklaşık 20 saniye bekliyoruz. Daha sonra flakonun tüm içeriğini bir tüberkülin şırıngasına çekiyoruz; bu sonraki adımda genellikle yaklaşık 0,2 ml geri kazanıyoruz.Pre-inkübasyon eklemeleri, enoksaparin içeren taze alınmış kan örneklerine üç ml'lik vacutainer tüplerinde eklenir. İlk ekleme heparinazdır ve bu aşamada karıştırma işlemi gerçekleştirilir. Ardından, karşılaştırılabilir bir toplam hacim elde etmek için, enoksaparin içeren ancak heparinaz içermeyen tüpe 0,2 ml salin eklenir.300 saniyelik geri sayımı gerçekleştirmek için cihazın yerleşik zamanlayıcısını kullanıyoruz. Bu, beş dakikalık bir ön inkübasyon süresidir. Ön inkübasyon tamamlandığında vakumlu tüpler çıkarılır.Son adım, önceden inkübe edilmiş örneklerden 2 ml'nin minimum düzeyde aktive edilmiş analiz tüplerine aktarılmasıdır. Bu tüpler, koagülasyonu başlatmak için 100 µL 0,25 M kalsiyum klorür ile önceden doldurulmuştur. Bu ilk tüp, heparinaz ile önceden inkübe edilen tüptür.İkinci örnek, enoxaparin içeren ancak heparinaz içermeyen örnektir. Zamanlayıcılar, kalsiyum klorür eklendiğinden beri geçen süreyi göstermektedir ve şu anda ilk örneğin tamamlandığını görebiliyoruz. Bu, pıhtılaşmanın tamamlanması için 200 saniye gerektiren üstteki flakondur.Heparinaz içermeyen örnek daha uzun sürüyor ve şu an tamamlandı. Bu, ml başına 0,4 uluslararası birim Enoxaparin eklenmiş kan ile elde ettiğimiz tipik sonucumuzun bir simülasyonudur. Bu Enoxaparin konsantrasyonunda, pıhtılaşma süresinde yaklaşık 45 saniyelik bir kısalma veya pıhtılaşma süresinde %18'lik bir azalma söz konusudur.Görülebileceği üzere, pıhtılaşma tespiti otomatiktir ve süreler, inceleme tamamlanana kadar cihazda saklanır. Bu testi, ml başına 0,1 uluslararası birim Enoxaparin kadar düşük bir konsantrasyonda da denediğimizi belirtmeliyiz. Giriş bölümünde belirttiğimiz gibi, bu konsantrasyon, tipik bir terapötik Enoxaparin dozundan 12 saat sonra mevcut olabilecek konsantrasyondur.Bu konsantrasyonda da güvenilir şekilde tespit yapabildik.

rapid-point-care-assay-enoxaparin-anticoagulant-efficacy-whole

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu çalışma daha önce bildirilmemiştir insan plazma fibrin pıhtı oluşumu sırasında FV koagülasyon aktivitesini ölçer bir roman mikroplate assay açıklanır. Yöntem sürekli olarak insan plazması içinde fibrin pıhtısı oluşumu sırasında 405nm de absorbans değişikliği ölçmek için bir kinetik mikroplaka okuyucu kullanır.

Bir Mikroplaka Pıhtılaşma Analiz Kullanarak İnsan Plazma Faktör V Aktivitenin Ölçümü

Tam kan sitotoksisite deneyi (WCA), flüoresans mikroskopisi ve otomatik görüntü işleme ile yüksek verimli hücre konumlandırma teknolojisini içeren tarafından geliştirilmiş bir sitotoksisite analizidir. Burada, bir anti-CD20 antikoru ile tedavi edilen lenfoma hücrelerinin enfekte hücre sitotoksisitesi analiz sağlamak için insan kanında gerçek zamanlı olarak analiz edilebilir açıklar.

İnsan Tüm Kan gerçek zamanlı sitotoksisite deneyleri

Biz bütün, anticoagulated kan çalışma ve koagülasyon analizini sağlayan bir vitro modeli mevcut. Anticoagulation sistemi sağlıklı endotel hücreleri doğal anticoagulation etkisi bağlıdır ve endotel hücre aktivasyonu pıhtılaşma içinde sonuçlanır.

Endotel hücreleri kullanarak 3D hücre kültürü ve sigara anticoagulated tam kan antikoagülan ve anti-enflamatuar özellikleri değerlendirilmesi

Bu konuda, insan bütün kan örneklerinin endotoksin aktivitesinin başında ölçmek için bir protokol sunuyoruz. Endotoksin aktivite tahlil gerçekleştirmek için basit bir test ve sepsis ile eleştirel hasta hastalarda yararlı bir biyomarker olabilir.

Eleştirel hasta hastalarda tam kan endotoksemi tespiti için endotoksin aktivite assay

Hasta kaynaklı endotel ile tam kan etkileşimini araştırmak için in vitro vasküler hastalık modeli salıyoruz. Bu sistem çeşitli koşullar altında primer endotel hücrelerinin trombojenik özelliklerinin incelenmesini sağlar. Bu yöntem özellikle pıhtılaşmanın farklı aşamalarında situ trombojenite ve antikoagülasyon tedavisinin değerlendirilmesi için uygundur.

In Vitro Mikroakışkan Hastalık Modeli Gerçek Zamanlı Olarak Tam Kan-Endotel Etkileşimleri ve Kan Pıhtısı Dinamikleri Çalışma

Bu protokol, EV'nin pıhtılaşma yeteneğinin bir göstergesi olarak hücre dışı vezikülden (EV) zengin plazmanın kullanımını araştırır. EV'den zengin plazma, diferansiyel santrifüjleme ve ardından yeniden kalsifikasyon işlemi ile elde edilir.

EV ile Aktive Edilen Pıhtılaşma Süresi (EV-ACT) Kullanılarak Hücre Dışı Vezikülün (EV) Prokoagülan Aktivitesinin Belirlenmesi

Devridaim test platformu içinde ventriküler destek cihazlarında (VAD) trombozu indüklemek için bir tezgah üstü protokol sunuyoruz. Bu yöntem, kan akış yolundaki trombojenik sıcak noktaları belirlemeye hizmet eder ve hayvan modellerinde klinik öncesi testlerden önce trombodirencin iyileştirilmesine yardımcı olabilir.

In Vitro Ventriküler Destek Cihazları için Tromboz Testi

Bu protokol, trombin ve plazmin üretiminin eşzamanlı ve zaman çözümlü ölçümünü mümkün kılan Nijmegen Hemostaz Testini tanımlar; böylece pıhtılaşma ve fibrinolizin entegre bir değerlendirmesi sağlanır. Test, geleneksel hemostatik testlerin kapsamının ötesinde araştırma ve klinik ortamlarda hemostatik dengenin karakterizasyonunu iyileştirmeyi amaçlamaktadır.

Nijmegen Hemostaz Testi: Tek bir Kuyiyada Trombin ve Plazmin Üretiminin Eşzamanlı Florojenik Ölçümü

Daha fazla analiz için çeşitli bileşenler elde etmek üzere tam kanın işlenmesi için bir metodolojinin ana hatlarını çiziyoruz. Klinik olmayan bir ortamda tam kan örneklerinin hızlı, yüksek verimli eş zamanlı işlenmesini sağlayan kolaylaştırılmış bir protokolü optimize ettik.

Topluluk tabanlı Ayar Elde Edilen Örneklerin hızlı Fraksiyonlama ve Tam Kan Bileşenlerinin İzolasyonu

Burada POCT kart tabanlı lökosit analizörü kullanarak periferik kan lökositlerini ölçmek için bir protokol sunulmaktadır. Aynı kan örnekleri, sonuçların tutarlılığını ve doğruluğunu değerlendirmek için iki otomatik hematoloji analizörü tarafından test edildi. Sonuçlar, değerlendirilen analizörün referans sistemi ile iyi bir korelasyona sahip olduğunu göstermiştir.

Periferik Kan Lökositlerini Ölçmek için Bakım Noktası Test Analizörünün Değerlendirilmesi

Öğrenin, enoksaparin antikoagülan etkinliğini heparinaz kullanarak hızlı bir nokta-bakım testiyle değerlendirin. Bu yöntem, böbrek yetmezliği olan hastalarda ilaç düzeylerini belirlemeye yardımcı olur.

Tüm Kan enoksaparin Antikoagülan Etkinliğinin Rapid Point-of-Care Assay

Daha fazla video keşfet