Tüm Kan enoksaparin Antikoagülan Etkinliğinin Rapid Point-of-Care Assay

Düşük molekül ağırlıklı heparin, enoksaparin tarafından kan pıhtılaşma inhibisyonunun hızlı bir nicel tahlil gösterilmesi. Enoksaparin katkısı heparinase ile sindirim yoluyla nüfuzunu kaldırarak tarafından değerlendirilir. Testin A dolgun açıklaması bizim yayınlanan yazıda ayrıntılı.

Giriş olarak, burada insan deneklerde düşük moleküler ağırlıklı heparin Enoksaparin'in plazma seviyelerinin zaman seyri üzerine yayınlanmış çalışmalara atıfta bulunuyoruz. Bugün, düşük moleküler ağırlıklı heparin için hızlı bir bakım noktası testi ile sonuçlarımızı gösteriyoruz. Bu durumda, varlık Enoksaparindir.

Bu slaytta gösterilen sonuçlar, ilacı kronik olarak günde bir kez, günde 40 miligram alan hastalarda plazma konsantrasyonunu göstermektedir ve bu son uygulamanın daha fazla kaybolması için takip edilen zaman maliyeti, uygulamadan yaklaşık dört saat sonra, ML başına 0.4 uluslararası birimlik bir tepe konsantrasyonu elde edilir, Ve bu seviye ilacın terapötik aralığı içindedir. Bununla birlikte, özellikle ilgi çekici bir nokta da, uygulamadan 12 saat sonra ne kadar kaldığıdır, çünkü düşük moleküler ağırlıklı heparin, bu durumda Enoksaparin'in uygulanmasından sonra en az 12 saat beklenmesi gerektiği klinik olarak kabul edilen bir kılavuz vardır. kanama riskine neden olabilecek bazı özellikle invaziv prosedürler yapmadan önce. O sırada hala net bir şekilde tespit edilebilir bir miktarın mevcut olması bizi ilgilendiriyor ve göstereceğimiz gibi bazı çalışmalarımızda buna odaklandık.

Bu çalışmada ayrıca gönderen tarafından etal olarak sunulan, böbrek yetmezliği olan bireylerin zaman boyunca ilacın önemli ölçüde daha yüksek seviyelerine sahip olduğu gerçeğidir ve böbrek yetmezliği olan bir hastada veya hamile bir kadında veya obez olan hastalarda bilindiği gibi 12 saatlik kılavuzun çok yetersiz olabileceğini görüyoruz. New York Tıp Koleji'nde bu projede yer alan araştırmacıları tanıtmak istiyorum. Benim adım Mario Osa.

Burada farmakoloji profesörüyüm. Ben Dr.Surya Patula, New York Tıp Koleji'nde Klinik anesteziyoloji doçentiyim. Benim adım Keshar Kal.

Tıp fakültesi üçüncü sınıf öğrencisiyim. Bu, bu tahliller için kullandığımız Aparattır. Cihaz, Omicron Corporation tarafından üretilmektedir.

Hat halinde veya pille çalıştırılabilir ve bu nedenle bu anlamda gerçekten bakım noktasıdır. Aparatın termostatik olarak kontrol edilen iki bölmesi vardır ve bu bölmeleri, gerçek tahlil hazırlığında numunelerin ön inkübasyonu için ve ayrıca pıhtılaşma tahlilinin kendisi için kullanırız. Testin önemli bir özelliği, yüksek oranda saflaştırılmış, ticari olarak temin edilebilen bir heparinaz preparatının kullanılmasıdır.

Bunu Siemens şirketinden satın aldık. Çok kararlı bir formda sağlanır ve tuzlu suda veya herhangi bir sulu çözeltide kolayca çözünür. Heparin ACE kullanımı yaklaşımımızda özellikle değerlidir çünkü hastanın temel pıhtılaşma değerini elde etmemize izin verir.

Heparin, heparin, heparinin herhangi bir etkisinin yokluğunda, ACE düşük moleküler heparini ve fraksiyone edilmemiş heparini tamamen parçalayabilir, ancak buradaki özel ilgimiz düşük moleküler heparin ve inaktiviteye indirgenmek ve heparinin herhangi bir etkisinin yokluğunda pıhtılaşma süresi için bir değer üretmektir. Burada gösterdiğimiz şey, düşük moleküler ağırlıklı heparinin, bu durumda Enoksaparinin heparinaz tarafından bozunmasının zaman seyridir. Veriler, temel kesme süresinin yüzdesi olarak çizilir, bu nedenle burada gördüğümüz şey, Enoksaparin'in bir anti 10'da eklendiğidir.

ML başına uluslararası bir birim, kanın pıhtılaşma süresinde yaklaşık %50'lik bir uzamaya neden olur. Daha sonra, 37 santigrat derecede heparinaz ile değişen inkübasyon dönemlerinden sonra, temel pıhtılaşma sürelerinin geri kazanılması için zaman maliyetini görüyoruz. Başka bir deyişle, Enoksaparinin etkisiz hale gelmesi tamamen bozunması.

Antikoagülan etki açısından, bunu zaten bir buçuk dakika görüyoruz. Esasen, temel pıhtılaşma süresinin% 100'ünde bir geri kazanım vardır. Bu zaman seyrini inceledikten sonra, pıhtılaşma süresinin ölçülmesinden önce kanın standart ön inkübasyonu olarak beş dakikalık inkübasyon kullanmayı seçtik.

Bu bakım noktası tahlili için tahlil tüpleri, üreticiden aldığımız şekilde biraz değiştirilmiştir. Bu tüpler orijinal olarak aktivatör kaolin içinde bulunur ve aktive edilmiş pıhtılaşma süresinin ölçümü için mevcuttur. Tüpü aktivatör olmadan kullandığımızda, hassasiyetini oldukça önemli ölçüde artırdığını bulduk.

Bunu minimal olarak aktive edilmiş tahlilimiz olarak adlandırdık çünkü tek olası aktivasyon kaynağının artık tüpün cam yüzeyi ve belki de mıknatıs olacağını düşünüyoruz. Mıknatıs, otomatik tahlilin önemli bir parçasıdır. Bu tüpler tüp kuyucuklarında döner ve mıknatıs bir yoğunluk pıhtısı tarafından yakalanarak hareket kaybına neden olur, o zaman bu tespit edilir ve pıhtılaşmanın tamamlandığını gösterir.

Ayrıca omikron ile aktive edilmiş parsiyel trombo Platin zaman kartuşu kullanılarak testi inceledik. Tahlil aynı şekilde yapılır. Bu sistemde biraz daha fazla aktivasyon var.

İlk adımımız, zambak heparinazını şişesinde aldığımız gibi yeniden oluşturmaktır. Şişeye 0.25 ml salin ekliyoruz ve daha sonra tam çözünme için yaklaşık 20 saniye izin veriyoruz. Daha sonra, şişenin tüm içeriğini bir tüberkülin şırıngasına aspire ediyoruz ve genellikle bu sonraki adımda yaklaşık 0.2 ml geri kazanıyoruz.

Ön inkübasyon için ilaveler, üç ml'lik vakutainer tüplerde enoksaparin içeren taze çekilmiş kan örneklerine eklenir. İlk baskı heparinazı temsil eder ve şu anda karıştırılmaktadır. Aşağıdaki nokta, bu, enoksaparin içeren tüpe 0.2 ml salin eklenmesidir, ancak karşılaştırılabilir bir VO toplam hacmi için heparinaz içermez.

300 saniyeyi geri saymak için cihazın yerleşik zamanlayıcısını kullanıyoruz. Bu beş dakikalık ön inkübasyondur. Ön inkübasyon tamamlandığında vakum tüpleri çıkarılır.

Son adım, iki ml önceden inkübe edilmiş numunenin minimal olarak aktive edilmiş tahlil tüplerimize aktarılmasıdır. Bu tüpler, pıhtılaşmayı başlatmak için yüz mikrolitre 0.25 molar kalsiyum klorür ile önceden doldurulur. Bu ilk tüp, heparinaz ile önceden inkübe edilmiş tüptür.

İkinci örnek, enoksaparin içeren ancak heparinaz içermeyen örnektir. Zamanlayıcılar, kalsiyum klorür ilavesinden bu yana geçen süreyi ifade ediyor ve şimdi ilk numunenin tamamlandığını görebiliyoruz. Bu, pıhtılaşmanın tamamlanması için gerekli olan 200 saniyelik üst şişedir.

Heparinaz içermeyen numune daha uzun sürüyor ve şimdi bitti. Bu, ml başına 0.4 uluslararası birim Enoksaparin ile çivilenmiş kan ile elde ettiğimiz tipik sonucun bir simülasyonudur. Bu, bu enoksaparin konsantrasyonunda pıhtılaşma süresinin yaklaşık 45 saniye kısalması veya pıhtılaşma süresinde %18'lik bir azalmadır.

Görüldüğü gibi, pıhtılaşma tespiti otomatikleştirilir ve muayene tamamlanana kadar süreler cihaz üzerinde korunur. Bu testi, ml başına 0.1 uluslararası Enoksaparin birimi kadar düşük konsantrasyonda test ettiğimizi belirtmeliyiz. Giriş bölümünde belirttiğimiz gibi, bu, tipik bir terapötik Enoksaparin dozundan 12 saat sonra mevcut olabilecek konsantrasyondur.

Bu konsantrasyonda da güvenilir bir şekilde algılama yapabildik.