Metisiline Dirençli Deneysel Endokardit Modeli Staphylococcus aureus (MRSA) Sıçan

Bu prosedürün genel amacı, sıçanlarda deneysel bir enfektif endokardit modeli oluşturmaktır. Bu, önce aureusun kültürlenmesi ve enfeksiyon için cerrahi kateterlerin hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. Daha sonra cerrahi alan hazırlanır ve hayvan uyuşturulur.

Hayvan uyuşturulduktan sonra, sağ karotis arterden kalbe doğru bir kateter yerleştirilir. Son adım, kuyruk damarı enjeksiyonu ile aureus ile hayvanları enfekte etmektir. Sonuçta, hedef dokular diseke edilir ve kantitatif kültür için hazırlanır.

Bu tekniğin hızlı endokardit modeli gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, kırmızı endokardit modelinin in vivo görüntüleme sistemi ile birlikte kullanılabilmesidir. İvus. Bu yöntem, virülans ve antimikrobiyal ajanın etkinliği gibi basamak oral patogenez alanındaki anahtar soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Genel olarak, bu tekniğe yeni olan kişiler, cerrahi prosedür zorlu olduğu için mücadele edeceklerdir.

İlk olarak, donmuş bir stoktan bir koyun kanı gezisi vakasına M SSA kültürü ile dolu bir döngü aşılayın. Soya burgu plakası: kontaminasyon olmadığından emin olduktan sonra kültürü gece boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Plakadan bir koloni seçin ve 15 mililitrelik bir çıtçıtlı kapak tüpüne beş mililitre soya suyu aşılamak için kullanın.

Aşılamayı gece boyunca 37 santigrat derecede çalkalanan bir inkübatörde inkübe edin. Önce kateterleri hazırlamak için 200 RPM'ye ayarlayın. Polietilen boruları 10 santimetre uzunluklarda kesin ve kateterleri cex dezenfeksiyon solüsyonunda 30 dakika sterilize edin.

Daha sonra, sağ karotis arterden sol ventriküle geçecek ve kalp attığında endokardda hasara neden olacak bir kateter oluşturmak için sterilize edilmiş bir tüpün bir ucunu ısıtılmış steril forseps ile ucuna bastırarak eritin. Daha sonra, anestezik etkili olana kadar bire bir flor oksijen karışımı içeren bir odaya yerleştirerek fareyi uyuşturun. Kasların gevşeyip gevşemediğini ve pedal reflekslerinin olup olmadığını kontrol ederek anesteziyi onaylayın.

Ve ameliyat sırasında gaz karışımına bağlı bir burun konisi kullanarak anestezi durumunu koruyun. Ameliyat boyunca cerrahi bölgeyi Betadine ve steril teknik kullanarak% 70 etanol ile temizleyin. Fareyi sırt pozisyonuna getirin ve künt diseksiyon kullanarak sternumun üzerindeki boynun cilt tabakasından dikey olarak bir kesi yapın.

Sağ karotis arteri ortaya çıkarmak için fasyayı ayırın. Sağ karotis arter, köprücük kemiğinin üzerinde, orta hattın hemen sağında bulunur. Arteri dikkatlice boyun boşluğundan yukarı çekin ve açıkta kalan sefalik uçta bağlamak için arterin altına 10 santimetre uzunluğunda iki ipek sütür yerleştirin.

Ardından kanamayı önlemek için artere bir klips yerleştirin. Forseps kullanarak bir kateter tanıtıcı kullanarak arterin tepesinde küçük bir delik açın. Kateterin mühürlenmemiş ucunu arterdeki delikten geçirin.

Klipsi çıkarın ve kateteri kalbe doğru itin. Direnç düzgün bir şekilde karşılanana kadar, kateter artere dört ila beş santimetre uzanmalı ve farenin kalp atışı ile nabız atmalıdır. Kateter yerleştirildikten sonra, arterin kıvrak ucunun etrafına gevşek sütür bağlayın ve kateteri yerine sabitleyin.

İpek sütür ile fazla sütür ve kateter uçlarını kesin ve ardından uçları boynun derisinin altına sokun. Cildi cilt klipleri ile kapatın. Fareyi temiz bir kafese koyun ve anesteziden kurtulana kadar ılık bir yerde tutun.

Yiyecek ve su sağlayın ve fareyi hem iyileşme sırasında hem de sonrasında sık sık kontrol edin. Enfeksiyon ameliyattan bir ila yedi gün sonra gerçekleştirilebilir, ancak süre deneyler içinde tutarlı kalmalıdır. Sıçanın kuyruğunu% 70 etanol ile temizleyin ve istenen hücreye 0.5 mililitre MRSA kültürü enjekte edin.

Kuyruk damarına sayın. 27 gauge yarım inçlik bir iğne kullanarak, fareyi kafesine geri döndürmeden önce herhangi bir kanama durana kadar enjeksiyon bölgesine basınç uygulayın. Fareyi kurban ettikten sonra, göğsü% 70 etanol ile silin ve ardından göğüste sternumun altında V şeklinde bir kesi yapın.

Sternumun her iki tarafındaki kaburgaların kıkırdağını kesin. Kalbi açığa çıkarmak için, kalbi yavaşça yukarı çekin ve aort tabakasına yakın dokuyu klipsleyin ve kalbi serbest bırakmak için yukarı doğru inceleyin. Kalbi dört x dört inç gazlı bezle kaplı steril bir petri kabına yerleştirin ve ardından sol ventrikül iç duvarından bir kesik açın ve sol taraftaki odayı açın.

Kateter yerleşiminin doğru olduğunu kontrol edin ve ardından çıkarın. Makas ve forseps ile valfteki bitki örtüsünü inceleyin ve çıkarın. Ayrıca böbrekleri ve dalağı çıkarın ve dokuları ve bitkileri tarttıktan ve homojenize ettikten sonra kantitatif kültür için PBS'de seri seyreltmeler yapın.

Burada, en soldaki okla gösterildiği gibi doğru konumlandırılmış bir kateter gösterilmektedir. Aort kapağı boyunca ve kalp odasının sol tarafına kadar uzanır ve orta ve sağ oklarla gösterildiği gibi aort kapaklarının etrafında çok sayıda bitki örtüsü görülür. Bu tablo, sıçan endokardit modelinde bir ssus suşunun virülansına bir örnek sağlar.

Tüm hayvanlara 10'dan beşinciye ve 10'dan altıncıya kadar inoküler ile meydan okundu. CFU, bir kez ustalaştıktan sonra kardiyak vejetasyonlarda, böbreklerde ve dalakta yüksek ssus yoğunluğuna sahip endokardit geliştirdi. Bu cerrahi işlem, uygun şekilde yapılırsa 10 dakika içinde yapılabilir.

Bu prosedürü denerken, bu prosedürü takiben ameliyat sırasında hayvanı değerlendirilmiş bir durumda tutmayı unutmamak önemlidir. Anti-mikrobiyal ajanların etkinliğinin gerçek zamanlı olarak izlenmesi ve geliştirilmesinden sonra in vivo gen ekspresyonu gibi ek soruları yanıtlamak için ivus gibi yöntemler gerçekleştirilemez. Bu teknik, step orus ve kurgu alanındaki araştırmacıların endovasküler enfeksiyondaki patojenik virülans faktörünü keşfetmelerinin yolu olabilir.

Bu videoyu izledikten sonra, sıçanlarda deneysel bir endokardit Modelinin nasıl oluşturulacağını iyi anlamış olmalısınız. MRA ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu işlemi gerçekleştirirken laboratuvar, mont ve eldiven giymek gibi önlemler alınması gerektiğini unutmayın.