Polivinil Alkol Sünger Model İmplantasyonu

Bu prosedürün genel amacı, farelerde yara iyileşmesini modellemek için bir polivinil alkol sünger kullanmaktır. Bu işlem, öncelikle süngerin implantasyon için hidrate edilmesi ve yüklenmesiyle gerçekleştirilir. Ardından sünger, farenin karın kası ile derisi arasındaki bir cebe yerleştirilir.

İmplantasyondan sonra, her bir süngere bir tedavi enjekte edilebilir. Son adım, süngerlerin fareden çıkarılmasıdır. Nihayetinde, yara iyileşme sürecindeki değişimleri ve varyasyonları gözlemlemek için kesit alma, boyama ve kantitatif analizler gerçekleştirilebilir.

Bu yöntem yara iyileşmesi hakkında bilgi sağlayabilse de, tümör anjiyogenezi, ilaç iletimi, implante edilmiş hücrelerin sağkalımı ve engraftman gibi diğer çalışma alanlarına da uygulanabilir. Süngerleri, %0,9'luk sulu sodyum klorür çözeltisi içerisinde gece boyunca karıştırarak hidrate ederek başlayın. Ardından, hidrate edilmiş sünger süspansiyonunun 75 mililitresini 121 °C'de 25 dakika boyunca otoklavlayın.

Süngerleri sterilize etmek için, otoklavlanmış sünger solüsyonunu steril bir kabine yerleştirin; ardından steril bir pens yardımıyla bir sünger alın, süngeri pensle sıkın ve süngerdeki solüsyonun mümkün olduğunca fazlasını uzaklaştırmak için bir vakum ucu kullanın. Şimdi, sıkılmış süngeri bir doku kültürü plağına, süngerler arasında boşluk bırakmaya dikkat ederek yerleştirin ve işlem solüsyonunu doğrudan bir süngerin merkezine pipetleyin. Ardından, süngerin solüsyonu emmesine yardımcı olmak için pipet ucuyla süngerin üzerine hafifçe bastırın.

Tüm süngerler yüklendikten sonra, süngerler fareye implante edilene kadar plakayı buz üzerinde saklayın. Kıstırma refleksi testi ile sedasyon onaylandıktan sonra, fareyi sırtüstü pozisyonda bir burun konisine yerleştirerek başlayın. Ardından, bir elektrikli tıraş makinesi kullanarak farenin göğüs kafesinin altındaki alt ventral bölgede bir inç çarpı bir inçlik bir alanı tıraş edin.

Ardından alanı kesilen kıllardan arındırmak için silin. Tıraş edilen bölgeyi önce Betadine ile, ardından %70 alkol ile sterilize edin. Sonrasında, cildi gergin tutun.

Yerleştirilecek süngerlerin çapının bir buçuk ila iki katı uzunluğunda dikey bir insizyon yapmak için skalpeli kullanın. Vücut boşluğunu kesmemeye dikkat edin. Derinin kenarını tutmak için cımbızı kullanın.

Ardından, insizyonun her iki yanındaki deriyi kaslardan yavaşça ayırmak için Metzenbaum makası kullanın. Cebi farenin genişliği boyunca, göğüs kafesinden arka bacaklara kadar genişletin. Şimdi, hayvana yerleştirilecek ilk süngeri yanlarından sıkarak almak için pensi kullanın.

Ardından süngeri, üstten ve alttan tutulacak şekilde bir çift düz pensle aktarın. Sonrasında, başka bir pensle derinin kenarını kavrayıp kaldırın ve deriye veya altındaki kasa değdirmemeye dikkat ederek süngeri yavaşça yerleştirin. Tüm süngerler yerleştirildikten sonra, bir pens yardımıyla insizyonun her iki yanını bir arada tutun ve ardından sütürü derinin her iki katmanından geçirin.

Cilt kenarlarını kapatacak kadar ilk düğümü sıkın ve kare düğümü diğer yönden bir atış daha yaparak tamamlayın. Bu kez düğümü sıkıca çekin. Ardından, sütürü tamamlamak için iki kare düğüm daha atın.

Tüm insizyonu kapatmak için ek süturlar yerleştirin. Son olarak, hayvanı anestezi sisteminden çıkarın ve bilinç geri gelene kadar izleyin. Fare hızlı bir şekilde hareket etmeye başlamalı ve ameliyat öncesi hareketliliğine dönmelidir.

Bir şırıngayı istenen solüsyonla doldurarak başlayın ve şırıngaya 28 gauge'lik bir iğne takın. Ardından, ayak parmağı sıkıştırma yöntemiyle sedasyonun gerçekleştiğini onayladıktan sonra, iğnenin süngerde olduğundan emin olmak için iğneyi süngerlerin merkezindeki deriden 45 derecelik bir açıyla hayvanın içine itin. İğneyi yavaşça dikey olarak kaldırın.

İğne süngerin içindeyse, sünger iğneyle birlikte yukarı kalkacaktır. Ardından maddeyi yavaşça süngere enjekte edin ve iğneyi çıkarın. Hayvan sakrifiye edildikten sonra, cildi bir cımbızla tutun ve istenen süngerin yakınına bir insizyon yapın.

Son olarak, çıkarılan süngeri çevreleyen ekstra doku almamaya dikkat ederek, süngerleri çevreleyen kapsülden dikkatlice ayırın. Süngerler, yapılacak analiz türüne bağlı olarak farklı koşullar altında saklanabilir. Kesit alma işlemi için geri kazanılan süngerler, optimal kesme sıcaklığı bileşiği (optimal cutting temperature compound) gibi bir dondurma ortamına gömülebilir veya bu H&E boyalı süngerlerde yapıldığı gibi, parafin bloklarda gömme ve kesit alma işlemleri için %10 formaline yerleştirilebilir.

Boyanmış trirem süngerlerinin bu kesitlerinde, en iyi kesim sonuçları, sünger burada gösterildiği gibi çap boyunca ikiye bölündüğünde ve ardından kesit yüzeyi aşağı gelecek şekilde gömüldüğünde elde edilir. Burada gösterildiği üzere, sünger kesitleri, süngerin tüm genişliği bu şekilde görünecek şekilde alınmalıdır. Soldaki sünger, kesitin sağ tarafı boyunca bozulan doku sınırından anlaşıldığı üzere yanlış gömülmüş veya yanlış kesilmiştir; buna karşın sağdaki sağlam sünger doğru şekilde işlenmiştir.

Bu videoyu izledikten sonra, farelerde yara iyileşmesini incelemek için polivinil alkol süngerlerin nasıl hazırlandığı, implante edildiği, enjekte edildiği ve çıkarıldığı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.