Ixodes scapularis Keneler gelen tükürük, Tükürük Bezi ve hemolimf Koleksiyonu

Keneler hemolimf, tükrük bezleri ve tükürük toplama patojenler hastalıklara nasıl neden kene kaynaklı incelemek önemlidir. Bu protokolü biz beslenmesini hemolimf ve tükrük bezleri toplamak nasıl gösterilmektedir

Bu prosedürün genel amacı, eski ODI skapularis kenelerini aktif olarak beslemekten kene, hemo, lenf tükürük bezleri ve tükürük toplamaktır. Bu, hemo topallamayı dışarı atmak için önce kenenin bacağının distal eklemde kesilmesiyle gerçekleştirilir. Daha sonra tükürük bezleri, kenenin fosfat tamponlu salin içinde diseke edilmesi, tükürük bezlerinin yerinin belirlenmesi ve temiz bir PBS havuzuna aktarılmasıyla toplanır.

Tükürük, mikro pipetin kene do dorsumuna pilokarpin uygulanarak, kenenin bir kısmını havuzlanmış bir kılcal tüpe sokarak ve kenenin tüpe tükürük salgılamasına izin vererek toplanır. Sonuçta, immünofloresan veya protein yoluyla hemo lenf veya tükürük bezlerinde bulunan mikroorganizmaları gösteren sonuçlar elde edilebilir. Diğer sonuçların yanı sıra tükürük proteinleri ile protein etkileşimleri.

Genel olarak, hemo lenf toplamaya yeni başlayan kişiler, orta bağırsağı yırtmadan keneyi hareketsiz hale getirmek ve böylece hemo lenfini kontamine etmek zor olduğu için mücadele edeceklerdir. Genel olarak, bireyler tükürük toplama ile mücadele edebilir, çünkü tüm keneler tükürük salgılamaz. Bu nedenle, tükenme noktasında veya bitmek üzere olan kenelerden tükürük toplamaya çalışmak önemlidir.

Genel olarak, tükürük bezi toplamaya yeni başlayan kişiler, tükürük bezlerinin kene kalıntıları arasında bulunması zor olduğu için mücadele edecektir. Ve bir kez yerleştirildikten sonra, bu tükürük bezleri yıkama adımları sırasında kolayca yırtılır ve kaybolur. Aktif olarak beslenen keneleri bir hayvan konakçısından nazikçe çıkardıktan sonra, bunları beş dakika boyunca% 3 topikal hidrojen peroksit içine yerleştirin.

Keneleri yüzeye çıkarmak için 10 dakika boyunca% 70 etanole aktarın, sterilize edin. Keneleri% 70 etanolden pap kalemle safra kağıdına dökerek çıkarın. Aklı başında kaplanmış bir mikroskoba bir daire çizin.

Bir diseksiyon mikroskobu altında pat kalem dairesinin içine kaydırın ve bir kene yerleştirin. Kenenin sırtını hafifçe aşağı itmek için forseps kullanın. Kenenin bacaklarını gösterin ve hareketsiz hale getirin.

Daha sonra ince bir nokta ile tek kullanımlık neşter kenenin bacağını veya bacaklarını distal eklemde ampute edin. Bacak veya bacaklar kesildikten sonra, hema lenflerinin bacaklardan dışarı salgılanması için kenenin sırtına baskı uygulamaya devam edin. Slaytın üzerine.

Tükürük bezlerini bir kene noktasından çıkarmak için hema lenfini yaymak için keneyi slayt üzerinde yavaşça hareket ettirin. Birkaç 25 mikrolitrelik fosfat tamponlu salin mikroskop üzerine çekilir. Diseksiyon mikroskobu altında PBS havuzlarından birine kaydırın ve bir kene yerleştirin.

Ağız kısımlarını veya kenenin arkasını tutarak keneyi stabilize etmek için ince uçlu forseps kullanın. İnce uçlu forsepsleri kenenin arkasına yerleştirin ve organları ortaya çıkarmak için kenenin sırtını kesin. Kenenin bacaklarının yanında bilateral olarak bulunan tükürük bezi çiftini bulun.

Bezler kene kalıntıları arasında görünmüyorsa, ince uçlu forsepslerle tükürük bezlerinin bozulmasını ve kaybını azaltmak için bezleri içeren ana kene kısmını yeni bir PBS havuzuna taşıyın. Tükürük bezlerini keneden çıkarın ve taze bir PBS havuzuna yerleştirin. Bezleri başka bir temiz 25 mikrolitrelik PBS havuzuna aktarın ve bu yıkamayı nazikçe tekrarlayın.

Herhangi bir dış mikroorganizmayı çıkarmak ve kalıntıları işaretlemek için üç ila dört kez daha adım atın. Bezleri, aklı başında kaplı bir slayt üzerinde temiz bir PBS havuzuna yerleştirin. Bir hayvan konakçısından neredeyse tıkanmış bir keneyi çıkardıktan sonra, bir cam mikroskop lamının bir ucuna bantlayın.

Bant, yolun yaklaşık dörtte üçü yukarı doğru yerleştirilmelidir. Kenenin sırtı başa doğru, bandın kenenin dorsal yüzeyinin ön kenarı ile buluştuğu yerde kenenin ağız kısımlarını açıkta bırakarak beş mikrolitre pilokarpin çözeltisi pipetleyin. Pilokarpinin kenenin ağız kısımlarıyla temas etmesine izin vermeden bandın pilokarpini kenenin sırtı üzerinden geçirmesine izin verin.

Mikroskobun üzerine bir parça toksik olmayan modelleme kili yerleştirin. İnce uçlu forseps kullanarak kenenin ağız kısımlarından yaklaşık bir inç kaydırın. Çekilmiş bir kılcal borunun ucunu istenen çapta kırın.

Daha sonra keneyi diseksiyon mikroskobu altında görüntülerken, kenenin hiper taşını kılcal boruya nazikçe yerleştirin ve maksiller hamurların kılcal borunun dışında kalmasına izin verin. Kılcal boruyu yerinde tutmak için kılcal borunun diğer ucunu modelleme kiline bastırın. Daha sonra, monte edilmiş tükürük salgılayan keneyi yüksek nemli karanlık bir odaya yerleştirin.

Sürgüyü, hiper taş kabın dibine bakacak şekilde eğin ve yerçekiminin tükürük toplanmasına yardımcı olmasına izin verin. Kabı oda sıcaklığına getirin ve ilk bir saat boyunca tükürük salgılayan keneleri yakından izleyin. Kılcal boruyu kene hiper taşından çıkarın ve tükürüğü oluştuğu gibi toplayın.

Bir makarna pipeti ampulünü kılcal borulardan dışarı atarak kullanmak. Kılcal boruyu hiper taşın üzerine yerleştirin ve en az dört saat boyunca her saat başı birikimi kontrol edin ve tükürüğü oluştuğunda toplamaya devam edin. Keneler tükürük salgılamıyorsa veya daha fazla tükürük gerekiyorsa.

Hiper taşa masaj yapmak için kılcal boruyu kullanarak tükürük salgısını indükleyin. Son olarak, tükürüğe 0.1 hacim proteaz inhibitör kokteyli ekleyin ve ihtiyaç duyulana kadar eksi 80 santigrat derecede saklayın. Bu şekil, kontamine olmamış hemo lenflerin bir örneğini göstermektedir.

Bacaklar kesildikten sonra berrak bir sıvı salgılanır. Orta bağırsak yırtılırsa, hemo lenf bulanık görünür ve burada gösterildiği gibi kontamine olarak kabul edilir. Burada, mililitre başına 10 mikrogram ile Borrelia burgdorferi için boyanmış tükürük bezlerinin immünofloresan konfokal bir görüntüsü gösterilmektedir.

Floresan izonat konjuge tavşan antib burgdorferi okları tükürük bezlerinde beberg Dre'yi gösterir. Bu videoyu izledikten sonra, tükürük bezleri için tıkalı bir kenenin nasıl inceleneceğini ve hema lenflerinin nasıl toplanacağını iyi anlayacaksınız. Ayrıca bir exo scapularis yetişkin dişisinden tükürüğün nasıl toplanacağını da anlayacaksınız.