Name: Ixodes scapularis Keneler gelen tükürük, Tükürük Bezi ve hemolimf Koleksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: Öğrenin Ixodes scapularis kenelerinden hemolimf, tükürük bezi ve tükürük toplama yöntemini. Bu teknik, kenelerin patojen bulaş mekanizmalarını anlamak ve hastalık kontrol stratejileri geliştirmek için kritik öneme sahiptir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar vektör kaynaklı hastalıkların Hayvan Kaynakları Şubesi Bölümü teşekkür etmek istiyorum, özellikle Andrea Peterson, Lisa Massoudi, Elçin O&#39;Brien ve fare ve tavşan bakımı ve bakım için John Liddell. Biz de bu yazının doğru katkıları için Amy Ullmann, Theresa Russell, ve Barbara J. Johnson teşekkür etmek istiyorum. Son olarak, bu yazının filme ile ilgili tüm legalities yönlendirmek için grafik çizimler ve Judy Lavelle üretmek için CDC, İletişim için Associate Direktörü Office Alissa Eckert kabul etmek istiyorum.

1. Slayt hazırlanması için hemolimf toplama (Film 1) <ol><li> Yavaşça yüzeyi sterilize ila 10 dakika süreyle% 70 etanol içinde daha sonra 5 dakika boyunca% 3 topikal hidrojen peroksit ve bir hayvan yerden aktif besleme kenelerin kaldırmak ve. </li><li> Pap kalem silan kaplı mikroskop lamı üzerine bir daire çizin ve pap kalem daire içinde kene yerleştirin ile. <ol><li> Silan kaplı slaytlar mikroskop lamı için hemolimf en iyi yapışması için kullanılır. </li></ol></li><li> Bir mikroskop (1X objektif, 10X mercek, 3.5x büyütme) altında kene görüntüle. </li><li> Yavaşça kene bacaklarının yayılmak ve kene immobilize etmek için forseps ile kenenin sırtı aşağı bastırın. </li></ol> Not: Bu ortabağırsak veya ponksiyon kene bozabilir ve hemolimf kontamine olabilir, çünkü kene immobilizing çok sert basmayın zaman. <ol start="5"><li> Th kenenin bacak veya bacakları organınıtek neşter ince bir nokta ile e distal eklem. Enfektivite belirlemek için hemolimf üzerinden sadece 1 bacağı ampute edilmesi gerekir. Slaytta hemolimf toplanması için birkaç bacakları ampute olabilir. </li></ol> Not: Bu hemolimf bir ortabağırsak kontaminasyona neden olabilir, çünkü vücudun çok yakın bacak kesmeyin. <ol start="6"><li> Bacak veya bacakları kesildikten sonra yavaşça slayt üzerine bacaklar dışarı salgılaması için hemolimf için kenenin sırtından basınç uygulamaya devam edeceklerdir. Yavaşça hemolimf yaymak için slayt etrafında kene taşıyın. </li></ol> 2. Tükürük bezinin çıkarılması (Movies 2 &amp; 3) <ol><li> Fosfat Nokta birkaç 25 ul havuzları bir mikroskop lamı üzerine (PBS) tamponlanmış ve PBS havuzlarından birine tick koyun. </li><li> Bir mikroskop (1X objektif, 10X mercek, 3.5x büyütme) altında kene görüntüle. </li><li> Ince uçlu forsepsle ile kene stabilizetemelinde capitulum (ağızdan parçalar) veya kene arka tutarak s. </li><li> Kene arka içine ince uçlu pens takın ve kene organları açığa sırtı var kadar dilim. İsterseniz ortabağırsak şu anda kaldırılmış ve bir mikroskop lamı üzerine PBS taze bir havuz veya PBS içeren bir mikrofuge&#39;de tüpüne aktarılabilir. </li><li> Bilateral kene bacakları yanında bulunan tükürük bezlerinde (üzüm salkımı benzeri) çifti bulun. Tükrük bezleri kene enkaz tükürük bezlerinin bozulması ve kaybını azaltmak için PBS taze bir havuz, hala tükürük bezleri içeren, ana kene kısmı hareket arasında görünmüyorsa. </li></ol> Not: Daha önce bir beslenme içinde, tükrük bezleri daha sonra beslenme üzerine karşılaştırıldığında onlar gibi gelişmiş olmadığından bulmak zordur. <ol start="6"><li> Ince uçlu pens ve PBS taze bir havuz yer olan kene ile tükürük bezleri çıkarın. </li><li> Wiince inci forseps herhangi bir dış mikroorganizmalar ve kene enkaz kaldırmak için bu yıkama adımı 3-4 defa daha tekrarlayın, başka bir temiz 25 ul PBS havuzuna tükürük bezlerinde transfer uçlu. </li></ol> Not: Bireysel tükürük bezlerinin kaybı ve kesintileri azaltmak için hafifçe tükürük bezi kümeleri yıkayın. <ol start="8"><li> Bir silan kaplı slaytta PBS temiz bir havuza veya PBS içeren bir mikrofuge&#39;de tüp bezleri yerleştirin. </li></ol> 3. Tükürük toplama (Movie 4) <ol><li> Yavaşça tavşan veya tam tıkalı onlar düşüyorlar hemen önce ince uçlu pens, yaklaşık 5-7 gün post-eki kullanarak başka bilgisayardan yetişkin dişi kene kaldırın. </li><li> Seloteyip ile bir mikroskop lamı bir ucuna yaklaşık tıkanık kene uyun. Bant yaklaşık konulmalıdır ¾ baş doğru kenenin sırtı kadar yolu, kenenin temelinde capitulum (ağız parçaları) maruz bırakarak.</li><li> Bandı% 5 pilokarpin çözeltisi kenelerin dorsal yüzeyini pipet 5 ul (metanol içinde) ön kenarının birleştiği yerde. Bant pilokarpin kenenin temelinde capitulum ile temas etmesine izin vermeden, kenenin sırtı pilokarpin fitil izin verin. </li><li> Mikroskop lamı üzerine toksik olmayan modelleme kil parçasının kenenin ağız yaklaşık bir inç monte edin. </li><li> Ince uçlu pens istenilen çapa çekti kılcal tüp 28 ucunu kırın kullanılması. </li><li> Bir mikroskop altında kenenin temelini capitulum görüntüle. </li><li> Yavaşça maksiller palps kılcal boru dışına ikamet için izin çekti kapiler tüpe kenenin hypostome uyacak. </li><li> Kılcal tüp yerinde tutmak için kil modelleme içine kılcal tüpün ucunu basın. </li><li> Yüksek nem (örneğin, ıslak pap ile kaplı bir strafor kapaklı kutusu ile karanlık bir odası içinde monte salyalar kene yerleştirin<html> er havlu). Yerçekimi tükürük toplama yardımcı sağlayan hypostome noktaları böylece, kabın dibine kayar eğim. </li><li> Oda sıcaklığında bir kap yerleştirin. </li><li> Yakından ilk saat için salyalar keneler izlemek ve bir Pasteur pipeti ampul kılcal tüpler dışarı atarak oluşturulan, tükürükteki toplamak. İlk saat sonra, en az 4 saat süreyle birikimi her saat kontrol edin. Oluşturulduğunda gibi tükürük toplamak için devam edin. </li></ol> Not: Yeterince tükürük yapılmaktadır Araştırma için toplanan bir kez Tükürük toplama durdurulabilir. <ol start="12"><li> Keneler salyalar değildir veya daha fazla tükürük gerekiyorsa, salivasyon bazen hypostome masaj kılcal tüpü kullanılarak oluşturulan olabilirsem. </li><li> Ihtiyaç kadar -80 ° C de tükürük ve mağaza proteaz inhibitörü kokteyl 0.1 hacimleri ekleyin. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar e_content &quot;&gt; Film 1 kısmen beslenen I. scapularis perisi tutun ve bir mikroskop lamı üzerine hemolimf toplamak için bacaklarını kesmek zorunda gösterilmiştir. bacak veya bacakları açık bir sıvı (Şekil 1A ve 1B) salgılanır ampute edildikten sonra. Eğer ortabağırsak hemolimf olduğu gibi bulanık görünüyorsa ampute bacak (lar) (Şekil 1C ve 1D) çıkan delinmiş veya yırtılmış. Perisi 48 veya 72 saat beslenme sonra tükürük bezlerinin çıkarılması filmleri 2 ve 3&#39;te gösterilmiştir. Kene enkaz bir sürü genellikle yoktur delinirse sonra (trakea, Malpighi tüpleri tübüller, kan oluşan bağ dokusu vb) tükürük bezlerinin kaybı veya bozulmasını önlemek için, PBS taze bir havuz kene taşıyın. Perisi kesmişler sonra tükürük bezleri bulunur Şekil 2A ve 2B gösterisi ve şekil 2C PBS bir havuzda tükürük bezi başlıkların çıkarılması gösterir. Tükürük toplama I. den kurmak scapularis yetişkin kadın i<html> s film 4 ve Şekil 3&#39;te gösterilmiştir. Bir tüp içine salyalar bir kene film 5 gözlenmektedir. Salivasyon teşvik etmek ve yetişkin dişi kene başına tükürük 20 ul fazla verim alınabilir pilokarpin kullanılan tükürük toplama yöntemi. <img alt="Şekil 1.." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig1.jpg" /> Şekil 1. Bir I. scapularis nympha Etiketli yapılar. Film 1. Ixodes scapularis hemolimf koleksiyon. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie1.avi">film izlemek için tıklayınız</a> . <img alt="Şekil 2." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig2.jpg" /> Şekil 2. Kirlenmemiş (A &amp; B) ve perisi bacağını gelen yayan (C &amp; D) hemolimf kontamine. 48 saatlik bir beslenen I. Film 2. Tükürük bezi çıkarma scapularis perisi.pload/3894/3894movie2.avi &quot;&gt; film izlemek için tıklayınız. 72 saat beslenen I. Film 3. Tükürük bezi çıkarma scapularis perisi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie3.avi">film izlemek için tıklayınız</a> . <img alt="Şekil 3." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig3.jpg" /> Şekil 3. Ixodes scapularis perisi tükrük bezleri. (A &amp; B) önce çıkarılması için bir 72 saat beslenmiş perisi olarak tükürük bezlerinin örnekleri. (C) tükürük bezi küme kaldırıldı. Film 4. Tükürük toplama bir yetişkin I. den kurmak scapularis dişi kene. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie4.avi">film izlemek için tıklayınız</a> . <img alt="Şekil 4." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig4.jpg" /> Yetişkin I. gelen Şekil 4. Tükürük toplama scapularis kadın ticks. (A &amp; B) kil modelleme tarafından tutulan kapiler tüpün unpulled sonu ile kılcal boru çekti sonunda onun hypostome bir slayt monte işaretleyin. (C &amp; D) salyalar yetişkin I. içeren Nemlendirilmiş odası scapularis dişi keneler. Film 5. Bir tüp içine salyalar scapularis dişi kene Ixodes. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie5.avi">film izlemek için tıklayınız</a> .

<ol><li>Quach, K. A., Boctor, F. N., Elston, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What%27s+eating+you%3F+Hyalomma+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Cutis%22%5BJournal%5D)">What's eating you? Hyalomma ticks.</a> Cutis. 87, 165-167 (2011).</li>
<li>Graham, J., Stockley, K., Goldman, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick-borne+illnesses%3A+a+CME+update%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr.+Emerg.+Care%22%5BJournal%5D)">Tick-borne illnesses: a CME update.</a> Pediatr. Emerg. Care. 27, 141-147 (2011).</li>
<li>Nuttall, P. A., Paesen, G. C., Lawrie, C. H., Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vector-host+interactions+in+disease+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Microbiol.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Vector-host interactions in disease transmission.</a> J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 2, 381-386 (2000).</li>
<li>Estrada-Pena, A., Jongejan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ticks+feeding+on+humans%3A+a+review+of+records+on+human-biting+Ixodoidea+with+special+reference+to+pathogen+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Appl.+Acarol%22%5BJournal%5D)">Ticks feeding on humans: a review of records on human-biting Ixodoidea with special reference to pathogen transmission.</a> Exp. Appl. Acarol. 23, 685-715 (1999).</li>
<li>Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogen-tick-host+interactions%3A+Borrelia+burgdorferi+and+TBE+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Zentralbl+Bakteriol%22%5BJournal%5D)">Pathogen-tick-host interactions: Borrelia burgdorferi and TBE virus.</a> Zentralbl Bakteriol. 289, 492-505 (1999).</li>
<li>Jones, L. D., Hodgson, E., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+virus+transmission+by+tick+salivary+glands%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Enhancement of virus transmission by tick salivary glands.</a> J. Gen. Virol. 70, 1895-1898 (1989).</li>
<li>Labuda, M., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick-borne+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick-borne viruses.</a> Parasitol. 129, 221-245 (2004).</li>
<li>Socolovschi, C., Mediannikov, O., Raoult, D., Parola, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+tick-borne+bacterial+diseases+in+Europe%5BTitle%5D)+AND+%22Parasite%22%5BJournal%5D)">Update on tick-borne bacterial diseases in Europe.</a> Parasite. 16, 259-273 (2009).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Interactions+that+Enable+Movement+of+the+Lyme+Disease+Agent+from+the+Tick+Gut+into+the+Hemolymph%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Molecular Interactions that Enable Movement of the Lyme Disease Agent from the Tick Gut into the Hemolymph.</a> PLoS Pathog. 7, e1002079(2011).</li>
<li>Piesman, J., Schneider, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+changes+in+Lyme+disease+spirochetes+during+transmission+by+nymphal+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Appl.+Acarol%22%5BJournal%5D)">Dynamic changes in Lyme disease spirochetes during transmission by nymphal ticks.</a> Exp. Appl. Acarol. 28, 141-145 (2002).</li>
<li>Brossard, M., Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick+immunobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick immunobiology.</a> Parasitol. , Suppl 129. S161-S176 (2004).</li>
<li>Machackova, M., Obornik, M., Kopecky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+salivary+gland+extract+from+Ixodes+ricinus+ticks+on+the+proliferation+of+Borrelia+burgdorferi+sensu+stricto+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Effect of salivary gland extract from Ixodes ricinus ticks on the proliferation of Borrelia burgdorferi sensu stricto in vivo.</a> Folia Parasitol. 53, 153-158 (2006).</li>
<li>Nuttall, P. A., Labuda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick-host+interactions%3A+saliva-activated+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick-host interactions: saliva-activated transmission.</a> Parasitol. 129, 177-189 (2004).</li>
<li>Anguita, J., Hedrick, M. N., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+of+Borrelia+burgdorferi+in+the+tick+and+the+mammalian+host%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Adaptation of Borrelia burgdorferi in the tick and the mammalian host.</a> FEMS Microbiol. Rev. 27, 493-504 (2003).</li>
<li>Hovius, J. W., van Dam, A. P., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick-host-pathogen+interactions+in+Lyme+borreliosis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick-host-pathogen interactions in Lyme borreliosis.</a> Trends Parasitol. 23, 434-438 (2007).</li>
<li>Dunham-Ems, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+reveals+a+biphasic+mode+of+dissemination+of+Borrelia+burgdorferi+within+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Live imaging reveals a biphasic mode of dissemination of Borrelia burgdorferi within ticks.</a> Journal Clin. Invest. 119, 3652-3665 (2009).</li>
<li>Ribeiro, J. M., Mather, T. N., Piesman, J., Spielman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissemination+and+salivary+delivery+of+Lyme+disease+spirochetes+in+vector+ticks+%28Acari%3A+Ixodidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Dissemination and salivary delivery of Lyme disease spirochetes in vector ticks (Acari: Ixodidae).</a> J. Med. Entomol. 24, 201-205 (1987).</li>
<li>Piesman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+of+Lyme+disease+spirochetes+%28Borrelia+burgdorferi%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Appl.+Acarol%22%5BJournal%5D)">Transmission of Lyme disease spirochetes (Borrelia burgdorferi.</a> Exp. Appl. Acarol. 7, 71-80 (1989).</li>
<li>De Silva, A. M., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+migration+of+Borrelia+burgdorferi+in+Ixodes+ticks+during+blood+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Trop.+Med.+Hyg%22%5BJournal%5D)">Growth and migration of Borrelia burgdorferi in Ixodes ticks during blood feeding.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 53, 397-404 (1995).</li>
<li>Horka, H., Cerna-Kyckova, K., Skallova, A., Kopecky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick+saliva+affects+both+proliferation+and+distribution+of+Borrelia+burgdorferi+spirochetes+in+mouse+organs+and+increases+transmission+of+spirochetes+to+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Med.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Tick saliva affects both proliferation and distribution of Borrelia burgdorferi spirochetes in mouse organs and increases transmission of spirochetes to ticks.</a> Int. J. Med. Microbiol. 299, 373-380 (2009).</li>
<li>Brossard, M., Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunology+of+interactions+between+ticks+and+hosts%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Immunology of interactions between ticks and hosts.</a> Med. Vet. Entomol. 11, 270-276 (1997).</li>
<li>Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick+modulation+of+host+immunity%3A+an+important+factor+in+pathogen+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick modulation of host immunity: an important factor in pathogen transmission.</a> Int. J. Parasitol. 29 (99), 851-859 (1999).</li>
<li>Binnington, K. C., Kemp, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+tick+salivary+glands+in+feeding+and+disease+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Role of tick salivary glands in feeding and disease transmission.</a> Adv. Parasitol. 18, 315-339 (1980).</li>
<li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+neutrophil+function+by+two+tick+salivary+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Inhibition of neutrophil function by two tick salivary proteins.</a> Infect. Immun. 77, 2320-2329 (2009).</li>
<li>Montgomery, R. R., Lusitani, D., De Boisfleury Chevance, A., Malawista, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick+saliva+reduces+adherence+and+area+of+human+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Tick saliva reduces adherence and area of human neutrophils.</a> Infect. Immun. 72, 2989-2994 (2004).</li>
<li>Lima, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+infectivity+of+the+Lyme+disease+spirochete+Borrelia+burgdorferi+derived+from+Ixodes+scapularis+salivary+glands+and+midgut%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Differential infectivity of the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi derived from Ixodes scapularis salivary glands and midgut.</a> J. Med. Entomol. 42, 506-510 (2005).</li>
<li>Severinova, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-inoculation+of+Borrelia+afzelii+with+tick+salivary+gland+extract+influences+distribution+of+immunocompetent+cells+in+the+skin+and+lymph+nodes+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Co-inoculation of Borrelia afzelii with tick salivary gland extract influences distribution of immunocompetent cells in the skin and lymph nodes of mice.</a> Folia Microbiol. 50, 457-463 (2005).</li>
<li>How to pull capillary tubes [Internet]. , benchflydotcom. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.youtube.com/watch?v=2yKHvKCatmM">http://www.youtube.com/watch?v=2yKHvKCatmM</a> (2009).</li>
<li>Labuda, M., Jones, L. D., Williams, T., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+tick-borne+encephalitis+virus+transmission+by+tick+salivary+gland+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Enhancement of tick-borne encephalitis virus transmission by tick salivary gland extracts.</a> Med. Vet. Entomol. 7, 193-196 (1993).</li>
<li>Kariu, T., Coleman, A. S., Anderson, J. F., Pal, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+Rapid+Transfer+and+Localization+of+Lyme+Disease+Pathogens+Within+the+Tick+Gut%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Methods for Rapid Transfer and Localization of Lyme Disease Pathogens Within the Tick Gut.</a> J. Vis. Exp. (48), e2544(2011).</li>
<li>Edwards, K. T., Goddard, J., Varela-Stokes, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examination+of+the+internal+morphology+of+the+Ixodid+tick+Amblyomma+maculatum+koch%2C+%28Acari%3AIxodidae%29%3B+a+%22How-to%22+pictorial+dissection+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Midsouth+Entomologist%22%5BJournal%5D)">Examination of the internal morphology of the Ixodid tick Amblyomma maculatum koch, (Acari:Ixodidae); a "How-to" pictorial dissection guide.</a> Midsouth Entomologist. 2, 28-39 (2009).</li>
<li>Ledin, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Borreliacidal+activity+of+saliva+of+the+tick+Amblyomma+americanum%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Borreliacidal activity of saliva of the tick Amblyomma americanum.</a> Med. Vet. Entomol. 19, 90-95 (2005).</li>
<li>Ribeiro, J. M., Zeidner, N. S., Ledin, K., Dolan, M. C., Mather, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+much+pilocarpine+contaminates+pilocarpine-induced+tick+saliva%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">How much pilocarpine contaminates pilocarpine-induced tick saliva?</a> Med. Vet. Entomol. 18, 20-24 (2004).</li>
<li>Barker, R. W., Burris, E., Sauer, J. R., Hair, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition+of+tick+oral+secretions+obtained+by+three+different+collection+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Composition of tick oral secretions obtained by three different collection methods.</a> J. Med. Entomol. 10, 198-201 (1973).</li>
<li>Burgdorfer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemolymph+test.+A+technique+for+detection+of+rickettsiae+in+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Trop.+Med.+Hyg%22%5BJournal%5D)">Hemolymph test. A technique for detection of rickettsiae in ticks.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 19, 1010-1014 (1970).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Kene hemolimf, tükrük bezleri ve tükürük toplama kene kaynaklı patojen bulaşma çalışmada önemlidir, yaygınlık, yaygınlaştırma, proliferasyon ve kene ve ana 6,11-13,20,23,29 hem de kalıcılık. Bir kene 30,31 incelemek için çeşitli yollar vardır. Ancak, tükrük bezleri alırken düzgün böylece tükürük bezlerinin yırtılması veya kenenin kalıntıların kayıp değildir kene incelemek için önemlidir. Tükürük bezleri onlar ortabağırsak kontaminasyonu gidermek için ve sonra tükürük bezi ekstraktı (SGE) elde etmek...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td></tr><tr><td> Hidrojen peroksit </td><td> Balıkçı </td><td> H312-500 </td></tr><tr><td> Etanol </td><td> Acros </td><td> 61509-5000 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Boston Bioproducts </td><td> BM-2205 </td></tr><tr><td> Dumont Güzel forseps (3C) </td><td> Balıkçı </td><td> NC9906085 </td></tr><tr><td> Silan tedavi mikroskop </td><td> Bioworld </td><td> 42763007-1 </td></tr><tr><td> Pap kalem </td><td> Bioworld </td><td> 21750008-1 </td></tr><tr><td> Süper don artı mikroskop </td><td> Balıkçı </td><td> 12-550-18 </td></tr><tr><td> Pilokarpin </td><td> Sigma </td><td> P6503-5G </td></tr><tr><td> Proteaz inhibitörü kokteyl </td><td> Sigma </td><td> P2714 </td></tr><tr><td> # 11 bistüri atılabilir </td><td> Tüy </td><td> 2975 # 11 </td></tr><tr><td> Zehirli kil modelleme </td><td&gt; Fisher </td><td> S17307 </td></tr><tr><td> Kapiler tüpler </td><td> Chase bilimsel Cam, inc </td><td> 40A502 </td></tr></tbody></table>

ixodes scapularis keneler gelen tükürük, tükürük bezi ve hemolimf koleksiyonu

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Keneler dünya çapında bulunur ve birçok kene kaynaklı hastalıklar insanlarda eziyet edilir. Keneler, Lyme hastalığı ve kene kaynaklı tekrarlayan ateş (Borrelia spp.), Rocky Mountain Benekli Ateşi (Rickettsia rickettsii), Ehrlichiosis (Ehrlichia chaffeensis ve E. equi), anaplazmoz (Anaplasma phagocytophilum), ansefalit (kene neden patojenler için vektörleri kaynaklı ensefalit virüsü), babesiosis (Babesia spp.), Kolorado kene ateşi (Coltivirus) ve tularemi (Francisella tularensis) 1-8. Düzgün konak içine aktarılacak bu enfeksiyon ajanları farklı şekilde, gen ekspresyonu düzenleyen kene proteinleri ile etkileşim ve kene 3,9-13 yoluyla göç ederler. Örneğin, Lyme hastalığı ajanı, Borrelia burgdorferi, kenenin enzootik döngüsü 14,15 şölen ve kıtlık aşamalarına farklı gen ifade aracılığıyla uyarlar. Dahası, bir Ixodes kene gibi bir tüketirbloodmeal Borrelia çoğaltmak ve ortabağırsak gelen onlar tükürük bezlerinin seyahat ve sınırdışı tükürük 9,16-19 ile ev sahibi içine iletilir hemocoel, göç. Kene beslenirken ev sahibi genellikle güçlü bir hemostatik ve immün yanıtı 11,13,20-22 ile yanıt verir. Bu konak yanıtları rağmen, I. kene tükürük 3,11,20,21,23 besleyen kene yardım immünomodülatör olan proteinlerin parçalayıcı ajanlar, antikoagülanlar ve fibrinolysins içerdiğinden scapularis birkaç gün süreyle besleyebilir. Kene tükürük veya tükürük bezi ekstraktı (SGE) tarafından sahip immünomodülatör faaliyetleri çok sayıda kene kaynaklı patojenlerin 3,20,24-27 iletimi, çoğalması ve yayılması kolaylaştırmak. Daha da kenelerin beslenme aktif incelemek ve kene tükürük toplamak esastır enfeksiyöz ajanlar hastalığı nasıl neden kene kaynaklı anlamak için. Bu video protokol için diseksiyon teknikleri gösteriyorhemolimf toplanması ve aktif I. beslenmesini tükürük bezlerinin çıkarılması scapularis periler 48 sonra ve 72 saat sonrası fare yerleşimi. Ayrıca yetişkin bir dişi I. tükürük toplama göstermek scapularis kene.

Keneler hemolimf, tükrük bezleri ve tükürük toplama patojenler hastalıklara nasıl neden kene kaynaklı incelemek önemlidir. Bu protokolü biz beslenmesini hemolimf ve tükrük bezleri toplamak nasıl gösterilmektedir<em&gt; Scapularis Ixodes</em&gt; Periler. Ayrıca kadın tükürük toplama göstermek<em&gt; I. scapularis</em&gt; Yetişkinler.

Ixodes scapularis Keneler gelen tükürük, Tükürük Bezi ve hemolimf Koleksiyonu

Keneler dünya çapında bulunur ve insanlara kene kaynaklı birçok hastalık bulaştırır. Keneler, Lyme hastalığına ve kene kaynaklı ... neden olan patojenler için vektör görevi görür.

Bu prosedürün genel amacı, aktif olarak beslenen ex ODI scapularis kenelerinden hemolenf, tükürük bezleri ve tükürük toplamakla ilgilidir. Bu işlem, öncelikle hemolenfi dışarı atmak için kenenin bacağının distal ekleminden ampute edilmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, kenenin fosfat tamponlu salin (PBS) içerisinde diseke edilmesi, tükürük bezlerinin konumunun belirlenmesi ve bunların temiz bir PBS havuzuna aktarılmasıyla tükürük bezleri toplanır.Tükürük, mikro pipetin sırtına pilokarpin uygulanarak, kenenin ağız kısmının ortak bir kapiler tüpe yerleştirilmesi ve kenenin tüp içine tükürük salgılamasına izin verilmesiyle toplanır. Sonuç olarak, immünofloresan veya protein analizleri aracılığıyla hemolenf veya tükürük bezlerinde bulunan mikroorganizmalar belirlenebilir. Diğer sonuçlar arasında, tükürük proteinleri ile protein etkileşimleri yer almaktadır.Genel olarak, hemolenf toplama konusunda deneyimsiz kişiler, kenenin orta bağırsağını yırtmadan immobilize etmenin zorluğu nedeniyle zorlanabilirler; bu durum hemolenfin kontamine olmasına yol açar. Genel olarak, tüm keneler salya üretmediği için kişiler salya toplama aşamasında zorluk yaşayabilirler. Bu nedenle, doyuma ulaşmış veya

saliva-salivary-gland-hemolymph-collection-from-ixodes-scapularis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Sağlıklı laboratuarda yetiştirilen kenelerin üretimi, kene biyolojisi ve kene patojen etkileşimleri üzerine çalışmalar için gereklidir. Burada, fare için düşük maliyetli ve stresli olgunlaşmamış kene beslemesi için basit bir protokolü gösteriyoruz.

yetiştirme<em&gt; Geyik kenesi,</em&gt; Siyah Ayaklı Tik Tak: Fare üzerinde Olgunlaşmamış Evreleri Besleme

Burada, dağınık şekilde ve geçici kene cesaret bir değiştirilmiş bütün-mount In situ hibridizasyon yaklaşım kullanarak uygun microbiota varlığı değerlendirmek için bir protokol mevcut.

Kene bağırsaklar tarafından bütün-mount Situ hibridizasyon Microbiota görselleştirme

Kene hemolymph analizi, bazı patojenlerin hastalığa neden olduğu ve keneler immünolojik olarak bu enfeksiyona nasıl yanıt vereceği konusunda önemli bir bilgi kaynağını temsil eder. Bu çalışmada, mantar propagülleri aşılamak ve Rhipicephalus Microplus tıkanmış kadınlarda hemolymph toplamak gösterilmiştir.

Hemolymph toplama ve Metarhizyum blastosporların omurgasız patoloji çalışmalarına doğru Rhipicephalus Microplus ticks içine inoculation

Bu çalışmada, laboratuvar faresine bağlı bir kapsül kullanılarak sert kenenin nymphal ve larva evreleri için bir besleme sistemi geliştirilmiştir. Besleme kapsülü esnek malzemelerden yapılır ve en az bir hafta boyunca fareye sıkıca bağlı kalır ve kene beslemenin rahat bir şekilde izlenmesini sağlar.

Laboratuvar Farelerde Olgunlaşmamış Sert Kene Aşamaları Enfestasyon için Kapsül Tabanlı Model

Mevcut protokol, mikroRNA'ların kene tükürük bezlerinden ve saflaştırılmış hücre dışı veziküllerden izolasyonunu tanımlamaktadır. Bu, yaygın olarak kullanılan reaktifleri ve sarf malzemelerini birleştiren evrensel bir prosedürdür. Yöntem aynı zamanda az sayıda kene kullanımına izin verir, bu da kolayca sıralanabilen kaliteli mikroRNA'larla sonuçlanır.

MikroRNA'ların Kene Ex Vivo Tükürük Bezi Kültürlerinden ve Hücre Dışı Veziküllerden İzolasyonu

Burada sunulan, çeşitli kene yaşam aşamalarının kısmi veya tam olarak engorgementine izin vermek için yapay bir membran sistemi aracılığıyla keneleri in vitro olarak kan beslemek için bir yöntemdir.

Ixodes scapularis için Kene Yapay Membran Besleme

Daha sonraki analizler için ölçülebilir hemolenfleri küçük eklembacaklılardan verimli bir şekilde toplamak için bir yöntem tarif ediyoruz.

Küçük Eklembacaklılardan Hemolenf Toplamak için Kesin ve Ölçülebilir Bir Yöntem

Bu makale, klinik araştırmalar için insanları larva Ixodes scapularis'e maruz bırakma metodolojisini sunmaktadır. Teknik nispeten basittir, araştırma gönüllüleri tarafından tolere edilebilir ve deneysel ihtiyaçlara göre değiştirilebilir. İnsan denekleri içeren bu tür araştırmalar, uygun düzenleyici makamlar tarafından onaylanan klinik çalışma protokolleri kapsamında yürütülmelidir.

İnsanların Larva Ixodes scapularis Kenelerine Deneysel Maruziyeti İçin Bir Model

Burada, vektör yeterliliği ve patojen-mikrobiyom etkileşimlerinin anlaşılmasını ilerletmek için kene kaynaklı patojenlerin dokuya özgü lokalizasyonunu incelemek için, beslenen bir kenenin diseksiyonunu takiben tükürük, hemolenf, tükürük bezleri ve orta bağırsak toplamak için bir protokol sunuyoruz.

Bireysel Kenelerden Tükürük, Hemolenf, Tükürük Bezleri ve Orta Bağırsağın Ekstraksiyonu (Acari: Ixodidae)

Bu yöntem, 3D baskılı bir oda ve laboratuvarda üretilmiş silikon membranı içeren in vitro kene kan besleme sisteminin geliştirilmesini öngörür. Sistem, kenelerin yapay beslenmesini sağlar, çeşitli beslenme evrelerinde kolayca örnekleme alınır ve düşük miktarda kan kullanılır; bu da ixodid kenelerini incelemek için paha biçilmez bir araç sağlar.

Ixodid kene araştırmalarında 3D baskılı bir odada yapay bir zardan beslenen kene kanı

Öğrenin Ixodes scapularis kenelerinden hemolimf, tükürük bezi ve tükürük toplama yöntemini. Bu teknik, kenelerin patojen bulaş mekanizmalarını anlamak ve hastalık kontrol stratejileri geliştirmek için kritik öneme sahiptir.

Ixodes scapularis Keneler gelen tükürük, Tükürük Bezi ve hemolimf Koleksiyonu

Daha fazla video keşfet