Name: KRİYOPREZERVE Numune Kurtarma için Do-It-Yourself Aygıt yanlışlıkla Kriyojenik Depolama Tankları içine Dropped (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: Keşfedin, sıvı azot tanklarından kriyoprezerve örnekleri güvenli ve hızlı bir şekilde kurtarmak için düşük maliyetli, kriyotoleranslı bir cihazın nasıl yapıldığını. Bu yöntem, örnek bütünlüğünü korur ve tek operatör tarafından kullanılabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

DIY kriyojenik alma cihazı projeler Kanser Araştırma programı, Fen Virginia Akademisi Mary Louise Andrews Ödülü sponsorluğunda &quot;biyoinformatik ve moleküler yaklaşımlar kullanılarak ökaryotik hücrelerde Modelleme bakteriyel protein prenylation&quot;, &quot;Plazma RNA Düzenleme Fizyolojik Anlam sırasında test edilmiştir Thomas F. Jeffress ve Kate Miller Jeffress Memorial Trust ve Devlet Sözleşme 16.740.11.0364 (Bilim ve Eğitim Bakanlığı, Rusya) tarafından desteklenen dendritik hücreler &quot;. Biz RNA bütünlük deneyi için yardım Beth Eom teşekkür etmek istiyorum.

1. Cryoboxes Almak İçin Cryotolerant Cihaz Meclisi <ol><li> . Pense kullanarak, 3 taraflı güçlü bağı (Şekil 1A) yapmak için bir L şeklinde güçlü-kravat Şekil 1B gösterildiği Not bir tarafı düzeltmek: güçlü-kravat boyutları Dewar boyun çapına bağlı olarak seçilebilir . </li><li> . Şekil 3 (AB) &#39;de gösterildiği gibi Cryoscoop temel teşkil Crown somun, pul ve vida kullanarak güçlü bir kravat-T kayışı (Şekil 2) Not böyle iki güçlü bağları Güvenli: İki güçlü bağları alınmasını sağlamak için kullanılır 5 ½ inç X 5 ½ inç cryoboxes. </li><li> Bir oluklu levha (Şekil 4) kullanarak, oluklu levha bir ucunda yuvaları ile güçlü-kravat T kayışı yuvalara hizalayın ve Hillman somun ve cıvatalar (Şekil 5) yardımıyla birlikte iki sabitleyin. Not: Eğer oluklu levha ve güçlü bir bağ Kullanıcı birlikte değilBana önceden delinmiş delikleri ile, delik karbür matkap kullanılarak delinmiş sahip olmak zorunda kalacaktır. </li><li> Şekil 6&#39;da gösterildiği gibi, pense yardımı ile yarılmış plakanın diğer ucu bükülür. (Bu adım isteğe bağlıdır). </li><li> Zaman sıvı azot içinde, Şekil 6&#39;da gösterildiği gibi daha iyi cihazı kavramak için köpük ile sap kaydırılır. (Isteğe bağlı) Not: otoklav öncesinde köpük çıkarın. </li></ol> 2. Cryovials Almak İçin Cryotolerant Cihaz Meclisi Cryotolerant DIY alma cihazı da cryovials alımı için adapte edilebilir. Bu sıvı azot (Şekil 7) şişeleri dışarı karıştırıyordu değiştirilmiş gösterildiği gibi bir paslanmaz çelik süzgeç ile düz taban yerine içerir. <ol><li> Sökün Crown fındık ve oluklu levha için güçlü-kravat T kayışı takılarak civatalar. </li><li> Oluklu levha paslanmaz çelik süzgeç takmadan önce, hafifçe boyun eğmek., bu kolay cihaz ile manevra yapacak süzgeç bir dudak gelirse, dudak aşağı eğmek için pense kullanın: Bir kepçe (Şekil 8) Not benzemek için bir açıyla yönlendirmek tabanına pense yardımı ile boşaltın. </li><li> Oluklu plaka üzerinde delikler ile birlikte süzgeç sap üzerinde delik hizalayın ve Hillman fındık ve Şekil 8&#39;de gösterildiği gibi cıvata yardımıyla Not süzgeci sabitleyin:. Süzgeç ön delikli gelmezse, size ihtiyacınız olacak karbür matkap ile delinmiş deliklere sahip düzenlemek. </li></ol> 3. Dewar itibaren Cryoboxes ve Cryovials alınıyor <ol><li> Başlamak için, kriyojenik eldiven takın ve manevra için oda izin Dewar 1 veya 2 Dondurucu rafları çıkarın. </li><li> Yavaşça güçlü-kravat T taban kayışı (Şekil 5) ile donatılmış dik Cryotolerant DIY alma cihazı ile Dewar alt kısmındaki kazıyorum ve kutu falle toplamak, hemen bir ılımanlaştırma nesne ile temas üzerine Sıvı azot kaynar azot gazı (Leidenfrost etkisi) yalıtım nesnesi zarflama. Dewar tankı Not altına n. Örneklerin alma önce cihaza soğutmak için, yavaş yavaş Dewar içine batırmak cihazı ve sıvı azot yukarıda adım geçmeden önce yeterince cihazı soğutulur. </li><li> Tankın dışına dondurucu kutusunun oymak için Dewar duvarları boyunca dik cihazı çekin. </li><li> Dewar altına alınan kutu tut. </li><li> Cryovials almak için, hafifçe bir süzgeç (Şekil 9) ile donatılmış cryoscoop ile Dewar alt kazıyın. </li><li> Cryobox alma benzer, dik cihaz çekin ve süzgeç toplanan şişeleri yakala. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar Gen çalışmaları büyük bir zorluk RNA kalitesini saklama koşullarına bağlı olduğunudondurulmuş doku örnekleri ve RNA 4 ayıklanır. Şekil 10 ikisi için toplam RNA bütünlüğü üzerine numune işleme etkisini gösterir. Aynı doku kaynağı (insan adipoz) toplam RNA farklı numune işleme tabi tutuldu. Önce deneme için, sağlam toplam RNA preperatı yaklaşık iki kat 18S rRNA bant (Şekil 10, hat 1) gibi yoğun olarak 28S rRNA bandı ile net 28S ve 18S rRNA bantları gösterir. 18S yoğunluk oranı 2:1 5 ayrılmaktadır: Bu, 2:1 oranında (28S: 18S) kısmen bozulmuş RNA yayma, ya da 28S olarak görünürken, RNA sağlam olduğunu bir göstergesidir. 3-4 Lanes önemli ölçüde bozulma ile RNA örnekleri gösteriyor. Bu RNA örnekleri böylece periyodik düşmüş şişeleri ve kutuları hatırlama (Şekil 10, Lane 3-4 gerekliliği nedeniyle boşaltılması ile uzun süreli depolama modelleme, Dewar (Yöntem A) kısa vadeli alımlar tarafından tekrar kısmi defreezing tabi tutuldu ). Bununla birlikte, örnekler Dewar servisli saklananDIY cihazı (Yöntem B) kullanılarak ve böylece herhangi bir kısmi defreezing, bozulmamış RNA (Şekil 10, Lane 2) içerir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig1.jpg" /> Şekil 1.. A) 3 temel iki taraflı güçlü-kravat gösterilen boyutları oluşur. Her güçlü-kravat büyük bir önceden delinmiş delik (katı ok) ve her yüzünde birden fazla küçük delik (küçük ok) içerir. Bu somun ve civata ile bağlantı sağlamak için bir seçenek sağlar. Ayrıca küçük delikler numune alımı sırasında sıvı azot hızlı drenaj sağlar. B) güçlü-kravat her bir tarafı L şeklinde güçlü-kravat yapmak için pense yardımı ile doğruldu edilir. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig2.jpg" /> Şekil 2. Güçlü-kravat T kayışı birlikte güçlü bağları korumak için kullanılır. Güçlü-kravat gibi, T-kayışı büyük bir önceden delinmiş delik (katı ok) ve iki küçük delik (smal varHer köşesinde l ok). Somun ve cıvata kullanılarak Askı - Bu T uzunluğu boyunca güçlü bağları güvence sağlar. Ayrıca, yarıklı plakasına T-kayışı sabitleme sağlar. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig3.jpg" /> Şekil 3. A) Her bir güçlü-kravat) B. Taç cıvata somun, cıvata ve pullar kullanarak uzunluğu boyunca, T-kayışı bir köşesine bağlanır İki güçlü bağları 5 ½ inç X 5 ½ almak için birbirine bitişik güvenli cryoboxes inç. X 2 inç 2 gibi küçük cryoboxes için içeri, tek bir güçlü-kravat bir T-kemersiz oluklu levha doğrudan bağlanabilir. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig4.jpg" /> Şekil 4. Düz plaka kolu olarak kullanılır Oluklu. Oluklu plakası uzunluğu Dewar derinliği bağlıdır. Bu durumda, yarıklı plakanın 4 ayak kullanılmıştır. Oluklu levha kalınlığı kritik sDewar dolu sıvı azot örnekler alınırken ince oluklu levhalar (&lt;14 ölçü) cihazı dayanıksız hale ince. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/3903/3903fig5.jpg" /> Şekil 5. Güçlü bağları ve T kayışı oluşan düz taban sonra oluklu levha bir ucunda sabitlenir. T kayışı kalan köşesinde büyük delik düz plaka üzerinde yuva ile uyumlu ve hex cıvata ve somun ile bağlanır. Bu cihaz şu anda Dewar gelen cryoboxes almak için de kullanılabilir. <img alt="Şekil 6" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig6.jpg" /> Şekil 6. Oluklu düz plaka bir ucu, pense ile bükülür ve özellikle de, bu durumda gösterilen derin Dewar, daha iyi kavrama sağlamak için köpük ile kaplıdır. <img alt="Şekil 7" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig7.jpg" /> Şekil 7. Tel örgü ve paslanmaz çelik saplı SüzgeçDewar gelen cryovials almak için kullanılır. Kolu yuvası ile sağlanan değilse, karbür matkap ucu ile delik delmek için gerekli olacaktır. <img alt="Şekil 8" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig8.jpg" /> Şekil 8. Cryovials alınmasını kolaylaştırmak için, süzgeç kepçe şeklindeki süzgeç almak için pense ile birlikte boyun bükülür. Süzgeç Bu durumda olduğu gibi dudağı sağlanmamışsa, bu pense bükmek için kullanılabilir. Bu süzgeç Dewar içinde yakalanmak değil sağlar. <img alt="Şekil 9" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig9.jpg" /> Şekil 9. Süzgeç altıgen somun ve cıvata kullanılarak bir ucunda oluklu düz plaka üzerine sabitlenir. <img alt="Şekil 10" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig10.jpg" /> 10 Şekil. RNA örnek bütünlüğünü farklı numune alma şartlarına tabi. Keşfetmek için RNA kalite c işleme örnek tarafından nasıl etkilendiğinionditions, aynı kaynaktan RNA örnekleri arasında bir dizi handlings için iki yöntem tabi tutuldu. Yöntem A böylece DIY cihaz kullanarak örnek almasını tabi Dewar, hiçbir kısmi defreezing RNA depolama oluşuyordu. Yöntem B böylece periyodik düşmüş örnekleri almak için boşaltma ile uzun süreli depolama modelleme, Dewar kısa vadeli alımlar tarafından tekrar kısmi defreezing maruz Dewar RNA depolama oluşuyordu. Toplam RNA bütünlük sonra jel elektroforezi ile analiz edildi. Lane1: Örnek önce Dewar depolama; Lane 2: Yöntem A tarafından alınmalarını tabi Dewar örnek; Lane 3, 4: Yöntem B tarafından alınmalarını tabi Dewar örnek; M: 100 bp merdiveni.

<ol><li>Kittel, P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKittel%2C+P+%22Advances+in+Cryogenic+Engineering%22">Advances in Cryogenic Engineering</a>. , Springer. 41(1996).</li>
<li>Edeskuty, F. J., Walter, F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEdeskuty%2C+FJ+%22Stewart+Safety+in+the+handling+of+cryogenic+fluids%22">Stewart Safety in the handling of cryogenic fluids</a>. , Plenum Press. New York. (1996).</li>
<li>Council, N. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCouncil%2C+NR+%22Prudent+Practices+in+the+Laboratory%3A+Handling+and+Management+of+Chemical+Hazards%22">Prudent Practices in the Laboratory: Handling and Management of Chemical Hazards</a>. , National Academies Press. (2011).</li>
<li>Muyal, J., Muyal, V., Kaistha, B., Seifart, C., Fehrenbach, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+comparison+of+RNA+extraction+techniques+from+frozen+and+fresh+lung+tissues%3A+checkpoint+towards+gene+expression+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Systematic comparison of RNA extraction techniques from frozen and fresh lung tissues: checkpoint towards gene expression studies.</a> Diagnostic Pathology. 4, 9(2009).</li>
<li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+cloning%3A+a+laboratory+manual%22">Molecular cloning: a laboratory manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2001).</li>
<li>Holland, N. T., Smith, M. T., Eskenazi, B., Bastaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+sample+collection+and+processing+for+molecular+epidemiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Mutation+Research%2FReviews+in+Mutation+Research%22%5BJournal%5D)">Biological sample collection and processing for molecular epidemiological studies.</a> Mutation Research/Reviews in Mutation Research. 543, 217-234 (2003).</li>
<li>Lynch, P. T. CELL, TISSUE AND ORGAN CULTURE | Storage and Cryopreservation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLynch%2C+PT+%22Encyclopedia+of+Rose+Science%22">Encyclopedia of Rose Science</a>. , 106-111 (2003).</li>
<li>Crawford, R. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCrawford%2C+RJ+%22Plastics+Engineering%22">Plastics Engineering</a>. , Elsevier Butterworth-Heinemann. (1998).</li>
<li>Gorenc, B., Tinyou, R., Syam, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGorenc%2C+B+%22Steel+designers%27+handbook%22">Steel designers' handbook</a>. , University of New South Wales Press. (1996).</li>
<li>Harper, C. A., Petrie, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plastics+materials+and+processes%3A+a+concise+encyclopedia%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley-Interscience%22%5BJournal%5D)">Plastics materials and processes: a concise encyclopedia.</a> Wiley-Interscience. , (2003).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Dewar tankın dibinden cryoboxes ve cryovials almak en yaygın yöntemlerden biri yedek bir kap içine sıvı azot boşaltacaktır ve şişede kalan veya dekante sıvı azot içinde yüzen örnekleri çekin etmektir. Ancak bu, sıvı azot buharı uzun süre maruz 2. nedeniyle kriyojenik yanıklara veya boğulmaya neden olabilecek güvenli olmayan bir uygulamadır. Düşmüş cryovials alımı Diğer yaygın yolu cryovial maşa 3 kullanımını gerektirir. Bununla birlikte, sıvı azot ile doldurulmuş tankının koyu boşluğu içinde sınırl...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Hillman Grup Kaplama Oluklu Düz 1-3/8 x 4 metre; 14 Gauge </td><td> Yerel Donanım dükkanı </td><td> N / A </td><td> 1 birim gerekli </td></tr><tr><td> Taç Bolt Paslanmaz Çelik # 6 - Oval Başkanı Phillips Sürücü Makine Vida 32 inç x 3/8 </td><td> Yerel Donanım dükkanı </td><td> Model # 42281 </td><td> Gerekli 4 adet </td></tr><tr><td> Taç Bolt Çinko Kaplama Çelik Fender Yıkayıcılar inç x 1-1/2 3/8 inç </td><td> Yerel Donanım dükkanı </td><td> Model # 20122 </td><td> Gerekli 4 adet </td></tr><tr><td> Taç Bolt Çinko Kaplama # 8-32 Makine Vida Somun </td><td> Yerel Donanım dükkanı </td><td> Model # 18512 </td><td> Gerekli 4 adet </td></tr><tr><td> Simpson Güçlü-Kravat BC40Z Yarım Baz 4 inç In.x4 </td><td> Yerel Donanımalışveriş </td><td> Model # BC40Z </td><td> Gerekli 2 adet </td></tr><tr><td> T Askı inç x 6 inç Simpson Strong-Tie 6 </td><td> Yerel Donanım dükkanı </td><td> Model # 66T </td><td> 1 birim gerekli </td></tr><tr><td> Oneida 6 &quot;Mesh Süzgeç </td><td> Yerel Bakkal dükkanı </td><td> Model # 7859W </td><td> 1 birim gerekli </td></tr><tr><td> Hillman Grup Hex Fındık 3/8-16 Galvanizli </td><td> Yerel Donanım dükkanı </td><td> Model #: 810.509 </td><td> Gerekli 6 adet </td></tr><tr><td> Hillman Grup Hex Cıvata 3/8- 16 Galvanizli </td><td> Yerel Donanım dükkanı </td><td></td><td> Gerekli 4 adet </td></tr><tr><td> Izolasyonu için köpük </td><td> Yerel Donanım dükkanı </td><td></td><td> 1 birim gerekli </td></tr><tr><td> Sürücü Vida </td><td> Yerel Donanım dükkanı </td><td></td><td> 1 birim gerekli </td></tr><tr><td> Kerpeten </td><td> Yerel Donanım dükkanı </td><td></td><td> 1 birim gerekli </td></tr></tbody></table>

krİyoprezerve numune kurtarma için do-it-yourself aygıt yanlışlıkla kriyojenik depolama tankları içine dropped

Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks 

Sıvı nitrojen (-196 ° C) sıvı basıncı altında tutulması son derece soğuk, kokusuz, renksiz. Bu, genellikle kan, hücre ve doku 1,2 gibi biyolojik maddeler uzun süreli depolama için bir kriyojenik sıvısı olarak kullanılır. Sıvı azot kriyojenik doğası, numune korunması için ideal iken, kişi canlı dokuların hızlı dondurma neden olabilir - &#39;kriyojenik yanık&#39; 2 olarak bilinen, yakın depolama ve Dewar numune alımı ilgili kişiler şiddetli soğuk yakmasına yol açabilir. Ayrıca sıvı azot buharlaşır gibi, havadaki oksijen konsantrasyonu azaltır ve özellikle kapalı alanlarda 2, asfiksi neden olabilir. Laboratuvarlarımızda, biyolojik örnekler genellikle Dewar tankları 1 içinde paslanmaz çelik raflara yığılmış cryovials veya cryoboxes saklanır. Bu depolama rafları rafları dışarı kaymasını kutuları önlemek için uzun bir şaft ile ve dibine verilmektedirRutin kullanım sırasında Dewar. Tüm çok sık, ancak, değerli örnekleri ile kutular veya şişeleri dışarı kayma ve sıvı nitrojen dolu tankın dibine çöker. Bu gibi durumlarda, numuneler tediously yedek bir kap veya atmadan içine sıvı azot transfer sonra elde edilebilir. Kutuları ve şişeleri sonra nispeten güvenli boşalttı Dewar kurtarıldı olabilir. Ancak, sıvı azot, genişleme hızının kriyojenik doğa batık numune alma tehlikeli hale getirir. Genellikle numune alma tek bir kişi tarafından gerçekleştirilen asla bu Emniyet Müdürlükleri tarafından önerilir. Başka bir alternatif flakon 3 çıkarmak için piyasada bulunan serin gaspçı veya maşa kullanmaktır. Ancak, koyu sıvı dolu Dewar içinde sınırlı görünürlük kullanımı önemli bir sınırlama teşkil etmektedir. Bu makalede, güvenli bir iki kriyojenik sıvılar içeren Dewar numune alma yapan bir Cryotolerant DIY alma cihazı, inşaat tarifnd kolay.

Burada sıvı nitrojen dolu Dewar tanklardan numune alımı için düşük maliyetli, dayanıklı cryotolerant cihaz sunuyoruz. Inşaat ve cihaz modüler tasarım kolaylığı kriyojenik tanklarından numune alma işlemi güvenli ve kolay hale getirir.

KRİYOPREZERVE Numune Kurtarma için Do-It-Yourself Aygıt yanlışlıkla Kriyojenik Depolama Tankları içine Dropped

Sıvı nitrojen; renksiz, kokusuz, aşırı soğuk (-196 °C) ve basınç altında tutulan bir sıvıdır. Yaygın olarak uzun süreli... için kriyojenik bir akışkan olarak kullanılır.

Bu prosedürün amacı, kolayca inşa edilebilen bir cihaz kullanarak sıvı nitrojenle dolu duo tanklardaki kriyobox ve kriyotüpler içindeki örneklerin geri alınmasını kolaylaştırmaktır. Bu işlem, öncelikle manevra alanı sağlamak için duo tanktan bir veya iki dondurucu rafın çıkarılması ve ardından cihazın dikey olarak duo tanka yerleştirilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, cihazla duo tankın tabanı boyunca nazikçe sıyırma işlemi yapmaktır.Ardından, cihazı dondurucu kutusunu tanktan çıkarmak için duvarlar boyunca dik bir şekilde çekin. Son adım, dondurucunun tabanından çıkarılan kutuyu yakalamak ve çıkarılan dondurucu raflarını yerine yerleştirmektir. Bu tekniğin, dekantasyon gibi mevcut yöntemlere karşı temel avantajı, numune bütünlüğünü koruyan ve tek bir operatör tarafından gerçekleştirilebilen kolay, güvenli ve hızlı bir alternatif sunmasıdır. Kriyotoleranslı cihazın montajına başlamak için, üç tarafı olan güçlü bir bağın bir tarafını pense yardımıyla düzleştirerek LHA tipi güçlü bir bağ oluşturun.Burada görüldüğü gibi, güçlü bağın boyutları, operatörün boyun çapına bağlı olarak seçilebilir. Cihazın 5,5 x 5,5 inçlik kriyokutuları geri alabilmesini sağlamak için bu tür iki güçlü bağ yapılmalıdır. Kriyoskopun tabanını oluşturmak için bunları bir kron cıvata, somun pulu ve vida kullanarak güçlü bir bağ TST kayışıyla sabitleyin.Cihaz şimdi burada görüldüğü şekilde görünmelidir. Şimdi, kanallı bir plaka kullanarak, güçlü bağlama T-şeridindeki kanalları kanallı plakanın bir ucundaki kanallarla hizalayın. Ardından ikisini Hillman somun ve civatalarla birbirine sabitleyin.Yarıklı plaka ve güçlü bağlarda önceden delinmiş delikler yoksa, sabitleme için delikler açın. Arzu edilirse, yarıklı plakanın diğer ucu bükülerek ve süngerle sarılarak bir tutamak oluşturulabilir. Cihazı daha iyi kavrayabilmek için, suyla temizlemeden önce süngeri çıkardığınızdan emin olun.Kriyotoleranslı DIY geri alma cihazı, kriyo tüplerinin geri alınması için de uyarlanabilir. Bu işlem, düz tabanın, tüpleri sıvıdan kepçeyle çıkarmak için değiştirilmiş paslanmaz çelik bir süzgeçle değiştirilmesini içerir. Montaja başlamak için öncelikle taç somunları ve cıvataları sökün ve güçlü lastik T-kayışı kanallı plakaya takın.Ardından, paslanmaz çelik süzgeci yarıklı plakaya takmadan önce, tabanı bir kepçeye benzeyecek şekilde açılı hale getirmek için süzgecin boyun kısmını bir pense yardımıyla nazikçe bükün. Eğer kullanılan süzgeç kenarlıklıysa, kenarlığı aşağı doğru bükmek için pense kullanın. Bu işlem, cihazla çalışmayı kolaylaştıracaktır.Süzgecin sapındaki deliği, delikli plaka üzerindeki deliklerle hizalayın ve süzgeci Hillman somun ve civatalar kullanarak sabitleyin. Süzgeç önceden delinmiş şekilde gelmemişse delikler açın. Bir dondurucudan kriyojenik kutuları çıkarmaya başlamadan önce, mutlaka kriyojenik eldivenlerinizi giydiğinizden emin olun.Ardından, cihazla manevra yapabilmek için dondurucudan bir veya iki dondurucu rafını çıkarın. Sonra, güçlü bağlayıcı ttra tabanlı dik kriyotoleranslı DIY geri kazanım cihazını kullanarak, dondurucu tankının tabanına düşen kutuyu toplamak için taban boyunca nazikçe kazıyın. Ardından, dondurucu kutusunu tanktan çıkarmak için cihazı duvarlar boyunca dik bir şekilde yukarı çekerek kutuyu alın.Kutunun tekrar hazneye kaymasını önlemek için cihazın dikey tutulması ve düz bir şekilde yukarı çekilmesi gerektiğini unutmayın. Kriyo tüplerini geri almak için, süzgeçli kriyo kepçesini kullanarak, kriyo kutusunun geri alınmasına benzer şekilde haznenin tabanını nazikçe kazıyın, cihazı dik konuma getirin ve süzgeçte toplanan tüpleri alın. Gen ekspresyon çalışmalarındaki temel zorluklardan biri, RNA kalitesinin hem dondurulmuş doku örnekleri hem de ekstrakte edilen RNA için saklama koşullarına bağlı olmasıdır.Bu şekil, örnek hazırlama ve taşıma işlemlerinin toplam RNA bütünlüğü üzerindeki etkisini göstermektedir. Aynı doku kaynağından elde edilen toplam RNA'lar, deneyden önce farklı örnekleme işlemlerine tabi tutulmuştur; bozulmamış toplam RNA preparatı, 28 S ribozomal RNA bandının 18 S ribozomal RNA bandından yaklaşık iki kat daha yoğun olduğu belirgin 28 S ve 18 S ribozomal RNA bantları göstermektedir. Bu durum, RNA'nın bütünlüğünün korunduğunun bir göstergesidir. Üçüncü ve dördüncü hatlar, dondurucudan kısa süreli geri alımlar nedeniyle tekrarlanan kısmi çözülmelere bağlı olarak önemli düzeyde degradasyona uğramış örnekleri tasvir ederek, kutulardaki tüplerin geri alınması gerekliliği nedeniyle periyodik olarak çözülmelerin yaşandığı uzun süreli depolama koşullarını modellemektedir.Ancak, DIY cihazı kullanılarak doer servisinde saklanan ve dolayısıyla kısmi çözünme gerçekleşmeyen örnekler, ikinci şeritte sağlam RNA içermektedir. Bu videoyu izledikten sonra, sıvı azot dolu dvar içeriğini boşaltmaya gerek kalmadan örneklerin nasıl geri alınacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

do-it-yourself-device-for-recovery-cryopreserved-samples-accidentally

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu videoda, biyolojik numuneleri korumak için ultra hızlı bir kriyo vitrifikasyon yöntemini gösteriyoruz. Yöntem, hücre içi buz kristali oluşumunu önleyerek biyolojik dokuyu donma hasarından korumak için kriyoprotektanların bir kombinasyonunun kullanılmasını gerektirir.

Vitrifikasyon Tabanlı Kriyoprezervasyon: Biyolojik Örnekleri Uzun Süreli Depolama için Çok Düşük Sıcaklıklarda Korumak İçin Ultra Hızlı Bir Soğutma Tekniği

Bu makale, transmisyon elektron mikroskobu ile süspansiyon hücreleri görselleştirme için bir kullanımı kolay ve düşük maliyetli bir cryofixation yöntemini tarif etmektedir.

Dalma Donma: Transmisyon Elektron Mikroskobu içinde Süspansiyon Hücrelerinin ultrastrüktürel ve immünolokalizasyonu Çalışmaları için Aracı

Bu protokol, doğrudan sıvı azot içine sokulup çıkartılarak kas dokuları dondurarak için bir prosedür tarif eder. Bu protokol, aynı zamanda, azot gazı "battaniye etkisi" önlemek yeni cryovial vurguladığında sıvı azot temas bir numunenin doku yüzeyi.

Kas Dokular doğrudan sıvı azot içine girdikleri zaman Artifacts Donma bir çoklu-delikli dondurarak saklamaya uygun vialler ortadan kaldırır

Bu el yazması, büyük miktarlarda sıçan hepatositleri için buzsuz kriyopreservation yöntemini açıklar ve böylece birincil hücreler düşük konsantrasyonda kriyoprotektif ajanlarla önceden kuluçkaya yatırılır ve büyük damlacıklarda vitrifiye edilir.

Primer Hepatosit Korunması için Dökme Damlacık Vitrifikasyon

Burada silikon nitrür membranlar ve dalma-donma bir senkrotron kriyojenik X-ışını nanoprobun ile X-ışını floresan görüntüleme öncesinde hücre kültürü için bir protokoldür. Sadece oda sıcaklığında nano-analiz yapıldığında, dondurulmuş numuneler daha da dondurularak kurutulabilir. Bunlar hücre içi element bileşimi hakkında bilgi edinmek için kritik adımlardır.

Silikon Nitrür Membranları ve Synchrotron X-ışını Floresan Nano-Analizi için Kriyopreyeüzerine Hücre Kültürü

Bu protokol, apex2 etiketli membran proteininin en iyi korunmuş hücre ultrayapısı içinde iletim elektron mikroskobu ile lokalize edilebildiği kriyoAPEX yöntemini açıklar.

Ultrayapısal Olarak Korunmuş Hücrelerde Membran Protein Lokalizasyonunun Elektron Mikroskobu Analizi için CryoAPEX Yöntemi

Bu protokol, mikron ölçekli silindirik ve düzlemsel kriyojenik sıvı jetlerinin çalışma ve prensiplerini sunmaktadır. Şimdiye kadar bu sistem lazer-plazma deneylerinde yüksek tekrarlama oranı hedefi olarak kullanılmıştır. Beklenen disiplinler arası uygulamalar, laboratuvar astrofiziğinden malzeme bilimine ve nihayetinde yeni nesil parçacık hızlandırıcılarına kadar uzanmaktadır.

Yüksek Tekrarlama Hızı Keşif Bilimi için Kriyojenik Sıvı Jetler

Burada, donmuş örneklerin dinamik nükleer polarizasyon (DNP) sihirli açı eğirme (MAS) nükleer manyetik rezonans (NMR) probuna kriyojenik transferi için bir protokol sunulmaktadır. Protokol, deneyden önce rotor depolaması için yol tariflerini ve deneyden önce ve sonra uygulanabilirlik ölçümleri için yol tariflerini içerir.

Hücresel Canlılığı Koruyan Sihirli Açı Dönen Nükleer Manyetik Rezonans Spektrometresine Kriyojenik Örnek Yükleme

Bu protokol, kriyo yapısına sahip aydınlatma mikroskopisi kullanılarak biyolojik kriyo ile korunmuş örneklerin nasıl görüntülenerek görüntülenlerin ortaya koyduğunu göstermektedir. U2OS hücrelerinin sitoskeletonlarını görüntüleyerek metodolojiyi gösteriyoruz.

Kriyojenik Olarak Korunmuş Hücrelerden Kriyo-Yapılandırılmış Aydınlatma Mikroskobik Veri Toplama

Bu protokol, genetik çeşitliliği güvence altına almayı ve resif restorasyon çabalarını desteklemeyi amaçlayan, tehdit altındaki mercan türlerinden spermin işlenmesi ve dondurularak saklanmasının verimliliğini ve kapasitesini artırmak için yarı otomatik bir yolu tanımlar.

Biyobankacılık ve su ürünleri yetiştiriciliğini desteklemek için mercan spermlerinin dondurularak saklanması için yarı otomatik bir iş akışı

Keşfedin, sıvı azot tanklarından kriyoprezerve örnekleri güvenli ve hızlı bir şekilde kurtarmak için düşük maliyetli, kriyotoleranslı bir cihazın nasıl yapıldığını. Bu yöntem, örnek bütünlüğünü korur ve tek operatör tarafından kullanılabilir.

KRİYOPREZERVE Numune Kurtarma için Do-It-Yourself Aygıt yanlışlıkla Kriyojenik Depolama Tankları içine Dropped

Daha fazla video keşfet