KRİYOPREZERVE Numune Kurtarma için Do-It-Yourself Aygıt yanlışlıkla Kriyojenik Depolama Tankları içine Dropped

Bu prosedürün amacı, yapımı kolay bir cihaz kullanarak sıvı nitrojen ile doldurulmuş ikili tanklardan kriyo kutuları ve kriyo şişelerindeki numunelerin alınmasını kolaylaştırmaktır. Bu, manevra için yer açmak için önce doerden bir veya iki dondurucu rafının çıkarılması ve cihazın doer'a dikey olarak yerleştirilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, cihazla birlikte yapıcının altını nazikçe kazımaktır.

Ardından, cihazı yapıcının duvarları boyunca dik olarak çekin Dondurucu kutusunu tanktan çıkarmak için son adım, yapıcının altından alınan kutuyu almak ve çıkarılan dondurucu raflarını değiştirmektir. Bu tekniğin boşaltma, çubuk dolusu sıvı nitrojen gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, numune bütünlüğünü koruyan ve tek bir operatör tarafından gerçekleştirilebilen kolay, güvenli ve hızlı bir alternatif sunmasıdır. Kriyo toleranslı cihazın montajına başlamak için, LHA güçlü bir bağ yapmak için üç taraflı güçlü bir bağın bir tarafını düzeltmek için pense kullanın.

Burada görüldüğü gibi, güçlü bağın boyutları, yapanın boynunun çapına bağlı olarak seçilebilir. Cihazın beş buçuk x beş buçuk inçlik kriyo kutularını almasına izin vermek için bu kadar güçlü iki bağ yapılmalıdır. Bunları, kriyo kepçesinin tabanını oluşturmak için bir taç cıvatası, somun rondela ve vida kullanarak güçlü bir bağ TST kayışı ile sabitleyin.

Cihaz şimdi burada görüldüğü gibi görünmelidir. Şimdi oluklu bir plaka kullanarak, güçlü kravat tişörtü üzerindeki yuvaları, oluklu plakanın bir ucundaki yuvalarla hizalayın. Ardından ikisini Hillman somun ve cıvatalarıyla birbirine sabitleyin.

Oluklu plaka ve güçlü bağlarda önceden delinmiş delikler yoksa, bağlantı için delikler açın. İstenirse, oluklu plakanın diğer ucu bükülerek ve köpük ile sarılarak bir tutamak oluşturulabilir. Cihazı daha iyi kavramak için, suyla kaplamadan önce köpüğü çıkardığınızdan emin olun.

Kriyo toleranslı DIY alma cihazı, kriyo şişelerinin alınması için de uyarlanabilir. Bu, düz tabanın, şişeleri sıvıdan çıkarmak için değiştirilmiş paslanmaz çelik bir süzgeç ile değiştirilmesini içerir. Montaja başlamak için, önce taç somunlarını ve cıvatalarını sökün ve güçlü lastik tişört strapp'ını oluklu plakaya takın.

Ardından, paslanmaz çelik süzgeci oluklu plakaya takmadan önce, tabanı bir kepçeye benzeyecek bir açıyla yönlendirmek için süzgecin boynunu pense yardımıyla hafifçe bükün. Kullanılan süzgeç bir dudakla birlikte geliyorsa, dudağı aşağı doğru bükmek için pense kullanın. Bu, cihazla manevra yapmayı kolaylaştıracaktır.

Süzgecin sapındaki deliği, oluklu plakadaki deliklerle birlikte hizalayın ve süzgeci Hillman somun ve cıvatalarını kullanarak sabitleyin. Süzgeç önceden delinmiş deliklerle gelmiyorsa delikler açın. Bir uygulayıcıdan kriyo kutularını almaya başlamak için önce kriyojenik eldivenler giydiğinizden emin olun.

Ardından, cihazla manevra yapmak için yer açmak için bir veya iki dondurucu rafını doerden çıkarın. Daha sonra, yapanın altını nazikçe kazımak ve kutuyu toplamak, yapıcı tankın dibine düşmek için güçlü bağlama ttra tabanına sahip dik kriyo toleranslı DIY geri alma cihazını kullanın. Ardından, dondurucu kutusunu tanktan çıkarmak için cihazı doerin duvarları boyunca dik olarak çekin

Kutunun tekrar doer'a kaymasını önlemek için cihazın dikey olarak tutulması ve düz bir şekilde yukarı çekilmesi gerektiğini unutmayın. Kriyo şişelerini almak için, kriyo kutusu alımına benzer şekilde doerin altını nazikçe kazımak için bir süzgeçle donatılmış kriyo kepçesini kullanın, cihazı dik olarak çekin ve süzgeçte toplanan şişeleri alın. Gen ekspresyonu çalışmalarındaki en büyük zorluk, RNA'nın kalitesinin hem donmuş doku örnekleri hem de ekstrakte edilen RNA için saklama koşullarına bağlı olmasıdır.

Bu şekil, numune işlemenin toplam RNA'nın bütünlüğü üzerindeki etkisini göstermektedir, aynı doku kaynağından alınan toplam RNA, deneyden önce farklı numune işlemeye tabi tutulmuştur, bozulmamış toplam, RNA hazırlama hızı net 28 s ve 18 s ribozomal, 28 s ribozomal RNA bandına sahip RNA bantları, 18 s ribozomal RNA bandının yaklaşık iki katı yoğunluktadır. Bu, RNA'nın sağlam olduğunun bir göstergesidir. Üçüncü ve dördüncü şeritler, yapandan kısa süreli geri almalarla tekrarlanan kısmi dondurma nedeniyle önemli ölçüde bozulmaya sahip numuneleri gösterir, böylece düşen şişelerin kutular üzerinde alınması gerekliliği nedeniyle periyodik boşaltma ile uzun süreli depolamayı modeller.

Bununla birlikte, DIY cihazı kullanılarak yapıcı servisinde saklanan ve bu nedenle kısmi donma olmayan numuneler, ikinci şeritte bozulmamış RNA içerir. Bu videoyu izledikten sonra, sıvı nitrojen dolgulu dvar'dan numuneleri boşaltmaya gerek kalmadan nasıl alacağınızı iyi anlamış olmalısınız.