Name: Sıçan mezenter eksteriorizasyon: Anjiogenez ilgilendim Hücresel Dinamikler araştırılması için Bir Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 29 s
Description: Keşfedin sıçan mezenter eksteriorizasyon modelini anjiogenez ve mikrovasküler ağ büyümesindeki hücresel dinamikleri incelemek için. Bu yöntem tek hücre düzeyinde yüksek çözünürlüklü görüntüleme sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ve Tulane Hipertansiyon ve NIH hibe olarak Mükemmeliyet Merkezi Böbrek P20RR017659-08 (PI: Bu çalışma Louisiana LEQSF (2009-12)-RD-A-19 (WL Murfee PI) Devleti Regents Kurulu tarafından desteklenmiştir : L. Gabriel Navar).

1. Cerrahi Prosedür Set-Up Notlar <ol><li> Ameliyat öncesinde cerrahi malzemeleri ve aletleri sterilize edin. Her bir sıçan için steril cerrahi işlem için kullanılan Malzemeleri araçların yerleştirilmesi için steril bir yüzey olarak dışarı yerleştirebilinirler 1 drape dahil, merkezi x 1.5 0.5 hakkında önceden kesilmiş delikli bir drape sıçan üzerine yerleştirilecek ve gazlı bez. Esnasında, önceden kesilmiş delik sıçan üzerinde yapılan bir kesi ile uyumlu hale getirecektir. Ameliyat için gerekli Aletleri dikiş malzemesi kesmek için kullanılacak makas 1 standart çift, iki forseps ve sütür taşınması ve kavrama için ince bir iğne tutucu ve bir bıçak ile bir neşter vardır. Biz Özel Cerrahi Malzemeler ve Araçlar Tablo bizim laboratuar tarafından kullanılan ortak araçları listeledik. Ancak, nihai aracı seçim deneyci tercihlerine bağlıdır. </li><li> Cerrahi alan hazırlayın. Sağlamak için bir ısıtma yastık altında bir 100 ml% 0.9 steril tuzlu su torbası koyun o kişi w gelir tuzluITH mezenter dokusunun yaklaşık 37 için önceden ısıtılır ° C Salin bir alternatif olarak, Ringer çözeltisi ya da başka bir fizyolojik tampon kullanabilir. Eksteriorizasyon işlemi sırasında kolay erişim için steril bir örtü üzerine steril cerrahi aletler ve malzemeleri yerleştirin. Ayrıca, steril pamuk uçlu aplikatörler ve sütürlerin uygun 3 tip (4-0, 5-0 ve 7-0) ihtiyacınız olacaktır. Emin paketleri malzemeleri steril taşıma ile erişilebilir, böylece önceden açılmış yapar. Son olarak, en az 5 dakika için% 100 etanol içinde daldırarak pre-değiştirilmiş plastik aşaması dezenfekte. Aşamada merkezi (Şekil 1) kesilmiş bir eliptik delik olan bir 100 mm Petri yemektir. A Dremel Aracı başlangıçta yapmak ve, gerektiği takdirde, deliğin genişletmek için kullanılabilir. Deliği yapıldıktan sonra, kesme plastik kenarları farklı tanelerinin zımpara kağıdı kullanılarak düzgün yapılır. Sahne sonra ya etkisiz kil modelleme (yerel el sanatları mağaza satın alınan) veya Silic, nihayet, yıkanmış ve birTutkal yükseltilmiş bir düz yüzey temin etmek için delik kenarına eklenir. Doku ile temas öncesinde, sahne yeterince steril tuzlu su ile durulanmalıdır gerekecektir. </li><li> Anjiyogenez bu model için, biz genellikle erişkin erkek Wistar sıçanlar (350 ± 25 gr) kullanın. Diğer sıçan suşlara ve yaş kullanılabilir. Laboratuvarımızda, sıçanlar ketamin (80 mg / kg), ksilazin (8 mg / kg) ve atropin (0.08 mg / kg) ile intramüsküler enjeksiyon yoluyla anestezi uygulanmıştır. Yaklaşık 5 dakika sonra, anestezinin etkisi onaylanır ve farenin karın cildi tıraş edilir. </li></ol> 2. Sıçan mezenter eksteriorizasyon Modeli <ol><li> Vücut ısısını korumak için bir ısıtma pedi üzerinde sırtında anestezi sıçan yerleştirin. Aseptik teknikler cerrahi işlem sırasında kullanılan. Steril eldiven giyin ve araç ve gereçlerin sıçan dokuları dışında steril olmayan yüzeylere temas etmesine izin vermeyin. </li><li> Mendil USI alternatif karın alanı temizleyinng% 70 izopropil ve iyot ile ıslatılmış steril gazlı bez. </li><li> Bisturi bıçak kullanılarak, cilt üzerinde küçük (yaklaşık 0,75 inç) uzunlamasına kesik ve sonra aşağıda sternum linea alba yaklaşık 1 inç edin. </li><li> Açıklığı kesi aynı hizada olacak şekilde karın bölümünün üzerine önceden kesilmiş drape yerleştirin. </li><li> Yavaşça kesi çevresinde basınç uygulayın. Bu genellikle kolayca tespit edilmesi için yeterince ince bağırsakta ortaya çıkmasına sebep olacaktır. </li><li> Pamuk uçlu aplikatör kullanarak, yavaşça ince bağırsağın bir bölümü çekin ve ileum bulun. Mezenter çekilirse gibi, yavaşça plastik aşamada (Şekil 2) dışarı yerleştirebilinirler gerekir. </li><li> 6-8 vaskülarize mezenterik pencereleri belirleyin. A mesenterik penceresi ince bağırsağın (Şekil 2) besleme arter / ven çiftleri arasındaki ince geçirgen zar olarak tanımlanır. </li><li> Eksteriorizasyon başlangıç ​​zamanı kaydedin. Mesente bırakınry bölüm 20 dakika batın. Eksteriorizasyon dönemde aralıklı doku batırma kalır ve kurumasına değil emin olmak için Petri kabındaki tuzlu su doldurmak için steril bir enjektör (5 ml) kullanın. </li><li> 20 dakikalık süresi boyunca, steril 7-0 sütür ile 2 merkezi mezenterik pencereleri işaretleyin. Işaretleri bağırsağın yakın yağ alanında yapılmalıdır. </li><li> Karın boşluğuna mezenter batın bölgesi dönün. </li><li> Kesintiye desen 5-0 monofilament sütür ile karın kas kapatın. </li><li> Kesintiye desen 4-0 monofilament sütür ile cilt kapatın. </li><li> % 70 isopropoyl ve iyot ile ıslatılmış steril gazlı bez mendil kullanarak alternatif ile sütüre alanı silin. </li><li> Sıçan her iki göz de göz kayganlaştırıcı jel sürün. Göz kayganlaştırma amacı, cerrahi işlem sırasında ve geri kazanım kornea kurumaya önlemektir. Göz yağlayıcı uygulama uygulanmalıdırcerrahi müdahale başlamadan önce. Gerekirse, kurtarma için kendi kafesine sıçan dönmeden önce göz yağ yeniden uygulayın. </li></ol> 3. Doku Hasat ve Fiksasyon <ol><li> Ilgi sonrası stimülasyon gününde, uyutmak ve sıçan euthanize. Laboratuvarımızda, fareler beuthanasia intrakardiak ile ötenazi ardından intramuskuler ketamin (80 mg / kg), ksilazin (8 mg / kg) ve atropin (0.8 mg / kg) ile enjeksiyon ve üzeri anestezi vardır. Beuthanasia hızlı ve ağrısız ötenazi için kullanılabilecek bir sodyum pentobarbital / fenitoin çözümdür. 0.2 ml - sıçan başına laboratuvar genelde 0.1 enjekte eder. </li><li> Karın boşluğuna yeniden açın ve yavaşça ince bağırsak kaldırmak ve iki işaretli pencere bulun. </li><li> Forseps ve mikro-makas kullanarak batın mezenterik pencereleri her kesin. Yağ başına pencerenin bir sınır da dahil olmak üzere daha sonraki dokusu mikroskop lamı üzerine yaymak için avantajlıdır. HemenPBS her pencere batırmayın. Keserken, pencerelerin dolum potansiyel kan aza indirmek için pencere yağ sınırları içinde arter / ven çiftleri ile kesme kaçınıyorum. Ayrıca, bağırsak içeriği sonuç pencereleri temas ettiği barsak ile kesme aza indirmek. </li><li> Pozitif yüklü mikroskop lamı üzerine dokulara yayılmasına forseps kullanın. İki dokular slayt başına monte edilebilir. </li><li> Dokuların kısmen kurutun ve bir neşter bıçağı aşırı şişman kaldırmak kullanarak izin verin. </li><li> Dokular artık sabit hazırız. Tipik fiksasyon yöntemleri kullanılabilir. Laboratuarımızda, biz genellikle 30 dakika boyunca metanol (-20 ° C) slaytlar düzeltmek. Başarılı etiketleme da sabitlenmemiş dokuları ile yapılmıştır. Tespit yöntemlerinin tercih edilen antikor bağlı olabilir. </li></ol> 4. Doku ile immün <ol><li> Dokular genel şimdi immünhistokimya için antikor başına talimatlarına göre etiketli olabilir. Rolleri belirlemek bizim ilgi göz önüne alındığındaanjiyogenez sırasında damar perisitler, bizim laboratuar yaygın endotel ve perivasküler hücreleri 10, 12, 13 için etiketler. Mikrovasküler ağların hiyerarşisi boyunca endotel hücreleri tanımlamak için yararlıdır etiketlerin, bir anti-PECAM antikor veya BSI-lektin vardır. Bu doku kullanılan perivasküler hücre işaretleyicileri NG2, desmin SM-α aktin, PDFGRβ ve sınıf III β-tubulin içerir. Aşağıda, bölüm 3.3 &#39;de, biz kolorimetrik ve floresan PECAM immün protokolleri protokolleri listeledik. </li><li> İlk primer antikor inkübasyon öncesi, kaydıraklar aşırı tampon çözeltisi kaldırmak için vakumda kurutulur vardır. Ayrıca, dokular, başlangıçta uzağa dokudan antikor çözeltileri kontrolsüz akışını önlemek için bir balmumu kalem ile açıklanmaktadır. Son olarak, tüm etiketleme adımları yıkama adımları takip ediyor. Adımları yıkama için, slaytlar boyama kavanoz içine yerleştirilir. Tampon çözelti yıkama süresi sırasında 3 kez değiştirilir. </li><li> Endotel hücre antikor etiketleme prosedürleri: &lt;p class = &quot;jove_step&quot;&gt; PECAM Kolorimetrik Lableing <ol><li> Primer antikor inkübasyon: Her doku üstünde yaklaşık 100-200 ml primer antikor çözeltisi (antikor tampon içinde seyreltilmiş 1:200 fare biyotinile CD31 monoklonal antikor (PBS +% 2 BSA% 0.1 Saponin)) Damla; bütün doku olduğundan emin olun antikor çözeltisi ile kaplanmıştır. Oda sıcaklığında 1 saat için inkübasyon. </li><li> 30 dakika süreyle PBS +0.1% saponin ile dokuları yıkayın. </li><li> İkincil antikor inkübasyon: Damla sekonder antikor çözeltisi (Vector Laboratories VECTASTAIN Elit ABC çözümü; bir streptavidin peroksidaz sekonder antikor çözeltisi) doku üstünde. 1 saat oda sıcaklığında inkübe edilir. </li><li> 30 dakika süreyle PBS +0.1% saponin ile dokuları yıkayın. </li><li> 15 dakika boyunca vektör Nova Kırmızı ile dokuları inkübe edin. Sonra su ile dokulara yükselecek. </li><li> Dağı slaytlar:% 95 etanol Dip slaytlar 10 kez. Immerse 2 dakika için% 100 etanol içinde kayar. Başka bir% 100 etanol içinde bırakın slaytlar yüzden2 dakika için Direkt Ekspres. Ardından 2 dakika arayla üst üste% 100 ksilen çözümler batırmayın slaytlar. VectaMount ince bir tabaka ve bir coverslip ile dokuları kurutmak ve kapatmak için izin ver. </li></ol> PECAM Floresan Etiketleme <ol><li> Primer antikor inkübasyon: Her doku üstünde yaklaşık 100-200 ml primer antikor çözeltisi (antikor tampon içinde seyreltilmiş 1:200 fare biyotinile CD31 monoklonal antikor (PBS +% 2 BSA% 0.1 Saponin)) Damla; bütün doku olduğundan emin olun antikor çözeltisi ile kaplanmıştır. Oda sıcaklığında 1 saat için inkübasyon. </li><li> 30 dakika süreyle PBS +0.1% saponin ile dokuları yıkayın. </li><li> Sekonder antikor inkübasyon:. Doku üstüne Damla sekonder antikor çözeltisi ((1:100 Streptavidin-Cy3 (PBS +% 2 BSA ile% 0.1 Saponin) antikoru tamponu içinde seyreltilir) 1 saat boyunca oda sıcaklığında inkübe. </li><li> 30 dakika süreyle PBS +0.1% saponin ile dokuları yıkayın. </li><li> Dağı slaytlar: dokuların üst gliserol 50:50 PBS Damla. Kapakkapak kayma ile. Sonra, kapak kayma ve slayt arasındaki boşluğu kapamak için tırnak cilası kullanabilirsiniz. </li></ol></li></ol> 5.. Temsilcisi Sonuçlar Immünohistokimyasal PECAM için etiketli sıçan mezenter dokuların Temsilcisi görüntüleri Şekil 3 görüntülenir. PECAM etiketleme mikrovasküler ağlar remodeling hiyerarşisi boyunca damar türleri tanımlar ve spesifik zaman noktalarında sonrası uyarılması azından anjiyojenik ölçümlerini ölçmek için kullanılabilir. PECAM etiketleme da damarları karşı venüller belirlenmesi için olanak sağlar. Besleme arteriyollerde genellikle eşleştirilmiş venüller (Şekil 4) göre daha küçük çaplarda ve uzamış endotel hücre morfolojisi gösterirler. Kılcal ve kılcal damar filizi kendi çapına ve bir şebeke dahilindeki göreli konumu göre tespit edilebilir. Remodeling ağlar tipik özellikleri arttı filizlenmesi kılcal damar yoğunluğu, damarlı bölge ve venular kıvrımlı dahilSığ. Çeşitli anjiogenik ölçümleri Kantitasyonu ağ büyüme (Şekil 5) zamanında ders tanımlar. Gün 3 ve 5. Gün ve Gün 10 unstimulated seviyeye getirileri arasında önceden var olan gemiler, tepelerinden filizlenme Kapiller. Küba&#39;da Bu geçici bir artış damar yoğunluğu ve damarlı bölge artışlar takip eder. Bu modelde büyük damarların yeniden kanıt olarak, arteriol ve venül segment sayısı da zaman boyunca artar. Laboratuvarımızda, bu model Bu yenilenme sürecinde 10, 11 sırasında belirli bir zaman noktasında hücresel fenotipik değişiklikleri tanımlamak için kullanılmaktadır. Örneğin, sınıf III β-tubulin anjiyogenik damarlar boyunca perisitler (Şekil 6) tanımlar. Unstimulated dokularda, sınıf III β-tubulin ifadesi sinir özgüdür. Bunun aksine, filizlenme kılcal tepe boyunca, sınıf III β-tübülin perivasküler hücreler olarak ifade edilir. Bu türsonucu anjiyo sürecine dahil yeni hücre tipleri tanımlamak için bu basit ve sağlam anjiyogenik modelinin kullanımını vurgulamaktadır. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3954/3954fig1.jpg" /> Şekil 1. Plastik sahne öncesi ve sonrası modifikasyon Görüntüler. Önceden modifiye aşamasında 100 mm Petri yemektir. Değişiklikler merkezinde elips şeklinde bir delik kesim ve kabarık, düzgün bir yüzey yaratmak için deliğin kenarına modelleme kil veya silikon tutkal sonradan eklenmiş. Bu yüzey batın mezenterik pencerelerin superfusion kolaylaştıran bir iç sınır sağlar. Ölçek çubuğu 1 cm. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3954/3954fig2.jpg" /> Şekil 2. Batın mezenterik bölgenin görüntüsü. Mezenterik pencereler ince bağırsağın besleyen arter / ven çiftleri arasındaki ince geçirgen membranların olarak tanımlanır. Eksteriorizasyon sırasındasüresi, mezenterik bölgede ortaya koydu ve bir modifiye petri içinde tuzlu batırılır. İnert sarı kil modelleme önceden kesilmiş delikten çekilebilecek şekilde mezenter için pürüzsüz bir yüzey sağlar. Ölçek çubuğu 1 cm. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3954/3954fig3.jpg" /> Şekil 3. Unstimulated doku ve doku 3 ve mezenter 10 gün sonrası eksteriorizasyon gelen mezenterik mikrovasküler ağların Temsilcisi görüntüler. PECAM etiketleme arteriyoller (A), venüller (V) ve kılcal (C) de dahil olmak üzere mikrovasküler ağların hiyerarşisi tanımlanır. Mesaj stimülasyon, mikrovasküler ağlar kılcal çimlenme (ok başları) ve damar yoğunluğunda bir artış göstermiştir. Ölçek çubuğu 100 mikron olduğunu. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3954/3954fig4.jpg" /> Erişkin sıçan mezenterik mikrovasküler ağ içinde arteriyol / venül çiftleri Şekil 4. Temsilcisi görüntüleris. Her iki görüntüleri, arteriol (A) daha küçük bir göreceli çap ve uzamış endotel hücre morfolojisi dayalı venüller (V) ayırt edilebilir. Ölçek çubukları 20 mm&#39;dir. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/3954/3954fig5.jpg" /> Şekil 5. Mikrovasküler büyüme sonrası mezenter eksteriorizasyon zaman boyunca anjiyogenik ölçümlerini Temsilcisi miktar. Doku alanı başına A) Vasküler alanı. Vasküler alana düşen kılcal filizi B) sayısı. Vasküler alan başına C) Toplam damar uzunluğu. * Unstimulated grubuna göre anlamlı bir farklılık gösterir. İstatistiksel karşılaştırmalar Dunn testi tarafından izlenen bir One-Way ANOVA kullanılarak yapılmıştır. (P &lt;0.05). UN unstimulated temsil eder. <img alt="Şekil 6" src="/files/ftp_upload/3954/3954fig6.jpg" /> Şekil 6. 3 ve 10 unstimulated doku ve dokulardan mezenterik mikrovasküler ağların Temsilcisi floresan görüntülerigün mezenter dışsallaştırdığını gönderin. Immünofloresan PECAM etiketleme (kırmızı) endotel hücreleri tanımlayan ve sınıf III β-tubulin etiketleme (yeşil) sinirler (ok başları) ve perivasküler hücreleri (oklar) tanımlar. Perivasküler hücreler geçici çimlenme kılcal sırasında sınıf III β-tubulin upregulate. Unstimulated mikrovasküler ağlarda, sınıf III β-tubulin sinir özeldir ve perivasküler hücreleri belirlemek değil. 3 gün sonrası stimülasyon, sınıf III β-tubulin olumlu mikrodamarlar birlikte perivasküler hücreler etiketler. Günlük 10, sınıf III β-tubulin ifade desen unstimulated senaryoyu geri dönmeye başlarlar. Ölçek çubuğu 50 mikron olduğunu. <img alt="Şekil 7" src="/files/ftp_upload/3954/3954fig7.jpg" /> Şekil 7. Mezenter eksteriorizasyon tarafından uyarılan mikrovasküler ağ büyüme sırasında izleme önceden etiketli lokal olarak uygulanan hücre fizibilite destekleyen Görüntüler. Hücreler Mezenter üzerinde superfused edildi20 dakikalık eksteriorizasyon döneminde ic pencereler. 1 gün sonrası cerrahi, DII etiketli hücreleri (kırmızı) PECAM pozitif mikrodamarlar (yeşil) ile dame odak düzlemi gözlendi. DII etiketli kemik iliği hücrelerinin A, B) Örnekler morfolojileri yuvarlak ve uzamış sergilenmesi. Bazı durumlarda (oklar) hücreleri kılcal boyunca uzamıştı. C) DII bir küme Örneği (ok) filiz kılcal bir ucu yakınında mezenkimal kök hücreleri etiketli. Ölçek çubukları 50 um (A) ve 20 um (B, C) vardır.

<ol><li>Carmeliet, P., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+cancer+and+other+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in cancer and other diseases.</a> Nature. 407, 249-257 (2000).</li>
<li>le Noble, F. A., Stassen, F. R., Hacking, W. J., Struijker Boudier, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+and+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hypertens%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis and hypertension.</a> J. Hypertens. 16, 1563-1572 (1998).</li>
<li>Peirce, S. M., Skalak, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+remodeling%3A+a+complex+continuum+spanning+angiogenesis+to+arteriogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Microvascular remodeling: a complex continuum spanning angiogenesis to arteriogenesis.</a> Microcirculation. 10, 99-111 (2003).</li>
<li>Anderson, C. R., Ponce, A. M., Price, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+identification+of+an+extracellular+matrix+scaffold+that+microguides+capillary+sprouting+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Histochem.+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical identification of an extracellular matrix scaffold that microguides capillary sprouting in vivo.</a> J. Histochem. Cytochem. 52, 1063-1072 (2004).</li>
<li>Ponce, A. M., Price, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenic+stimulus+determines+the+positioning+of+pericytes+within+capillary+sprouts+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Angiogenic stimulus determines the positioning of pericytes within capillary sprouts in vivo.</a> Microvasc. Res. 65, 45-48 (2003).</li>
<li>Franzen, L., Ghassemifar, R., Malcherek, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+mast+cell+activation+improves+connective+tissue+repair+in+the+perforated+rat+mesentery%5BTitle%5D)+AND+%22Agents+Actions%22%5BJournal%5D)">Experimental mast cell activation improves connective tissue repair in the perforated rat mesentery.</a> Agents Actions. 33, 371-377 (1991).</li>
<li>Anderson, C. R., Hastings, N. E., Blackman, B. R., Price, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capillary+sprout+endothelial+cells+exhibit+a+CD36+low+phenotype%3A+regulation+by+shear+stress+and+vascular+endothelial+growth+factor-induced+mechanism+for+attenuating+anti-proliferative+thrombospondin-1+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Capillary sprout endothelial cells exhibit a CD36 low phenotype: regulation by shear stress and vascular endothelial growth factor-induced mechanism for attenuating anti-proliferative thrombospondin-1 signaling.</a> Am. J. Pathol. 173, 1220-1228 (2008).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+models+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo models of angiogenesis.</a> J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).</li>
<li>Norrby, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+Mesentery+Angiogenesis+Assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Rat Mesentery Angiogenesis Assay.</a> J. Vis. Exp. (52), e3078(2011).</li>
<li>Murfee, W. L., Rehorn, M. R., Peirce, S. M., Skalak, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perivascular+cells+along+venules+upregulate+NG2+expression+during+microvascular+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Perivascular cells along venules upregulate NG2 expression during microvascular remodeling.</a> Microcirculation. 13, 261-273 (2006).</li>
<li>Stapor, C. P., Murfee, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+class+III+%CE%B2-tubulin+as+a+marker+of+angiogenic+perivascular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">Identification of class III β-tubulin as a marker of angiogenic perivascular cells.</a> Microvascular Research. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Yang, M., Aragon, M., Murfee, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+Mesenteric+Microvascular+Networks+from+Spontaneously+Hypertensive+Versus+Normotensive+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in Mesenteric Microvascular Networks from Spontaneously Hypertensive Versus Normotensive Rats.</a> Microcirculation. , (2011).</li>
<li>Robichaux, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic%2FBlood+endothelial+cell+connections+at+the+capillary+level+in+adult+rat+mesentery%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec.+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Lymphatic/Blood endothelial cell connections at the capillary level in adult rat mesentery.</a> Anat. Rec. (Hoboken). 293, 1629-1638 (2010).</li>
<li>Amos, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFATS+collection%3A+The+role+of+human+adipose-derived+stromal+cells+in+inflammatory+microvascular+remodeling+and+evidence+of+a+perivascular+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">IFATS collection: The role of human adipose-derived stromal cells in inflammatory microvascular remodeling and evidence of a perivascular phenotype.</a> Stem Cells. 26, 2682-2690 (2008).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Eksteriorizasyon modeli 2006 yılında bildirilmiş ve anjiyogenez 4-7 önceki mekanik yaralanma sıçan mezenter modelleri uyarlanan ve sıçan mezenter 9 yararlanmak iyi kurulmuş ip enjeksiyon modelleri benzer sonuçlar üretir. 20 dakikalık eksteriorizasyon zaman deneysel olarak sağlam bir anjiyojenik yanıt üretmek belirlendi. Bu dönemde farklı şekillerde olabilir iken, mekanik çalışmalar ve hücre soyu çalışmalar için eksojen hücrelerinin doğrudan uygulama için anjiyogenik inhibitörlerinin yerel uygulama 4 için izin vermiyor. Mezenterik doku remodeling hücre içine şirketleşme Fizibilite önceden etiketli kemik iliği hücreleri ve mezenkimal kök hücreler (Şekil 7) kullanarak bizim laboratuvarda ön çalışmalar, ve insan adipoz-kaynaklı stromal hücrelerin enjeksiyon ip 14 akıbetini soruşturuyor başarısı tarafından desteklenmektedir . Laboratuarımızda, biz pericyte phen tanımlamak için bu model kullandımanjiogenik yanıt 10 saat boyunca ve hipertansiyon 12 gibi patolojik durumlar sırasında anjiyogenik potansiyelini değerlendirmek amacıyla otypic değişir. Anjiyojenik tepki ve bu model ile ilişkili hücre fenotipi değişiklikler de kronik hipoksiye maruz kalma 10, 11 gibi diğer sıçan mezenterik anjiyogenik modelleri görülebilir. Dışsallaştırdığını modeli bir sınırlaması anjiyogenez tam tetikleme mekanizması bilinmemektedir olmasıdır. Mezenter dışsallaştırdığını mast hücre degranülasyonu ve artan histamin düzeyi 6 ile bağlantılı olduğunu, ancak daha fazla araştırma daha fazla bilgi edinmek için gereklidir. Anjiogenik uyaran bir mikrovasküler ağ hiyerarşisi karşısında sağlam bir yeniden şekillenme tepki üreten, kuşkusuz çok etkenli olduğunu. Bilinmeyen mekanizmalar bu modelin önemli bir eleştirisini kalırken, yeniden üretimi ve basitlik hücresel dinamikleri invol belirlenmesi için cazip haledoğası gereği karmaşık kılcal filizlenme sürecinde ved. Modelin tekrarlanabilirliği laboratuarımızda 10, 12 daha önce yayınlanmış çalışmaların birden fazla sıçan suşları arasında mikrovasküler ağ büyüme (Wistar erkek ve dişi Sprague-Dawley) zamanında boyunca karşılaştırılabilir anjiyogenik ölçümlerini tarafından desteklenmektedir. Bu yana, yetişkin sıçan mesenterik dokuların çoğunluğu damarlı olup, model ayrıca hayvan başına incelenmek üzere birden fazla dokular için olanak sağlar. Fare mezenterik pencereler az yerli kanlanmalı ve bizim deneyim, sık gözlenebilen dallanma ağlar yoksun Ne yazık ki, bu model genetik fare modelleri ile açıkça geçerli değildir. Gelecek uygulamalar belirli zaman noktalarında intra-vital mikroskopi kullanılarak anjiyogenezi sırasında geminin işlevsellik soruşturma ve lenfanjiyogenezin ve nöron dahil ilgili hücresel dinamiklerinin incelenmesi içerir. Mezenterik pencere başına yerli vaskülarizasyonu ölçüde rou görünmesine rağmenyaş ile orantılı ghly, 4-5 haftalık kadar genç erkek Wistar sıçanlarda mikrovasküler ağları dallanma gözlemledik. Bu gözlemler eksteriorizasyon modeli de çağlar boyunca bir anjiyojenik farkları karşılaştırmak için uygulanabilir olduğunu göstermektedir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Ek yorumlar </td></tr><tr><td> Asmak </td><td> Cardinal Health </td><td> 4012 </td><td> 12 &quot;x12&quot; Bio-Shield Düzenli Sterilizasyon sarar </td></tr><tr><td> Noyes Mikro Makas </td><td> Roboz Cerrahi Alet </td><td> RS-5677 </td><td> Noyes Micro Bahar Makas Kesme; Düz, Sharp-Blunt Nokta; 13mm Cutting Edge; 0.25mm İpucu Genişlik, 4 1/2 &quot;Uzunluk </td></tr><tr><td> Graefe forsepsle </td><td> Roboz Cerrahi Alet </td><td> RS-5135 </td><td> Forseps Kesme Micro, tırtıllı, hafif eğri; 0.8mm İpucu Genişlik; 4 &quot;Uzunluk </td></tr><tr><td> Graefe forsepsle </td><td> Roboz Cerrahi Alet </td><td> RS-5130 </td><td> Mikro Kesme Forseps, Dişli, Düz; 0.8mm İpucu Genişlik; 4 &quot;Uzunluk </td></tr&gt; <tr><td> 4-0 sütür </td><td> Ethicon </td><td> 699G </td><td> (1.5 metrik) ETHILON Naylon Dikiş Siyah Monofilament </td></tr><tr><td> 5-0 sütür </td><td> Ethicon </td><td> 8556 </td><td> (1.0 metrik) prolen poliprolen Sütür Mavi Monofilament </td></tr><tr><td> 7-0 sütür </td><td> Ethicon </td><td> 1647G </td><td> (0.5 metrik) ETHILON Naylon Dikiş Siyah Monofilament </td></tr><tr><td> Castroviejo Micro Needle Holder </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 12060-02 </td><td> İpucu Genişlik: 0.6mm 5mm: Uzunluk Sıkma Uzunluk: 9cm Düz ucu </td></tr><tr><td> Castroviejo İğne Tutucu </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 12565-14 </td><td> İpucu Şekli: Düz İpucu Genişlik: 1.5mm Mengene Uzunluk: 10mm Makas: Hayır Kilit: Evet Uzunluk: 14cm Dişli: Evet </td></tr><tr><td> Neşter Kolu </td><td> Roboz Cerrahi Alet </td><td> RS-9843 </td><td> Neşter Kolu, # 3; Katı, 4 &quot;Uzunluk </td></tr><tr><td> Steril Cerrahi Bıçak </td><td> Cincinnati Cerrahi </td><td> 0110 </td><td> Paslanmaz Çelik; Boyutu 10 </td></tr><tr><td> Petri Dish </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-757-13 </td><td> Slippable eğimli Ridge, </td></tr></tbody></table> Özel Cerrahi Araç ve Gereçler Tablo. <table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Ek yorumlar </td></tr><tr><td> Beuthanasia </td><td> Schering-Plough Hayvan Sağlığı Corp Birliği (MWI Veteriner kaynağından Sıralı) </td><td> MWI #: 011.168 </td><td> Aktif Madde: 100 ml başına, 390 mg sodyum pentobarbital, 50mg fenitoin sodyum </td></tr><tr><td> Ketamin </td><td> Fort Dodge Hayvan Sağlığı (MWI Veteriner kaynağından Sıralı) </td><td> MWI #: 000.680 </td><td> Kateset 100 mg / ml </td></tr><tr><td> Ksilazin </td><td> LLOYD. A.Ş. (MWI Veteriner kaynağından Sıralı) </td><td> MWI #: 009.307 </td><td> 100 mg / ml Anased </td></tr><tr><td> Tuzlu </td><td> Hospira A.Ş. </td><td> 94-217-JT </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> SIGMA </td><td> 011M8207 </td><td></td></tr><tr><td> Saponin </td><td> Sigma </td><td> BCBB4080 </td><td></td></tr><tr><td> PECAM (CD31) </td><td> BD Pharmingen </td><td> 553371 </td><td></td></tr><tr><td> Streptavidin-Cy3 </td><td> Jackson Immunoresearch </td><td> 016-160-084 </td><td></td></tr><tr><td> BSA </td><td> Jackson Immunoresearch </td><td> 096555 </td><td></td></tr><tr><td> VECTASTAIN Elit ABC </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> PK-6100 </td><td></td></tr><tr><td> Vektör Nova Kırmızı </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> SK-4800 </td><td></td></tr><tr><td> VectaMount </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> H-500 </td><td></td></tr></tbody></table> Özgül Reaktifler Tablo

sıçan mezenter eksteriorizasyon: anjiogenez ilgilendim hücresel dinamikler araştırılması için bir model

Rat Mesentery Exteriorization: A Model for Investigating the Cellular Dynamics Involved in Angiogenesis

Mikrovasküler ağ büyüme ve yeniden yapılanma yara iyileşmesi, inflamasyon, diyabetik retinopati, tümör büyümesi ve diğer hastalık koşulları 1, 2 kritik yönleri vardır. Ağ büyüme genellikle önceden varolan damarlardan yeni damarların büyümesi olarak tanımlanan anjiyogenez, atfedilir. Anjiogenik süreci de doğrudan bir perivasküler hücre kaplama ve damar genişlemesi kılcal edinimi olarak tanımlanan, arteriogenesis bağlantılıdır. Söylemeye gerek yok, anjiyogenez karmaşık ve hücresel ve moleküler düzeyde 3 birden fazla oyuncu içerir. Bir mikrovasküler ağ büyüdükçe ne anlama anjiyogenez süresi boyunca bir ağ hiyerarşisi boyunca zamansal ve mekansal dinamiklerini tanımlamak gerektirir. Bu bilgiler, damar büyüme manipüle yönelik tedavilerin geliştirilmesi için kritiktir. Bu makalede açıklanan eksteriorizasyon modeli uya için basit, tekrarlanabilir modeli temsilsıçan mezenter anjiogenezisi alanlarındaki durum. Bu sıçan mezenter 4-7 yara iyileşmesinde modellerden uyarlanmış ve pro-anjiyogenik ajanlar 8, 9 ip enjeksiyon yoluyla mezenterinde anjiyogenez uyarmak için bir alternatif oldu. Minimal cerrahi girişim gerektirir ve tek için tüm mikrovasküler ağların iki boyutlu görselleştirme sağlayan bir doku nispeten kısa bir süre boyunca kılcal lahanası, damar alanı ve damar yoğunluğu dramatik, tekrarlanabilir artar aşağıya üretir çünkü eksteriorizasyon modeli çekici hücre düzeyinde. Uyarılmış büyümesi yabancı anjiyogenik moleküllerin müdahalesi olmaksızın fizyolojik bir ortamda doğal anjiyogenik yanıtları yansıtır. Immünohistokimyasal etiketleme yöntemleri kullanarak, bu model anjiyogenez katılan yeni hücresel olayları tanımlamada son derece yararlı olduğu kanıtlanmıştır. Araştırmacılar, kolayca zaman sp yeniden şekillenme zamanı sırasında anjiyogenik ölçümleri ilişkili olabilirBu tür hücre fenotipik değişiklik ya da hücresel etkileşimler 4, 5, 7, 10, 11 gibi ecific dinamiği,.

Bu makale sıçan mezenter anjiogenezisi teşvik için basit bir model tanımlamaktadır. Modeli aşağı tek hücre düzeyine kadar tüm mikrovasküler ağlarının yüz görselleştirme tr sağlayan bir doku nispeten kısa bir süre boyunca kılcal filizlenmesi, damar alanı ve damar yoğunluğu dramatik artış üretir.

Sıçan mezenter eksteriorizasyon: Anjiogenez ilgilendim Hücresel Dinamikler araştırılması için Bir Model

Mikrovasküler ağ büyümesi ve yeniden şekillenmesi; yara iyileşmesi, inflamasyon, diyabetik retinopati, tümör büyümesi ve diğer hastalıkların kritik yönleridir...

Aşağıdaki deneyin amacı, mevcut damarlardan yeni kan damarlarının oluşumu olarak tanımlanan anjiyogenezde yer alan mekansal ve zamansal hücresel dinamikleri belirlemektir. Basit ve tekrarlanabilir bir model kullanarak, önce sıçan mezenterini kısa süreliğine dışarı çıkararak anjiyogenezi uyarın ve stimülasyon sonrası farklı zaman noktalarında mezenterik dokuları toplayın. Ardından, doku kesitlerini immünolojik olarak işaretleyin.Örneğin, bir doku içindeki tüm yeniden şekillenen damarlanmayı görüntülemek için bir endotel hücre belirteci kullanın ve büyüyen mikrovasküler ağların temel bir iki boyutlu görselleştirmesini oluşturun. Bu model, beraber alındığında nispeten kısa bir zaman seyri boyunca birden fazla anjiyojenik metrikte çarpıcı bir artış sağladığı için caziptir. Ağların tek hücre düzeyinde görüntülenmesi ve bu metriklerin çok hücreli etiketleme ile korelasyonu, kapiller filizlenmeyi içeren yeni hücre fenotiplerinin belirlenmesinde son derece yararlı olmuştur.Bu yöntem, mikrovasküler ağ büyümesinde yer alan hücresel dinamiklere ilişkin temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bunlar arasında, kılcal damar filizlenme sürecinde belirli hücrelerin ne zaman ve nerede mevcut olduğu yer almaktadır. Bu yöntemin temel avantajları; basit olması, minimum cerrahi müdahale gerektirmesi ve nispeten kısa bir süre içinde güçlü bir anjiyojenik yanıt oluşturmasıdır.Ek olarak, tek hücre seviyesine kadar bozulmamış bir ağın gözlemlenmesine olanak tanıyan bir doku olan rap mezenterinden yararlanılmaktadır. Deneyimlerimize göre, prosedürün gösterilmesiyle birlikte öğrenilmesi oldukça kolaydır ve dolayısıyla araştırmacıdan araştırmacıya tekrarlanabilir niteliktedir. Bugün, laboratuvarımızda lisansüstü öğrencisi olan Peter Stapler, beraberindeki metinde ayrıntıları verildiği şekilde cerrahi işleme hazırlık yapacaktır.Sıçanın karın bölgesini tıraş ettikten sonra, vücut sıcaklığını korumak için anestezi altındaki sıçanı sırt üstü bir ısıtma pedinin üzerine yerleştirin, karın bölgesini sırasıyla %70'lik izopropil alkol ve iyot emdirilmiş steril gazlı bezlerle temizleyin; sternumun yaklaşık bir inç altına cildi ve ardından linea alba boyunca küçük bir boylamsal insizyon yapın. Önceden kesilmiş örtüyü, açıklık insizyonla hizalanacak şekilde karın bölgesinin üzerine yerleştirin. İnce bağırsağı açığa çıkarmak için insizyonun etrafına nazikçe baskı uygulayın. Pamuklu aplikatörler yardımıyla, ince bağırsağın bir bölümünü nazikçe dışarı çıkarıp mezenterini steril salin içeren plastik platformun üzerine yerleştirin ve ileumu belirleyin.İnce bağırsağı besleyen arter-ven çiftleri arasındaki ince, yarı saydam membran olan altı ila sekiz vaskülarize mezenterik pencereyi belirleyin. Dış ortam başlangıç saatini kaydedin ve 20 dakikaya bir zamanlayıcı kurun. Merkezi konumdaki iki mezenterik pencereyi, bağırsağa yakın yağlı bölgede steril yedi sıfır sütür ile işaretleyin.Dokunun daldırılmış ve nemli kalmasını sağlamak için, steril beş mililitrelik bir şırınga kullanarak Petri kabındaki salini ara ara yenileyin. Eksternalizasyon süresi dolduktan sonra, mezenteri karın boşluğuna geri yerleştirin. Karın kasını, beş sıfır monofilaman sütür ile kopuk dikiş şeklinde kapatın.Ardından cildi, kesikli dikiş modeliyle dört sıfır monofilaman sütür kullanarak kapatın; sütür bölgesini %70'lik izopropil alkol ve iyot emdirilmiş steril gazlı bezle sırasıyla silerek temizleyin, sıçanın her iki gözüne kayganlaştırıcı jel sürün ve iyileşmesi için kafesine geri koyun. İlgilenilen günde, stimülasyon sonrası, sıçanı kurum yönergelerine uygun olarak anestezi altına alın ve ötanize edin. Ardından karın boşluğunu tekrar açın ve karın bölgesini bir parça streç filmle örtün. Şimdi ince bağırsağı nazikçe dışarı çıkarın ve pens ile mikro makas kullanarak işaretlenmiş iki pencereyi bulun.Yağ kenarını da içerecek şekilde, dışarı çıkarılan mezenterik pencerelerin her birini kesin. Pencerelerin potansiyel olarak kanla dolmasını en aza indirmek için, yağ kenarı içindeki arter-ven çiftlerini kesmekten kaçının. Ayrıca, bağırsak içeriğinin sızmasına neden olacak bağırsak kesimlerini minimize edin.Pencerelere temas eder etmez, her bir pencereyi hemen PBS içine daldırın. Ardından, dokuları pozitif yüklü mikroskop lamlarına yaymak için pens kullanın. Her lama iki doku yerleştirin. Dokular kısmen kuruduktan sonra, fazla yağı bir bistüri ucuyla temizleyin.Numuneleri dondurucuya yerleştirerek -20 °C'de 30 dakika boyunca metanol ile fikse edin. Fazla tampon çözeltiyi uzaklaştırmak için lamları vakumlu kurutmaya tabi tutun. Ayrıca, antikor çözeltilerinin dokudan kontrolsüz bir şekilde akmasını önlemek için dokuların etrafını balmumu kalem ile çerçeveleyin.Şimdi, tüm dokuyu kaplayacak şekilde yaklaşık 200 µL seyreltilmiş primer antikor çözeltisini damlatın. Oda sıcaklığında bir saat boyunca inkübe edin, dokuları PBS artı %0,1 sapin ile tamponu üç kez değiştirerek yıkayın. Ardından, strep adin peroksidaz sekonder antikor çözeltisini ekleyin ve oda sıcaklığında bir saat boyunca inkübe edin; üç yıkamadan sonra örnekleri 15 dakika boyunca vector nova red içerisinde inkübe edin.Slaytları monte etmek için suyla durulayın. 10 kez %95 etanol içine batırın ve ardından ardışıkdehidratasyon adımlarını uygulayın. Slaytların kurumasına izin verin, dokuları ince bir tabaka tutkal ile kapatın; vakumlu kurutma ve işaretlemeden sonra lamelleri yerleştirin.Lamlar. Doku örneklerini seyreltilmiş primer antikor çözeltisi ile kaplayın. Oda sıcaklığında bir saat boyunca inkübe edin.Her yıkama 10 dakika sürecek şekilde, %0,1 saponin içeren PBS ile üç kez yıkayın. Ardından sekonder antikoru ekleyin ve bir saat boyunca inkübe edin. %0,1 saponin içeren PBS ile yıkama işlemlerini gerçekleştirin; lamları gliserol içeren PBS ile kapatın ve oje ile mühürleyin.Burada, yaygın bir Petri kabının cerrahi platform olarak kullanılması için nasıl modifiye edildiğini detaylandırıyoruz. Mezenterin önceden kesilmiş delikten çekilebilmesi için pürüzsüz bir yüzey sağlamak amacıyla sarı modelleme kili kullanılmıştır. Eksternalizasyon süresi boyunca platformda gösterilen mezenterik pencereler, burada bağırsağı besleyen arter-ven çiftleri arasındaki ince, yarı saydam membranlar olarak tanımlanmaktadır.PCAM etiketlemesi, eksternalizasyon sonrası belirli zaman noktalarında, yeniden şekillenen mikrovasküler ağların hiyerarşisi boyunca tüm damar tiplerini tanımlar. Bu görüntüler, stimülasyon sonrası belirli zaman noktalarında anjiyojenik metrikleri nicelleştirmek için kullanılabilir.PCAM etiketlemesi, arteryollerin venüllerden ayırt edilmesini sağlar. Besleyici arteryollerin, eşleşmiş venüllere kıyasla tipik olarak daha küçük çaplar ve uzamış endotelyal hücre morfolojisi sergilediğine dikkat edin. Yeniden şekillenen ağların tipik özellikleri arasında vaskülarize alan, kapiller filizlenme ve damar yoğunluğu yer alır.Bu çeşitli anjiyojenik metriklerin nicelleştirilmesi, ağ büyümesinin zaman seyrini karakterize eder. Mevcut damarlardan kılcal filizlenme üçüncü gün ile beşinci gün arasında zirveye ulaşır ve 10. güne kadar uyarılmamış seviyeye döner. Laboratuvarımızda, filizlenmedeki bu geçici artışı, vaskülarize alan ve vasküler yoğunluktaki artışlar takip etmektedir.Bu model sistem, bu yeniden şekillenme sürecindeki belirli zaman noktalarında yeni hücresel fenotipik değişiklikleri belirlemek için kullanılmıştır. İmmünofloresan PCA markalaması endotel hücrelerini kırmızıya boyarken, sınıf üç beta tübülin markalaması sinirleri ve anjiyojenik damarlar boyunca yer alan parazitleri yeşile boyar. İlginç bir şekilde, uyarılmamış dokularda sınıf üç beta tübülin ekspresyonu sinire özgüdür.Buna karşılık, kapiler filizlenmenin zirvesinde, perivasküler hücreler tarafından sınıf üç beta tübülin eksprese edilir. Bu tür bir sonuç, anjiyojenik süreçte yer alan yeni hücre tiplerini belirlemek için bu basit ve sağlam anjiyojenik modelin kullanımını vurgulamaktadır. 10. güne gelindiğinde, sınıf üç beta tübülin ekspresyon paterni uyarılmamış senaryoya dönmeye başlar.Bu model aynı zamanda potansiyel olarak hücre soyu çalışmalarında da kullanılabilir. Önceden işaretlenmiş kemik iliği hücrelerinin veya mezenkimal kök hücrelerin, 20 dakikalık dışlama süresi boyunca mezenterik pencereler üzerine süperfüze edildiği bu ön çalışmalar, hücrelerin yeniden şekillenen mezenterik dokuya dahil edilmesinin fizibilitesini desteklemektedir. Bu videoyu izledikten sonra, mikrovasküler ağ büyümesinde yer alan hücresel dinamikleri araştırmak için sıçan mezenter interiorizasyon modelimizi nasıl kullanacağınız konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.Bu basit teknik yaklaşık 45 dakika ile bir saat arasında gerçekleştirilebilir. Cerrahi bir işlemden sonra mezanterin hassas bir şekilde tutulmasının ve damarların delinmemesinin kritik olduğunu unutmayın. Kan damarları boyunca birden fazla hücre tipini tanımlamak için immün etiketleme yapılabilir.Ayrıca lenfatik damarlar ve sinirler için de markalama yapabilirsiniz. Bu, sadece anjiyogenezde yer alan hücresel fenotipik değişiklikleri değil, aynı zamanda anjiyogenez, nörogenez ve lenfanjiyogenez arasındaki koordinasyonu incelememize olanak tanır.

rat-mesentery-exteriorization-model-for-investigating-cellular

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Fizyolojik anjiyogenez ve yoksun Normal erişkin vaskülarize memeli doku çalışma için kullanılan cerrahi müdahaleye maruz kalmamış: (i) başlatılması ve test ajanların intraperitoneal uygulanması aşağıdaki anjiyogenez geliştirilmesi; ve sistemik uygulanması aşağıdaki (ii) anjiyogenez değişiklik Test ajanlar seçilir.

Rat mezenter Anjiyogenez Testi

Yenidoğan fare retina bir anjiyogenez modüle farklı genler ya da uyuşturucu rolleri soruşturma izin anjiyogenez bir iyi karakterize fizyolojik modeli...

Anjiyogenez Araştırma Yenidoğan Fare Retina Tüm Dağı Immunofluorescent Boyama<em&gt; In vivo</em

Protokol farelerde geliştirilen komea mikro-tahlili tarif eder.

Kornea mikrocep Testi: Fare Eye Angiogenezis Bir Model

Ultrason ve endomikroskopi olmak üzere iki tamamlayıcı görüntüleme yöntemi kullanarak kanser hücreleri tarafından salgılanan bir faktör havuzunun anjiyojenik potansiyelini göstermek için bir matrigel tıkaç testi tarif ediyoruz. Hücre dışı bir matriks (ECM) taklidi jeli olan matrigel, konağı (fare) şartlandırılmış ortama (CM) salgılanan anjiyojenik faktörlerle tanıştırmak için kullanılır.

Hızlı büyüyen Tümör üreten hücreleri tarafından salgılanan faktörler tarafından işe alınmış İzleme İşlevsellik ve vaskülatürüne morfolojisi

Bu iletişim kuralı transgenik fareler hücre özgü floresan işaretleri ifade intravital görüntüleme açıklar. İntravital görüntüleme implante edilebilir windows üzerinden süreçlerin mikroskobik görselleştirme mümkündür kullanarak yaşayan hayvanlarda yüksek çözünürlüklü gözlemler için non-invaziv bir yöntem sağlar. Bu yöntem boyuna işlemleri incelemek özellikle kullanışlıdır.

Tümör ilişkili damarlara kullanmanın intravital mikroskobu gelişmiş Dorsal deri kıvrım pencere Chambers transgenik floresan fareler üzerinde

Anjiyogenez, fizyolojik olarak ilgili bir ortamda araştırılması gereken çok hücreli, çok sistemli etkileşimleri içerir. Bu çalışmanın amacı, sıçan mezenter kültürü modelinin, anjiyogenez sırasında sağlam mikrovasküler ağların hızlandırılmış karşılaştırmalarını yapma yeteneğini göstermektir.

bir<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Yöntem kültürlü Rat Mezenterik Mikrovasküler Ağları Time-Lapse Görüntüleme için

Biz metastazın tümör mikroortamı ile ilişkili geçici vasküler geçirgenliği değerlendirmek için iki yöntem tarif (tmem) kapı fonksiyonu ve kanser hücresi konvülsyon yüksek molekül ağırlığı İntravenöz enjeksiyon kullanarak (155 kDa) farelerde dekstran. Yöntemleri, canlı hayvanların intravital görüntüleme ve immünofluorescence kullanarak sabit doku analizi içerir.

Intravital görüntüleme ve sabit doku analizi kullanılarak kanserli hücre yaygınlaştırılması ile Ilişkili Metasküler kapı-aracılı vasküler geçirgenlik tümör Mikroortamının değerlendirilmesi

Bu tahlil, filizlenen anjiyogenezi in vitro olarak kontrol eden biyolojik süreçleri analiz etmek için 3D-kollajen jel içinde kültürlenmiş embriyoid cisimlere farklılaştırılmış fare embriyonik kök hücrelerini kullanır. Bu teknik, ilaçları test etmek, hastalıkları modellemek ve embriyonik olarak ölümcül olan delesyonlar bağlamında spesifik genleri incelemek için uygulanabilir.

In Vitro Vasküler Hastalık Modellemesi ve İlaç Testi için Fare Embriyonik Kök Hücreleri Kullanılarak Anjiyogenezin Üç Boyutlu Filizlenme Testi

Bu çalışma, iki boyutlu (2D) çizik yara migrasyon testini ve üç boyutlu (3D) küresel filizlenme testini, RNA ekstraksiyonu ve immünositokimya dahil olmak üzere ilgili aşağı akış analiz yöntemleriyle birlikte, in vitro anjiyogenezi incelemek için uygun testler olarak sunmaktadır.

Çizik Yara Migrasyon Testi ve Sferoid Filizlenme Testinden Yararlanarak Anjiyogenezin Fonksiyonel ve Moleküler Düzeyde İncelenmesi

Gelişim ve hastalık için temel olan filizlenme anjiyogenez, karmaşık moleküler ve mekanik süreçleri içerir. Domuz karotis arterlerinden hücresel filizlenmeyi analiz eden, sertliğe bağlı anjiyogenezi ve farklı lider-takipçi hücre mekaniğini ortaya çıkaran çok yönlü bir 2.5D ex vivo model sunuyoruz. Bu model, doku mühendisliği stratejilerinin ve kanser tedavisi yaklaşımlarının geliştirilmesine yardımcı olur.

Canlı Dokuda Filizlenen Anjiyogenezin Ex Vivo Mekanik Karakterizasyonu için 2.5D Model

Keşfedin sıçan mezenter eksteriorizasyon modelini anjiogenez ve mikrovasküler ağ büyümesindeki hücresel dinamikleri incelemek için. Bu yöntem tek hücre düzeyinde yüksek çözünürlüklü görüntüleme sağlar.

Sıçan mezenter eksteriorizasyon: Anjiogenez ilgilendim Hücresel Dinamikler araştırılması için Bir Model

Daha fazla video keşfet