Name: Akut Hepatit Model Uygulama: Görselleştirme ve Hepatik Mikrosirkülasyon Kan Akış ve Oksijen Tüketimi Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-04T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 40 s
Description: Öğrenin, akut hepatit modelinde optik sistemle karaciğer mikrosirkülasyonunu görselleştirmeyi ve lazer destekli fosforimetri ile oksijen kısmi basıncını ölçmeyi. Bu yöntem, mikrovasküler yapı ve kan akışı analiziyle karaciğer patolojisinin mekanizmalarını açıklar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar teknik destek ve yardım deneyler için Bayan Risa Otsuka teşekkür ederim. Bu araştırma kısmen Eğitim Bakanlığı, Bilim, Spor ve Kültür, tarafından desteklenmiştir Grant-Aid Genç Bilim Adamları (B), 2010, 22.700.476, ve KT Suzuken Memorial Foundation 2010 Ve bu çalışmanın Araştırma ve Geliştirme tarafından desteklenen için Yaşayan Madde, MEXT ve Nesil Süper Bilgisayar Projesi Geliştirme ve Kullanım bir parçası ve JST ERATO Suematsu Gaz Biyoloji Projesi tarafından kısmen ve Nesil Entegre Simülasyon.

1. Floresein izotiyosiyanat izomer I (FITC) ile Eritrositler Etiketleme Kullanılan tüm deneysel protokolleri Keio Üniversitesi Tıp Fakültesi Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylandı. <ol><li> Bir donör fareler uyutmak ve yaptıktan sonra bir Seliotomide kesi heparin az miktarda içeren 1 ml şırınga ile vena kava tam kan çekilme. Fare hemen sodyum pentobarbital enjeksiyon (100 mg / kg ip) tarafından ötenazi edildi. </li><li> Bir sallanma-kova rotor içinde 400 g hızında 5 dakika süreyle santrifüjlenerek PBS (pH 7.4) ile iki kez tam kan yıkanır. </li><li> 100 mM Na 2 HPO 4, 5 ml içinde FITC 10 mg eritilir ve 0.22 um-gözeneklere sahip olan bir zar ile filtre. </li><li> Bir test tüpü 3 mM glukoz 0.15 ml, 180 mM 100 mM NaH 2 PO 4 ve 1.5 ml 2 HPO 4 Na 0.25 ml FITC çözeltinin 1 ml karıştırın. R 0.2 ml ilave edilirM.Ö. pelet ve karıştırma için tüp dokunun. </li><li> 4 ° C&#39;de 2 saat boyunca boru tutmak ve sonra iki defa PBS ile boyanmış kırmızı kan yıkanır. </li><li> Slayt çim eritrosit süspansiyonu küçük bir miktar koyun ve eritrositler sağlıklı bakarsanız bakın (yani, onların şekil ve boyutları normal olduğunu) ve floresan yeterli olduğunu. </li><li> PH 7.4 &#39;te PBS 0.9 ml RBCs 0.1 ml Askıya, ve 4 süspansiyon tutmak ° C enjeksiyona kadar. </li></ol> 2. Oksijen-duyarlı Dye hazırlanması <ol><li> PBS pH 7.4 &#39;te 10 ml BSA, 500 mg eritilir. </li><li> Pd 30 mg ekleme (II)-mezo-tetra (4-karboksifenil) BSA çözeltisi ile porphine (Pd-TCPP) ve gece boyunca karıştırılır. </li><li> (İsteğe bağlı) ücretsiz Pd-TCPP ayırmak için yerçekimi akışı kromatografisi veya bir spin kolon kullanarak BSA bağlı Pd-TCPP ayıklayın. </li><li> Pd-TCPP çözünmemiş kaldırmak ve 0.22-mikron gözeneklere sahip bir membran filtre ile süpernatant filtrelemek için çözüm santrifüjleyin. &lt;/ Li&gt; <li> -20 ° C&#39;de tüpler Mağaza 1 ml hacimde Tekrarlanan donma-erime döngüleri kaçının. </li></ol> 3. Hayvan Hazırlık <ol><li> Mikrodolaşım mikroskobik gözlem için delik üzerinde 30 mm kare kare cam kapak bir delik 20 mm çapında ve bant ile plastik bir tabak hazırlayın. </li><li> Bir fare uyuştur, deri kürk kaldırmak ve hazırlık. Heparinize PBS ile doldurulmuş bir 10 cm&#39;lik bir polietilen (PE 10) bağlı bir kateter 30 G iğne kullanılarak madde enjeksiyon için boşa kuyruk bir kateter yerleştirin. </li><li> Median insizyon sonra, plastik plaka üzerinde bir karaciğer ana lobülü genişletmek ve sternal pozisyonda bulunan fare yerleştirin. </li><li> Solunum ile karaciğerin hareketli ve kurumasını tutarak inhibe hepatik lobun kenarında mutfak wrap (3 mm x 8 mm) ve çini onlarla küçük fişleri hazırlayın. </li><li> Mikroskop altında hepatik mikrosirkülasyonu (iletilen ışık ile) dikkat edin, onaylayın ki blood akışı, en azından 15 dakika süreyle görüş alanını herhangi bir durağanlığın sahiptir. </li><li> Yavaş yavaş kan akımı gözlem veya pO 2 ölçümü için Pd-TCPP çözüm 0.2 ml floresan ile işaretlenmiş eritrositler 0.2 ml enjekte edilir. FITC-etiketli eritrositler Bu miktar görüntülenmiştir bölgede dolaşımda bulunan tüm eritrositler 1/50 sorumlu olacaktır. </li></ol> 4. Kan Akış Görselleştirme <ol><li> Bandpass (450-490 nm) 1 geçti civa lambası ile irradyasyonu ile FITC heyecanlandırıyor. </li><li> Bir CCD kamera ile floresan görüntüyü kaydedin. </li></ol> 5.. pO 2 Ölçme Pd-TCPP fosforesans oldukça zayıf olup, yüksek hassasiyetli dedektör ile tespit edilmelidir. Bütün deneyler bir karanlık odaya yapılması gerekir. <ol><li> Pd-TCPP emilimi pikleri 410 nm ve 532 nm, bu nedenle ikinci harmonik dalga boyu 532 nm eksitasyon için tavsiye edilir. YAG lazer pulse 2: Bu dalga boyu Nd tarafından oluşturulabilir. </li><li> Inverted mikroskop uygun portuna YAG lazer ve odak düzlemi merkezi bir konuma ışın spot ayarlayın: Nd ışın besleyin. Uzaysal çözünürlüğü, bir iğne deliğinden ışını geçirilerek değiştirildiğinde lazer spot büyüklüğü, bağlıdır. </li><li> Fosforesans saptamak için, uzun bir geçiş filtresi (&gt; 620 nm) ve mikroskop diğer portuna bir photomultiplier tüpü (PMT) takabilirsiniz. PMT özellikle 700 nm çapında, kırmızı dalga boyları karşı duyarlı olmalıdır. </li><li> Fosforesans sinyali (500 puan 200 KHz) tadın ve çürüme bir üstel fonksiyonu takarak çürüme zaman sabitini hesaplayabilirsiniz. </li><li> Kalibrasyon için pO 2 150 mmHg ve 0 mmHg Pd-TCPP çözüm örneklerinin iki set hazırlayın. Oksijen yokluğunda üretmek için örneklemek üzere sodyum ditionit hacim olarak% 1 ekleyin. 7,4 azından örnekleri arasında pH ve sıcaklık tutmakKalibrasyon sırasında 37 ° C &#39;de Ture. </li><li> Stern-Volmer sabiti k q ve oksijensiz lüminesans yıkım zamanı denklemde τ 0 (1) 3 Fix. 37 ° C ve 7.4 pH Pd-TCPP çözümleri ile bizim durumda, k q 374 mmHg -1 s -1 ve τ 0 0.74 ms. Bu ölçüm parametreleri ekipmanı (yani lazer, dedektör, diğer optik cihazlar) ve sinyal işleme yöntemine bağlıdır, bu yüzden her kalibrasyon ölçüm sistemi 4 gereklidir. τ 0 / τ = ​​1 + q k 0 • • τ pO 2 (1) </li><li> Mikroskop sahnede plaka üzerinde fare ayarlayın, hepatik mikrosirkülasyonu gözlemlemek ve lazer nokta nokta hedef mikrodamar pozisyonunu ayarlayın. </li></ol> 6. Hepatit modeli <ol><li> Gecede suya ücretsiz erişim ile hızlı fare. </li><li> Bir hazırlayın20 DMSO asetaminofen (APAP) ml çözelti başına mg. </li><li> 1 ml/100 gr bw (yani, 200 mg / kg) intraperitoneal olarak enjekte. Enjeksiyonundan sonra, fare yiyecek ve su 5 serbest erişim verilebilir. </li><li> Enjeksiyondan 24 saat sonra, fare uyutmak ve median insizyon yaparak karaciğer maruz bırakmaktadır. Hepatit elde edilirse, perisentral bölgede nekroz çıplak gözle kolayca görülebilir. </li></ol> 7. Temsilcisi Sonuçlar Hepatik mikrodolaşım Örneği görüntü (a) iletilen bir ışıklı görüntü ve (b), flöresanlı bir resimdir Şekil 1 &#39;de gösterilmektedir. Bireysel FITC etiketli eritrosit video film gözlenir ve portal venlerde, sinüzoidler ve santral venlerde kan akış yönü ile tanınır. Şekil 2 de gösterildiği gibi, bir x100 objektif lens ile merkezi bir venül irradyasyonu laser ışınının approxim idiçapı 10 um rilmesi gerekir. Hepatik mikrosirkülasyonda İntravasküler pO 2 erkek C57BL / 6 farelerde ölçülebilir ve Şekil 3 (a) pO 2 ve portal ve santral venlerde damar çapı arasındaki ilişkileri gösterir edildi. Sinüzoidler geçerken merkezi venüller portal gelen pO 2 degrade etkili olduğunu eritrositlerde serbest oksijen gösterir. Şekil 3 (b) &#39;de gösterildiği gibi, ortalama pO2 portal damarlar, sinüzoidlerdeki 48.2 mmHg ve santral venlerde 38.9 mmHg 59.8 mmHg idi. Biz APAP intraperitoneal enjekte edilerek akut hepatit üretilen zaman, intravasküler pO 2 önemli ölçüde hepatik mikrodolaşım her kesiminde artmıştı: p sinüzoidler ve santral venlerin (Şekil 3 (c)), portal ven ve p &lt;0.01 &lt;0.05. <img src="/files/ftp_upload/3996/3996fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. Düşük büyütme images (a) geçen ışık ve (b) flüoresan ile hepatik mikrodolaşım gösteren. <img src="/files/ftp_upload/3996/3996fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2. PO 2 ölçüm için hedeflenen merkezi venül irradyasyonu lazer nokta görüntüsü. <img src="/files/ftp_upload/3996/3996fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Sağlıklı kontrol farelerin ve asetaminofen bağlı karaciğer hasarı ile farelerde karaciğer mikrosirkülasyonda Şekil 3. PO 2 degrade. (A) pO 2 karşılık portal venüller (FV) ve merkezi venüller (KV) için damar çapı gösterir, ve (b) sinüsoidlerinden (S) vasıtasıyla PV CV oksijen gradyanı gösterir. PV ve CV arasındaki pO 2 farkı hepatositler veya diğer parankimal hücrelerin oksijen tüketimi yansıtır. (C) APAP alımının yol açtığı hepatit durumunda, pO 2 önemli ölçüde PV, S ve CV ve pO 2 yükselebilir olduğunu gösterirdegrade hepatik oksijen tüketimi tatlıya belirten azalmıştır.

<ol><li>Ishikawa, M., Sekizuka, E., Shimizu, K., Yamaguchi, N., Kawase, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+RBC+velocities+in+the+rat+pial+arteries+with+an+image-intensified+high-speed+video+camera+system%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Measurement of RBC velocities in the rat pial arteries with an image-intensified high-speed video camera system.</a> Microvasc. Res. 56, 166-172 (1998).</li>
<li>Tsukada, K., Sekizuka, E., Oshio, C., Tsujioka, K., Minamitani, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Red+blood+cell+velocity+and+oxygen+tension+measurement+in+cerebral+microvessels+by+double-wavelength+photoexcitation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Red blood cell velocity and oxygen tension measurement in cerebral microvessels by double-wavelength photoexcitation.</a> J. Appl. Physiol. 96, 1561-1568 (2004).</li>
<li>Stern, O., Volmer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%C3%9Cber+die+Abklingzeit+der+Fluoreszenz%5BTitle%5D)+AND+%22Physik.+Zeitschr%22%5BJournal%5D)">Über die Abklingzeit der Fluoreszenz.</a> Physik. Zeitschr. 20, 183-188 (1919).</li>
<li>Rumsey, W. L., Vanderkooi, J. M., Wilson, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+phosphorescence%3A+a+novel+method+for+measuring+oxygen+distribution+in+perfused+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Imaging of phosphorescence: a novel method for measuring oxygen distribution in perfused tissue.</a> Science. 241, 1649-1651 (1988).</li>
<li>Soga, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+metabolomics+reveals+ophthalmic+acid+as+an+oxidative+stress+biomarker+indicating+hepatic+glutathione+consumption%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Differential metabolomics reveals ophthalmic acid as an oxidative stress biomarker indicating hepatic glutathione consumption.</a> J. Biol. Chem. 281, 16768-16776 (2006).</li>
<li>Goda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+heme+oxygenase+isoforms+in+rat+liver.+Topographic+basis+for+carbon+monoxide-mediated+microvascular+relaxation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Distribution of heme oxygenase isoforms in rat liver. Topographic basis for carbon monoxide-mediated microvascular relaxation.</a> J. Clin. Invest. 101, 604-612 (1998).</li>
<li>Grote, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGrote%2C+J+%22Physiologie+der+Menschen%22">Physiologie der Menschen</a>. , 20th edn, Springer-Verlag. New York. 560(1980).</li>
<li>Suganuma, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythrocytes+with+T-state-stabilized+hemoglobin+as+a+therapeutic+tool+for+postischemic+liver+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Erythrocytes with T-state-stabilized hemoglobin as a therapeutic tool for postischemic liver dysfunction.</a> Antioxid Redox Signal. 8, 1847-1855 (2006).</li>
<li>Vanderkooi, J. M., Maniara, G., Green, T. J., Wilson, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optical+method+for+measurement+of+dioxygen+concentration+based+upon+quenching+of+phosphorescence%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">An optical method for measurement of dioxygen concentration based upon quenching of phosphorescence.</a> J. Biol. Chem. 262, 5476-5482 (1987).</li>
<li>Bernal, W., Auzinger, G., Dhawan, A., Wendon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+liver+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Acute liver failure.</a> Lancet. 376, 190-201 (2010).</li>
<li>Hinson, J. A., Roberts, D. W., James, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+acetaminophen-induced+liver+necrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Handb.+Exp.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of acetaminophen-induced liver necrosis.</a> Handb. Exp. Pharmacol. 169, 369-405 (2010).</li>
<li>Hinson, J. A., Reid, A. B., McCullough, S. S., James, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acetaminophen-induced+hepatotoxicity%3A+role+of+metabolic+activation%2C+reactive+oxygen%2Fnitrogen+species%2C+and+mitochondrial+permeability+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Metab.+Rev%22%5BJournal%5D)">Acetaminophen-induced hepatotoxicity: role of metabolic activation, reactive oxygen/nitrogen species, and mitochondrial permeability transition.</a> Drug Metab. Rev. 36, 805-822 (2004).</li>
<li>Lieber, C. S. Medical disorders of alcoholism. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLieber%2C+CS+%22N.+Engl.+J.+Med%22">N. Engl. J. Med</a>. 333, 1058-1065 (1995).</li>
<li>Zimmerman, H. J., Maddrey, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acetaminophen+%28paracetamol%29+hepatotoxicity+with+regular+intake+of+alcohol%3A+analysis+of+instances+of+therapeutic+misadventure%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Acetaminophen (paracetamol) hepatotoxicity with regular intake of alcohol: analysis of instances of therapeutic misadventure.</a> Hepatology. 22, 767-773 (1995).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Dokularına oksijen taşınmasına mikrodolaşımında önemli bir rolü olduğunu ve bir çok gazete mikrodamar anatomi ve reoloji 6 ile ilgili hastalıklar açıklar. Karaciğer kan akımı arteriyel ve venöz kan bir kombinasyonudur. Karaciğer kan akımının yaklaşık% 30 portal ven tarafından sağlanan hepatik arter ve diğer% 70, sağladığı iyi oksijenli kan ise, dalak ve gastrointestinal kanal 7 den az oksijenli kan venöz çıkış olduğunu. Bu tür yağlı karaciğer, şok, veya tümör değişiklik hepatik mikrosirkülasyonda k...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Pd (II) mezo-tetra (4-karboksifenil) porphine </td><td> Frontier Scientific, Inc </td><td> PdT790 </td></tr><tr><td> Floresein izotiyosiyanat izomeri I </td><td> Sigma-Aldrich Co </td><td> F7250 </td></tr><tr><td> Asetaminofen </td><td> Sigma-Aldrich Co </td><td> A7085 </td></tr></tbody></table> <table border="1"><tbody><tr><td> Ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Ekipman </td></tr><tr><td> photomultiplier tüp </td><td> Hamamatsu Photonics KK </td><td> H10722-20 </td></tr></tbody></table>

akut hepatit model uygulama: görselleştirme ve hepatik mikrosirkülasyon kan akış ve oksijen tüketimi analizi

Visualization and Analysis of Blood Flow and Oxygen Consumption in Hepatic Microcirculation: Application to an Acute Hepatitis Model

Hepatik oksijen tüketimi nispeten yüksektir ancak hepatik kan akımı yaklaşık% 70 az gastrointestinal sistem ve dalak türetilen portal ven kan oksijenli olduğu için oksijen kaynağı ve karaciğerde talep arasındaki önemli bir fark vardır. Oksijen sinüzoidler üzerinden merkezi bir venül için portal ven bir terminal dalı akan kan ile hepatositler teslim ve bu hepatik lobülleri bir oksijen gradiyenti yapar. Oksijen gradyanı yukan ve aşağı hepatik mikrodolaşım Enzimlerin ifadesi, fakat hepatik mikrodolaşım oksijen tüketimi ölçülmesi için teknikler eksikliği karaciğer içindeki oksijen metabolizması ilgili mekanizmaları aydınlatılması geciktirmiştir içerir önemli fiziksel bir parametredir. Bu nedenle karaciğer mikrosirkülasyonu görselleştirmek için FITC etiketli eritrositleri kullanılmış ve burada kılcal oksijen kısmi basıncı ölçmek için lazer yardımlı phosphorimetry kullanılır. Noncontact ve sürekli optik ölçüm kan akım hızları, damar çapları ve karaciğerde oksijen tüketimi ile ilgili oksijen degradeler ölçmek olabilir. Akut hepatit modeli biz perisentral bölgesinde hepatosit nekrozu oksijen basıncı yukarı kayar ve enzim ifade etkileyebilir belirten, biz portal ve santral venüller hem artmış oksijen basıncı ancak sinüzoidlerdeki azalmış oksijen gradiyenti gözlendi farelere asetaminofen ile sağlandı periportal bölgede. Sonuç olarak, ölçme hepatik hemodinamik ve oksijen tüketimi için optik yöntemlerle karaciğer hastalığı ile ilgili mekanizmaların ortaya çıkarabilir.

Bir optik sistem FITC-etiketli eritrosit ile karaciğer mikro görselleştirmek ve lazer yardımlı phosphorimetry ile kılcal oksijen kısmi basıncı ölçmek için geliştirilmiştir. Bu yöntem, mikrovasküler yapısı, çapı, kan akış hızı, ve oksijen gerilimi analiz ederek fizyolojik ve patolojik mekanizmalar araştırılması için de kullanılabilir.

Akut Hepatit Model Uygulama: Görselleştirme ve Hepatik Mikrosirkülasyon Kan Akış ve Oksijen Tüketimi Analizi

Karaciğerde oksijen arzı ve talebi arasında önemli bir fark vardır; çünkü hepatik oksijen tüketimi nispeten yüksektir ancak ...'nın yaklaşık %70'i

Floresan işaretli eritrositler ile hepatik mikrosirkülasyonu görselleştirmek ve lazer destekli fosfo görüntüleme ile mikrodamarlardaki oksijen kısmi basıncını ölçmek için bir optik sistem geliştirilmiştir. Bu yöntem; mikrovasküler yapı, çap, kan akış hızı ve oksijen tansiyonu analiz edilerek fizyolojik ve patolojik mekanizmaların araştırılmasında kullanılabilir. Hepatik mikrosirkülasyonda kan, portal ES'den santral ES'ye doğru akar ve bu iki bölge arasında bir oksijen gradyanı oluşturur.Karaciğerdeki oksijen konsantrasyonu, hem enzim ekspresyonunu hem de patolojiyi etkilediğinden, kan akış analizi ve oksijen ölçümü araştırmaların önemli konuları haline gelmiştir. Deneysel yöntemimiz, floresan ile işaretlenmiş kırmızı kan hücrelerinin intravenöz olarak uygulanmasını içermektedir.Oksijen parsiyel basınç ölçümü için floresans kullanarak mikrosirkülasyonu görüntülemek amacıyla, bir lazer tarafından uyarıldığında çevredeki oksijen konsantrasyonuna bağlı olarak kan akışında fosforesans yayan paladyum porfirini intravenöz olarak uyguluyoruz. Bu süreç oksijenin kantitatif analizine olanak tanır; hepatik mikrosirkülasyonun parsiyel basınç ölçümleri, portal ve santral venöz oksijen parsiyel

visualization-analysis-blood-flow-oxygen-consumption-hepatic

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu makale, görüntü elde etme ve analiz için özel bir metodoloji ile birlikte intravital mikroskopi görüntüleme kullanılarak fare karaciğer damar sisteminin tek tek kan damarları içindeki kan akış hızının dinamik ölçümü ve miktarının belirlenmesi için ayrıntılı bir yöntem hakkında ayrıntılı bir yöntem hakkında rapor vermektedir.

Aşağıdaki Karaciğer intravital Mikroskopi Görüntüleme<em&gt; Leishmania</em&gt; Enfeksiyon: Karaciğer Hemodinami Üzerine Bir Değerlendirme

Karaciğerdeki immün hücrelerin stabil intravital yüksek çözünürlüklü görüntülenmesi zordur. Burada, yoğun bakım monitörizasyonu ile birlikte intravital multifoton lazer tarama mikroskobu ile fare karaciğerindeki bağışıklık hücrelerinin göçünü ve hücre-hücre etkileşimlerini uzun süreler boyunca (yaklaşık 6 saat) incelemek için oldukça hassas ve güvenilir bir yöntem sunuyoruz.

CXCR6.Gfp Muhabir Fare kullanma Sağlıklı ve hastalıklı Karaciğer Bağışıklık Hücreleri Uzun Vadeli intravital multiphoton Mikroskopi Görüntüleme

Vasküler rejenerasyonu görselleştirmek için kullanılan aletler, vasküler ağaçları kontrastlamak için yöntemler gerektirir. Bu film, vasküler ağaçların optimal kontrastını elde etmek için kullanılan hassas bir enjeksiyon tekniğini gösterdi ve elde edilen örneğin μCT ve histolojik seri kesitler kullanılarak ayrıntılı bir analizinden kaynaklanan potansiyel faydaları gösterdi.

Normal Farelerde% 70 hepatektomi sonrası Vasküler ve Parankimal Rejenerasyon görselleştirme

Burada portal hipertansif sendromu sıçanlarda karakterize için portal basınç, splanchnic kan akımı ve sistemik hemodinami gibi hemodinamik parametrelerin invaziv ölçümleri için detaylı bir protokol açıklayın.

Sirozlu fareleri Portal hipertansif sendromunda invaziv hemodinamik karakterizasyonu

Burada deneysel olarak karaciğer dokusu içinde vivoplazma koagülasyon değerlendirmek için bir protokol mevcut. Bir domuz modelinde mikro lazer Doppler tarafından incelenir, koagülasyon derinlik histolojik olarak ölçülür, koagülasyon sitesini kızılötesi termometre ve termografik kamera ve kanal etkisi sızdırmazlık sıcaklıkta patlama basıncı ile belgelenen deneyler.

Plazma koagülasyon büyük hayvan modeli Vivo içinde karaciğer dokusu üzerinde değerlendirilmesi

Protokol, portal ven perfüzyonu yoluyla metabolik çalışmalar için sağlam bir fare karaciğerini rezeke etmenin basit bir yöntemini açıklar.

Eski Vivo Farede Portal Damarından Hepatik Perfüzyon

Burada, karaciğer mimarisini bozmadan, ancak karaciğer dışı faktörlerin yokluğunda karaciğer metabolizmasının akut ve doğrudan regülasyonunu incelemek için fare karaciğerinin yerinde perfüzyonu için sağlam bir yöntem sunuyoruz.

Hepatik Glikoz Üretimi, Ürejenez ve Lipoliz, Perfüze Fare Karaciğer Modeli Kullanılarak Ölçüldü

Yüksek uzamsal çözünürlüğe (100 μm) ve duyarlılığa sahip ultra hızlı Doppler ultrason (UFUS), hepatik vaskülatür hakkında kapsamlı bir kalitatif genel bakış elde etmek için uygun bir noninvaziv görüntüleme modalitesini temsil eder. UFUS ayrıca vasküler hastalık mekanizmaları hakkındaki anlayışımızı geliştirmeyi amaçlayan mikrovasküler sistemin kantitatif ölçümlerini de kolaylaştırır.

Ultrafast Doppler Ultrason Kullanılarak Farelerin Hepatik Vaskülatürünün Görüntülenmesi ve Miktarının Belirlenmesi

Bu protokol, canlı farelerin intravital mikroskopisi (IVM) için hızlı ve akut deneyler için doku stabilitesini artıran son teknoloji ve Yeniden Kullanılabilir Hepatik Görüntüleme Aracı (RHIT) sunmaktadır. RHIT'in 3D baskılı tasarımı, maliyet etkin üretim, ölçeklenebilirlik ve çok yönlülük sunar; böylece farklı boyuttaki farelerde metabolik süreçlerin uzun süreli gözlemlenmesini mümkün kılar.

Yeniden Kullanılabilir Hepatik Görüntüleme Aracı: Hepatik İntravital Mikroskopi İçin Yeniden Kullanılabilir 3D Baskılı Bir Araç

Burada, klinik öncesi biyomedikal araştırmalarda daha erişilebilir, uygun maliyetli ve yinelemeli kullanım sağlayan, mevcut platformların yüksek maliyetinin ve sınırlı esnekliğinin üstesinden gelmek için tasarlanmış açık kaynaklı, değiştirilebilir bir normotermik ex vivo perfüzyon sistemi için bir protokol sunuyoruz.

Araştırmacı bilim adamları için tasarlanmış açık kaynaklı bir Normothermic perfüzyon sistemi

Öğrenin, akut hepatit modelinde optik sistemle karaciğer mikrosirkülasyonunu görselleştirmeyi ve lazer destekli fosforimetri ile oksijen kısmi basıncını ölçmeyi. Bu yöntem, mikrovasküler yapı ve kan akışı analiziyle karaciğer patolojisinin mekanizmalarını açıklar.

Akut Hepatit Model Uygulama: Görselleştirme ve Hepatik Mikrosirkülasyon Kan Akış ve Oksijen Tüketimi Analizi

Daha fazla video keşfet