Sıçan ve Farelerde Ovariektomi ve 17β-östradiol Değiştirme: Görsel Gösteri

Bu prosedürün genel amacı, dişi sıçan ve farelerde aksi takdirde dalgalanma gösteren serum östrojen konsantrasyonları üzerinde sıkı bir kontrol sağlamaktır. Bu, öncelikle overlerin dorsal kökten çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, cel elastik kapsüller ve bir Nutella karışımı hazırlanır.

Son olarak, bir kapsül deri altına yerleştirilir veya Nutella karışımı oral yolla uygulanır. Nihayetinde, kapsül yöntemi için stabil, Nutella yöntemi için ise dalgalı serum 17 beta estradiol konsantrasyonlarını gösteren radyoimmünolojik analiz kullanılarak sonuçlar elde edilebilir. Bu tekniklerin yavaş salınımlı peletler gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, uzun süreler boyunca fizyolojik estradiol konsantrasyonları ürettiklerinin kanıtlanmış olmasıdır.

Bu yöntem; uygulama yolu, kökenler ve dozlar arasındaki etkilerin farklılıkları gibi östrojen alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Hayvanı anestezi uyguladıktan sonra, rektal termometreye bağlı bir ısıtma plakası üzerinde pron pozisyona getirin. IGEL'i ve ameliyat sonrası rahatlama için gerekenleri hayvanın boynunun lateral kısmına subkütan olarak uygulayın.

İliak krist tıraşlayıcının 4x4 cm'lik alanının anterioruna, salin içerisinde kilogram başına beş miligram IL uygulayın. Ardından, hayvanı 4x4 cm'lik açıklığa sahip bir cerrahi örtüyle örtmeden önce bölgeyi bir antiseptik ile dezenfekte edin. Orta hatta iki ila üç santimetrelik bir insizyon yapın ve deriyi, orta hattın 1 cm laterali boyunca alttaki fasyadan künt diseksiyonla ayırın.

Fasya boyunca başka bir insizyon yapın. Ardından, karın boşluğuna ulaşana kadar bu fasyanın altından lateral olarak, mümkün olduğunca yüzeysel şekilde künt diseksiyon gerçekleştirin. Cımbız kullanarak, karın boşluğundaki yumurtalığı çevreleyen adipöz dokuyu tutun ve nazikçe dışarı çekin.

Overi tanımlayın ve uterus kornularını ve damarları, bu yapının 0.5 ila bir santimetre proksimalinden bağlayın. Overi ve bağlanan adipoz dokuyu kesin ve geri kalan dokuyu abdominal kaviteye geri yerleştirin.

Kontralateral fasyaya başka bir insizyon yapın ve diğer overi çıkarın. Yaraları kapatın ve eğer 17 beta estradiol hemen uygulanmayacaksa, hayvanın anesteziden uyanmasını bekleyin.

Hayvanı cerrahi işlemden sonra en az iki saat boyunca ısıtılmış bir kafeste tutun. Sıçanı ameliyat sonrası ilk birkaç gün boyunca ayrı olarak barındırın. Cerrahi işlemden 24 saat sonra deri altına uygulayın.

17 beta estradiol'i scholastik kapsüller aracılığıyla uygulamak için hayvanlara kilogram başına beş miligram daha IL enjekte edin. İstenen miktarı susam yağı içinde iyice karıştırın. Pens kullanarak, tıkama işlemi için üç santimetre uzunluğunda scholastik tüpler ve beş milimetre uzunluğunda ahşap aplikatör çubukları kesin.

17 beta estradiol susam yağı çözeltisini enjekte etmeden önce, skolastik kapsülün içine bir adet ahşap tıpa yerleştirin. Tüm uzunluğu doldurmak için, skolastik kapsülün açık ucunu başka bir ahşap tıpayla nazikçe kapatın. Kapsülleri implantasyondan önce, kalan 17 beta estradiol çözeltisi içinde gece boyunca inkübe edin.

Ektomi insizyonlarını kapattıktan sonra, sıçanın boynunun dorsal kısmında ikiye iki santimetrelik kare bir alanı tıraş edin ve dezenfekte edin. Bir santimetrelik bir insizyon yapın ve lateral yönde künt diseksiyon gerçekleştirin. Kapsül için geniş bir alan oluşturacak şekilde subkütan bir cep diseke edin.

Şolastik kapsülü silin ve insizyon arasından nazikçe yerleştirin. Ardından insizyonu bir sütür ile kapatın. Kapsülün, özellikle yara çevresinde, cildi mümkün olduğunca az gerdiğinden emin olun.

Östrojen uygulama ortamı olarak Nutella fındık kremasını kullanmak için, 17 beta estradiol'i susam yağında tamamen çözün ve ardından susam yağını fındık kremasıyla karıştırın. Deneyden beş gün önce, 17 beta estradiol içermeyen bir plasebo fındık kreması hazırlayın. Sıçanları, birinci günden üçüncü güne kadar hormon içermeyen fındık kremasını yemeleri için eğitin.

Hayvanları dördüncü ve beşinci günlerde gruplar halinde eğitin. Deneyler boyunca onları ayrı kafeslerde fındık kreması ile besleyin. Hayvanlara fındık kreması fizyolojik serum verildiğinde, onları ayrı kafeslere yerleştirin.

Güncel yöntemlerin yeniden üretmeyi amaçladığı 17 beta estradiol konsantrasyonları, sıçanlar için yaklaşık 5 ila 140 picograms per milliliter ve fareler için 5 ila 35 picograms per milliliter'dir. Burada gösterildiği gibi, 300 gram ağırlığındaki dişi Sprague Dawley sıçanlarına uygulandığında.

Deri altı elastik kapsüller, serum 17 beta estradiol konsantrasyonlarını ikinci günde yaklaşık 40 picogram per milliliter seviyelerinden 35. güne kadar 10 picogram per milliliter seviyelerine yavaşça düşürür. Ancak, 25 gram ağırlığındaki dişi C 57 black six farelere kapsüller uygulandığında, uygulamadan hemen sonra yaklaşık 1000 picogram per milliliter düzeyinde bir serum konsantrasyonu piki beklenebilir ve bu değer sekiz saat içinde fizyolojik aralığa geriler.

300 gramlık Sprague Dawley sıçanlarına nut krem yoluyla uygulandığında, serum konsantrasyonu ikinci günde yaklaşık 90 picograms per milliliter seviyesinden 35. günde 25 picograms per milliliter seviyesine yavaşça düşmüştür. Farelerde 17 beta estradiol fizyolojik seviyeleri günlük olarak 10 ile 70 picograms per milliliter arasında dalgalanma göstermiştir.

17 beta estradiol seviyeleri mililitre başına 20 ve 120 pikogram arasında dalgalanma göstermiştir. Uzmanlaşıldığında, eksizyon ve kapsül implantasyonu tekniği, doğru şekilde uygulandığı takdirde 10 dakikada tamamlanabilir. Bu prosedür uygulanırken, hijyen kurallarına kesinlikle uyulmasının önemli olduğu unutulmamalıdır.