Alerjik Havayolu Enflamasyon sırasındaki solunum Dendritik Hücre olgunlaşması ve Göç Analizi

Bu prosedürün amacı, farelerde Val Boomin'in neden olduğu alerjik hava yolu iltihabının seyri sırasında pulmoner dendritik hücre veya DC olgunlaşmasını ve göçünü değerlendirmektir. Bu, önce farelerin Val Boomin ile hassaslaştırılması, ardından uygun etiketli Val Boomin ile hava yolu zorluğu ile gerçekleştirilir. Daha sonra akciğer ve mediastinal lenf düğümleri toplanır.

Son olarak akciğer ve lenf bezi dokularından tek hücreli bir süspansiyon hazırlanır. Sonuç olarak, FITC Val Boomin challenge'ından sonra mediastinal lenf nodunda bulunan Pullman okuma dendritik hücrelerinin olgunlaşma durumu ve mutlak hücre sayısı, akış sitometrik analizi ile değerlendirilebilir. Bu yöntem, dendretik hücrelerin olgunlaşıp olgunlaşmadığı, antijen maruziyetinin düştüğü ve derecelendirme lenf düğümlerine göç edip etmedikleri gibi pulmoner immün yanıtlarla ilgili temel soruları yanıtlamamıza yardımcı olabilir.

Ve eğer göç ederlerse, o zaman göç oranı nedir? Girdap yaparken bir şap tüpüne bire bir oranında taze hazırlanmış Val Boomin solüsyonu Dropwise ekleyerek başlayın. Karışımı 30 dakika karıştırın ve ardından bir mililitrelik şırıngayı 0,2 mililitre karışımla doldurun.

Bir elinizin işaret parmağındaki baş parmağınızı kullanarak, kafatasının tabanına yakın boynun hurdası tarafından enjekte edilecek fareyi kavrayın. Daha sonra Val Boomin şap solüsyonunu diğer elinizle farenin periton boşluğuna enjekte edin. Şapta ikinci Val enjeksiyonundan yedi gün sonra, şap duyarlı bir hayvanda anestezi uygulanmış bir vali dik pozisyonda tutun ve ardından steril pipet uçları kullanarak 100 mikrolitre ve yeni hazırlanmış val in fxi solüsyonunu farenin NAS'ına damla damla

Bir mililitrelik şırıngaya 20 gauge kateter takarak başlayın. Daha sonra farenin ötenazisini onayladıktan sonra, fare trakeasını ortaya çıkarmak ve kanüle etmek için hayvanın göğüs boşluğunu boynuna kadar açın. Periferik kanda bulunan tüm kontamine alveolar makrofajların ve mononükleer hücrelerin çıkarıldığından emin olmak için akciğerleri lavaj yapmak ve kalbi doldurmak kesinlikle çok önemlidir.

Ve sonraki iki adımı dikkatli bir şekilde ve tabii ki sabit bir el ile gerçekleştirdiğinizden emin olun. Şimdi alt solunum yolunu durulamak ve hücreleri alveolar boşluklardan çıkarmak için kateterden üç kez EDTA ile buz gibi soğuk PBS uygulayın. Daha sonra 10 mililitrelik bir şırıngayı 20 gauge iğne ile taktıktan sonra, kalbin sağ ventrikülü yoluyla heparin içeren 10 mililitre PBS ile akciğerlere perfüze edin.

Akciğer damar sisteminden kalan kan hücrelerinin çıkarılması, akciğerler beyaza döndüğünde tamamlanmış sayılır. Daha sonra, mediastinal lenf düğümlerini çıkarın ve ayrı bir kaba koyun. Dokunun ışığa maruz kalmasını en aza indirerek uygun su vermeyi önleyin.

Daha sonra perfüze edilmiş akciğerleri inceleyin ve akciğerleri makasla kıyın bir Petri kabına koyun. Daha sonra, akciğer dokusunu mililitre kollajenaz D başına 250 birim içinde 37 santigrat derecede sindirin.25 dakikalık inkübasyondan sonra, kollajenaz aktivitesini durdurmak için karışıma beş dakika boyunca EDTA ekleyin. Son olarak, sindirilmiş akciğerlerin parçalarını 100 mikronluk bir hücre süzgecinden geçirin ve eritrositleri hipotonik tamponla yerleştirin.

Mediastinal lenf düğümlerini ince iğneler kullanarak ayırın ve akciğerler için gösterildiği gibi kollajenaz ile sindirin, ardından dokuyu intraperitoneal, sensitizasyon ve hava yolunu takiben bir hücre süzgeci ile süzün. Val meydan okuyor. İnflamatuar hücrelerin varlığı kontrolden temsili akciğer kesitlerinde hemat, toin ve eozin boyaması ile değerlendirilebilir.

Tuzlu su ile tedavi edilen hayvanlar, dokular üstteki grafikte gösterildiği gibi iltihaptan yoksundur. Buna karşılık, enflamatuar hücreler, altta görülebileceği gibi, duyarlı ve zorlu hayvanlarda Val'den akciğer bölümleri boyunca yaygındır. Grafik, periyodik asit kayması boyası, bu alttaki grafikte gösterildiği gibi mukus üretimini değerlendirmek için kullanılabilir.

Duyarlı farelerde Val'deki meydan okumayı takiben hava yolu alerjik inflamasyonunun indüksiyonu, mukus varlığı ile doğrulanır. Tersine, mukus üretiminin tamamen yokluğu kontrol ile sergilenir. Serum fizyolojik ile tedavi edilen fareler, meydan okuyan pulmoner dc'lerde val'i takiben üst grafikte gösterildiği gibi olgunlaşmaya ve ardından boşalan lenf düğümlerine göç etmeye uğrar.

Burada, fare mediastinal lenf nodlarının temsili bir analizi, tuzlu su ile tedavi edilen farelere kıyasla Val Boomin ile duyarlı ve zorlanmış hayvanlarda CD 11 C pozitif hücrelerin oranında mütevazı fakat tutarlı bir artış tespit edildiğini göstermektedir. Ayrıca, CD 11 C pozitif CD 11 B pozitif Val Boomin'in mutlak hücre sayısının analizi, duyarlı ve zorlanmış farelerde Val'in mediastinal lenf düğümlerinden C pozitif hücrelere uyar, salinle tedavi edilen hayvanlara kıyasla zorlanmış farelerde DC sayılarında birkaç kat daha yüksek bir artış meydana geldiğini göstermektedir. Bu videoyu izledikten sonra, pulmoner dendritik hücre olgunlaşmasını ve göçünü analiz etme tekniğimizi gerçekten iyi anlamış olmalıyız.

Ve bu tekniği gerçekten anladığınızda, diğer deneysel faktörlerin yanı sıra diğer patojenlere karşı pulmoner dendritik hücre tepkilerini değerlendirmek için onu değiştirmeye devam edebilirsiniz.