Name: Alerjik Havayolu Enflamasyon sırasındaki solunum Dendritik Hücre olgunlaşması ve Göç Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-23T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: Öğrenin farelerde ovalbumin ile indüklenen alerjik havayolu enflamasyonu sırasında pulmoner dendritik hücre olgunlaşması ve lenf nodlarına göçünü değerlendirme yöntemini. Akış sitometrisi ile immün yanıtları inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma Dr Jim Hu CIHR ve CF Kanada hibe ve CF Kanada tarafından Rahul Kushwah verilen bir Doktora Öğrenciliği tarafından finanse edildi.

1. Ovalbumin fareler duyarlılaştırılması <ol><li> OVA (evre V; Sigma, MO) solüsyonu hazırlamak 1 mg / ml &#39;lik bir konsantrasyonda steril PBS içinde (solüsyonu -80 ° C&#39;de saklanabilir.) </li><li> OVA&#39;ya Alum karışım hazırlamak için, bir tüp içinde Alum almak ve 1:1 oranında, tüp vorteks sırasında bir çözeltisine damla damla tarzda OVA solüsyonu ilave edin. 30 dakika boyunca karışımı ilave edip karıştırdıktan sonra hemen kullanın. </li><li> Bir 1 ml şırınga kullanılarak, fare periton içine karışımı 0.2 ml enjekte ve 2 hafta sonra tekrar enjekte tekrarlanır. </li></ol> 2. FITC Etiketli ovalbumin fareler intranazal Mücadelesi <ol><li> OVA-Şap, ikinci enjeksiyon sonrası 7 gün, fareler OVA-FITC intranazal meydan hazırız. </li><li> -80 Az 1 mg / ml ve alikotları depolayan bir konsantrasyonda steril PBS kullanılarak OVA-FITC (Sigma) solüsyonu ° C&#39;de hazırlamak </li><li> Bir 50 ml Falcon borusunun alt kısmında ve kimyasal bir saat içinde, bir steril gazlı yerleştirmekOOD, gazlı bez üzerine Aerrane 5 ml ekleyin. Farelerde uyuşturmak için, yaklaşık 5-10 saniye tüp içine hayvan yönlendirir. </li><li> Dik konumda ve steril pipet uçları, bir drop-bilge moda farelerin burun üzerine OVA-FITC solüsyonu 100 ul kullanarak anestezi hayvan tutun. </li><li> Sonraki iki gün OVA-FITC intranazal meydan tekrarlayın. </li></ol> 3. Tek hücreli akciğer gelen Süspansiyon ve boşaltılması Lenf düğümleri hazırlanması <ol><li> Euthanyl intraperitoneal kullanarak fareler kurban. </li><li> DC analizi karmaşıklaştırabilir makrofaj kirlenme, azaltmak amacıyla, akciğer lavaj gerçekleştirilir. Akciğerler lavaj için, fare tracheas kısaca bir kateter ve şırınga ile maruz kalan ve deliklidir; 5 mM EDTA ile buz PBS kullanarak, alt solunum yolu alveoler boşluklar hücreleri kaldırmak için 3 defa durulanır. </li><li> 10 U / ml hepar içeren PBS ile 10 ml akciğerler perfüzekalp sağ ventrikül vasıtasıyla in, akciğer vasküler kan hücreleri çıkarmak için kullanılır. Akciğerlere kan hücrelerinin çoğu çıkarılması göstergesi, beyaza kadar perfüzyonsintigrafisiyle gerçekleştirin. Bu periferik kandan kirlenmesine hücreleri çıkarmak için özellikle önemlidir. </li><li> Ciğerlerini inceleyin ve mediastinal lenf nodu (MLN) çıkarın ve ayrı bir kapta, lenf düğümleri yerleştirin. (FITC floresans söndürme engellemek için ışığa dokuların maruziyeti en aza indirmek için deneyin.) </li><li> Bir Petri tabağına yerleştirin akciğerler ve makas kullanılarak kıyma. Sonraki 37 azından 25 dakika süreyle akciğerler sindirimi ° kollajenaz aktivitesi durdurmak için bir sonraki 5 dakika boyunca 250 U / ml Kollajenaz D (Roche) ve eklentinin EDTA (10 mM nihai konsantrasyon) ile C. </li><li> 100 mikron hücre süzgecinden sindirmek akciğerlerin parçaları Pass ve eritrositler kaldırmak için hipotonik parçalanma. Tek bir hücre süspansiyonu dendritik daha fazla analiz için hazırdır. </li><li> MLN, t tek bir hücre süspansiyonu hazırlamak içinbir hücre süzgecinden süzme ardından yukarıda tarif edildiği gibi kollajenaz ince iğneler ve sindirim kullanılarak MLN kolaylığı. </li></ol> 4. DC için boyama Olgunlaşma / göçün değerlendirilmesi için Belirteçleri <ol><li> Akciğerlerde DC&#39;ler belirlemek için, boyama CD11c ve CD11b için yapılır. Ayrıca olgunlaşması için değerlendirmek üzere, boyama DC&#39;ler olgunlaşma tabi olarak regüle edilir CD86 ve CD80 için yapılır. MLN içinde CD11c + CD11b + OVA-FITC + hücreleri akciğerlerden OVA havayolu meydan yanıt MLN göç akciğer DC&#39;leri olarak tanımlanır. </li><li> 10 x 10 6 hücre / ml FACS tampon içinde (% 1 FBS ve 1 mM EDTA ile PBS) ve FACS boyanması için hücre süspansiyonu / tüp alikotu 150 ul&#39;lik bir konsantrasyonda hücreleri askıya. Akciğer DC&#39;ler belirlenmesi için, takip lekeleri ihtiyaç vardır: boyanmamış kontrol (OVA-FITC maruz kalmayan farelerin Akciğer hücreleri), OVA-FITC kontrolü, CD11c tek kontrol CD11b tek kontrol CD11b+ CD11c + çift kumanda, CD11b + OVA-FITC + çift kumanda, CD11c + OVA-FITC + çift kumanda, MHC II OVA-FITC + CD11c + CD11b + MHCII için boyanan tek bir kontrol, CD86 tek kontrol, CD80 tek kontrol ve örnek + , OVA-FITC + CD11c + CD11b + CD86 + ve OVA-FITC + CD11c + CD11b + CD80 +. </li><li> DC göç değerlendirmek MLN gelen tek hücre süspansiyonu mutlak hücre sayımı gerçekleştirmek ve daha sonra aşağıdaki tüpler hazırlamak için: CD11c boyanmamış kontrol (OVA-FITC maruz kalmayan farelerin MLN hücreleri), OVA-FITC kontrolü, + tek kontrolü, CD11b + çift ​​kumanda, CD11b + OVA-FITC + çift kumanda, CD11c + OVA-FITC + çift kontrol ve CD11c + CD11b + OVA-FITC + örnekleri. </li></ol> 5.. Temsilcisi Sonuçlar Havayolu alerjik enflamasyon indüklemek için intraperitoneal sensitizasyon için gereken zaman noktalarında önemlidir ve Şekil 1 de tasvir edildiği gibi yapılmalıdır. Hava yolu alerjik enflamasyon indüksiyonu teyit etmek için, intraperitoneal hassasiyetine ve hava yolu OVA meydan takiben, bazı fareler feda edilebilir ve Şekil 2 &#39;de gösterildiği gibi histolojik analiz akciğer bölümler üzerinde gerçekleştirilebilir. Inflamatuar hücre varlığı Hematoksilen &amp; Eosin boyama tarafından teyit edilebilir (Şekil 2A) ve mukus üretiminin varlığı Periyodik asit-Schiff boyası (Şekil 2B) tarafından değerlendirilebilir. Toplamda bu OVA-Duyarlı farelerin 8 OVA karşılaştırmadan sonra hava yolu allerjik inflamasyonun indüksiyonu onaylayacaktır. Bunun aksine, Tuzlu muamele farelerin akciğer bölümler herhangi bir mukus üretimi yokluğu ile birlikte herhangi bir iltihap serbest olması beklenmektedir. Ayrıca, aşağıdaki OVA meydan, akciğer DC&#39;leri unde<html> rgo olgunlaşma ve lenf düğümlerine sonraki göç. Duyarlı ve OVA ile meydan farelerin lenf nodu (MLN) içinde CD11c + hücrelerin analizi tuzlu uygulanan farelerin (Şekil 3A) göre CD11c + hücrelerinin yüksek oranda göstermesi bekleniyor. Ayrıca, CD11c + CD11b mutlak hücre sayısının analizi OVA-duyarlı ve meydan farelerin MLN in + OVA-FITC + hücreler, (birkaç kat daha yüksek yani) anlamlı derecede yüksek bir sayı göstermek için bekleniyor tuzlu tedavi edilen farelerde (gelen meslektaşlarıyla Şekil 3B). <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/4014/4014fig1.jpg" /> Şekil 1. Ovalbumin indüksiyon (OVA) FITC etiketli ovalbumin (OVA-FITC) ile havayolu meydan birlikte farelerde neden olduğu alerjik hava yolu inflamasyonu için deneysel protokol. fig2.jpg &quot;/&gt; OVA havayolu meydan takip Şekil 2. OVA sensitizasyon (A) gösterilen akciğer bölümlerin Hematoksilen &amp; Eosin boyama ile belirlenen hava yolu allerjik inflamasyonun indüksiyonu yol açar ve aynı zamanda akciğer Periyodik Asit Schiff boyası ile belirlenen solunum yollarındaki mukus üretimini azalır (B) &#39;de gösterildiği gibi bölümler. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/4014/4014fig3.jpg" /> Şekil 3. OVA-FITC meydan akciğerlerden lenf nodu (MLN) DC göç indükler. (A) Flow sitometri parselleri kontrol veya OVA-sensitize farelerin MLN içinde CD11c + hücre oranları resmediyor. (B) serum fizyolojik veya OVA-sensitize farelerin MLN içinde CD11c + CD11b + OVA-FITC + hücrelerin mutlak sayıları. * P &lt;0.05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4014/4014fig3large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> .

<ol><li>Kushwah, R., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+dendritic+cells+in+the+induction+of+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biosci%22%5BJournal%5D)">Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells.</a> Cell Biosci. 20, (2011).</li>
<li>Kushwah, R., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complexity+of+dendritic+cell+subsets+and+their+function+in+the+host+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Complexity of dendritic cell subsets and their function in the host immune system.</a> Immunology. 133, 409-419 (2011).</li>
<li>Lambrecht, B. N., Hammad, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taking+our+breath+away%3A+dendritic+cells+in+the+pathogenesis+of+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Taking our breath away: dendritic cells in the pathogenesis of asthma.</a> Nat Rev Immunol. 3, 994-1003 (2003).</li>
<li>Hammad, H., Lambrecht, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+and+epithelial+cells%3A+linking+innate+and+adaptive+immunity+in+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells and epithelial cells: linking innate and adaptive immunity in asthma.</a> Nat. Rev. Immunol. 8, 193-204 (2008).</li>
<li>Lloyd, C. M., Murdoch, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerizing+allergic+responses+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tolerizing allergic responses in the lung.</a> Mucosal. Immunol. 3, 334-344 (2010).</li>
<li>Herz, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relevance+of+murine+animal+models+to+study+the+development+of+allergic+bronchial+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The relevance of murine animal models to study the development of allergic bronchial asthma.</a> Immunol. Cell Biol. 74, 209-217 (1038).</li>
<li>Herz, U., Lumpp, U., Daser, A., Gelfand, E. W., Renz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+animal+models+to+study+the+central+role+of+T+cells+in+immediate-type+hypersensitivity+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Exp.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Murine animal models to study the central role of T cells in immediate-type hypersensitivity responses.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 409, 25-32 (1996).</li>
<li>Nakae, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TNF+can+contribute+to+multiple+features+of+ovalbumin-induced+allergic+inflammation+of+the+airways+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Allergy+Clin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">TNF can contribute to multiple features of ovalbumin-induced allergic inflammation of the airways in mice.</a> J. Allergy Clin. Immunol. 119, 680-686 (2007).</li>
<li>Guth, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+environment+determines+unique+phenotype+of+alveolar+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Lung environment determines unique phenotype of alveolar macrophages.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 296, L936-L946 (2009).</li>
<li>Kushwah, R., Cao, H., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+pulmonary+T+cell+response+to+helper-dependent+adenoviral+vectors+following+intranasal+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Characterization of pulmonary T cell response to helper-dependent adenoviral vectors following intranasal delivery.</a> J. Immunol. 180, 4098-4108 (2008).</li>
<li>Kushwah, R., Oliver, J. R., Zhang, J., Siminovitch, K. A., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptotic+dendritic+cells+induce+tolerance+in+mice+through+suppression+of+dendritic+cell+maturation+and+induction+of+antigen-specific+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Apoptotic dendritic cells induce tolerance in mice through suppression of dendritic cell maturation and induction of antigen-specific regulatory T cells.</a> J. Immunol. 183, 7104-7118 (2009).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Burada sunulan yöntemi havayolu meydan için OVA-FITC teslim dayalı akciğer DC&#39;leri, analiz için bir akış sitometri tabanlı bir yaklaşım sunuyor. Bu OVA-FITC sürebilir ve izlenen bu nedenle DC nüfus, etkili OVA bağlı alerjik hava yolu inflamasyonu sırasında hava yolu bağışıklık yanıtı katılıyor olanlar akciğer DC&#39;leri, seçici izleme sağlar. Kontrolü farelerde, allerjik hava yolu inflamasyonu yokluğunda, MLN tespit göçmen DC&#39;lerin numaraları (OVA-FITC + DC) önemli bir artışla sonuçlanan alerjik hava yolu infla...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Ovalbumin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5503 </td></tr><tr><td> Şap </td><td> Thermo Scientific </td><td> 77161 </td></tr><tr><td> OVA-FITC </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A9771 </td></tr><tr><td> Kollajenaz D </td><td> Roche </td><td> 11088858001 </td></tr><tr><td> Antikorlar </td><td> E-Bioscience </td><td></td></tr></tbody></table>

alerjik havayolu enflamasyon sırasındaki solunum dendritik hücre olgunlaşması ve göç analizi

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

Dendritik hücreler (DC) antijen-spesifik T hücreleri aktive ederek adaptif immün yanıtın başlatılması dahil anahtar oyuncular vardır. DC&#39;ler kararlı periferik dokularda bulunur, ancak antijen uyarılara yanıt olarak, DC&#39;lerin antijen kadar sürebilir ve hızla 1,2 antijene karşı T hücre yanıtı başlatır lenf düğümlerine göç ederler. Buna ek olarak, dendritik da otoimmün yanı sıra alerjik bağışıklık yanıtı 3 başlatıcı önemli bir rol oynamaktadır. DC&#39;ler akciğer çevre 4 ortamda hoşgörü immün yanıt ve indüksiyon hem başlamasında önemli bir rol oynamaktadır. Akciğer çevre antijenleri 5 geniş bir dizi maruz kalma nedeniyle, büyük ölçüde tolerogenic olduğunu. Bununla birlikte, bazı kişiler alerji ve astım indüksiyon yol açar toleransı bir ara vardır. Bu çalışmada, hava yolu DC olgunlaşması ve mig izlemek için kullanılabilecek bir strateji tanımlamaksensitizasyon için kullanılan antijene karşı tepki olarak oranı. Havayolu DC olgunlaşma ve göç ölçümü hava yolu allerjik inflamasyon sırasında bağışıklık yanıtının kinetiği değerlendirmesi için olanak sağlar ve ayrıca altta yatan mekanizmalarıyla birlikte izleyen bağışıklık yanıtının büyüklüğünü anlamakta yardımcı olur. Bizim strateji duyarlaştırıcı ajan olarak ovalbumin kullanımına dayanmaktadır. Ovalbumin bağlı allerjik astım solunum yolu eozinofili, akciğer iltihabı ve astım 6,7 sırasında bulunan yüksek IgE düzeyleri yeniden üretmek için yaygın olarak kullanılan bir modeldir. Sensitizasyon sonra, farelerin alımı ovalbumin havayolu DC&#39;lerin özel etiketleme sağlar FITC etiketli ovalbumin intranazal teslimat, karşı karşıya gelmekte. Sonraki birkaç DC özel işaretlerini kullanarak, bu DC&#39;ler olgunlaşmasını değerlendirmek ve aynı zamanda akış sitometri kullanılarak lenf düğümlerine göç değerlendirebilir.

Biz ovalbumin bağlı alerjik hava yolu inflamasyonu ayarı ovalbumin yanıt olarak pulmoner dendritik hücrelerin olgunlaşma ve göç izlemek için bir strateji tanımlamak. Bu strateji, enfeksiyon ayarlarında pulmoner dendritik hücreler göç değerlendirmek için modifiye edilebilir.

Alerjik Havayolu Enflamasyon sırasındaki solunum Dendritik Hücre olgunlaşması ve Göç Analizi

Dendritik hücreler (DH'ler), antijene özgü T hücrelerini aktive ederek adaptif immün yanıtın başlatılmasında yer alan temel oyunculardır. DH'ler ... içerisinde bulunur.

Bu prosedürün amacı, farelerde Val Boomin ile indüklenen alerjik havayolu inflamasyonu seyri sırasında pulmoner dendritik hücre veya DC maturasyonunu ve migrasyonunu değerlendirmektir. Bu işlem, öncelikle farelerin Val Boomin ile sensitize edilmesi ve ardından fitsy etiketli Val Boomin ile havayolu challenge uygulanmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, akciğer ve mediastinal lenf düğümleri toplanır.Son olarak, akciğer ve lenf düğümü dokularından tek hücre süspansiyonu hazırlanır. Nihayetinde, FITC Val Boomin challenge sonrası mediastinal lenf düğümünde bulunan pulmoner dendritik hücrelerin olgunlaşma durumu ve mutlak hücre sayısı akış sitometrisi analizi ile değerlendirilebilir. Bu yöntem; dendritik hücrelerin olgunlaşıp olgunlaşmadığı, antijene maruz kalma durumu ve drenaj lenf düğümlerine göç edip etmedikleri gibi pulmoner immün yanıtlarla ilgili temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir.Ve eğer göç ederlerse, göç hızının ne olduğu belirlenir. Bir tüp içindeki alum çözeltisine, vortexleyerek, taze hazırlanmış Val Boomin çözeltisini birer birer oranında damla damla ekleyerek başlayın. Karışımı 30 dakika boyunca karıştırın ve ardından bir mililitrelik şırıngayı karışımın 0,2 m

analysis-pulmonary-dendritic-cell-maturation-migration-during

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Fare akciğer dendritik hücreler yüksek oranda saflaştırılmış açıklanmıştır. Özgül ağırlık, geleneksel dendritik hücre alt izolasyon verilir.

Fare Akciğer Dendritik Hücrelerinin İzolasyonu

İnsanlardaki dendritik hücreler (DC'ler) dahil olmak üzere akciğerde yerleşik bağışıklık hücreleri, solunan patojenlere ve alerjenlere karşı savunma için kritik öneme sahiptir. Bununla birlikte, insan akciğer dokusunun kıtlığı nedeniyle, çalışmalar sınırlıdır. Bu çalışma, immünohistokimya ve akış sitometrisi kullanarak akciğer DC'lerini incelemek için insan mukozal endobronşiyal biyopsilerini işlemek için protokoller sunmaktadır.

İmünohistokimya ve Akım Sitometri Kullanımı Endobronşiyal Biyopsilerinde Mekansal Dağılımı ve Fenotipik Kimlik: İnsan Akciğer dendritik hücrelerin

Bu hassas kesim Akciğer dilimleri (PCLS) üretilmesi ve akciğerde çeşitli immün hücre tipleri lokalizasyonunu görselleştirmek için bunları immünolojik boyama için bir yöntem tarif eder. Bizim protokol, çeşitli koşullar altında konum ve birçok farklı hücre tiplerinin fonksiyonunu görselleştirmek için uzatılabilir.

Hassas kesimli Canlı Pulmoner Dendritik Hücreler Visualize&#39;a Fare Akciğer Dilimleri

Burada, geliştirmek ve tolerogenic dendritik hücreler (TolDCs) karakterize ve onların immunotherapeutic yardımcı programı değerlendirmek için bir protokol mevcut.

Geliştirme ve işlevsel fare Tolerogenic dendritik hücrelerin karakterizasyonu

Çift-odası pletismografisi tarafından bilinçli farelerde solunum işlevin sonucunu önerilen yordamları ayrıntılı bir açıklama sağlamak için mevcut makale hedefidir.

Solunum fonksiyon çift-odası pletismografisi tarafından bilinçli farelerde değerlendirilmesi

Burada tanıtılan Protokolü içinde vivo inflamatuar koşullar altında birincil insan lenfosit akciğer izleme kapasitesini karakterizasyonu sağlar. Alerjik iltihap bir fare modeli adoptively transfer edilen insan bağışıklık hücrelerinin pulmoner infiltrasyon görüntüsü ve kimyasal olarak temizlenen Akciğer doku ışık sayfalık Floresans mikroskobu tarafından sayılabilir.

Akciğer yolu bulabilen insan lenfosit içinde deneysel bir alerjik iltihap ışık sayfalık mikroskobu üzerinde dayalı, Vivo modeli görüntüleme gelişmiş

Bu protokolde lenfositler, alt odadan gözenekli bir zarla ayrılan bir transmigration sisteminin üst odasına yerleştirilir. Keokin alt hazneye eklenir, bu da bir kemokin gradyan boyunca aktif göçe neden olur. 48 saat sonra, lenfositler transmigration quantitate için her iki odada sayılır.

Ex Vivo Transmigration Sisteminde Lenfosit Göçünün Değerlendirilmesi

Bu protokol, iskemik inmenin bir murin modeli olan geçici orta serebral arter tıkanıklığını takiben pulmoner ortamda immün hücre kompozisyonu, sitokin profili ve kemokin profilindeki değişiklikleri tanımlamak için flow sitometrinin kullanımını açıklamaktadır.

Pulmoner Ortamda İmmün Hücrelerin ve Proinflamatuar Mediatörlerin Karakterizasyonu

Burada , in vitro DC farklılaşması için stabil nakavt hücre hatları elde etmek için shRNA'nın lentiviral transdüksiyonunu kullanarak dendritik hücrenin (DC) gelişiminde rol oynayan potansiyel transkripsiyon faktörlerini taramak için bir protokol sunuyoruz.

Hematopoetik Kök ve Progenitör Hücre Hattı In vitrounda Kısa Saç Tokası RNA Aracılı Gen Knockdown ile Dendritik Hücre Gelişiminin İncelenmesi Çalışması

Bu çalışmada, murin solunum sisteminin immün popülasyonlarını izole etmek için etkili ve tekrarlanabilir bir protokol sunuyoruz. Ayrıca, 9 renk tabanlı bir akış sitometri paneli kullanarak, sağlıklı farelerin akciğerlerinde bulunan tüm doğuştan gelen ve adaptif bağışıklık hücrelerinin tanımlanması için bir yöntem sunuyoruz.

Murin Akciğerinin Doğuştan Gelen ve Adaptif İmmün Hücrelerinin Tanımlanması için Akım Sitometrik Analizi

Öğrenin farelerde ovalbumin ile indüklenen alerjik havayolu enflamasyonu sırasında pulmoner dendritik hücre olgunlaşması ve lenf nodlarına göçünü değerlendirme yöntemini. Akış sitometrisi ile immün yanıtları inceleyin.

Alerjik Havayolu Enflamasyon sırasındaki solunum Dendritik Hücre olgunlaşması ve Göç Analizi

Daha fazla video keşfet