Name: Rat splenositlerin T Hücre Büyüme Faktörü hazırlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-31T22:24:33.000+00:00
Duration: 18 min 27 s
Description: Öğrenin, sıçan splenositlerinden T hücre büyüme faktörü hazırlama yöntemini. Concanavalin A ile uyarılmış mononükleer hücrelerden sitokin üretimi ve TCGF elde edilmesi sürecini keşfedin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li> Lewis sıçan dalak (160-200g arasında fareler en iyi) ele alalım. Bir hücre süzgeç kullanarak PBS + antibiyotikler (PBS-PS) içeren bir petri buz Dilacerate. 50 ml&#39;lik bir tüp içinde koyun. PBS-PS ile doldurun. </li><li> 4 10 dakika Spin ° C pelet hücreleri. </li><li> Hücreler iki kez yıkayın. </li><li> Pelet NH 4 Cl 0.15 M (dalak başına 5 ml) tekrar Eritrositler lyse buz üzerinde 3 dakika süreyle bir pipetlemeyin yavaşça ve sürekli karıştırın. Orta tüp doldurun. </li><li> 4 10 dakika Spin ° C pelet hücreleri. </li><li> Hücreler iki kez yıkayın. </li><li> Hücreleri saymak. Bir sıçan dalak 200-250 milyon hücre verir. </li><li> Tam orta ml başına 2 milyon tohum hücreleri: 75 cm 2 şişeyi başına 50 ml. </li><li> Inkübatörde 48 saat boyunca büyümesini sağlar. </li><li> Pelet hücreleri Spin 15 dakika 4 ° C. </li><li> Süpernatantı toplamak; hücrelerin atın. </li><li> 15 mg / ml metil mannoside süpernatantı ekleyin. Iyice karıştırınız. </li><li> Filtre (0.2 mm) </li><li> -20 ° C&#39;de kısım ve mağaza Gerekirse 10 gün, 4 ° C&#39;de muhafaza edilebilir. </li></ol>

<ol><li>Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+blocking+of+voltage-gated+K%2B+channels+treats+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+inhibits+T-cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation.</a> J. Immunol. 166, 936-944 (2001).</li>
<li>Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+blockade+of+T+lymphocyte+K%2B+channels+ameliorates+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%2C+a+model+for+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad%22%5BJournal%5D)">Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis.</a> Proc. Natl. Acad. 98, 13942-13947 (2001).</li>
<li>Mor, F., Cohen, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propagation+of+Lewis+rat+encephalitogenic+T+cell+lines%3A+T-cell-growth-factor+is+superior+to+recombinant+IL-2%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Propagation of Lewis rat encephalitogenic T cell lines: T-cell-growth-factor is superior to recombinant IL-2.</a> J. Neuroimmunol. 123, 76-82 (2002).</li>
</ol>

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Düzenli olarak naif sıçanlarda serum ve thymi in vitro Lewis sıçan T hücre hatları teşvik etmek için hasat bu gerginlik euthanize beri Lewis sıçan splenositlerin TCGF hazırlar. Bu TCGF diğer sıçan suşları T hücre hatlarının büyüme ve hayatta kalma teşvik etmek için kullanılabilir. TCGF sıçan diğer suşları hazırlanabilir.

1 şişe PSG; 5 ml RPMI vitaminler; 5 ml sodyum piruvat; 5 ml non-esansiyel amino asitler, 50 UM% 10 FCS: tam bir kültür ortamı, RPMI 1640 ve steril filtre 500 ml şişe için aşağıdaki eklemek hazırlamak için beta-mercaptoethanol; 2 ug / ml Concanavalin A.

rat splenositlerin t hücre büyüme faktörü hazırlanması

Preparing T Cell Growth Factor from Rat Splenocytes

Hücre genişleme 1,2 evreleri ayrılmış antijen-bağlı aktivasyon kültür antijen spesifik T hücre hatları veya klonlar Bakım mermi gerektirir. IL-2, genişleme aşamasında kültür ortamı eklenmesi hücre ölümü önlemek için gerekli ve kısa vadeli T hücre hatları korumak için yeterli ama Th1 kutuplaşma 3 artış görülmüştür . Sitokinlerin bir karışımını içeren T hücre büyüme faktörü (TCGF) IL-2 Yedek interlökin 2 3 in vitro uzun vadeli T hücre hatlarının korunmasında daha etkili. Ayrıca, laboratuvarda büyük miktarlarda TCGF kolayca hazırlanır ve rekombinant interlökin 2 çok daha ucuz olabilir. Burada, sıçan splenocyte kültür süpernatantlar TCGF nasıl hazırlanacağını gösteriyor. Bu işlem için, biz, timus ve kan toplama için ötenazi naif Lewis sıçan dalak hasat. Biz kültür ortamında dalak, dalak tek hücre süspansiyonları hazırlamak, kırmızı kan hücrelerinin ozmotik şok lyze ve tohum. Concanavalin A, non-selektif olarak sitokinlerin üretimini indükleyen, tüm sıçan T lenfositleri aktive olduğunu mitojenle hücreleri uyarılır. Kültür supernantant andexcess Concanavalin 48 saat sonra toplanan bir TCGF eklendi olacak T hücre hatları aktive önlemek için alfa metil mannoside bağlıdır. TCGF sonra, steril filtrelenmiş aliquoted ve -20 ° C&#39;de saklanır.

Biz, antijen-spesifik sıçan T lenfosit hatları in vitro genişlemesi için kullanılan T hücre büyüme faktörü hazırlık açıklar.

Rat splenositlerin T Hücre Büyüme Faktörü hazırlanması

Antijen spesifik T hücresi hatlarının veya klonlarının kültürde sürdürülmesi, hücre genişleme fazları ile ayrılmış antijen indüklü aktivasyon döngüleri gerektirir 1,2. ...

Merhaba, ben Christine Beaton. California Üniversitesi Irvine kampüsündeki Fizyoloji ve Biyofizik Bölümü'nde, George Chen'in laboratuvarında araştırma asistanıyım. Önümüzdeki iki gün boyunca size, T hücresi büyüme faktörü anlamına gelen TCGF'nin nasıl hazırlanacağını göstereceğim.Günlük hücre kültürlerimizde, kültür ortamındaki sitokinlerin bileşimi hakkında kesin bir bilgiye ihtiyaç duymadığımız durumlarda, T hücrelerinin genişlemesine yardımcı olacak gerekli sitokinleri içeren, dalak hücre kültüründen elde edilen bir süpernatant olan T-hücre büyüme faktörünü (TCGF) kullanırız. TCGF'yi hazırlama yöntemimiz şöyledir: Sağlıklı Lewis sıçanları sakrifiye edildiğinde dalaklarını alır, tek hücre süspansiyonu hazırlar, eritroliz yoluyla eritrositlerden kurtulur ve ardından mononükleer hücreleri, T hücrelerini büyümeleri için gerekli tüm sitokinleri üretmeye teşvik edecek olan konkanavalin A ile stimüle ederiz. TCGF üretmek için hücreleri aktive etmemiz gerekir.İşlem şu şekilde gerçekleşir: Hücre kültürümüze, kısaltılmış adıyla Con A olarak bilinen lectin concanavalin A ekleyeceğiz. Con A'yı hücre kültürümüze eklediğimizde, glikozillenmiş T-hücre reseptör kompleksine bağlanacaktır ve aynı

preparing-t-cell-growth-factor-from-rat-splenocytes

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bryostatin 1/Ionomycin Yoluyla Tümör-reaktif T hücrelerinin ex vivo Genişleme ve Ortak Gama Zinciri Sitokinler Formülasyon

Bu video, floresan bazlı test yoluyla immünomodülatör bileşiklerin taranmasını göstermektedir. Yeşil floresan protein ekspresyon kasetlerine sahip transgenik fare kaynaklı T lenfositleri bu bileşiklerle tedavi edilir. Geliştirilmiş ve azaltılmış GFP sinyalleri, sırasıyla bileşiklerin uyarıcı ve inhibitör etkilerinin tanımlanmasını sağlar.

İmmünomodülatör Bileşiklerin Taranması için Tasarlanmış Lenfositlerin Kullanıldığı Floresan Bazlı Bir Test

Video, sitotoksik T lenfositlerinde veya CTL yanıtlarında immünodominansı test etmek için akış sitometrisi tabanlı bir testi göstermektedir. Enjekte edilen floresan hedef hücreler, immünojenik epitoplara karşılık gelen değişen floresan sergiler. Dalak sonrası toplama ve sınıflandırma, yüksek yoğunluklu floresan hücrelerde bir azalma olduğunu ortaya koyarak CTL yanıtlarında immünodominansı doğrular.

Sitotoksik T Lenfosit Yanıtlarında İmmün Baskınlığı Değerlendirmek İçin Bir Test

Kemoterapi ve radyasyon bakım standardının lenfodepletiktif ve immünomodülatör etkileri, T hücresi immünoterapisinin antitümör etkinliğini artırmak için kullanılabilir. EGFRvIII'e özgü kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücrelerinin üretilmesi ve bunların glioblastoma bakım standardı bağlamında uygulanması için bir yöntemin ana hatlarını çiziyoruz.

Bakım Glioblastoma Standardı Kapsamında Adoptif Tedavisi için CAR T hücrelerinin üretilmesi

Burada, hoşgörü Ekiminde teşvik ve içinde in vitro ve in vivo değerlendirmek için bir protokol farklı hücre alt kümeleri alıcıdan gelen süpresif kapasitesi ve donör veya eksojen antijenleri doğru alıcının bağışıklık durumu mevcut.

Vitro ve In Vivo değerlendirme T, B ve Myeloid hücrelerin süpresif etkinlik ve nakli alıcılardan gelen Humoral yanıt

Burada, hızlı ve tekrarlanarak ayarlanabilir boyutu, şekli ve yüzey proteini tanıtımı için T hücre genişletme ex vivo veya içinde vivo hücre (aAPC) sunan biyolojik ilham, biyolojik olarak parçalanabilen articifical antijen üretmek için bir iletişim kuralı mevcut .

Yönbağımlı polimer yapay antijen hücreleri CD8 + T Hücre aktivasyonu için sunma imalatı

Burada, sitotoksisik T lenfosit (CTL) yanıt olarak bir model tümör antijeni için immundominance muayene sağlayan bir akış sitometri tabanlı in vivo öldürme tahlil tarif. Biz bu zarif tahlil mekanik çalışmalar için ve ilaç etkinliği test için istihdam olabilir nasıl örnekler sunuyoruz.

Tümör-spesifik CD8+ T hücre tepkiler Immunodominance çalışması Için In vivo sitotoksisite assays terzilik

Bu protokolün amacı, canlı hücrelerdeki yüzey reseptör dinamiklerini dört boyutlu olarak görselleştirmek için Kafes Işık Sayfası Mikroskobu'nun nasıl kullanılacağını göstermektir. Burada CD4+ primer T hücrelerindeki T hücre reseptörleri gösterilmiştir.

Yüzey T-Hücre Reseptör Dinamiklerini Dört Boyutlu Olarak Kafes Işık Sayfası Mikroskobu Kullanarak Görselleştirme

Bu protokol, düzenleyici T hücrelerinin efektör T hücre çoğalması ve farklılaşması üzerindeki etkilerini araştırmak için in vitro bir ortak kültür stratejisi sunar.

In Vitro Düzenleyici T Hücrelerinin Fonksiyonel Analizi: Proliferasyon ve Farklılaşmaya Odaklanma

Bu video, gelişmekte olan serebral korteksin eksplantlar, büyüme faktörü ile kaplı boncuklar, hazırlanması ve yerleştirilmesi için iki yöntem gösteriyor. Bu boncuklar önbeyin eksplantlar sinir dokusu gibi gelişmekte olan mekansal sınırlı gen ekspresyonu ikna etmek için kullanılabilir. Yöntemleri Affi-Gel boncuk ve heparin akrilik boncuklar kullanarak verilmiştir.

Dorsal önbeyin eksplantlar Büyüme Faktörü-Kaplı Boncuk Yerleştirme

Öğrenin, sıçan splenositlerinden T hücre büyüme faktörü hazırlama yöntemini. Concanavalin A ile uyarılmış mononükleer hücrelerden sitokin üretimi ve TCGF elde edilmesi sürecini keşfedin.

Rat splenositlerin T Hücre Büyüme Faktörü hazırlanması

Daha fazla video keşfet