Name: Heterokaryon Oluşumu İki Yöntemleri HCV Sınırlayıcı Etkenler Discover (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-16T12:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 49 s
Description: Öğrenin, heterokaryon oluşumu kullanarak hepatit C virüsü sınırlayıcı etkenlerini tespit etme yöntemlerini. Bu teknikler, viral çoğalma döngüsünü ve hücre hatlarındaki kısıtlama faktörlerini incelemek için etkilidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz Takaji Wakita sırasıyla JFH1 ve J6CF izolatlar için Jens Bukh, minnettarız. Ayrıca biz Charles Huh-7.5 hücreler için Rice ve 9E10 antikor, E2-spesifik antikor CBH-23 Steven Foung ve Deneysel Viroloji, faydalı öneri ve tartışmalar için Twincore Bölümü tüm üyelerine teşekkür ediyorum.

<ol><li>Zhu, Q., Guo, J. T., Seeger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication+of+hepatitis+C+virus+subgenomes+in+nonhepatic+epithelial+and+mouse+hepatoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Replication of hepatitis C virus subgenomes in nonhepatic epithelial and mouse hepatoma cells.</a> J. Virol. 77, 9204-9210 (2003).</li>
<li>Kato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonhepatic+cell+lines+HeLa+and+293+support+efficient+replication+of+the+hepatitis+C+virus+genotype+2a+subgenomic+replicon%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Nonhepatic cell lines HeLa and 293 support efficient replication of the hepatitis C virus genotype 2a subgenomic replicon.</a> J. Virol. 79, 592-596 (2005).</li>
<li>Ali, S., Pellerin, C., Lamarre, D., Kukolj, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatitis+C+virus+subgenomic+replicons+in+the+human+embryonic+kidney+293+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Hepatitis C virus subgenomic replicons in the human embryonic kidney 293 cell line.</a> J. Virol. 78, 491-501 (2004).</li>
<li>Date, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genotype+2a+hepatitis+C+virus+subgenomic+replicon+can+replicate+in+HepG2+and+IMY-N9+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Genotype 2a hepatitis C virus subgenomic replicon can replicate in HepG2 and IMY-N9 cells.</a> J. Biol. Chem. 279, 22371-22376 (2004).</li>
<li>Chang, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication+of+hepatitis+C+virus+%28HCV%29+RNA+in+mouse+embryonic+fibroblasts%3A+protein+kinase+R+%28PKR%29-dependent+and+PKR-independent+mechanisms+for+controlling+HCV+RNA+replication+and+mediating+interferon+activities%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Replication of hepatitis C virus (HCV) RNA in mouse embryonic fibroblasts: protein kinase R (PKR)-dependent and PKR-independent mechanisms for controlling HCV RNA replication and mediating interferon activities.</a> J. Virol. 80, 7364-7374 (2006).</li>
<li>Zhong, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+hepatitis+C+virus+infection+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Robust hepatitis C virus infection in vitro.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 9294-9299 (2005).</li>
<li>Lindenbach, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+replication+of+hepatitis+C+virus+in+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Complete replication of hepatitis C virus in cell culture.</a> Science. 309, 623-626 (2005).</li>
<li>Wakita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+infectious+hepatitis+C+virus+in+tissue+culture+from+a+cloned+viral+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Production of infectious hepatitis C virus in tissue culture from a cloned viral genome.</a> Nat. Med. 11, 791-796 (2005).</li>
<li>Witteveldt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD81+is+dispensable+for+hepatitis+C+virus+cell-to-cell+transmission+in+hepatoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">CD81 is dispensable for hepatitis C virus cell-to-cell transmission in hepatoma cells.</a> J. Gen. Virol. 90, 48-58 (2009).</li>
<li>Bitzegeio, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+of+hepatitis+C+virus+to+mouse+CD81+permits+infection+of+mouse+cells+in+the+absence+of+human+entry+factors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Adaptation of hepatitis C virus to mouse CD81 permits infection of mouse cells in the absence of human entry factors.</a> PLoS Pathog. 6, e1000978(2010).</li>
<li>Lindemann, D., Goepfert, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+foamy+virus+envelope+glycoproteins%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Microbiol+Immunol%22%5BJournal%5D)">The foamy virus envelope glycoproteins.</a> Curr Top Microbiol Immunol. 277, 111-129 (2003).</li>
<li>Brohm, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+determinants+important+for+hepatitis+C+virus+p7+function+in+morphogenesis+by+using+trans-complementation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Characterization of determinants important for hepatitis C virus p7 function in morphogenesis by using trans-complementation.</a> J. Virol. 83, 11682-11693 (2009).</li>
<li>Steinmann, E., Brohm, C., Kallis, S., Bartenschlager, R., Pietschmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+trans-encapsidation+of+hepatitis+C+virus+RNAs+into+infectious+virus-like+particles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Efficient trans-encapsidation of hepatitis C virus RNAs into infectious virus-like particles.</a> J. Virol. 82, 7034-7046 (2008).</li>
<li>Koutsoudakis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+early+steps+of+hepatitis+C+virus+infection+by+using+luciferase+reporter+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Characterization of the early steps of hepatitis C virus infection by using luciferase reporter viruses.</a> J. Virol. 80, 5308-5320 (2006).</li>
<li>Frentzen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Completion+of+hepatitis+C+virus+replication+cycle+in+heterokaryons+excludes+dominant+restrictions+in+human+non-liver+and+mouse+liver+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Completion of hepatitis C virus replication cycle in heterokaryons excludes dominant restrictions in human non-liver and mouse liver cell lines.</a> PLoS Pathog. 7, e1002029(2011).</li>
<li>Lindemann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+particle-associated+glycoprotein+signal+peptide+essential+for+virus+maturation+and+infectivity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">A particle-associated glycoprotein signal peptide essential for virus maturation and infectivity.</a> J. Virol. 75, 5762-5771 (2001).</li>
<li>Blight, K. J., McKeating, J. A., Rice, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+permissive+cell+lines+for+subgenomic+and+genomic+hepatitis+C+virus+RNA+replication%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Highly permissive cell lines for subgenomic and genomic hepatitis C virus RNA replication.</a> J. Virol. 76, 13001-13014 (2002).</li>
</ol>

TP Biotest gelen danışmanlık ücreti aldı.

Biz HCV çoğaltma engel dominant negatif kısıtlamaların analizi için kültür hücreleri heterokaryon oluşumunu uyarmak için iki yöntem sunuyoruz. Bu prosedürler kullanılarak çeşitli insan olmayan karaciğer ve murin karaciğer hücre çizgileri baskın bir yapısal olarak ifade edilen veya virüs kaynaklı faktörü varlığında bırakıldı. Kısıtlama faktörler bulaşıcı döl HCV montaj ve salınımını önlemek eğer ilk testi öncelikle analiz eder. Bu durumda ambalaj hücreleri HCV replikon hücreleri için erimiş olduğundan, ambalaj hücrelerin...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Almanya </td><td> 41965-039 </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Almanya </td><td> 25030-024 </td></tr><tr><td> Olmayan amino asitler </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Almanya </td><td> 11140-035 </td></tr><tr><td> Penisilin / streptomisin </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Almanya </td><td> 15140-122 </td></tr><tr><td> Fetal buzağı serumu </td><td> PAA, Cölbe, Almanya </td><td> A15151 </td></tr><tr><td> α-E2 (CBH23) </td><td> nazik Steven Foung 10 tarafından sağlanan </td><td></td></tr><tr><td> ATP </td><td> Sigma, Steinheim, Almanya </td><td> A2833-106 </td></tr><tr><td> Glutatyon </td><td> Sigma, Steinheim, Almanya </td><td&gt; G4251-1G </td></tr><tr><td> Blasticidin </td><td> İnvivo Gen, San Diego, ABD </td><td> Ant-bl-1 </td></tr><tr><td> G418 (genetisin) </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Almanya </td><td> 11811-064 </td></tr><tr><td> Polietilen glikol-1500 </td><td> Roche, Mannheim, Almanya </td><td> 10783641001 </td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> Roth, Karlsruhe, Almanya </td><td> 0335.3 </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Roth, Karlsruhe, Almanya </td><td> 3051.2 </td></tr><tr><td> Keçi serumu </td><td> Sigma, Steinheim, Almanya </td><td> G9023-5ml </td></tr><tr><td> α-NS5A (9E10) </td><td> Nazik Charles Rice 7 tarafından sağlanan </td><td></td></tr><tr><td> DAPI (4 &#39;, 6&#39;-diamidino-2-fenilindol dihidroklorür) </td><td> Invitrogen </td><td> D1306 </td></tr><tr><td> Alexa-Fluor 546 - keçi anti-insan IgG </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Almanya </td><td> A21089 </td&gt; </tr><tr><td> Alexa-Fluor 488 - keçi anti-fare IgG </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Almanya </td><td> A10680 </td></tr><tr><td> Lipofektamin 2000 </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Almanya </td><td> 11668-019 </td></tr><tr><td> CellTracker CMTMR </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Almanya </td><td> C2927 </td></tr><tr><td> CellTracker CMFDA </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Almanya </td><td> C2925 </td></tr><tr><td> Fluoromount </td><td> Sigma, Steinheim, Almanya </td><td> F4680-25ml </td></tr><tr><td> Tüm diğer kimyasal maddeler </td><td> Roth, Karlsruhe, Almanya </td><td></td></tr><tr><td> Hücre kültürü malzemeleri </td><td> Sarstedt, Nümbrecht, Almanya </td><td></td></tr></tbody></table>

heterokaryon oluşumu İki yöntemleri hcv sınırlayıcı etkenler discover

Two Methods of Heterokaryon Formation to Discover HCV Restriction Factors

Hepatit C virüsü (HCV), insan ve şempanze sınırlı bir ana-aralığı ile hepatotropic virüstür. HCV RNA çoğaltma insan olmayan karaciğer ve fare hücre hatlarında gözlenmiştir rağmen, verimliliği çok düşük olduğunu ve HCV replikon kullanarak gerekli uzun vadeli seçim prosedürleri baskın antibiyotik seçilebilir işaretleri 1-5 ifade oluşturur. In vitro araştırma HCV nedenle virüs ömrü çevrimi ile virüs girişi ve tamamlanması için ılımlı insan hepatoma hücre çizgileri ile sınırlıdır. Dar türler tropizm HKH&#39;lerinin nedeniyle, tam HCV replikasyon siklusu 6-8 ayakta kullanılabilen bir bağışıklık küçük bir hayvan modeli yoktur. Fare kökenli örneğin insan olmayan hücrelerin HCV verimsiz çoğaltma olasılıkla önemli konak bağımlılık faktörleri ve / veya kısıtlama faktörlerin ifade genetik uyumsuzluk eksikliğinden kaynaklanmaktadır. Biz HCV yayılım baskın kısıtlama fa tarafından bastırılmış olup olmadığını araştırmaknon-hepatik dokulardan veya fare karaciğer hücre hatlarında edilen insan hücre dizileri ya da ctors. Bu amaçla, somatik hücre füzyonu dayanarak iki bağımsız koşullu trans-tümleme yöntemleri geliştirdi. Her iki durumda da, viral döngüsü tamamlanmasından heterokaryonlar de mümkündür. Sonuç olarak, bulaşıcı döl viral de novo üretiminin ölçülmesi ile tespit edilir başarılı bir trans-tümleme, baskın bir kısıtlama olmadığı gösterir. Spesifik olarak, bir lusiferaz transgeni taşıyan alt genomik HCV Replikon çok ılımlı insan hepatoma hücreleri (Ha-7,5 hücreleri) içine transfekte edildi. Daha sonra, bu hücreler kültürlendi ve co-HCV yapısal proteinler çekirdek, zarfı 1 ve 2 (E1 ve E2) ve yardımcı proteinler p7 ve NS2 eksprese eden çeşitli insan ve fare hücrelere kaynaşmıştır. Hücre füzyon polietilen-glikol (PEG) ile muamele ile başlatılmıştır koşuluyla, kültür bulaşıcı virüs pa serbestbir reseptör bağımlı bir tarzda naif hücreleri enfekte rticles. Hücreye girişi, RNA çeviri, çoğaltma ve virüs montaj dahil tam viral yaşam döngüsü baskın kısıtlamaların etkisini değerlendirmek için, biz, CD81 endojen ifade yoksun bir insan karaciğer hücre dizisi (Huh-7 Lunet N hücreler 9) yararlandı HCV temel bir giriş faktörü. Ektopik ifade edilen CD81 yokluğunda, bu hücrelerin HCV enfeksiyonu 10 esasen refrakter vardır. Daha da önemlisi, ortak kültüre ve insan CD81 ancak eksikliği en azından önemli bir başka hücreye girişi faktörü (örneğin SR-BI, CLDN1, OCLN) ifade hücreleri ile kaynaşmış, yalnızca ortaya çıkan heterokaryonlar enfeksiyonu için gerekli HCV giriş faktörlerin komple set gösterilecek. Bu nedenle, egemen kısıtlama faktörler HCV çoğaltma döngüsü tamamlanmasından bastırmak olmadığını analiz etmek, biz yukarıda belirtilen crit yerine fare ve insan kaynaklı çeşitli hücreleri Lunet N hücreleri eritilireria. Co-kültürlenmiş hücrelerde prototipi köpüksü virüs mutantı yüksek bir füzojenik Viral zarfın protein (PFV 11) ile transfekte edilmiş ve daha sonra bulaşıcı parçacıklar HCV (HCVcc) ile karşılaştırılan edildiğinde, bulaşıcı virüsün üretimini de novo gözlenmiştir. Bu HCV başarıyla böylece bu hücre hatları hakim kısıtlama faktörlerin ifadesi ortadan heterokaryonlar kendi çoğaltma döngüsü tamamlanmış olduğunu gösterir. Bu yeni şartlı trans-tümleme yöntemleri HCV-özgü baskın kısıtlama faktörlerin ifadesi için hücre hatları ve birincil hücreler büyük bir paneli taramak için yararlı olacaktır.

Biz, koşullu için iki yöntem tarif<em&gt; Trans</emHepatit C virüsü (HCV) montaj ve heterokaryon oluşumu itimat tam viral yaşam döngüsü, tamamlanması&gt;-tamamlayamamakta. Bu teknikler bulaşıcı HCV döl üretimi engel baskın kısıtlama faktörler, ifade hücre hatları için ekran uygundur.

Heterokaryon Oluşumu İki Yöntemleri HCV Sınırlayıcı Etkenler Discover

Hepatit C virüsü (HCV), konakçısı insan ve şempanzelerle sınırlı olan hepatotropik bir virüstür. HCV RNA replikasyonu ...'da gözlemlenmiş olsa da

Bu prosedürün amacı, heca oluşumuna dayanan iki yöntem kullanarak, herhangi bir hücre hattında hepatit C virüsü replikasyon döngüsünün tamamlanması üzerindeki kısıtlama faktörlerinin etkisini incelemektir; ilk yöntem için insan karaciğer hücrelerinin yanı sıra heal A ve Hep 56 1D paketleme hücrelerini kültüre ederek başlayın; ardından hepatit C virüsünü veya H-C-V-R-N-A'yı elektroporasyon yoluyla karaciğer hücrelerine transfekte edin. Sonrasında, ikinci füzyon yönteminde polietilen glikol kullanarak HCV replike eden hücre hattını ilgili paketleme hücre hattı ile füzyonlayın. İlk adım, yüksek titreli HCV stokunun üretilmesidir.Ardından farklı hücre hatları birlikte kültüre edilir ve prototip köpüklü virüs glikoproteininin transfeksiyonu ile hücre füzyonu indüklenir. Daha sonra, heterokaryonlar HCV ile enfekte edilir. Heterokaryon oluşumunun her iki yöntemi takiben, füzyonu onaylamak için floresan mikroskopi uygulanır ve enfektiyöz partikül üretimi kantifiye edilir.Bu tekniğin temel avantajı, HV'ye özgü baskın restriksiyon faktörlerinin ekspresyonu açısından çok sayıda hücre hattı ve primer hücre panelinin taranmasında kullanışlı olmasıdır. Bu yöntem, HCV'nin tür özgüllüğü ve normlar

two-methods-heterokaryon-formation-to-discover-hcv-restriction

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Mekik hücre tipine spesifik protein yerelleştirme ve Nükleositoplazmik karakterizasyonu için esnek ve verimli bir yöntem açıklanmıştır. Bu heterokaryon yaklaşım görüntü protein lokalizasyonu hücre füzyonu sonra floresan etiketli füzyon proteinleri kullanır. Protokol kararlı durum lokalizasyonu veya canlı hücre görüntüleme dayalı daha dinamik tespitler mükellef.

Hücre Tipi özel Yerelleştirme Analizi için Heterokaryon Tekniği

Source: Ren, S., et al. A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication. J. Vis. Exp. (2014).This video demonstrates an immunofluorescence-based method to detect Hepatitis C virus replication in infected hepatoma cells. The protocol involves cell fixation, antibody staining for viral protein and double-stranded RNA, and visualization using fluorophore-tagged secondary antibodies. Dual signal detection under a fluorescence microscope confirms active viral replication within the host cells.

Immunofluorescence Assay to Detect Hepatitis C Virus Replication Complexes in Infected Cells

Hepatit C Virüsü (HCV), siroz ve kanser dahil olmak üzere karaciğer bozukluklarına neden olan önemli bir insan patojenidir. HCV enfeksiyöz hücre kültürü sistemi, HCV replikasyonunun moleküler mekanizmasını anlamak ve yeni terapötik yaklaşımlar geliştirmek için gereklidir. Burada, HCV replikasyon döngüsünün çeşitli aşamalarını araştırmak için bir protokol açıklıyoruz.

Hepatit C Virüsü Çoğaltma Analizi için Protokol

HIV-1 patogenezi hem viral özellikler hem de konak genetik faktörleri ile tanımlanır. Burada, gag gen dizisi varyasyonunun virüsün in vitro replikasyon kapasitesi üzerindeki etkisini değerlendirmek için tekrarlanabilir ölçümlere izin veren sağlam bir yöntemi açıklıyoruz.

Bir Kısıtlama Enzim Temelli Klonlama Yöntemi değerlendirin<em&gt; In vitro</em&gt; HIV-1 Tipi C Gag-MJ4 Kimerik Virüslerin Çoğaltma Kapasitesi

Burada HBV yaşam döngüsünün erken aşamalarında izlemek için yeni geliştirilmiş hepatit B virüsü (HBV) muhabiri sistemini açıklar. Vitro sistemde BASİTLEŞTİRİLMİŞ yüksek verimli bir strateji kullanılarak anti-HBV maddelerinin taranması yardımcı olacaktır.

Bir Hepatit B Virüsü Muhabir Sisteminin Geliştirilmesi Çoğaltma Döngüsü Erken Aşamaları Monitör

Lipid damlacıkları Hepatit C virüsü (HCV), dahil olmak üzere çeşitli patojenlere replikasyonu için önemli organellerdir. Bu ilişkili proteinler kantitatif kütle spektrometresi için lipid damlacıkları izole edilmesi için bir yöntem tarif; bu tür virüs enfeksiyonu, çevresel stres veya ilaç tedavisi gibi koşullar, çeşitli altında kullanılabilir.

Kantitatif Kütle Spektrometresi Analiz lipid Damlacık izolasyonu

Biz burada HBV DNA vitro nesil bir Hepatit B virüs enfeksiyonu sistemi üzerinden tarif ve tersini kullanarak (1-2 kopya) entegrasyonu son derece hassas tespiti PCR iç içe.

Algılama düşük kopya sayısı Vitro hepatit B enfeksiyonu tarafından kurulan entegre Viral DNA

Burada, bölünmüş luciferase tsay sistemi kullanarak HBx-DDB1 etkileşimini inhibe eden anti-hepatit B viral ajanların taranması için bir yöntem salıyoruz. Bu sistem protein-protein etkileşimlerinin kolay algılanmasını sağlar ve bu etkileşimlerin inhibitörlerini belirlemek için uygundur.

Bölünmüş Luciferase Assay Sistemi Kullanarak HBx-DDB1 Etkileşiminin Inhibitörlerinin Belirlenmesi

Bu el yazması, insan NTCP, HNF4α, RXRα ve PPARα'yı ifade eden 293T-NE-3NR' ler ve geleneksel hepatik hücreler (HepG2-NE, insan NTCP'yi ifade eden) yeni mühendislik temalı 293T hücreleri (293T-NE-3NR) enfeksiyonu için ayrıntılı bir protokol açıklar.

Hepatik Olmayan 293T-NE-3NR Hücrelerinde Hepatit B Virüs Enfeksiyonunun Modelilmesi

Protokol, hataya açık PCR ve ters genetik kullanarak tam uzunlukta mutant RNA sentezini birleştirerek hepatit C virüsü genomunda kontrol edilebilir genetik çeşitliliği tanıtmak için bir yöntemi açıklar. Yöntem, fenotip seçimi için bir model sağlar ve 10 kb uzunluğunda pozitif anlamlı RNA virüs genomları için kullanılabilir.

Pozitif Anlamlı RNA Virüsü Varyantlarını Tasarlamak için Tersine Genetik

Konakçı sodyum taurokolat birlikte taşınan polipeptit ile bağlanma afinitesini (KD) ölçmek için izotermal titrasyon kalorimetrisini kullanarak, viral giriş öncesi ve sonrası yaşam döngüsü aşamalarını hedefleyen anti-hepatit B virüsü (HBV) bileşiklerini taramak için bir protokol sunuyoruz. Antiviral etkinlik, viral yaşam döngüsü belirteçlerinin (cccDNA oluşumu, transkripsiyon ve viral montaj) baskılanması yoluyla belirlendi.

Terapötik Hedef Olarak Polipeptitin Sodyum Taurokolat Kotransportasyonu Yoluyla Hepatit B Virüsü Girişini İnceleyen Yetkin Bir Hepatosit Modeli

Öğrenin, heterokaryon oluşumu kullanarak hepatit C virüsü sınırlayıcı etkenlerini tespit etme yöntemlerini. Bu teknikler, viral çoğalma döngüsünü ve hücre hatlarındaki kısıtlama faktörlerini incelemek için etkilidir.

Heterokaryon Oluşumu İki Yöntemleri HCV Sınırlayıcı Etkenler Discover

Daha fazla video keşfet