İnsan Pankreas Adacıklar için boyama Protokoller

Bu prosedürün genel amacı, hematin ve eozin boyama ve immünohistokimya kullanarak insan pankreas deliklerini karakterize etmektir. Bu, bir parafin bloğuna gömülü bir pankreas örneğinden seri kesitler oluşturularak gerçekleştirilir. Bölümler daha sonra orijinal yönlerinde slaytlara yerleştirilir.

Slaytların bir kısmı hematin ve eoin ile boyanırken, kalan slaytlar immünohistokimya ile boyanır, son adım lekeli slaytları taramak ve duruma göre düzenlemektir. Sonuç olarak, bu görüntüler, alandaki diğer araştırmacılar tarafından görüntülenebilecekleri çevrimiçi bir patoloji veritabanına yüklenebilir. Bu tekniğin mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, slaytların orijinal oryantasyonlarını korurken seri olarak boyanmasıdır.

Prosedürü gösterenler, tarihi teknoloji uzmanı Linda Snyder, biyolojik bilim adamı Emily Montgomery ve laboratuvarımdaki laboratuvar teknisyeni Tiffany Hippo olacak. Başlamak için, parafin mikrotomisi için standart prosedürleri izleyerek su banyosunu ve mikrotomu kurun. Sonraki etiket: pozitif yüklü slaytları vaka numarası, pankreas bölgesi ve slayt numarası ile etiketleyin.

Her şey hazırlandıktan sonra, parafin bloğunu sol tarafta kaset etiketi olacak şekilde mikrotom aynasına yerleştirin. Normal mikrotomi prosedürlerini takiben, doku düzgün bir şekilde açığa çıkana kadar bloğu bölümlere ayırın. Doku eşit şekilde karşılaşıldığında, yaklaşık dört mikron kalınlığında seri kesitlerden oluşan bir şerit oluşturun.

Gerekli ilk lekelerin sayısına bağlı olarak üç ila altı bölüme ihtiyaç vardır. Ardından, şeridin bölümlerini ayırın. Her bölümü sırayla alın ve bir slayta yerleştirin.

Bölüm numarasını bir kalemle kaydedin. Bir bölüm kullanılamıyorsa, bu numarayı atlayın ve bölümleri tam sırayla numaralandırmaya devam edin. Slayt etiketi sola doğru bakacak şekilde, kasette bulunan yönün aynısını slaytta tutmaya dikkat edin.

Ardından, slaytları bir sürgülü rafa yerleştirin ve gece boyunca kurumaya bırakın. Oda sıcaklığında, dokuyu korumak ve oda sıcaklığında veya eksi 20 santigrat derecede arşivlemek için parafin bloğunun yüzeyini ince bir parafin tabakası ile tekrar kapatın. Bir sonraki örnek için bu prosedürü tekrarlayın.

H ve e boyama için yukarıda görüldüğü gibi her seviyede seri bölümler için numaralandırmanın korunması önemlidir. Her bloktan ilk slaydı bir kayar rafa yerleştirin ve ardından rafı otomatik boyayıcının ilk tepsisine yerleştirin. Standart HE programını seçin ve boyama işlemini başlatın.

Boyama bittiğinde, sürgüleri otomatik boyayıcıdan çıkarın ve kapağın kayması için kaputun içine yerleştirin. Standart teknikleri kullanarak her slayta bir kapak fişi yerleştirin. Son olarak, slaytları basılı bir etiketle etiketleyin ve kaputun içinde iyice kurumasını bekleyin.

Otomatik boyayıcıyı ayarlayarak ve gerekli tüm reaktifleri hazırlayarak başlayın. Çift lekeler için Daco programını seçin. Slaytların sayısını ve her birinin alacağı tedaviyi girin.

Tüm reaktifleri üreticinin tavsiyelerine göre otomatik boyayıcıya yükleyin. Ardından, TBST ve sitrat, tamponlar, antikorlar ve prosedür için gerekli diğer reaktifleri hazırlayın. Slaytları beş dakika boyunca ksilen içine yerleştirerek ayırın.

Slaytların kurumasına izin vermeyin çünkü bu, slaytlar depolanırken aşırı arka plan ve gözenek lekelenmesine neden olur. Kullanmadan önce ön ısıtmak için sitrat tamponunu bir buharlı pişiriciye dökün. Ardından, depa slaytlarını bir dizi etanol yıkamasına gönderin.

Slaytları deiyonize suda son bir kez durulayın. Slaytları önceden ısıtılmış sitrat tamponuna ekleyin ve 30 dakika buharda pişmelerine izin verin. Bu süreden sonra, slaytları tamamen soğuyana kadar hemen oda sıcaklığındaki bir su banyosuna aktarın.

Soğuduktan sonra, kızakları uygun sırayı korumaya özen göstererek Dayco auto Stainer raflarına aktarın. Son olarak, çift boyama programı tamamlandığında daha önce yüklenmiş olan çift boyama programını çalıştırın. Slaytları otomatik boyayıcıdan çıkarın ve kurutmadan önce en az bir saat kurumasını bekleyin.

Dehidrasyona devam etmek için, bir dakika boyunca% 80 etanole aktarın. Slaytları %95 etanole batırarak ve ardından %100 sonlandırarak kurutmaya devam edin. Son olarak, slaytları ksilen'e batırın ve bir dakika basılı tutun.

Prosedürü tamamlamak için cyto conta kullanarak slaytları hemen kapak fişleri ile monte edin. Organ ve blok numarası, leke türü ve tarih dahil olmak üzere vaka bilgilerini içeren etiketleri yazdırın. Leke slaytlarını taramak için her slayta bir etiket yerleştirin.

Bunları bir tarayıcı tepsisine yerleştirin ve standart prosedürleri izleyin. Leke slaytlarını oda sıcaklığında ve kalan lekelenmemiş slaytları ileride kullanmak üzere eksi 20 santigrat derecede arşivleyin. Son olarak, lekeli görüntüleri donör ve görülen doku tipine göre düzenleyin.

İşte hem düşük hem de yüksek büyütme seviyelerinde KI 67 artı insülin boyamaya bir örnek. Lekeli pankreas bölümlerinin görüntüleri, sanal bir biyobanka oluşturarak çevrimiçi bir patoloji veritabanına gönderilir. Araştırmacılar bu veri tabanını kullanarak araştırma ve tip bir diyabet için gerekli bilgilere hızlı bir şekilde erişebilirler.

Bu videoyu izledikten sonra, insan pankreasından yüksek kaliteli slaytların nasıl hazırlanacağını ve boyanacağını iyi anlamış olmalısınız.