Name: HH Sahne 10 Tavuk Embriyolar Ovo Electroporations (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-11-01T00:29:01.000+00:00
Duration: 13 min 6 s
Description: Öğrenin HH 10 tavuk embriyolarında in ovo elektroporasyon tekniğini. Bu yöntem, omurilik gelişiminde gen ekspresyonunu manipüle ederek merkezi sinir sistemi genlerinin fonksiyonlarını incelemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yumurta taşıma <ol><li> Yumurta canlılığının önemli bir kayıp olmadan (küçük bir şarap soğutucusu, bu amaç için idealdir) kuluçka için bir hafta öncesine kadar 13 ° C&#39;de muhafaza edilebilir. </li><li> Inkübasyondan önce, yumurtalar inkübatör 37.8 nemlendirilmiş bir tavuk, sonra oda sıcaklığında, yer ısınmasını bekleyin ° C (100 ° F). </li><li> Biz genellikle inkübasyon başlangıcında, embriyo Hamburger ve Hamilton aşamada 10 ulaşmıştır embriyolar yaklaşık 48 saat electroporate. </li><li> Inkübasyon süresi istenen Hamburger ve Hamilton sahne göre değişebilir. Sıcaklık en iyi inkübasyon sıcaklığı kritik ve sapma, inkübasyon süresi ve azalma embriyo canlılığı değiştirecektir. </li><li> İnkübasyon sırasında, yumurta, embriyo elektroporasyon için doğru konumda olacaktır, böylece onların yüzüne muhafaza edilmelidir. Embriyo, yumurta sarısı üst şamandıra ve burada kesmek için biliyorum pencereleme önce bir kalem ile yumurtanın üst işaretlemek için yararlı olur. </li></ol> Hazırlık <ol><li> 37 ° C&#39;ye kadar Sıcak Leibovitz L-15 medya Cam kılcal damarlar iğne içine çekin. Pozisyon elektrotlar ve mikromanipülatör ve darbe jeneratörü elektrotları bağlamak. </li></ol> Pencereleme <ol><li> Delmek küçük sonunda yumurta kabuğu, İğne çapı büyük olan bir şırınga yardımıyla. </li><li> Yumurta sarısı kesintileri önlemek için dikkatli bir şekilde aşağı iğne işaret ederek, albumin 5ml hakkında çıkarın. </li><li> Küçük bir parça bant ile delik Seal. </li><li> Başka bir parça bant (4x4 cm) yumurtanın üst kapağı. </li><li> Kavisli makas kullanarak ve embriyo bozabilir özen, çalışmak için bir pencere sağlamak için yetecek büyüklükte bir delik kesti. </li></ol> İsteğe Bağlı: nöral tüp görselleştirmek için, embriyo altında 26 iğne (kan ring dışına embriyo altında iğneyi) ile çözüm mürekkep enjekte edilir. Hindistan mürekkep Hanks veya benzer steril bir tampon çözelti ile 1:05 seyreltilmelidir. Enjeksiyon ve Elektroporasyon <ol><li> Cımbız kullanarak istenilen çapa kapiller uç kesme </li><li> Ağız pipet kullanarak, plazmid / Hızlı Yeşil boya ile kılcal yükleyin. </li><li> Size doğru kafa ile embriyo yerleştirin ve nöral tüp içine iğne sığ bir açıyla yerleştirin. </li><li> Plazmid çözüm boya tüm alanı doldurana kadar nöral tüp lümeni içine enjekte edilir. </li></ol> Not: ucu daha geniş nöral tüp çapı var dikkatli olun. Genel olarak, optimum uç boyutu kapiller sıvı çekmek için ne kadar kolay ya da zor elde edilip edilmediğini söylemek mümkün olacaktır. Aşırı direnç varsa, açılış muhtemelen çok küçük ve ucu kadar yüksek tekrar kırılmış olmalı. Çok az veya hiç direnç varsa, açılması çok büyük ve yeni bir iğne kullanılması gerekir. <ol><li> Embriyo üzerinde steril L-15 medya Yeri 1-2 damla. </li><li> Hemen 1 saniyelik aralıklarla 50 mseconds için 10-24 volt embriyonun her iki tarafta nöral tüp paralel elektrotlar, ve darbe 5 kat yerleştirin. Düzgün bir şekilde çalışıp çalışmadığını elektrotlar yakın kabarcıklar göreceksiniz. </li><li> Dikkatle, elektrotlar kaldırmak L-15, 5 damla embriyoların üstüne koydu ve bant ile yumurta mühür. Kurutma elektroporasyon aşağıdaki embriyo kaybı için önemli bir etken olduğu gibi yumurta, mühürlenmiş olduğunu emin olun. </li><li> Inkübatör içine yerleştirin yumurta, pencere yüzü yukarı, ve H &amp; H aşamada istenilen ulaşana kadar inkübe edin. </li></ol>

<ol><li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27Shocking%27+developments+in+chick+embryology%3A+electroporation+and+in+ovo+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">'Shocking' developments in chick embryology: electroporation and in ovo gene expression.</a> Nat Cell Biol. 1, 203-207 (1999).</li>
</ol>

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Bu protokol HH10 civciv embriyosunda nöral tüp elektroporasyon için bir adım adım kılavuz sağlar. Tekniği gösteren ek olarak, yumurta taşıma ve depolama için kılavuzlar da verilir. Bu teknik, genetik analizi için geniş bir uygulama yelpazesine sahiptir ve deney kolaylığı ve düşük maliyetli birçok laboratuvar için de uygun hale getirir.

<table><tbody><tr><td>Tavuk yumurtası inkübatörü</td><td></td><td></td><td>nemlendirilmiş, 37.80&amp;#x00B0;C (100F) değerine ayarlı</td></tr><tr><td>Pulse jeneratörü</td><td>Genetronics</td><td>BTX T820</td><td>Kare dalga jeneratörü veya benzeri</td></tr><tr><td>Elektrotlar</td><td></td><td></td><td>elektrotlarımız 0.25 mm çapında platin telden yapılmış olup 5 mm uzunluğunda ve 1 mm aralıklıydı</td></tr><tr><td>Bağlantı kabloları</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikromanipülatör</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td></td><td></td><td>geniş çalışma mesafeli</td></tr><tr><td>Cam kapilerler</td><td></td><td></td><td>ve kapiler çekici veya ticari cam iğneler</td></tr><tr><td>Leibovitz&amp;rsquo;s L-15 besiyeri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>tavuk yumurtaları</td><td></td><td></td><td>döllenmiş</td></tr><tr><td>Kavisli makaslar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 ml şırınga</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Geniş lümenli iğne</td><td></td><td></td><td>16-18G</td></tr><tr><td>Ağız pipeti</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Çini mürekkebi</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnsülin şırıngası/şırınga</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plazmid DNA</td><td></td><td></td><td>%0,05 Fast Green boyası içeren steril TE veya 1X PBS içinde &amp;#8805; 1&amp;#x03BC;g/&amp;#x03BC;l</td></tr></tbody></table>

hh sahne 10 tavuk embriyolar ovo electroporations

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

Büyük boy ve tavuk embriyo dış gelişimi kadar değerli bir araç gelişimsel biyoloji çalışma yaptık. Piliç, moleküler biyoloji teknikleri gelişiyle ile gen regülasyonu ve fonksiyonu incelemek için yararlı bir sistem haline gelmiştir. , Genler, gelişmekte olan tavuk embriyonun içine DNA veya RNA yapıları electroporating ifade veya in vivo gen fonksiyonu analiz etmek için yere serdi. Benzer şekilde, muhabir yapıları kaderi haritalama için kullanılan ya da varsayılan gen düzenleyici unsurları incelemek. Fare benzeri deneyler karşılaştırıldığında, civciv elektroporasyon, hızlı, kolay ve ucuz olma avantajları vardır. Bu video ilk embriyo kabuğu işlemek için bir pencere nasıl gösteriyor. Sonra, embriyo, embriyo altına enjekte Hindistan mürekkep bir çözelti ile görüntülendi. Bir bardak iğne ve pipet gelişmekte olan nöral tüp, daha sonra platin elektrotlar embriyo paralel olarak yerleştirilir ve kısa bir darbe jeneratörü elektrik darbeleri ile yönetilmektedir DNA ve Hızlı Yeşil boya enjekte etmek için kullanılır. Son olarak, yumurta bandı ile mühürlenir ve daha da geliştirilmesi için bir inkübatör içine geri yerleştirilir. Ayrıca uygun yumurta depolama ve işleme, video gösterileri ve embriyo kaybı aşağıdaki elektroporasyon olası nedenleri açıklanır.

Ovo elektroporasyon Civciv kuş embriyonun genetik manipülasyon sağlayan bir tekniktir. Bu tekniğin yaygın uygulamalar genlerin fonksiyonel analiz ve olası artırıcı unsurları içerir. Bu video HH 10 civciv embriyosunda nöral tüp elektroporasyon göstermektedir. Enjeksiyon tekniği ve uygun yumurta taşıma tartışılmıştır.

HH Sahne 10 Tavuk Embriyolar Ovo Electroporations

Tavuk embriyosunun büyük boyutu ve dış ortamda gelişimi, onu gelişim biyolojisi çalışmalarında uzun süredir değerli bir araç haline getirmiştir. ...'nın gelişiyle birlikte

Embriyoların manipülasyona çok uygun olması ve büyük boyutlarının onları diğer embriyolara göre çalışmayı çok daha kolay hale getirmesi nedeniyle civciv iyi bir model sistemdir. Civciv elektroporasyon deneyleri ayrıca kısa bir süre içinde çok sayıda genin taranmasına olanak tanır. Merhaba, ben Marissa Blank.Chicago Üniversitesi İnsan Genetiği Bölümü'ndeki Kathy Millon laboratuvarında lisansüstü öğrencisiyim. Bugün size civciv in ovo elektroporasyonunun nasıl yapılacağını anlatacağım; civcivlerde embriyonik gelişimin yaklaşık iki gününe tekabül eden Hamilton evre 10 tavuk embriyolarına elektroporasyon uygulayacağız. Bu prosedür laboratuvarımızda rutin olarak gerçekleştirilmektedir ve genellikle merkezi sinir sisteminin gelişiminde yer alan genlere ilgi duyduğumuz için omurilikteki genlerin aşırı ekspresyonunun veya susturulmasının etkilerini inceliyoruz.Bugün size göstereceğim in ovo elektroporasyon tekniği birkaç adımdan oluşmaktadır. İlk adım yumurtaya pencere açmak olacaktır. İkinci adım ise DNA'nın nöral tüp lümenine enjekte edilmesidir.Üçüncü adım, DNA'yı nöral tüpün bir tarafına itmek için bir elektrik alanı kullanmak olacaktır. Ardından, yumurtaların nasıl kapatılacağını göst

in-ovo-electroporations-of-hh-stage-10-chicken-embryos

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video nöronların genetik olarak tanımlanan gruplar aksonal yollar kullanarak embriyonik civciv omurilik görselleştirmek için nasıl...

Nöronlar, Genetik Tanımlı Gruplar Aksonal tanımında kullanılması Civciv Nöral Tüp Deşifre Ovo Elektroporasyon

Bu videonun genel amacı hedef retina enjeksiyon nasıl gerçekleştirileceği göstermek için...

Embriyonik Chick Retina Ovo Elektroporasyon

Işlevi ve orta beyin dopaminerjik nöron gelişimi sırasında genlerin düzenlenmesi değerlendirmek için, içeren bir yöntem...

Dopaminerjik Nöron Geliştirme Gen Fonksiyonunun Çalışılması için Chick orta beyin içinde ovo Elektroporasyon yılında

Daha sonra kuluçka dönemlerinde (Hamburger ve Hamilton evresi (SS) 22 yaşından büyük) az tavuk embriyosu gen transferi yöntemi açıklanmıştır. Bu yöntem, dezavantajların...

Tarafından Eski Tavuk Embriyolar içine Gen Transferi<em&gt; Ex ovo</em&gt; Elektroporasyon

Nöral tüp içinde gen ekspresyonunu bir hücre tipine özgü, izlenebilir bir şekilde aşağı regüle olabilen göre bir yöntem tarif edilmektedir. Biz nasıl...

Open-kitap Hazırlıklarında Dii Enjeksiyon tarafından geliştirilmesi Nöral Tüp ve fenotipleri Değerlendirilmesinde miRNA tabanlı Plazmidler arasında ovo Elektroporasyon yılında

Gelişimsel nörobiyoloji temel bir soru nasıl nöron ağları embriyonik beyinde kurulan olmasıdır. Burada bu Cre / Lox-plazmid ve dorsal internöronlar etiket ve çeşitli gelişim aşamalarında kendi aksonal projeksiyonlar ve sinaptik hedefleri izlemek için kuş Beyin içinde piggyBac-aracılı DNA aktarılması sistemi olarak yeni genetik araçları ile bir elektroporasyon tekniği kombine.

Civciv Embriyo aksonal Yörüngeler ve Synaptic Hedefler Trace için Beyin elektroporasyon

İşitme organı işitmeye aracılık eder. Burada, gelişmekte olan tavuk işitme organında işitsel progenitör hücre proliferasyonu ve farklılaşmasını incelemek için optimize edilmiş modifiye edilmiş bir in ovo mikro-elektroporasyon yöntemi sunuyoruz.

Tavuk İşitsel Organ gen Transferi tarafından<em&gt; Ovo olarak</em&gt; Mikro-elektroporasyon

Kuş ve memelilerin işitsel beyin sapı nöronları, normal işitme işlevleri için temel bir süreç olan hızlı sinirsel kodlama için uzmanlaşmıştır. Bu nöronlar, embriyonik arka bedenin belirgin öncüllerinden kaynaklanmaktadır. İşitme gelişiminde gen işlevini incelemek için tavuk embriyolarının arka bacasında genleri ifade etmek için elektroporasyon teknikleri sunuyoruz.

Tavuk İşitsel Beyinsapındaki Ovo Elektroporasyonunda

Biz bıldırcın embriyo modeli sistemde çoklu proteinlerin hızlı ve verimli ifade izin veren bir yöntem olarak haberci RNA (mRNA) elektroporasyonu rapor. Bu yöntem floresan hücreler için kullanılabilir ve Elektroporasyon kısa bir süre sonra zaman atlamalı mikroskopinin in vivo hareketlerini kaydetmek.

MRNA Electroporation kullanarak Avian embriyoları çoklu proteinlerin hızlı ve verimli Ifade

Bu video midgastrula evre Drosophila embriyolar primer nöronal kültürlerin hazırlanmasında gösteriyor. Canlı kültürlerin Görüntüleme kaplama 2 gün sonra bir bikarbonat tabanlı tanımlı bir ortamda büyüme ve farklı nöronlar sonra hücreler 1 saat gösteriyor. Nöronların elektriksel olarak uyarılabilen ve sinaptik bağlantıları formu.

Nöronal Kültürler Midgastrula Sahne Drosophila Embriyolar hazırlanması

Öğrenin HH 10 tavuk embriyolarında in ovo elektroporasyon tekniğini. Bu yöntem, omurilik gelişiminde gen ekspresyonunu manipüle ederek merkezi sinir sistemi genlerinin fonksiyonlarını incelemeyi sağlar.

HH Sahne 10 Tavuk Embriyolar Ovo Electroporations

Daha fazla video keşfet