Name: Fabrikasyon ve mikroçevresindeki microarrays Kullanımı (MEArrays) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-11T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 57 s
Description: Öğrenin mikroçevre proteinlerinin hücre yapışması ve fonksiyonlarına etkisini mikroarray teknolojisiyle analiz etme yöntemini. Bu teknik, farklı hücre tiplerinde diferansiyasyon ve proliferasyon çalışmaları için kullanılabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ML NIA (R00AG033176 ve R01AG040081) tarafından ve Laboratuvar Yönetmen Araştırma ve Geliştirme, # DE-AC02-05CH11231 Enerji sözleşme ABD tarafından desteklenmektedir.

<ol><li>Bissell, M. J., Labarge, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Context%2C+tissue+plasticity%2C+and+cancer%3A+are+tumor+stem+cells+also+regulated+by+the+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Context, tissue plasticity, and cancer: are tumor stem cells also regulated by the microenvironment.</a> Cancer Cell. 7, 17-23 (2005).</li>
<li>Engler, A. J., Sen, S., Sweeney, H. L., Discher, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix+elasticity+directs+stem+cell+lineage+specification%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Matrix elasticity directs stem cell lineage specification.</a> Cell. 126, 677-689 (2006).</li>
<li>McBeath, R., Pirone, D. M., Nelson, C. M., Bhadriraju, K., Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+shape%2C+cytoskeletal+tension%2C+and+RhoA+regulate+stem+cell+lineage+commitment%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">Cell shape, cytoskeletal tension, and RhoA regulate stem cell lineage commitment.</a> Dev. Cell. 6, 483-495 (2004).</li>
<li>LaBarge, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mammary+progenitor+cell+fate+decsions+are+products+of+interactions+with+combinatorial+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Biology%22%5BJournal%5D)">Human mammary progenitor cell fate decsions are products of interactions with combinatorial microenvironments.</a> Integrative Biology. 1, 70-79 (2009).</li>
<li>Kim, H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterning+Methods+for+Polymers+in+Cell+and+Tissue+Engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+biomedical+engineering%22%5BJournal%5D)">Patterning Methods for Polymers in Cell and Tissue Engineering.</a> Annals of biomedical engineering. , (2012).</li>
<li>Boudou, T., Ohayon, J., Picart, C., Pettigrew, R. I., Tracqui, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonlinear+elastic+properties+of+polyacrylamide+gels%3A+implications+for+quantification+of+cellular+forces%5BTitle%5D)+AND+%22Biorheology%22%5BJournal%5D)">Nonlinear elastic properties of polyacrylamide gels: implications for quantification of cellular forces.</a> Biorheology. 46, 191-205 (2009).</li>
<li>Tse, J. R., Engler, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+hydrogel+substrates+with+tunable+mechanical+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Current+protocols+in+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Preparation of hydrogel substrates with tunable mechanical properties.</a> Current protocols in cell biology. Chapter 10, Unit 10(2010).</li>
<li>Flaim, C. J., Chien, S., Bhatia, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+extracellular+matrix+microarray+for+probing+cellular+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">An extracellular matrix microarray for probing cellular differentiation.</a> Nat. Methods. 2, 119-125 (2005).</li>
<li>Soen, Y., Mori, A., Palmer, T. D., Brown, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+the+regulation+of+human+neural+precursor+cell+differentiation+using+arrays+of+signaling+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Syst.+Biol%22%5BJournal%5D)">Exploring the regulation of human neural precursor cell differentiation using arrays of signaling microenvironments.</a> Mol. Syst. Biol. 2, 37(2006).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Burada sunulan MEArray yöntemi hücre ve kombinatoryal mikroçevresindeki etkileşimleri 4 fonksiyonel analiz sağlar. MEArray analizi temel micropatterning teknolojileri, hücre biyolojisi ve mikroarray baskı robotlar ve birçok çok kullanıcılı tesisleri mevcuttur analiz cihazları kullanımı birleştiriyor. Serumsuz ortam formülasyonlar ek artırmak BSA ya da &lt;% 1 serum dahil etmek için bazı durumlarda ayarlanması gerekebilir rağmen MEArray ekranlar, en yapışık hücre tipleri ile uyumludur. Bu yöntem, belirli bir h...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> Cam 25 mm x 75 mm slaytlar </td><td> VWR </td><td> 48311-600 </td><td></td></tr><tr><td> Cam lamelleri (no.1) 24 mm x 50 mm </td><td> VWR </td><td> 48393-241 </td><td></td></tr><tr><td> Boyama çanak (veya COPLAN jar) </td><td> VWR </td><td> 25461-003 </td><td></td></tr><tr><td> Petri kapları (15 cm) </td><td> BD Falcon </td><td> 351058 </td><td></td></tr><tr><td> NaOH (1.0N) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S2567 </td><td></td></tr><tr><td> Maymunlar (&gt;% 98 (3-Aminopropil) triethoxysilane) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A3648 </td><td></td></tr><tr><td> Glutaraldehit </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G7651 </td><td> Su içinde% 50 </td></tr><tr><td> APS (&gt;% 98 Amonyum Persülfat) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A3678 </td><td> GKD 2 O ile% 10 çalışma çözeltisi hazırlayın </td></tr><tr><td> TEMED (N, N, N &#39;, N&#39;-Tetramethylethylenediamine) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T9281 </td><td></td></tr><tr><td> Akrilamid (% 40) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A4058 </td><td></td></tr><tr><td> Bis-akrilamid (% 2 w / v) </td><td> Fisher BioReagents </td><td> BP1404-250 </td><td></td></tr><tr><td> 0.45 mikron Şırınga filtresi 4-mm naylon </td><td> Nalgene </td><td> 176-0045 </td><td></td></tr><tr><td> FITC </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F4274 </td><td></td></tr><tr><td> PDMS (polidimetilsiloksan) </td><td> Dow Corning </td><td> 3097358-1004 </td><td> Ellsworth Yapıştırıcılar aracılığıyla Sylgard 184 Elastomer kiti </td></tr><tr><td> 2 odacıklı slaytlar </td><td> NUNC </td><td> 177380 </td><td></td></tr><tr><td> Pluronic F108 </td><td> BASF </td><td> 30089186 </td><td></td></tr><tr><td> AquArium mastik </td><td> Dow Corning </td><td> DAP 00688 </td><td></td></tr><tr><td> Fluormount-G </td><td> Güney Biotech </td><td> 0100-01 </td><td></td></tr><tr><td> Tek kullanımlık plastik bardaklar </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Abeslang </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Nitril eldivenler </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Plastik mikroskop lamı kutuları </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Spin coater </td><td> WS-400B-6NPP/LITE </td><td> Laurell Technologies Corporation </td><td></td></tr><tr><td> Fırın </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dijital hotplate </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 384-kuyucuklu levhalar </td><td></td><td></td><td> Mikroarray robot için uygun bir marka </td></tr><tr><td> Mikroarray baskı robot </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ters faz ve floresan mikroskop </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Akson mikroarray tarayıcılar </td><td> Molecular Devices </td><td></td><td> Çoklu konfigürasyonları mevcut </td></tr></tbody></table>

fabrikasyon ve mikroçevresindeki microarrays kullanımı (mearrays)

Fabrication and Use of MicroEnvironment microArrays (MEArrays)

Hücreler ve onların etrafındaki mikroçevrede arasındaki etkileşimler hücresel davranışı için fonksiyonel sonuçları vardır. Tek hücre düzeyinde, farklı mikroçevrelerde farklılaşma, göç ve proliferasyon fenotipleri empoze edebilir ve doku düzeyinde mikroçevrede morfolojilerinden tümörogenez 1 gibi karmaşık işler. Ancak içinde mikro etki hücrelerin hücre ve moleküler içeriği, ama böylece esneklik 2 ve doku geometrisi 3 kalmaz. Hücre-hücre,-ECM ve-çözünür faktör etkileşimlerinin toplamı olarak tanımlanan, fiziksel özelliklere ek olarak, mikro çevre karmaşıktır. Bir doku içindeki hücrelerin fenotiplerini onların genomik içeriği ve microenviroment ile kombinatoryal etkileşimleri kısmen, kısmen bağlıdır. Büyük bir meydan okuma farklı davranışları ile microenvironmental bileşenleri belirli kombinasyonları bağlamaktır. ent &quot;&gt; Burada, kombinatoryal mikroçevrelerde 4 etkileşimlerinin hücre tabanlı fonksiyonel tarama mikroçevrede mikroarray (MEArray) platformu sunmak. metodu moleküler yapısı ve elastik modülü eşzamanlı kontrolü sağlar ve yaygın olarak mevcut mikroarray kullanımı birleştiriyor ve micropatterning teknolojileri. MEArray ekranlarında yetişkin progenitör hücreler gibi nadir hücre tiplerinin fonksiyonel çalışmalar kolaylaştırır dizi başına 10.000 hücre kadar az ihtiyaç duyar. teknolojinin bir sınırlama olduğunu tüm doku mikroçevrelerde tamamen MEArrays üzerine değinmeyecek edilemez. Ancak, karşılaştırma çok sayıda ilgili mikro için aynı hücre tipi tepkiler, örneğin, belirli bir doku karakterize ECM proteinlerinin ikili kombinasyonlar, microenvironmental bileşenler doku-spesifik fonksiyonel fenotipleri temin nasıl anlaşılmasını sağlayacaktır. MEArrays rekombinant Gro geniş bir yelpazede kullanarak basılabilirwth faktörleri, sitokinler, ve saflaştırılmış ECM proteinleri ve bunların bileşimleri. Bu platform, sadece belirli reaktiflerin bulunması ile sınırlıdır. MEArrays zaman lapsed analizi mükellef bulunmaktadır, ancak en sık floresan problar ile ölçülebilen hücresel fonksiyonları bitiş noktası analizleri için kullanılır. Örneğin, DNA sentezi, apoptoz, farklılaştırılmış devletlerin edinimi, ya da belirli gen ürünlerinin üretiminde yaygın olarak ölçülür. Kısaca, deney MEArray temel akış baskı alt katman ile kaplanmış slaytlara hazırlamak için ve basılacak olan proteinlerin ana plaka hazırlamaktır. Sonra diziler bir mikroarray robot ile basılır, hücreler, iliştirin kültüründe yetişen ve daha sonra kimyasal deney bitiş noktası ulaştığınızda giderilen izin verilir. Geleneksel mikroskoplar veya mikroarray tarayıcılar ile görüntülenebilir Floresan veya kolorimetrik deneyleri, ilgili moleküler ve hücre fenotipleri (Şekil 1) ortaya çıkarmak için kullanılır.

Hücresel fonksiyonları üzerinde mikro moleküler bileşim etkileri ilgili bilgi sağlamak için bir kombinatoryal fonksiyonel tarama yöntemi tarif edilmektedir. Yöntemi hücre yapışması ve fonksiyonel analiz destekleyen tanımlı Kombinatoryal mikroçevrelerde diziler oluşturmak için varolan mikroarray tabanlı teknolojileri yararlanır.

Fabrikasyon ve mikroçevresindeki microarrays Kullanımı (MEArrays)

Hücreler ve onları çevreleyen mikroçevrenin etkileşimlerinin, hücresel davranış üzerinde fonksiyonel sonuçları vardır. Tek hücre düzeyinde, ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, adherent hücre tiplerini çeşitli Combinator mikroortamlardan oluşan bir koleksiyona paralel olarak maruz bırakarak, farklı mikroortamların hücresel fonksiyonlar üzerindeki etkilerini ölçmektir. Bu işlem, öncelikle mikroortam protein karışımlarının absorbsiyonunu destekleyecek baskı substratlarının üretilmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, tüy veya kapiler pin mikroarray baskı robotu kullanılarak ME dizileri basmak için kullanılan mikroortam protein ana plakaları hazırlanır.Ardından, mikroçevresel proteinlerin ana plakaları hazırlanır. Daha sonra, hücre sayısını sınırlama seçeneği ile yapışkan hücreler ME dizisi üzerinde kültüre edilir. Elde edilen sonuçlar, immunofloresan analize dayanarak, farklı mikroçevrelerin diferansiyasyon veya proliferasyon gibi hücresel fonksiyonlar üzerindeki etkisini gösterir.Bu yöntemle ilgili fikrimiz ilk olarak, doku mikroçevrelerinin insan hafıza kök hücresi kader kararları üzerindeki etkilerini nicelleştirmek istediğimizde ortaya çıktı, ancak in vivo çalışmanın imkansız olduğunu fark ettik. Geliştirilmiş olan bu yöntemin şu an hücre biyolojisi, araştırma ve ilaç keşfi alanlarında birçok uygulaması bulunmaktadır. PDMS; u

fabrication-and-use-of-microenvironment-microarrays-mearrays

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Özel microRNA mikroarray deneyler basit bir prosedür açıklanmıştır. Adımlar, RNA, etiketleme RNA ve referans DNA izole mikroarray'ler için örnekleri literatürde, mikroarray'ler tarama ve niceleme hibridizasyon sinyalleri analiz içerir.

Özel MicroRNA Mikroarray deneyler gerçekleştirme

Bir çip üzerinde fotopolimerizasyon tekniği kullanılarak bir polimer mikro oluşumu açıklaması. Atomik kuvvet mikroskobu, temas açısı ölçümleri, X-ışını fotoelektron spektroskopisi ve uçuş ikincil iyon kütle spektrometresi ve hücre bağlanma testinin zaman kullanarak yüksek aktarım yüzey karakterizasyonu da açıklanmıştır.

Biyomalzemelerin Yüksek Verimli Discovery için Polimer Mikroarray&#39;ler

Bu video, histon peptitleri üzerindeki translasyon sonrası modifikasyonları (PTM'ler) tanıyan antikorların özgüllüğünü profillemek için peptit mikrodizi teknolojisini uygulayan bir tekniği göstermektedir. Bilinen PTM kombinasyonlarına sahip hareketsizleştirilmiş florofor konjuge histon peptitleri içeren bir mikrodizi slaytı, hedef PTM'ye özgü antikorlarla muamele edilir. Bu işlem, antikorun hedef için özgüllüğünü ve hedef olmayan PTM'lerle potansiyel çapraz reaktivitesini tanımlamaya yardımcı...

Antikorların Özgüllük Profili için Bir Peptit Mikroarray Teknolojisi

Bir amplifikasyon mikrodizi önemli ölçüde son kullanıcı için mikro-dizi iş akışını tek bir oda içine asimetrik PCR amplifikasyonu ve mikrodizi hibridizasyon birleştirir. Mikrodizi iş akışı basitleştirilmesi rutin alt-kaynak ortamlarda kullanılabilir mikroarray tabanlı tanı oluşturmak için gerekli bir ilk adımdır.

Çok ilaca dirençli Demonstrating<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Amplifikasyon Microarray

Açıklanan, yapışık hücreler ve mikroyapılı substratlar arasındaki mekanik etkileşimleri ölçmek için kullanılan protokollerdir. Bu etkileşimler, göç, proliferasyon, farklılaşma ve apoptoz dahil olmak üzere temel hücre davranışlarıyla yakından bağlantılıdır. Protokoller, her bir mikro direk için ilgili kuvvetlerin belirlenmesini sağlayan MechProfiler adlı açık kaynaklı bir görüntü analiz yazılımı sunar.

Micropost Diziler Kolay ve Doğru Mekanik-profil

Hücre farklılaşması, iki matris bileşimi ve substrat malzeme özellikleri de dahil olmak üzere mikro-çevresel faktörlerin, bir ana bilgisayar tarafından kontrol edilir. Biz burada hücre farklılaşması ve microenvironmental bağlamında bir fonksiyonu olarak biyomekanik hücre substrat etkileşimleri hem değerlendirmek için çekiş kuvvet mikroskobu ile birlikte hücre mikrodiziler kullanan bir tekniği açıklar.

Hücre farklılaşması ve Çekiş Kuvvetleri Korelatif Analizi için Yüksek verim Hücre Mikroarray Platformu

Mikrobiyal toplulukların gelişimi, çevresel mimari, üye bolluğu, özellikleri ve etkileşimleri de içeren faktörlerin bir kombinasyonuna bağlıdır. Bu protokol, femtolitör kuyularda bulunan binlerce topluluğun eşzamanlı olarak izlenebilmesi için sentetik, mikrofabrik bir ortam tanımlamakta olup niş boyut ve sınırlama gibi anahtar faktörler yaklaşık olarak belirlenebilmektedir.

Bir Mikro Kuyruklu Dizi Platformunda Mikrobik Topluluk Geliştirmenin Montajı ve Takibi

Bu makalede, bir Multiplexed yapay hücresel MicroEnvironment (MACME) dizi taklit eden vivo içinde hücresel microenvironments fiziksel ve kimyasal yüksek üretilen iş manipülasyonu ipuçları ve için hazırlamak için ayrıntılı metodolojisi insan pluripotent kök hücreler (hPSCs) için en iyi hücresel ortam tek hücreli profil oluşturma ile tanımlayın.

Çoğaltılmış yapay hücresel MicroEnvironment dizi imalatı

Burada sunulan yöntemin amacı, mikroortam mikrodiziler (Mema) nasıl imal edilebilir ve kültürlü hücrelerin fenotürü üzerinde basit Kombinatoryal mikroortamlar binlerce etkisini sorgulamak için kullanılan göstermek için.

Kanser hücresel Phenotypes üzerinde Mikroçevresel etki Interrogate için Microdiziler kullanma

Bakteriyel Gen İfadesi Analizi Mikroarray&#39;ler Kullanımı

Öğrenin mikroçevre proteinlerinin hücre yapışması ve fonksiyonlarına etkisini mikroarray teknolojisiyle analiz etme yöntemini. Bu teknik, farklı hücre tiplerinde diferansiyasyon ve proliferasyon çalışmaları için kullanılabilir.

Fabrikasyon ve mikroçevresindeki microarrays Kullanımı (MEArrays)

Daha fazla video keşfet