Name: Fabrikasyon ve Lazer Doku Onarımı Rose Bengal-kitosan Film Uygulamaları (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 6 s
Description: Keşfedin lazer aktive kitosan yapıştırıcı üretimini ve periferik sinir onarımındaki uygulamasını. Bu biyouyumlu yöntem, geleneksel dikişlere göre doku hasarını azaltarak cerrahi müdahaleleri daha az invaziv hale getirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma UWS Araştırma Bursu ile desteklenmiştir.

1. Kitosan Yapıştırıcı Hazırlık <ol><li> Çitosan tozu, asetik asit çözelti içinde çözünür olan, asetik asit (% 2 v / v) bir stok çözelti hazırlamak için, 490 ml deiyonize su (di-H2O) için 10 ml glasiyal asetik asit ilave edin. </li><li> Asetik asit içinde Rose Bengal (RB) (% 0.01 w / v) bir stok çözeltisi hazırlanması için, photobleaching önlemek için alüminyum folyo ile sarılmış bir RB şişe içinde 5 mg ağırlığındadır. Asetik asit stok çözeltisi (bölüm 1.1 &#39;de anlatıldığı gibi) ve 49.5 mL daha sonra toz dağıtma DI-H2O 0.5 ml ilave edilir. </li><li> Çitosan solüsyonu (% 1.7 w / v) hazırlanması için, çitosan tozu (orta MW, asetilasyon derecesine% 85) 0.85 g ağırlığında ve RB asetik asit solüsyonundan 50 ml eklenir. RB kontrol olmaksızın asetik asit solüsyonu içinde çitosan çözülmesiyle hazırlanmıştır. </li><li> Çitosan karışım için bir manyetik karıştırıcı, ilave edin ve oda sıcaklığında karıştırın. Bileşenlerin tam bir çözünme sağlamak için, kitosan karıştırmaİki hafta ve 5 gün süre ile asetik asit içinde kitosan (kontrol) asetik asit içinde + RB. Çitosan çözünmüş zaman, çözelti pH ~ ~ 2.6 &#39;dan 3.9&#39; a artar. RB asidik pH içinde zayıf çözünürlüğe sahip olup, burada çözeltinin pH&#39;si ve çözünmesi için uzun bir süre içinde karıştırılmakta olan bir artış gerektirir dikkat ediniz. </li><li> 1 saat süre ile 3270 x g de santrifüjlenir ve çözümler, örneğin, bir steril 10 ml şırınga kullanılarak supernatant toplamak. Safsızlık pelet rahatsız değil emin olun. Bu adım sırasında, çözüm makroskopik kirlilikler ve çözünmeyen madde temizlenir. </li><li> Steril bir şırınga kullanarak düz perpex levha üzerinde (santrifüj) kitosan çözeltisinin enjekte. Kuru film kalınlığı, çözeltinin dağıtılan miktarı ve çözelti yayılmış olan fazla yüzey alanı arasındaki orana bağlıdır. Çözümü hava kabarcıkları serbest ve eşit levha üzerinde yayıldı emin olun. ~ 13 mikron kalınlığında ince filmler elde etmek için, 12 cm 2 yüzey üzerinde ~ 1 ml solüsyon enjektealanı (boyutları ~ 3x4 cm, Şekil 1A). </li><li> Çözeltinin photobleaching önlemek için örneğin alüminyum folyodan yapılmış bir ekranı olan bir Perspex levha, kapak. Yeterli havalandırma ekranın altında çözüm kuru garantili olduğundan emin olun. </li><li> Elde edilen film, suda çözünmez ve makroskopik olarak kabarmaz kadar oda sıcaklığında (25 ° C) ve basıncı (1 atm) kurumaya çözelti bırakın. Bu, tipik olarak 2 hafta içinde elde edilir. </li><li> Dikkatle ince ve düz spatula kullanarak filmler ayırın: bu filmlerin kolayca zarar vermeden perspex levha kapalı soyulmuş olabilir. </li><li> Bir mikrometre kullanılarak film kalınlığı ölçülür. </li><li> Temiz bir keskin makas ile dikdörtgen şeritler yapışkan kesin ve düz şekil korumak için steril cam slaytlar arasına koyun. Işık koruma için alüminyum folyo ile sarın slaytlar ve oda sıcaklığında saklayın. Veya &quot;chitosan ADHES&quot; yapıştırıcı gül &quot;olarak RB olan veya olmayan yapıştırıcılar etiketleyinive &quot;sırasıyla. </li><li> Yapışkan filmler gama radyasyonu (0.1 kGy / 24 saat için saat) 4,5 ile veya (% 90) etanol kullanılarak sterilize edilebilir yükseldi. </li></ol> 2. Yapıştırıcı Optik Zayıflama <ol><li> Bir kuvars küvet içinde gül yapışkanlı Fix. </li><li> Bir çift-kiriş spektrofotometre kullanarak 4 800 nm - 400 aralığında olan zayıflatılmış bir spektrum kaydedin. </li><li> Şöyle Beer yasasının geçerliliği varsayarsak, yapıştırıcı zayıflama uzunluğunu hesaplamak: I = I 0 e-Ax nerede 0 olay ışık yoğunluğu, 1 / A zayıflama uzunluğu ve x film kalınlığıdır. </li><li> Kitosan yapıştırıcı için 2.1 ile 2.3 bir kontrol olarak hizmet adımları tekrarlayın. </li></ol> 3 Vitro Uygulama In:. Bağırsak üzerine Lazer Doku Yapıştırma <ol><li> Hasat buzağı bağırsak hemen sonra -80 hayvan ötenazi ve mağaza ° C </li><li> Kullanmadan önce, defrost ve hidrat ti10 dakika için DI-H2O içine daldırarak ssue. </li><li> Operasyon mikroskobu (x10) altında # 10 bıçak kullanarak bölümleri (2 x 1 cm) içine doku ikiye bölmek. DI-H 2 O kullanarak bölümleri nemli tutun </li><li> (Uçtan uca) birbirine yakın kesi kütükleri getirin. Pamuk ipuçlarını kullanarak yüzeyden fazla suyu silin. </li><li> Bağırsak (Şekil 2) ile tam temas sağlanması microforceps ile seroza katman üzerinde kesi karşısında bir gül yapışkan bant (10 x 6 mm) yerleştirin. </li><li> Gül yapışkan bir doku yapışma modlu fiber optik (çekirdek çapı 200 um) 4 yoluna bağlı bir diyot pompalı katı hal lazer tarafından aktive edilir. </li><li> 180 mW lazer güç seviyesi ayarlayın ve Tablo 1&#39;de listelenen parametreleri kullanarak ~ 5 mm ışın spot büyüklüğü ile ~ 6 dk için yapıştırıcı ışın. Spot ışık saçmak yapıştırıcı her yerinde bitişik nokta ışın geçmeden önce ~ 5 saniye boyunca ışınlanır sağlanması. TOnun prosedürü lazer ışını yapışkan birkaç kez bütün yüzey alanı tarar garanti eder. </li><li> Doku yapıştırma gücü değerlendirmek için, mekanik kulpları kullanarak kalibre tek sütun tansiyometre (Instron, MA, ABD) için örnek bir kelepçe. 4 ayrı iki doku kütükleri kadar 22 mm / dak kulpları taşıyın. </li><li> Adım 3,5 anlatıldığı gibi doku üzerinde bir gül yapıştırıcı yerleştirin. Örnek ışın ve adım 3.8 &#39;de açıklandığı gibi doku yapıştırma gücünü ölçmek etmeyin. Bu örnek, bir kontrol olarak hizmet vermektedir. </li></ol> 4 Vivo Uygulama In:. Tibial Sinir Anastomoz <ol><li> O / izofluran 2 karışım (bundan sonra indüksiyon sırasında% 4,% 2) 5 ile Oturaklı Wistar sıçan. Subkutan intraoperatif analjezik aktivite sağlamak ve olası ağrı veya rahatsızlık hafifletmek için buprenex (0.03 mg / kg) enjekte. </li><li> Aşağıdaki cerrahi prosedür, bir ameliyat mikroskobu (x10) altında gerçekleştirilmelidir. Oblik cilt Yapsağ uyluk dorsolateral kısmında uzun ve gluteal kasları 2 yoluyla bir kas bölme yaklaşımı ile tibial sinir maruz yaklaşık 3 cm kesi. </li><li> Kısmen teşrih ve düz mikro-makas kullanarak tibial sinirin adventisya Döşeme ve steril gazlı bez veya pamuk ipuçları ile fazla su emer. </li><li> Mikro-makas ile tibial sinir kesin. </li><li> Mikro-forseps kullanarak tibial sinir altında steril bir kitosan şerit (boyutları 5 x 4 mm) yerleştirin. </li><li> Yaklaşık sinir uçlarının gül yapışkan şeridi üzerinde mikro-forseps ile uç uca. </li><li> Şeridi tam şerit lazer ışınlama sırasında sinir dönme konusunda yardımcı olabilecek bir yaka, oluşturan sinir yapışır. </li><li> ) Adımları 3.6 açıklandığı gibi lazer ile yapışkan gül etkinleştirin) ve 3.7. </li><li> Çalışan sinir yaka gereksiz yükseldi yapıştırıcı kesin. </li><li> Beş 3-0 dikişler 5 ile kaslar ve cilt kapatın. </li&gt; <li> Gerekirse Standart ameliyat sonrası iyileşme prosedürleri, ayrışma veya irin oluşumu ve analjezik uygulama için günlük muayene dahil takip edilmelidir. </li></ol> 5. Temsilcisi Sonuçlar Elde edilen filmler parlak, renkli gül ince ve pürüzsüz bir yüzey (Şekil 1) sahiptirler. Onlar da esnek ve neden gözyaşı veya başka görünür hasar (Şekil 1B) olmadan, küçük çaplı tüpler içine yuvarlandı olabilir. Gül yapışkanlı 530 ve 562 nm de iki emme zirvesi vardır; yeşil lazer ~ 12 mikron (Şekil 3) ve böylece güçlü 532 nm de yapıştırıcı ve gelen zayıflama uzunluğu tarafından emilir. Buna karşılık, RB olmadan kitosan film muhtemelen zayıf bir şekilde yayıldığı için lazer (1 / A ~ 162 um) zayıflar. Bu SaB anlamlı agregasyonu filmlerde oluşur spektrumları arsa görünür. Sıkıca yapıştırır yükseldiLazer ışını üzerine bağırsak (Şekil 2) 0,9 başarısızlığı tipik bir maksimum yük ± 0.4 N (n = 30) elde. Yapışma gücü yapışkan yüzey alanı, yani, 15 ile bölünmüş maksimum yük ± 6 kPa&#39;dan (n = 30) olarak tahmin edilmiştir. Işınlanmamış gül yapışkan doku daha az bağlı (2 ± 2 kPa, n = 30, eşleştirilmemiş t-testi, p &lt;10 6). Tibial sinirin in-vivo anastomoz başarılı bir şekilde yeşil lazer ile bağlantılı olarak gül yapıştırıcı uygulanması ve ardından bağ elde edildi. Bir hafta ameliyat sonrası, ameliyat sinir süreklilik ve onarım gücü 17 ± 9 kPa (n = 10). <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/4158/4158fig1.jpg" /> Şekil 1. A) RB-kitosan çözeltisinin düz perspex levha (levha kalınlığı ~ 5 mm) dökülmektedir. Grafik kağıt kuru dökme adım kolaylaştırmak için levha altına yerleştirilir. Suda çözünmeyen film iki hafta içinde dökümden sonra elde edilir. B) gül yapışkanlı esnek ve küçük bir silindir içine yuvarlandı olabilir. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/4158/4158fig2.jpg" /> Şekil 2. Gül yapışkanlı lazer ışınlama sonrası baldır bağırsak yapıştırılır. Düzgün ışınlama doku yapışma sırasında RB yapışkan uygulanır, ancak seçilen lekeler üzerinde yapışkan lazer foto-ağartma etkisini göstermek için bu resim gösterilir. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/4158/4158fig3.jpg" /> Şekil 3,. Gül yapışkanın emilme tayfı (isteğe bağlı olarak birim) 530 ve 562 nm &#39;de iki adet tepe noktası gösterir. Yeşil lazer (λ = 532 nm) ve böylece güçlü bir lazer pozlama sırasında yapıştırıcı ile emilir. RB olmadan kitosan yapışkan zayıf lazer ışını emer. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> n </td><td><s&gt; Alanı (mm 2) Trong </td><td> Güç (W) </td><td> Süre (s) </td><td> Fluence (J / cm 2) </td><td> I (W / cm 2) </td><td> Maksimum Yük / Alan (kPa) </td></tr><tr><td> Yapıştırıcı + Lazer </td><td> 30 </td><td> 60 ± 10 </td><td> 0.18 ± 0.03 </td><td> 365 ± 5 </td><td> ~ 110 </td><td> ~ 0.9 </td><td> 15 ± 1 </td></tr><tr><td> Yapıştırıcı </td><td> 30 </td><td> 60 ± 10 </td><td> NA </td><td> NA </td><td> NA </td><td> NA </td><td> 2 ± 2 </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Efsanesi. n, örneklem sayısı; Alan, gül yapışkanlı (± maksimum ortalama hata) yüzey alanı; Güç, lazer güç (± maksimum ortalama hata); Zaman, ışınlama süresi (± maksimum ortalama hata); Fluence, ortalama laser akısının, ben, tahmini ırradiance; Maksimum Yük / Alan, yapışkan yüzey alanına bölünmesiyle tamir dokusunun yetersizliği maksimum yük, (± SE) idi.

<ol><li>O'Neill, A. C., Winograd, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+anastomosis+using+a+photochemical+tissue+bonding+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg.+Med%22%5BJournal%5D)">Microvascular anastomosis using a photochemical tissue bonding technique.</a> Lasers Surg. Med. 39, 716-722 (2007).</li>
<li>Yao, M., Yaroslavsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phototoxicity+is+not+associated+with+photochemical+tissue+bonding+of+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg.+Med%22%5BJournal%5D)">Phototoxicity is not associated with photochemical tissue bonding of skin.</a> Lasers Surg. Med. 42, 123-131 (2010).</li>
<li>Lauto, A., Mawad, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemical+Tissue+Bonding+with+Chitosan+Adhesive+Films%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Engineering+OnLine%22%5BJournal%5D)">Photochemical Tissue Bonding with Chitosan Adhesive Films.</a> Biomedical Engineering OnLine. 9, 47(2010).</li>
<li>Chan, B. P., Kochevar, I. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+porcine+skin+graft+adherence+using+a+light-activated+process%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Enhancement of porcine skin graft adherence using a light-activated process.</a> J. Surg. Res. 108, 77-84 (2002).</li>
<li>Lauto, A., Faster, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sutureless+nerve+repair+with+laser-activated+chitosan+adhesive%3A+a+pilot+in+vivo+study%5BTitle%5D)+AND+%22Photomed.+Laser+Surg%22%5BJournal%5D)">Sutureless nerve repair with laser-activated chitosan adhesive: a pilot in vivo study.</a> Photomed. Laser Surg. 26, 227-234 (2008).</li>
<li>Lauto, A., Hook, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chitosan+adhesive+for+laser+tissue+repair%3A+in+vitro+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg.+Med%22%5BJournal%5D)">Chitosan adhesive for laser tissue repair: in vitro characterization.</a> Lasers Surg. Med. 36, 193-201 (2005).</li>
<li>Au, V., Madison, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+singlet+oxygen+on+the+extracellular+matrix+protein+collagen%3A+oxidation+of+the+collagen+crosslink+histidinohydroxylysinonorleucine+and+histidine%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Biochem.+Biophys%22%5BJournal%5D)">Effects of singlet oxygen on the extracellular matrix protein collagen: oxidation of the collagen crosslink histidinohydroxylysinonorleucine and histidine.</a> Arch. Biochem. Biophys. 384, 133-142 (2000).</li>
<li>Encinas, M. V., Rufs, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xanthene+dyes%2Famine+as+photoinitiators+of+radical+polymerization%3A+A+comparative+and+photochemical+study+in+aqueous+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Polymer%22%5BJournal%5D)">Xanthene dyes/amine as photoinitiators of radical polymerization: A comparative and photochemical study in aqueous medium.</a> Polymer. 13, 2762-2767 (2009).</li>
<li>Pini, R., Rossi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+technique+for+the+closure+of+the+lens+capsule+by+laser+welding%5BTitle%5D)+AND+%22Ophtalmic+Surgery+Lasers+%26+Imaging%22%5BJournal%5D)">A new technique for the closure of the lens capsule by laser welding.</a> Ophtalmic Surgery Lasers & Imaging. 39, 260-2626 (2008).</li>
<li>Wieken, K., Angioi-Duprez, K., Lim, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+anastomosis+with+glue%3A+comparative+histologic+study+of+fibrin+and+cyanoacrylate+glue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reconstr.+Microsurg%22%5BJournal%5D)">Nerve anastomosis with glue: comparative histologic study of fibrin and cyanoacrylate glue.</a> J. Reconstr. Microsurg. 19, 17-20 (2003).</li>
<li>Menovsky, T., Beek, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser%2C+fibrin+glue%2C+or+suture+repair+of+peripheral+nerves%3A+a+comparative+functional%2C+histological%2C+and+morphometric+study+in+the+rat+sciatic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Laser, fibrin glue, or suture repair of peripheral nerves: a comparative functional, histological, and morphometric study in the rat sciatic nerve.</a> J. Neurosurg. 95, 694-699 (2001).</li>
<li>García, P., Jorge, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+the+mechanical+behavior+of+a+cyanoacrylate+and+a+bioadhesive%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mater.+Sci.+Mater.+Med%22%5BJournal%5D)">Comparative study of the mechanical behavior of a cyanoacrylate and a bioadhesive.</a> J. Mater. Sci. Mater. Med. 15, 109-115 (2004).</li>
<li>Lauto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+extracellular+matrix+with+chitosan+adhesive+film+for+sutureless+tissue+fixation%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg.+Med%22%5BJournal%5D)">Integration of extracellular matrix with chitosan adhesive film for sutureless tissue fixation.</a> Lasers Surg. Med. 41, 366-371 (2009).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Asidik pH RB dağılmasından uzamış kitosan çözeltisi karıştırma gerektirir ama yapıştırıcı imalatı, basit bir kuru-dökme işlemi dayanmaktadır yükseldi. Bu bir suda çözünmeyen filmi haline gelene kadar çözüm kadar kuruması için önemlidir. Ağırlık su içeriği kurutulmuş film 6 içinde ~% 10 olduğu zaman meydana gelir. Çözünmeyen filmler genellikle sıcaklık ve basınç (~ 25 ° C ve ~ 1 atm), standart şartlar az 2 hafta kuru döküm sonra elde edilir. Bunun için lazer sağlayan komşu dokuya yapıştırıcıdan RB yayılır, dok...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> Rose Bengal </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 632-69-9 </td><td></td></tr><tr><td> Kitosan (orta MW) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 10318AJ </td><td></td></tr><tr><td> Asetik sirke asidi </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 08050051 </td><td> % 2 DI su, v / v </td></tr><tr><td> Manyetik karıştırıcı </td><td> Heidolph </td><td> MR Hei-Mix S </td><td></td></tr><tr><td> Santrifüj </td><td> Beckman Coulter </td><td> Allegra X-12R </td><td></td></tr><tr><td> Spektrofotometre </td><td> Varian </td><td> Cary 4000 UV-Görünür </td><td></td></tr><tr><td> Lazer </td><td> CNI Lazer </td><td> MGL-532 </td><td></td></tr><tr><td> Mikrometre </td><td> Mitutoyo </td><td> Serisi 227 </td><td></td></tr><tr><td> Cerrahi mikroskop </td><td> Zeiss </td><td> OPMI </td><td></td></tr></tbody></table>

fabrikasyon ve lazer doku onarımı rose bengal-kitosan film uygulamaları

Fabrication and Application of Rose Bengal-chitosan Films in Laser Tissue Repair

Fotokimyasal doku bağlama (PTB) iki doku kenarları 1,2 arasında gül bengal (RB) bir çözeltisi uygulanarak elde edilir ve doku onarımı, sütürsüz için bir tekniktir. Bunlar daha sonra seçici RB tarafından emilir bir lazer tarafından ışınlanır. Çıkan fotokimyasal reaksiyonlar sözde minimum ısı üretimi 3 dokuda kollajen liflerin çapraz. Bu raporda, RB lazer aktive olan bir roman doku yapıştırıcısı imal ince kitosan filmlerde dahil edilmiştir. Kitosan ve ~ 0.1 ağırlıkça% RB içeren esas Yapıştırıcı film, bir katı hal lazeri (λ = 532 nm, Fluence ~ 110 J / cm 2, spot büyüklüğü ~ 0.5 cm) tarafından imal ve buzağı bağırsak ve sıçan tibia sinirlere yapıştırılır . Kişisel bir bilgisayar ile ara-yüzeyi kurulan bir tek sütun gerilimölçer, yapışma direnci test etmek için kullanılır. 15 bir güç ± 6 kPa, (n = 30) ile sıkıca bağırsak RB-kitosan yapıştırır. Yapışma gücü 2 &amp; düşerplusmn; 2 kPa (n = 30) lazer yapıştırıcı uygulanan değilken. Tibial sinir anastomoz da dikişler kullanımı olmaksızın yapılabilir. Bir roman kitosan yapışkan olduğu tahvil fotokimyasal doku imal edilmiştir ve dikiş gerektirmez.

Dikişler genellikle cerrahi işlemler sırasında doku onarımı için gereklidir. Onlar invaziv ve doku zarar verebilir Ancak, bunların uygulama sorunlu olabilir. Bir roman doku yapıştırıcı üretim ve uygulama yöntemleri burada raporlanır. Bu yapışkan film lazer devreye girer ve sütürlerin kullanımı gerektirmez.

Fabrikasyon ve Lazer Doku Onarımı Rose Bengal-kitosan Film Uygulamaları

Fotokimyasal doku bağlama (PTB), iki doku arasına rose bengal (RB) çözeltisi uygulanarak gerçekleştirilen, dikişsiz bir doku onarım tekniğidir...

Bu prosedürün genel amacı, lazerle aktive edilen bir kitosan yapıştırıcı üretmek ve bunun periferik sinir onarımlarında nasıl uygulanacağını göstermektir. Bu işlem, öncelikle kitosan ve rose Bengal tozunun asetik asit çözeltisinde çözünür hale getirilmesiyle gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı, ince bir film elde etmek için çözeltinin kuru döküm yöntemine tabi tutulmasıdır.Üçüncü adım, sıçan sinirinin açığa çıkarılması ve diseksiyonunun yapılmasıdır. Son adımda, diseke edilmiş sinirin etrafına film yerleştirilir ve filmin dokuya bağlanması için yeşil lazerle ışınlama yapılır. Son olarak, gül filminin dokuya bağlanma gücü, kalibre edilmiş bir tensiometre kullanılarak ölçülür.Lazer yapıştırıcısı biyouyumludur ve doğrudan dokuya bağlanma avantajına sahiptir. Bu özellik, sütürlerin zor olduğu derin ve erişilmesi güç dokuların onarımı için onu oldukça kullanışlı hale getirir. Ayrıca dura veya bağırsak gibi su sızdırmaz kapatmanın önemli olduğu dokuların onarımında da avantaj sağlar.Yapıştırıcı hazırlama aşamasında birçok adım söz konusu olduğu ve cerrahi prosedür sırasında yapıştırıcının dokuya uygulanmasında özel dikkat gerektiği için, alto ve yapıştırıcı tekniğinin görsel olarak gösterilmesi önemlidir. Gösterimin çoğu, laboratuvarımdaki lisansüstü öğrencisi Matt Barton tarafından gerçekleştirilecek ve cerrahi operasyon Quare Üniversitesi'nden Profesör Marcus Studley tarafından yapılacaktır. Rose Bengal katkılı asetik asit içinde bir Kita kum çözeltisi hazırlayarak başlayın.Kontrol çözeltisi basitçe rose Bengal içermeyebilir; çözeltiyi oda sıcaklığında manyetik karıştırıcı ile hazırlayın. Rose Bengal içermeyen kontroller için hazır hale gelmesi yaklaşık iki hafta veya beş gün sürecektir. Bu süre zarfında, kitosan çözündükçe pH yaklaşık 2,6'dan 3,9'a yükselir.Hazırlama işlemi tamamlandıktan sonra, çözeltiyi bir saat boyunca santrifüjleyin ve çözeltiyi safsızlık peletinden ayırın. Peleti yerinden oynatmamak için aspirasyonu nazikçe yapın. Steril bir şırınga kullanarak çözeltiyi düz bir perspeks plaka üzerine enjekte edin.Hava kabarcığı oluşmamasına dikkat ederek çözeltiyi eşit şekilde yayın. Yaklaşık 13 mikron kalınlığında bir film elde etmek için, 12 santimetrekarelik bir alana bir mililitre çözelti yayın. Çözeltinin fotobezleme yapmasını önlemek için Perspex plakayı alüminyum folyo ekranla kapatın, ancak filmin kuruması için yeterli havalandırma boşluğu bırakın. Çözeltiyi oda sıcaklığı ve basıncında kurumaya bırakın.Film kuruduğunda, test etmek için ince bir spatula kullanarak onu plakadan dikkatlice ayırın. Eğer yapıştırıcı kurumuşsa, küçük bir örnek kesin ve su içeren bir şişeye yerleştirin.Film çözünmediğinde ve makroskobik olarak şişmediğinde kurumuş demektir. Bu işlem genellikle iki hafta sürer. Ardından, temiz ve keskin makaslar kullanarak bir mikrometre ile filmin kalınlığını ölçün.Filmi, uygulamanız için gereken boyutta dikdörtgen şeritler halinde kesin. Gül yapışkanlı veya kontrol yapışkanlı parçaları, alüminyum folyoya sarılmış steril lamlar arasında ve oda sıcaklığında saklayın. Filmi bir uygulamada kullanmadan önce optik zayıflamasını belirleyin.Bu işlem, küçük bir film parçasının kuvars bir küvete sabitlenmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, çift ışınlı bir spektrofotometrede filmin 400 ile 800 nanometre arasındaki zayıflatma spektrumu kaydedilir. Ölçümler, filmin kalınlığı ile karşılaştırılabilecek olan zayıflatma uzunluğunu sağlamak için Beer yasası kullanılarak yorumlanabilir.Bu protokol için, buzağı bağırsağı hayvan ötanazyasından hemen sonra alınmış ve minus 80 degrees Celsius'ta saklanmış olmalıdır. Dokuyu 10 dakika boyunca deiyonize su içinde bekleterek çözdürün ve hidrate edin. Ardından, düşük büyütmeli bir operasyon mikroskobu altında, 10 numaralı bistüri ucu kullanarak dokuyu iki santimetreye bir santimetre boyutlarında bölümlere ayırın.İki kesiti birbirine yapıştırmak için kesitleri su damlalarıyla nemli tutun. Kesitleri uç uca yerleştirin ve yüzeydeki fazla suyu silin. Bu işlem için mikro pensler eşliğinde pamuklu çubuklar kullanın.Ciero tabakasındaki insizyonun üzerine bir şerit gül rengi yapışkan film yerleştirin. Filmin bağırsakla tam temas halinde olduğundan emin olun. Çok modlu bir optik fibere bağlı DDE pompalı katı hal lazerini hazırlayın.Lazer parametrelerinin doğru ayarlandığını kontrol edin. Şimdi yapıştırıcıyı ışınlayın. Işın spot boyutu, yapıştırıcı noktalarına temas ettiği yerde yaklaşık beş milimetre genişliğinde olmalıdır; yapıştırıcının her bir bölümünü yaklaşık beş saniye boyunca ışınlayın.Son olarak, yüzey yaklaşık altı dakika boyunca birkaç kez taranır. Işınlanmış örneği çıkarın. Doku bağlanma gücünü değerlendirmek için.Bir örneği kalibre edilmiş tek kolonlu bir tensiyometreye mekanik kıskaçlar kullanarak sabitleyin. Kontrol olarak, iki doku kütlesi birbirinden ayrılana kadar kıskaçları dakikada 22 milimetre hızla hareket ettirin.Dokunun üzerine bir gül yapıştırıcısı yerleştirin. Örneği ışınlamayın ve dokunun bağlanma gücünü ölçün. Bu işlem için gül yapıştırıcı filmler sterilize edilmelidir.Bu işlem %90 ethanol kullanılarak veya gama radyasyonu ile gerçekleştirilebilir. Bir Wistar sıçanını %4 gaz halindeki isofluran ile sedate edin ve hayvan ağrı refleksine yanıt vermemeye başladığında konsantrasyonu %2'ye düşürün. Ayak parmaklarını sıkıştırma gibi bir test uygulayın, sıçanın uyluk bölgesini tıraş edin ve sanitize edin.Operasyon mikroskobu altında cerrahi için konumlandırın, sağ uyluğun dorsolateral kısmında yaklaşık üç santimetrelik oblik bir cilt insizyonu yapın. Düz mikro makaslar kullanarak gluteal kaslar üzerinden kas ayırma yöntemiyle tibial siniri açığa çıkarın. Tibial sinirin adventisyasını kısmen diseke edin ve temizleyin.Fazla sıvıları steril gazlı bez veya pamuklu çubuklar yardımıyla emdirin. Ardından mikro pens kullanarak tibial siniri kesin. Tibial sinirin altına steril bir rose yapışkan şerit yerleştirin.Ardından, sinir güdüklerini roz adhezif şerit üzerinden uç uca yaklaştırın. Sinirlerin gerginlikten uzak olması önemlidir. Şerit, sinire tamamen yapışarak sinirin rotasyonuna yardımcı olabilecek bir kolye yapısı oluşturacaktır.Lazer ışınlaması sırasında, daha önce açıklanan şekilde lazerle roz adezivini aktive etme işlemine geçiniz. Son olarak, kasları ve cildi beş adet 3-0 sütürle kapatınız ve sıçanın iyileşme süreci için standart postoperatif protokolleri uygulayınız. Belirtilen protokole uyunuz.Elde edilen filmler parlak gül renginde, ince ve pürüzsüz bir yüzeye sahiptir. Filmler ayrıca esnektir ve yırtılma veya başka herhangi bir belirgin hasara yol açmadan küçük çaplı tüpler şeklinde rulo haline getirilebilir. Gül yapıştırıcısı 530 ve 562 nanometrede iki absorbsiyon pikine sahiptir.Böylece yeşil lazer, yapıştırıcı tarafından güçlü bir şekilde absorbe edilir ve 532 nanometredeki karşılık gelen zayıflatma uzunluğu yaklaşık 12 mikrondur. Buna karşılık, RB içermeyen Esan filmler lazerle çok düşük düzeyde zayıflatma gösterir. Gül rengi yapıştırıcı, lazer ışınlamasıyla bağırsağa sıkıca bağlanır ve kopma anında tipik olarak yaklaşık bir Newton'luk maksimum yüke ulaşır.Yapışma gücü, maksimum yükün yapışma yüzey alanına bölünmesiyle tahmin edilmiştir. Işınlanmamış gül yapışkanı dokuya önemli ölçüde daha az bağlanmıştır. Keto ve yapışkanın suyla tamamen çözünmez hale gelene kadar kurutulması önemlidir.Bu işlem yaklaşık iki hafta sürer. Ayrıca, yapıştırıcıyı hazırladığınız her seferinde asitlere ihtiyaç duyulur ve asitler çeker ocak altında işlenmelidir. Bu prosedürde lazerlerin kullanıldığını ve bunların çok tehlikeli olabileceğini, bu nedenle her zaman lazer koruyucu gözlük takmanız gerektiğini unutmayın.

fabrication-application-rose-bengal-chitosan-films-laser-tissue

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bir roman imalat, FDA onaylı malzemelerle esnek ince film cerrahi yapıştırıcı, chitosan ve indosiyanin yeşili açıklanmıştır. Bir düşük enerjili bir kızıl ötesi lazer ile basit bir aktivasyon işlemi yoluyla kollajen doku için bu yapışkan yapıştırılması gösterilmiştir.

Bir Kitosan Bazlı, Lazer Aktif İnce Film Cerrahi Yapıştırıcı, &#39;SurgiLux&#39;: Hazırlık ve Gösteri

Mevcut kök hücre tedavilerinde büyük bir engel konak dokularına bu hücrelerin sunmak için en etkili yöntem belirlemektir. Adipoz kaynaklı kök hücreler kendi multipotency korumasını sağlarken Burada, verimli ve yaklaşım, basit bir kitosan tabanlı dağıtım yöntemi açıklar.

Kök Hücre yüklü Chitosan Mikrokürelerin teslimi için bir Kollajen Hidrojel oluşturma

Bu makale, bir biofabrication yaklaşımı tarif: hücreleri ya da proteinler ile fonksiyonelleştirilmiş edilebilir biyouyumlu filmler oluşturmak üzere yanlı elektrotlar varlığında uyaran-tepkisel polisakaritler çökelmesi. Biz, laboratuar-on-a-çip etkileşimli uygulamalar için biofunctionalized yüzeyler oluşturmak için filmler gibi temel kullanımların üretimi için, bir tezgah üstü stratejisi göstermektedir.

Biofabrication ile Bio-Elektronik Arayüz Bridging

Bu protokol, miyokard enfarktüslerinin kök hücre tedavisi için bir hidrojel sistemi ve fibrin bazlı bir yapıştırıcı kullanılarak zayıf hücre aşılamasının sınırlamasını hafifletmeyi amaçlamaktadır. Bu yaklaşımla, enfarktüs sonrası hücreden dokuya temas korunabilir ve bu da yaralanma bölgesindeki faydalı ajanların terapötik potansiyelini artırır.

Bir Hidrojel Construct ve Fare Miyokard Enfarktüsü Modeli Therapeutics sunun için Tutkal Yaklaşım Fibrin tabanlı.

poli (N-izopropil akrilamid) -graft-kondroitin sülfat oluşan enjekte edilebilir doku mühendisliği iskelesi (PNIPAAm-g-CS) içeren aljinat mikro hazırlandı. Özellikleri ve in vitro biyouyumluluk şişme yapışma mukavemeti, bu çalışmada incelenmiştir. Burada geliştirilen karakterizasyon teknikleri diğer thermogelling sistemleri için geçerli olabilir.

Doku Mühendisliği Aljinat mikropartiküllerin ile Thermogelling Poli (N-izopropil) -graft-kondroitin Sülfat Kompozitlerin Sentezi

Ücretsiz çözelti kapiler elektroforezi, kimyasal reaksiyonların gerçek zamanlı olarak kantitatif olarak izlenmesini sağlayan hızlı, ucuz ve sağlam bir analitik yöntemdir. Hızlı, kullanışlı ve hassas analiz için faydası, burada gelişmiş hücre yapışması için kitosan filmler üzerine kovalent peptit aşılamasının analizi yoluyla gösterilmiştir.

Kapiler Elektroforez Real Time Kitosan Films üzerine Peptit Aşılama Monitör

Burada, insan periodontal bağ (PDL) hücre kürleri tarafından kitosan filmleri ile ilgili protokoller sunuyoruz. Üç boyutlu (3D) hücresel küreler kültürü geleneksel doku kültürü Polistiren (TCPS) kültür sistemine bir alternatif sağlar.

Kitosan filmlerde ınsan periodontal ligament hücre kürleri oluşumu

Mevcut protokol, kitosan-genipin mikrojellerinin üretimi için emülsiyon bazlı olmayan bir yöntemi tanımlamaktadır. Bu mikrojellerin boyutu hassas bir şekilde kontrol edilebilir ve pH'a bağlı şişlik gösterebilir, in vivo olarak bozulabilir ve zamanla sürekli bir şekilde salınan terapötik moleküllerle yüklenebilir, bu da onları doku mühendisliği uygulamaları için oldukça alakalı hale getirir.

Doku Mühendisliği Uygulamaları için Boyut Kontrollü ve Emülsiyonsuz Kitosan-Genipin Mikrojellerinin İmalatı

Mekanik olarak izole edilmiş stromal vasküler fraksiyon (SVF), bir fibrin hidrojel ile kombinasyon halinde, doku mühendisliği ve/veya yara iyileşmesi amaçları dahil olmak üzere çeşitli endikasyonlar için canlı adipoz türevli stromal hücreler için kolay ve verimli bir taşıyıcı sunar. Burada, translasyonel araştırma ve klinik uygulama için mekanik bir SVF (mSVF)-fibrin hidrojel yapısının hazırlanmasını sunuyoruz.

Mekanik Olarak İzole Edilmiş Stromal Vasküler Fraksiyon ve Fibrin Hidrojel Kombinasyonu: Bir İşleme Protokolü

Bu çalışma, sürekli ve aralıklı basınç ayarları altında 72 saat boyunca basınç ve sıvı toplamayı değerlendirerek yara örtüsü malzemelerinin negatif basınçlı yara tedavi sistemleri ile uyumluluğunu değerlendirmek için tasarlanmış bir tezgah üstü model sunmaktadır.

Yara Örtü Malzemelerinin Negatif Basınçlı Yara Tedavi Sistemleri ile Uyumluluğunun Değerlendirilmesi İçin Tezgah Üstü Model Geliştirilmesi

Tavşanlarda kornea stromal yara onarımı için yerinde mavi ışık-çapraz bağlanabilir jelatin–riboflavin hidrojelinin hazırlanması, zenginleştirilmesi ve uygulanması için tekrarlanabilir bir protokol sunulur; bu süreç cerrahi müdahale, kısmi tarsorrafi ve ameliyat sonrası bakım için prosedürel adımlar içerir.

Tavşanlarda Korneal yara onarımı için zenginleştirilmiş foto-çapraz bağlı jelatin–riboflavin hidrojellerin üretimi ve cerrahi uygulaması

Keşfedin lazer aktive kitosan yapıştırıcı üretimini ve periferik sinir onarımındaki uygulamasını. Bu biyouyumlu yöntem, geleneksel dikişlere göre doku hasarını azaltarak cerrahi müdahaleleri daha az invaziv hale getirir.

Fabrikasyon ve Lazer Doku Onarımı Rose Bengal-kitosan Film Uygulamaları

Daha fazla video keşfet