Name: Patch Clamp Elektrofizyoloji ve Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak arteriyel düz kas KV7 Potasyum Kanal Fonksiyon Exploring (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 2 s
Description: Keşfedin patch clamp elektrofizyolojisi ve basınç miyografisi kullanarak arteriyal düz kas Kv7 potasyum kanal fonksiyonunu. Bu yöntem, vasküler fizyoloji ve farmakoloji araştırmalarında damar sağlığını anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma KLB ve Amerikan Kalp Derneği (09PRE2260209) ve BKM Arthur J. Schmitt Vakfı&#39;ndan doktora öncesi burslar için Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü (NIH R01-HL089564) bir hibe ile finanse edildi.

<ol><li>Passmore, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KCNQ%2FM+Currents+in+Sensory+Neurons%3A+Significance+for+Pain+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">KCNQ/M Currents in Sensory Neurons: Significance for Pain Therapy.</a> J. Neurosci. 23, 7227-7236 (2003).</li>
<li>Falloon, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+small+artery+sensitivity+and+morphology+in+pressurized+and+wire-mounted+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Comparison of small artery sensitivity and morphology in pressurized and wire-mounted preparations.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 268, H670-H678 (1995).</li>
<li>Dunn, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+resistance+artery+sensitivity+to+agonists+under+isobaric+compared+with+isometric+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Enhanced resistance artery sensitivity to agonists under isobaric compared with isometric conditions.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 266, H147-H155 (1994).</li>
<li>Buus, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+sensitivity+of+rat+mesenteric+small+arteries+to+agonists+when+studied+as+ring+preparations+or+as+cannulated+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Differences in sensitivity of rat mesenteric small arteries to agonists when studied as ring preparations or as cannulated preparations.</a> Br. J. Pharmacol. 112, 579-587 (1994).</li>
<li>Abdelhalim, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+big+endothelin-1+in+comparison+with+endothelin-1+on+the+microvascular+blood+flow+velocity+and+diameter+of+rat+mesentery+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of big endothelin-1 in comparison with endothelin-1 on the microvascular blood flow velocity and diameter of rat mesentery in vivo.</a> Microvasc. Res. 72, 108-112 (2006).</li>
<li>Altura, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dose-response+relationships+for+arginine+vasopressin+and+synthetic+analogs+on+three+types+of+rat+blood+vessels%3A+possible+evidence+for+regional+differences+in+vasopressin+receptor+sites+within+a+mammal%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">Dose-response relationships for arginine vasopressin and synthetic analogs on three types of rat blood vessels: possible evidence for regional differences in vasopressin receptor sites within a mammal.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 193, 413-423 (1975).</li>
<li>Henderson, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasopressin-induced+vasoconstriction%3A+two+concentration-dependent+signaling+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Vasopressin-induced vasoconstriction: two concentration-dependent signaling pathways.</a> J. Appl. Physiol. 102, 1402-1409 (2007).</li>
<li>Mackie, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+KCNQ+potassium+channels+as+novel+targets+for+the+control+of+mesenteric+artery+constriction+by+vasopressin%2C+based+on+studies+in+single+cells%2C+pressurized+arteries%2C+and+in+vivo+measurements+of+mesenteric+vascular+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">Vascular KCNQ potassium channels as novel targets for the control of mesenteric artery constriction by vasopressin, based on studies in single cells, pressurized arteries, and in vivo measurements of mesenteric vascular resistance.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 325, 475-483 (2008).</li>
<li>Brueggemann, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+selective+cyclooxygenase-2+inhibitors+on+vascular+smooth+muscle+ion+channels+may+account+for+differences+in+cardiovascular+risk+profiles%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Differential effects of selective cyclooxygenase-2 inhibitors on vascular smooth muscle ion channels may account for differences in cardiovascular risk profiles.</a> Mol. Pharmacol. 76, 1053-1061 (2009).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Patch+Clamp+Technique%22">Patch Clamp Technique</a>. Kaneez, F. S. , Intech. (2012).</li>
<li>Berra-Romani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TTX-sensitive+voltage-gated+Na%2B+channels+are+expressed+in+mesenteric+artery+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">TTX-sensitive voltage-gated Na+ channels are expressed in mesenteric artery smooth muscle cells.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 289, H137-H145 (2005).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Burada açıklanan yöntemler ve deneysel yaklaşımlar oldukça sağlam ve titiz ile uygulandığında net ve tekrarlanabilir sonuçlar üretebilir. İyi elektrofizyolojik kayıtlar ve daralma / arterlerin dilatasyon sırasıyla hücreler ve arter segmentinin sağlığına bağlıdır. Hücre hazırlıklar hatta aynı protokolü kullanarak, günden güne değişebilir. İzolasyon Solutions en fazla 2 hafta için kullanılabilir, fakat hücre hazırlama kalitesi iki takip eden günlerde düşük ise yeni izolasyon çözüm hazırlanmalıdır. Bu enzim aktiviteleri en...

<table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Sodyum klorür </td><td> Sigma </td><td> S5886 </td><td> Kesme Çözüm: 145 Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 140 Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 10 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 140 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 145 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 145 </td></tr><tr><td> Potasyum klorür </td><td> Sigma </td><td> P5405 </td><td> Kesme Çözüm: 4.7 Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 5.36 Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 135 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 5.36 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 4.7 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 4.7 </td></tr><tr><td> Potasyum EGTA </td><td> Sigma </td><td> E4378 </td><td> Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 0.05 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Sigma </td><td> H9136 </td><td> Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 10 Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 10 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 10 </td></tr><tr><td> Disodyum hidrojen fosfat </td><td> Sigma </td><td> S5136 </td><td> Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 0.34 </td></tr><tr><td> Potasyum hidrojen fosfat </td><td> Sigma </td><td> P5655 </td><td> Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 0.44 </td></tr><tr><td> Magnezyum Klorür </td><td> Sigma </td><td> M2393 </td><td> Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 1.2 Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 1 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 1.2 </td></tr><tr><td> Kalsiyum Klorür </td><td> Sigma </td><td&gt; C7902 </td><td> Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 2 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 0.05 </td></tr><tr><td> Sodyum fosfat </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP331-1 </td><td> Kesme Çözüm: 1.2 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 1.2 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 1.2 </td></tr><tr><td> Magnezyum Sülfat </td><td> Sigma </td><td> M2643 </td><td> Kesme Çözüm: 1.17 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 1.17 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 1.17 </td></tr><tr><td> MOPS </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP308 </td><td> Kesme Çözüm: 3 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 3 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 3 </td></tr><tr><td> Piruvik asit </td><td> Sigma </td><td> P4562 </td><td> Kesme Çözüm: 2 Banyolu çözümbasıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi: 2 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 2 </td></tr><tr><td> EDTA dihidrat </td><td> Araştırma Organics </td><td> 9572E </td><td> Kesme Çözüm: 0.02 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 0.02 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 0.02 </td></tr><tr><td> D-Glikoz </td><td> Sigma </td><td> G7021 </td><td> Kesme Çözüm: 5 Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 10 Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 20 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 10 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 5 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 5 </td></tr><tr><td> Sığır serum albümini </td><td> Sigma </td><td> A3912 </td><td> Kesme Çözüm: 1% Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 1% </td></tr><tr><td> pH </td><td></td><td></td><td> Eriyik Diseksiyonn: 7.4 Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 7.3 Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 7.2 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 7.2 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 7.4 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 7.4 </td></tr><tr><td> Ozmolarite </td><td></td><td></td><td> Kesme Çözüm: 300 Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 298 Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 298 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 298 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 300 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 300 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> * 11 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Tablo 1. Deneyde kullanılan çözümler Bileşenleri. </td></tr></tbody></table>

patch clamp elektrofizyoloji ve basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak arteriyel düz kas kv7 potasyum kanal fonksiyon exploring

Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography

Direnç arterlerinin duvarları içinde düz kas hücrelerinin kasılması ya da gevşeme arter çapı belirler ve böylece damar yoluyla kan akışını kontrol eder ve sistemik kan basıncını katkıda bulunur. Daralma süreci öncelikle iyon taşıyıcıları ve çeşitli kanallar tarafından kontrol sırayla olduğunu sitozolik kalsiyum konsantrasyonu ([Ca 2 +] cyt) tarafından düzenlenir. İyon kanalları vazokonstriksiyon veya vazodilatasyon etkisi için vazoaktif hormonların aktive sinyal transdüksiyon yollarının sık ara vardır. Ve iyon kanalları genellikle ya kasten terapötik ajanlar veya bilmeyerek (istenmeyen kardiyovasküler yan etkilere neden örneğin) (örneğin kalsiyum kanal blokerleri vazodilatasyon ve düşük kan basıncı ikna etmek için kullanılır) hedeflenir. KV7 (KCNQ) voltaj bağımlı potasyum kanalları son zamanlarda önemli fizyolojik ve terapötik targı suçlanmışdüz kas kasılması düzenlenmesi için ets. Fizyolojik sinyal transdüksiyon hem de terapötik ajanların eylemleri KV7 kanal spesifik rolü aydınlatmak için, hem de dokunulmamış arter bağlamında etkisini değerlendirmek olarak etkinliğinin hücresel düzeyde modüle edilmektedir nasıl çalışma gerekir. Sıçan mezenter arterleri kullanışlı bir model sistem sağlar. Arterler kolayca diseke bağ dokusu temizlenir ve yama kelepçe elektrofizyoloji için izole arteriyel miyositler hazırlamak için kullanılan veya kanüle ve nispeten fizyolojik koşullar altında vazokonstriktör / vazodilatör yanıtları ölçümleri için basınç olabilir. Burada ölçümler her iki tür için kullanılan yöntemleri açıklamak ve deneysel tasarım vasküler tonusun düzenlenmesinde bu iyon kanallarının rolleri net bir şekilde anlaşılmasını sağlamak için entegre edilebilir nasıl bazı örnekler verir.

Yılanı / dilatör yanıtları (basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak) ölçümleri ile paralel izole arteriyel miyositler (yama elektrofizyolojik teknikler kelepçe kullanarak) KV7 (KCNQ) potasyum kanal aktivitenin ölçümleri vasküler düz kas fizyolojisi KV7 kanalları rolleri hakkında önemli bilgiler ortaya çıkarmak ve olabilir farmakoloji.

Patch Clamp Elektrofizyoloji ve Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak arteriyel düz kas KV7 Potasyum Kanal Fonksiyon Exploring

Direnç arterlerinin duvarlarındaki düz kas hücrelerinin kasılması veya gevşemesi, arter çapını belirler ve böylece ... akışını kontrol eder.

Bu prosedürün genel amacı, taze olarak ayrıştırılmış mezenterik arter düz kas hücrelerindeki KV seven potasyum kanallarının aktivitesini ölçmek ve bunu fizyolojik koşullar altında kaydedilen arter çapı ölçümleriyle ilişkilendirmektir. Bu işlem, öncelikle bir sıradan mezenterik vasküler arkadın cerrahi olarak çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım ise mezenterik arter segmentlerinin diseke edilmesi ve temizlenmesidir.Ardından, KV7 potasyum akımlarının patch clamp elektrofizyolojik ölçümlerini yapmak üzere tekil düz kas hücrelerini izole etmek için bazı segmentler kullanılır. Son adım, KV7 potasyum kanallarının farmakolojik modülatörlerine yanıt olarak gelişen arteriyel konstriksiyon veya dilatasyonun basınç miyografisi ölçümleri için sağlam arteriyel segmentlerin kanülasyonudur. Nihayetinde, patch clamp elektrofizyolojisi ve basınç miyografisinin kombinasyonu, KV7 potasyum kanallarının aktivitesindeki artış veya azalışın mezenterik arteriyel konstriksiyonu nasıl etkilediğini göstermek için kullanılır.Bu tekniğin, hücre hatlarında eksprese edilen klon kanalların kullanımı gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, akımların kanalları doğal olarak eksprese eden kültürlenmemiş h

exploring-arterial-smooth-muscle-kv7-potassium-channel-function-using

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

BK kanalları İyonik akım yama klemp teknikleri kullanılarak kaydedildi. BK kanalları ifade edilmiştir.

İyon Kanalları incelenmesi için yama Kelepçe ve Perfüzyon Teknikleri cinsinden ifade edilir Xenopus Oosit

Kv kanal disfonksiyonu kardiyak aritmiler ile ilişkilidir. Biz Kv kanal yan altbirim knockout farelerde atriyal ve ventriküler kardiyomiyositlerde izolasyonu için sistematik bir protokol kullanmak gibi aritmiler neden moleküler mekanizmaları incelemek için. İzole kardiyomiyositlerde hemen sonra hücresel elektrofizyolojik çalışmalar, biyokimyasal ya da immunofloresan (IF) deneyleri için de kullanılabilir.

Mürin Atriyal ve Ventriküler kardiyomiyositlerde izolasyonu ve Kv Kanal Kayıtları

Burada bir perfüzyon Langendorff sistemi kullanılarak erişkin fare cardiomyoctyes izolasyonunu tarif eder. Elde edilen hücreler, + toleranslı elektriksel olarak hareketsiz Ca2 ve kültürlenmiş ve adeno-veya gen ekspresyonunu değiştirmek için lentivirüsler ile transfekte edilmiş olabilir. Bunların işlevi de MMSYS sistemi ve yama kelepçe teknikler kullanılarak analiz edilebilir.

İzolasyon, Kültür ve Yetişkin Fare Cardiomyoctyes Fonksiyonel Karakterizasyonu

Basınç myography basınçlı zaman sürekli daralma geliştirmek küçük arterlerin vazoaktiviteye değerlendirmek için kullanılır. Bu yazıda sıçanların, vazoaktiviteye ve damar çapı intraluminal basıncın etkisi küçük mezenterik arterler izole segmentlerinde değerlendirmek için ayrıntılı bir protokol sağlar.

Basınç myography kullanma Direnç Mezenterik Arter ise andMyogenic Tepkisi ve vazoaktiviteye Değerlendirilmesi

electroformation ve jel destekli şişme - dev tek tabakalı veziküller (GUVs) içine transmembran protein, KvAP, şifreden iki dehidrasyon-rehidrasyon yöntemleri için gösterilmiştir. Her iki yöntemde de, protein içeren küçük tek lamelli kesecikler, sonra, flüoresans mikroskopisi ve yama klempi elektrofizyoloji ile incelenebilir GUVs oluşturmak üzere bir araya birleştirilir.

Bir transmembran proteinin yeniden oluşturulması, Mikroskop ve yama kelepçe Çalışmaları Dev tek-katmanlı keseler içine Voltaj kapılı iyon kanalı, KvAP,

Bu el yazması arteriyoller elektrofizyolojik, kalsiyum görüntüleme ve baskı myography çalışmalarda kullanılan fare retina üzerinden yalıtım için basit bir protokol açıklar.

Retina arteriyoller yalıtım Ex Vivo Hücre fizyolojisi çalışmaları için

Bu makalenin birincil amacı, mikroelektrot Kazığa oturtma yöntemini kullanarak orta serebral arter membran potansiyelinin (Vm) nasıl kaydetilme ayrıntılarını sağlamalıdır. Kanüle orta serebral arter miyojenik tonu elde etmek için dengelenmiş, ve damar duvarı yüksek direnç mikroelektrotları kullanılarak kazığa olduğunu.

Mikroelektrot Impalement yöntemi bir kanüle orta serebral arter membran potansiyelini kaydetmek için

Bu protokol, fare aort endotel fonksiyonunun deneysel ex vivo değerlendirmesinde çok odacıklı bir miyograf sistemi kullanılarak tensometrik miyograf tekniğinin kavramlarını ve teknik uygulamasını açıklamaktadır.

Fare Torasik Aortunda Endotele Bağlı Vazogevşemenin Tensometrik Küçük Hacimli Oda Miyografisi ile Ölçülmesi

Bu protokol, tüm hücre yama kelepçesi tekniğini kullanarak H9c2 kardiyomiyositlerinde voltaj kapılı potasyum (Kv) kanal akımlarının gerçek zamanlı ve dinamik olarak elde edilmesi için etkili bir yöntem tanımlamaktadır.

Tüm Hücre Yama-Kelepçe Tekniği ile H9c2 Kardiyomiyositlerine Voltaja Bağlı Potasyum Akımı Kaydı

Bu protokol, sıçan baziler arterinden düz kas hücrelerini izole etmek ve tüm hücre yama kelepçesi tekniğini kullanarak bu hücrelerde içe doğru doğrultucu potasyum kanal akımlarını kaydetmek için hızlı ve etkili bir yöntemi tanımlar. Baziler arter ve iyon kanallarını inceleyen araştırmacılar için yeni bir yaklaşım sunar.

Yeni İzole Edilmiş Baziler Arter Düz Kas Hücrelerinde İçe Doğru Doğrultucu K+ Akımlarının Yama Klemp Tekniği ile Kaydedilmesi

Keşfedin patch clamp elektrofizyolojisi ve basınç miyografisi kullanarak arteriyal düz kas Kv7 potasyum kanal fonksiyonunu. Bu yöntem, vasküler fizyoloji ve farmakoloji araştırmalarında damar sağlığını anlamaya yardımcı olur.

Patch Clamp Elektrofizyoloji ve Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak arteriyel düz kas KV7 Potasyum Kanal Fonksiyon Exploring (Video) | JoVE Journal

Patch Clamp Elektrofizyoloji ve Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak arteriyel düz kas KV7 Potasyum Kanal Fonksiyon Exploring

Daha fazla video keşfet