Whiteflies kullanarak Verici Bitki Virüsler

Aşağıdaki deneyin genel amacı, beyaz sinekler aracılığıyla bitki virüslerini iletmektir. Bu, diğer potansiyel vektörler ve patojenlerle kontamine olmamış, haftalık bazda yeni çıkmış ergin beyaz sinekler sağlayan bir beyaz sinek kolonisinin kurulması ve sürdürülmesiyle gerçekleştirilir. Koloniler, yeni erginlerin üretildiği, böcek içermeyen genç bitkilere düzenli olarak beyaz sinekler eklenerek sürdürülür.

Her hafta 17 ila 20 gün sonra, yeni çıkan yetişkinler, virüs iletimini kazanmaları veya iletmeleri için test bitkilerine aktarılabilir. Tipik olarak yaklaşık %100'lük verimlilikler elde edilir ve iletim oranları genellikle düşük başlar ve sistematik optimizasyonla yükselir. Virüsleri inoküle etmek için beyaz sineklerin kullanılmasındaki en zorlayıcı yön, beyaz sineklerin istenmeyen patojenlerin ve böceklerin dışlandığı bir şekilde yetiştirilmesidir.

Özellikle kök çürükçül mantarlar ve yaprak yanıklıkları gibi patojenler, virüs konukçusu bitkilerin kalitesini düşürecektir. Tripsler gibi istenmeyen böcekler, beyazsinek üremesini baskılayabileceği gibi virüs konukçusu bitkinin kalitesini de bozabilir. Prosedürleri, laboratuvarımdan bir teknisyen olan Heather Capa Bianco uygulamalı olarak gösterecektir.

Beyaz sinek kolonileri temiz ve kontrollü bir yetiştirme odasında muhafaza edilmelidir. Yumurtadan erginliğe 18 günde gelişen bir koloni için bağıl nem, sıcaklık, fotoperiyot ve ışık şiddetinin kontrolü esastır; şu ayarları kullanın. Sıcaklık 26 ile 30 derece Celsius arasında ayarlanmalı ve bağıl nemin ideal olarak %30 ile %50 arasında olması gerekir. Bağıl nem %70'in üzerine çıkarsa, böcek ve bitki fungal patojenlerin sorun oluşturması muhtemeldir.

İdeal fotoperiyot 14 saattir. Işık şiddeti oldukça yüksek olmalı ve VHO floresan lambalar bitki kanopisinde 800 ila 1000 foot-candle değerinde ışık sağlayabilir. Fungals patojenlerin yanı sıra tuz birikimini önlemek için gübreleme oranları ve sulama da azaltılmalıdır. Whitely kafesleri; havalandırmaya, erişim kolaylığına ve büyüyen bir whitely popülasyonu için yeterli alana izin vermelidir.

Organza kumaş artı alüminyum eleme ve beyaz kanıtlı eleme ile iyi sonuçlar elde edilmiştir. Bitki türünün seçimi önemli bir husustur. İlk olarak, bitki hızlı büyümeli ancak kabini aşırı doldurmamalıdır. İkinci olarak, bitki, çökmeden yüksek bir böcek popülasyonunu destekleyecek kadar güçlü olmalıdır.

Bu nedenlerle, cüce veya çalı formundaki kültivarlar uygun bitki seçimleridir. Üçüncü olarak, yetiştirilecek koloninin türüne bağlı olarak, bitki kullanılan virüsü ya barındırabilmeli ya da barındıramamalıdır. Akarlar, THP'ler, yabani beyaz sinekler veya diğer istilacı böcekler nedeniyle koloni çökebileceğinden, seçilen kültivarlar diğer böcekleri dışarıda bırakacak korunaklı bir ortamda yetiştirilmelidir.

Yeni bir koloninin ilk beyaz sinekleri; bitki virüslerinden, diğer böceklerden ve böcek patojenlerinden arındırılmış olmalıdır. Eğer beyaz sinekler sahadan toplanmışsa, bunları en az sekiz hafta boyunca virüse konukçuluk yapmayan bitkiler üzerinde yetiştirin ve bu süre zarfında bitkilerde semptom olup olmadığını kontrol edin. Temiz beyaz sinekler elde edildiğinde, aspirasyon yoluyla veya başka bir kaynak bitkiden nazikçe sallayarak 20 ila 100 adet sineği bitkilerin bulunduğu kafese yerleştirin.

Her hafta yeni bir kafes kurulması gerekir. İlk üç hafta boyunca, yeni kafesi kurmak için ST dışı bitkiler üzerindeki beyazsinekler kullanın. Dördüncü haftadan itibaren, bir sonraki kafesi kurmak için üç haftalık kafesteki genç yetişkin beyazsinekleri kullanın.

Kafesteki ilk hafta boyunca, beyaz sinekler yumurtalarını bitki yapraklarının alt yüzeylerine bırakacaktır. İkinci haftada, henüz gelişmemiş beyaz sinekler görünür hale gelecek ve yetişkinlerin bir kısmı hâlâ hayatta olacaktır. Üçüncü haftada, birçok yeni yetişkin beyaz sinek ortaya çıkmış olacak ve yetişkin beyaz sinek popülasyonunda oldukça belirgin bir artış gözlemlenmelidir.

Bu beyazsinekler iletim deneylerinde kullanılabilir. Dördüncü haftada, bir haftalık yetişkinler yeni bir kafese aktarılmalıdır. Eski kafes kaldırılmalı ve içindeki bitkiler imha edilmelidir. Hassas.

Beyaz sineklerin nazikçe aktarımı, bir aspirasyon cihazı ve toplama tüpleri ile gerçekleştirilir; asla doğrudan vakumlamayın. Bitkilerle beslenen beyaz sinekler, beslenme sırasında bitkiye gömüldükleri için bitkiden çekildiklerinde kopacaklardır. Bu durum beyaz sineği kullanılamaz hale getirir. Beyaz sinekleri toplamak için bir elinizle sarı plastik bir koruyucuyu koloni kafesinin içinde tutun, diğer elinizle işlemi gerçekleştirin.

Yetişkin beyaz sineklerin uçmasını sağlamak için bitmelere hafifçe vurun. Beyaz sinekler, toplama işleminin yapılabileceği sarı karta yönelecektir. Aspiratörü kullanarak ve çok hafif bir vakum uygulayarak her toplama tüpüne en fazla 20 beyaz sinek ekleyin.

Ardından, sineklerin yönünü şaşırtmak için tüpe hafifçe vurun ve tüpü parafilm ile kapatın. Başarılı viral iletim sağlamak için, virüse ve konukçu bitkiye bağlı olarak, virüsle enfekte olmuş bitkilerden sağlıklı bitkilere 15 ila 40 genç yetişkin aktarmayı deneyin. Direnç taraması gibi diğer protokoller daha büyük başlangıç popülasyonlarına ihtiyaç duyar.

Bu durumda, beyaz sineklerle istila edilmiş virüsle enfekte bitkileri, inoküle edilmesi gereken bitkilerin üzerine sallayın. Beyaz sinekler virüsle enfekte bir bitkiye yerleştirildikten sonra, kalıcı olarak iletilen virüsleri edinmeleri için 48 ila 72 saat boyunca beslenmelerine izin verin. Daha fazla süre, genellikle non-persistan veya yarı-persistan şekilde iletilen virüslerin iletim oranını artırmaz.

Belirli yapraklardan edinim gerektiren deneyler için bir saatten bir güne kadar daha kısa bir edinim erişim süresi yeterli olacaktır. Klipsli kafesler kullanılabilir; kafesi yaprağın alt yüzeyi erişilebilir olacak şekilde kurun ve 2,5 santimetre çapındaki kafes başına 10'dan fazla dişi Beyaz sinek kullanmayın, aksi takdirde kalabalıklaşma nedeniyle iletim oranı düşecektir. Bitki inokülasyonu için bitki sayısını göz önünde bulundurarak uygun kafesi seçin.

Örneğin, tek bir bitki için sadece kendisinden biraz daha büyük küçük bir kafes gerekir; birden fazla bitki için ise daha küçük bir PVC boru, çerçeveli kafes veya daha büyük bir alüminyum çerçeveli kafes arasında seçim yapın. Bitki kanopisinin etrafındaki alan ne kadar küçük olursa o kadar iyidir. Beyaz sinekler yeni bitkiye eklendikten sonra, inokülasyon için gereken süre virüse ve konukçu bitkiye bağlıdır.

Edinimde olduğu gibi, iletim için gereken süre iletim biçimine bağlıdır. Non-persistan iletim, yarı-persistan veya persistan iletime göre çok daha kısa bir erişim süresi gerektirir. İnokülasyon erişim süresi boyunca beyazsineklerin sondaj yaptığından veya beslendiğinden emin olun.

Kafesi açın ve her bitkideki bazı yaprakların alt kısımlarını inceleyin. Daha uzun süreli inokülasyon erişim dönemlerinde, bitkilerin yeniden dağılmasını teşvik etmek için bitkileri periyodik olarak hafifçe sarsın.

Bu işlem, beyaz sineklerin aşılama döneminin sonunda kümelenme yönündeki doğal eğilimlerini karşılayarak iletim hızını artıracaktır. Beyaz sinekleri, art arda uygulanan iki insektisit ile öldürün. İlk olarak, insektisidal sabun gibi, yetişkin beyaz sinekleri hızlıca etkisiz hale getirmek için kontak etkili bir insektisit uygulayın.

İkinci olarak, takip eden haftalarda gelişebilecek beyaz sinekleri yok etmek için sistemik bir insektisit uygulayın. Kalan yetişkinler için imidacloprid veya pyrethrin etkili seçeneklerdir. Bu prosedürler kullanılarak, rutin olarak %100 oranında virüs iletim hızları elde etmek mümkündür. Bu denli yüksek iletim oranları, test bitkilerinin virüs direncini tararken gereklidir ve kimyasal bileşiklerin virüs iletimini engelleme yeteneklerinin etkinliğini değerlendirirken tercih edilir.

Bu videoyu izledikten sonra, beyaz sineklerin nasıl yetiştirileceği ve bitki virüslerini bulaştırmak için nasıl kullanılacağı konusunda iyi bir anlayış kazanmış olacaksınız. Bu prosedürler, araştırma amaçları için, virüse dirençli bitkilerin ticari geliştirilmesi için veya bileşiklerin virüs bulaşmasını engelleme yeteneklerini test etmek için kullanılabilir.