Damar Hastalığı Çalışmaları Farelerde Ortotopik Aort Nakli

Bu prosedürün amacı, donör farenin abdominal aortasını allojenik bir alıcı fareye nakletmektir. Bu işlem, öncelikle donör aortanın elde edilmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, alıcı hayvanda greft bölgesi oluşturulur.

Ardından, alıcı hayvanın doğal aortu diseke edilir ve bölünür. Son adım, donör aortu implante etmek için iki uç uca vasküler anastomoz kullanmaktır. Nihayetinde, bu prosedür allojenik suş kombinasyonlarında transplantasyon sonrası vasküler hastalık gelişimini incelemek için kullanılabilir.

Bu yöntemin, örneğin heterotopik kalp transplantasyonuna göre avantajı, damarların tek tip boyutta olması nedeniyle morfometrik analizin daha kolay yapılabilmesidir. Ayrıca, damar; hücresel infiltratlar ve analizi karmaşıklaştırabilecek diğer unsurların bulunabileceği parankimal doku ile çevrili değildir. Bu tekniğin kullanılması, özellikle insan klinik transplantasyonlarında çözülemeyen bir sorun olan transplantasyon sonrası vasküler hastalıklarla ilgili mekanizmaların gösterilmesinde faydalı olabilir.

Stres etkilerini minimize etmek ve enerji rezervlerini maksimize etmek için, hayvanları cerrahi işlemden önce en az 72 saat boyunca vivaryumda tutun. Cerrahi gününde, 35 ila 38 derece Celsius'ye ayarlanmış bir ısıtıcı pedin üzerine metal bir ameliyat tahtası yerleştirin. Ardından, anestezi sonrası hayvanın ventral abdomen bölgesindeki tüyleri temizleyin.

Hayvanı ameliyat masasına ekstremiteleri açık konumda sabitlemek için laboratuvar bandı kullanın ve ardından tıraşlanmış tüm alanı önce bir dezenfektan, ardından etanol ile steril makas yardımıyla üç kez sanitize edin. Daha sonra, abdominal viseral organları açığa çıkarmak için vücut duvarı boyunca bir insizyon yapın. Ardından, steril bir pamuklu çubuk kullanarak viseral organları sıcak salin ile ıslatılmış bir steril gazlı bez üzerine yana doğru itin ve karın bölgesindeki büyük damarları açığa çıkarın.

Şimdi, abdominal aortu, inferior vena cava da dahil olmak üzere çevre dokulardan çok dikkatli bir şekilde künt diseksiyonla ayırın ve ardından lomber arteri dikkatlice kaldırıp koterize edin. Diseksiyon için seçilen aorta bölümü, renal damarların altında ve aortun femoral arterlere ayrıldığı bifurkasyonun üzerinde olmalıdır. Bölge tanımlandıktan sonra, renal arterlerin hemen altına bir sütur ve bifurkasyonun hemen üzerine başka bir sütur atın.

Ardından, aortu bölmek için makas kullanın ve ardından damarın bir ucunu çok dikkatli bir şekilde tutarak, yerçekimi yardımıyla damarın içinden akması için heparinli salin damlatın. Daha sonra damar uçlarına mümkün olduğunca az dokunarak grefti çıkarın ve hemen buz soğukluğundaki bir salin kabına yerleştirin.

Alıcı hayvana anestezi ve analjezi uyguladıktan sonra, gösterildiği gibi ventral abdomen bölgesini tıraş edin. Gözlerin kurumasını önlemek için gözlere gentamisin oftalmik pomad uygulayın ve ardından yeterli dezenfeksiyonu sağlamak için abdomen bölgesini gösterildiği şekilde sterilize edin. Şimdi cilt ve vücut duvarı boyunca aşamalı olarak orta hat üzerinden bir insizyon yapın.

Ardından, klembin gövdesinin engel teşkil etmemesi için vida düzeneğini hayvanın arka ucuna doğru yönlendirerek, abdominal insizyonu açık tutmak amacıyla bir ayırıcı yerleştirin. Sonra, bağırsakların üzerine salinle ıslatılmış steril bir gazlı bez yerleştirin. Ardından, bir parmağınızla gazlı bezi nazikçe yerinde tutun.

Bağırsakların altına steril bir pamuklu çubuk yerleştirin ve bağırsaklar gazlı bezin üzerine gelecek şekilde onları nazikçe kenara çekin. Bağırsakların üzerine başka bir parça steril gazlı bez yerleştirin ve bunu salin ile ıslatın. ATA ve inferior vena cava'yı örten yağ dokularını nazikçe temizledikten sonra, infrarenal aortu inferior vena cava'dan dikkatlice ayırmak için pens kullanın.

Şimdi iki klembe yerleştirecek kadar geniş bir alanı temizleyin ve bölündüğünde greftin sütüre edilebileceği yeterli damar uzunluğunun kalmasını sağlayın. Siyah sütürün, damar boyunca ağırlığınızı hissetmek için kullanılabileceğini unutmayın. Diseksiyon sırasında damar dallarını arayın ve gerektiğinde düşük sıcaklıklı bir koterle bu dalları koterize edin.

Ardından, bir vasküler klempi renal arterin hemen altına ve diğer vasküler klempi bifurkasyonun hemen üzerine yerleştirin. Daha sonra aortayı kesin. Bu örnekte, iki klembin ortasına yakın bir dal damar koterize edildiği için kesi bifurkasyona daha yakın yapılmıştır; bu durum, burayı anastomoz için uygun bir bölge haline getirir. Aortanın uçları genellikle geri çekilerek yaklaşık beş milimetrelik bir boşluk bırakacaktır.

Hemostazı kontrol edin. Klempler doğru çalışıyorsa, kesimden sonra sadece az miktarda kan sızmalıdır. Ardından, aortun kesilen uçlarını heparinli salin ile durulayın ve fazla solüsyonu pamukla temizleyin.

Şimdi, her iki uçta üç adet ayrı dikiş kullanarak grefti yerine sabitleyin. Ardından, her iki uçta anastomozun bir tarafını dikin ve geri kalan kısmı yedi ila sekiz adet ayrı dikişle tamamlayın. Sürekli dikiş tercih edilirse, damar duvarlarının gevşek kalmasına ve anastomozda stenoz oluşmamasına dikkat edin.

Şimdi aortanın kranial ucundaki klempi dikkatlice çıkarın ve sütur hatlarında sızıntı olup olmadığını kontrol edin. Ardından, ıslatılmış bir pamuk aplikatör ile anastomoz bölgesinin üzerindeki aortaya hafifçe bastırın ve ikinci klempi çıkarın. Damarın açık olduğunu doğrulamak için aortaya birkaç kez hafifçe bastırıp bırakın. Greft hemen perfüze olacak ve bir nabız görülmelidir.

Şimdi, bağırsakların üzerindeki gazlı bezi kaldırın ve bağırsakları, normal anatomik oryantasyonlarını koruyarak ve bükülmesini önleyerek tekrar yerlerine yerleştirin. Kas tabakasını kapatmak için beş sıfır Vicryl sütür kullanın ve ardından cildi beş sıfır veya altı sıfır proline sütür ile kapatın. Anesteziyi sonlandırmadan önce analjeziyi artırmak için fareye deri altından karprofen uygulayın ve ardından aynı yolla fareye 0,5 ila 0,8 mililitre salin verin.

Son olarak, fareyi iyileşme için ısıtılmış bir kafese yerleştirin ve hayvanı dikkatle izleyin. Operasyondan 12 ve 24 saat sonra, hayvana sırasıyla deri altı yoluyla buprenorfin ve karprofen uygulayın. Bu ilk şekil, bir aort greftini göstermektedir.

Burada beyaz oklarla belirtilen sütür hatlarına dikkat edin. Alıcıların sağkalımının 56 günlük bir süre boyunca takip edildiği tipik bir deney betimlenmiştir. Kontrol grubu, bowel C aortaları nakledilen wild type C 57 BL six by FVB alıcı farelerden oluşmaktadır.

Deney grubu, hem oksijenaz bir ekspresyonu eksik olan C 57 BL six by FVB alıcılardan oluşmuştur. Bu nakavt, 24 saat içinde greftlerin trombozuna yol açar. Özellikle, bu durum tüm alıcıların ölümüyle sonuçlanmıştır.

Bu son şekil, normal bir hayvan ile nakil alıcısındaki inferior vena cava ve abdominal aorta ekokardiyografi ölçümlerini göstermektedir. Graftın açık olduğuna ve görünüm açısından nakil yapılmamış aortaya benzediğine dikkat edin. Gördüğünüz üzere, dokular oldukça hassas ve küçüktür; bu nedenle bu prosedürün kesinlikle zamanla kazanılan bir beceri olduğunu ve dolayısıyla yöntem bir kez ustalıkla öğrenildikten sonra başarılı ve rutin bir şekilde uygulanabilmesi için hatırı sayılır miktarda pratik gerektiğini unutmamalısınız.

Bu teknik, uygun şekilde uygulandığında bir saat içinde tamamlanabilir.