Name: Araştırma Bronkoalveoler Lavaj (BAL); Yeterli Örnek Verim Alma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-24T19:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 47 s
Description: Öğrenin bronkoalveoler lavaj tekniğini; düşük basınçlı aspirasyonla akciğer immün hücreleri toplanır. Yerel anestezi ve hafif sedasyonla hasta güvenliği sağlanır, hücre canlılığı korunur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Araştırma bronkoskopilerin ile yaptığı desteği için Elena Mitsi (Araştırma Görevlisi) ve Sr Carole Hancock (Araştırma hemşire) ve filme katkılarından dolayı tiyatro personel, ve David Shaw (araştırma hemşire) teşekkür ederiz. Bu prosedür filme izin verdiği için de bizim gönüllü Rebecca Dunphy için teşekkürler.

1.. Konular Solunum Araştırma Hemşiresi tarafından Geliş Met vardır <ol><li> Konu katı gıda ve berrak sıvıların 1 için 2 saat süreyle&gt; 4 saat oruç olmuştur. </li><li> Prosedürü (standart hastane politikası uyarınca) uygun öncesi ve işlem sonrası kontrolleri ile bir günlük vaka olarak gerçekleştirilir. </li><li> Konu bir hastane elbisesi giyer. </li><li> Küçük bir göstergesi kanül (ideal sol eline) yerleştirilir ve işlem sonrası iyileşme dönemi 1 sonuna kadar yerinde kalır. </li><li> Uygulama öncesi gözlemler alınır (kan basıncı, kalp hızı, oksijen satürasyonu [sats]). </li><li> Konu bronkoskopi aktarılır. </li></ol> 2. Konu Bronkoskopi deneyimli bir Solunum Araştırma Klinisyen tarafından Suite Prosedür için hazırlanır <ol><li> 3-kurşun EKG, pulse oksimetre 1,10 ve tansiyon aleti; izleme ekipmanları da dahil olmak üzere takılır. Anesthetic destek yazılı bilgilendirilmiş onam dahil olmak üzere gerekli değildir. </li><li> Oksijen&gt;% 90 1 satürasyonu elde etmek kadar 4 L / dk nazal kanül aracılığı ile teslim edilebilir. </li><li> Operatör, bu steril serum fizyolojik aspire etkili emme sağlanması içerir, bronkoskop denetler. </li><li> Lidokain ile topikal anestezi (lidokain kullanılarak) (Instillagel 1 kullanarak) burun ve ağız mukozasında elde edilir </li><li> Sedasyon uygun ve konu ile talep varsa, intravenöz midazolam 1 verilir. Uygun bir ters madde (flumazenil) hemen kullanılabilir. </li><li> Resüsitasyon ekipmanı 1,10 hazır olmalıdır. </li></ol> 3. Bronkoskop yerleştirilebilirler edilir <ol><li> Entübasyon burun üzerinden genellikle. Bu durum, nazal polipler, iltihaplı konka ya da sonra herhangi bir rahatsızlık söz konusu ağız yolu ile entübe mümkün değilse (bir ağız koruma önlemek için kullanılır) kapsamı veya deneğin dişlerine zarar verebilir. </li><li> Gırtlak topikal anestezi genellikle 4-6 ml toplam kullanılan,% 4 lidokain kullanılarak tamamlandı. Genellikle bu damlatılmasından üzerinde öksürüğe neden olur. </li><li> Ses telleri geçti ve olan sağ alt lob (RLL) ve sağ orta lob (RML) bölünmesi de ve RML girişinde, karina 2 lidokain% 2 ml&#39;lik numuneler kullanılarak daha fazla mukozal anestezi. </li><li> Bronkoskop emme (&#39;Wink test&#39;, emme düğmesi kullanılarak uygulandığı zaman hava yolu daraltır ve böylece güvenli bir konumda olmak için yeterince uzak ama çok uzak olmayan bir konumda, ideal medial segmentte, RML içinde konumlandırılır .) </li><li> İyi konumlandırma tam bronkoskopist ve hemen nazik emiş tam kapanmıyor bir havayolu konumunda muhafaza edilebilir bir bronkoskop ile Göz testi sırasında belirtilir. </li></ol> 4. BAL Yapılır <ol><li> Dört 60 ml şırınga önceden vardır60 ml, 50 ml, 50 ml, ve birbirini takip eden şırıngalar içinde, 40 ml - ısıtıldı, normal tuzlu su ile doldurulur. Konu ve bronkoskopist hazır olduğunuzda bronkoskopist RML olarak konumunu korumaktadır ederken tuzlu ilk şırınga bronkoskopi asistanı tarafından telkin edilir. </li><li> Nazik el emme sonra aynı port ve 50 ml şırınga kullanarak asistanı tarafından yapılır. </li><li> Bu prosedür, o zaman özel bir teknik kullanılan 200 ml&#39;lik bir maksimum hacme sahip, bir başka 3 kez tekrar edilir. </li><li> Alınan BAL sıvısı zaten erimeye buz üzerinde tutulan etiketli kaplar içine yavaşça dışarı atılır. Cam kaplar, hücre bağlanmasının inhibe edilmesi ve hücre dönüş en üst düzeye çıkarmak amacıyla presiliconized olabilir. </li><li> BAL sıvısı yüzey aktif maddeler ile oluşan yüzey, sabun köpüğü ile ışığa karşı puslu görünür. </li><li> Bronkoskop yavaş yavaş tamamen çekilir. </li><li> BAL sıvısı anında işlem için buz üzerinde bir gecikme olmaksızın taşınır. </li></ol> 5. Konu Kurtarma </p&gt; <ol><li> Konu bir koğuşta solunum araştırma hemşiresi tarafından 2-4 saat için geri kazanılır. </li><li> Bu süre içinde onlar (kendi yutmak güvenli olarak değerlendirilir zaman) işleminden sonra, sırayla aspirasyon riskini azaltmak dinlenmek ve daha sonra sadece yemek ve&gt; 60 dakika 1 içmek için izin verilir. </li><li> Mesaj usul gözlemler izlenir ve kaydedilir. Bir klinik muayene deşarj öncesinde oluşur. </li><li> Konu yaygın yan etkileri (ateş, hafif sağ submamariyan göğüste rahatsızlık hissi, boğaz ağrısı) hakkında Taburcu bilgi verdi ve önemli yan etkileri 1 oluşması durumunda bir irtibat numarası verilir. </li><li> Konu takip edilir 1-5 gün bir klinik temas sonrası prosedür de. Bu telefonla ya da şahsen olabilir. </li></ol> 6. Hücreler Laboratuvarında İzole nelerdir - Erime Ice gerçekleştirin nerede Olası <ol><li> BAL sıvısının hacmi, steril bir gazlı bez bir çift tabaka ile kaydedilir ve süzülürönceden soğutulmuş, steril bir 50 ml santrifüj tüplerine mukus fişler kaldırın. </li><li> Hücreler, 5-10 dakika boyunca 4 ° C&#39;de 500 x g&#39;de santrifüj ile pelet haline getirildi ve 50 ml normal tuzlu su içinde soğuk bir vorteks ile yıkanır. Santrifüj bir kez tekrarlanır. </li><li> Hücreler (RPMI-1640 +% 10 cenin sığır serumu + 2 mM L-glutamin + Penisilin [40 IU / ml], streptomisin [75 IU / ml] ve amfoterisin B [0.5 IU / ml]) ve kültür ortamında yeniden süspanse diferansiyel sayma tripan mavinin eşit hacmi ve bir hemasitometre kullanılarak gerçekleştirilmiştir. </li><li> Hücre süspansiyonu, uygun doku kültür levhaları içerisine pipetle tanıtıldı (biz 1 x 10 6 hücre / ml kullanımı) ve makrofaj yapışmasını sağlamak için 3 saat boyunca 37 ° C&#39;de inkübe istenilen yoğunluğuna normalize edilir. Oyuk başına bu hücre süspansiyonu 1 ml 24 oyuklu kültür plakaları için uygundur. </li><li> Lenfosit çalışması için, inkübasyon 3 saat sonra kültür ortamı nazikçe yukarı ve aşağı 3x pipetle ve toplanır. Bu ortam, lenfositler içerirve yapışmayan makrofajlar ve lenfosit fonksiyonunu değerlendirmek için kullanılabilir, aynı zamanda saflaştırma adımları kullanılabilmektedir makrofajlar kaldırmak için CD14 manyetik boncukları ile örneğin. </li><li> Makrofaj çalışması için, inkübasyon 3 saat sonra, ortam dikkatlice minimal pipetleme ile çıkarılır ve taze antibiyotikler olmadan, sıcak bir ortam (RPMI 1640 +% 10 cenin sığır serumu + 2 mM L-glutamin) ile değiştirildi. Makrofajlar (bkz. Şekil 1), doku kültürü plakasına yapışık. </li></ol>

<ol><li>BTS, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+British+Thoracic+Society+Bronchoscopy+Guideline+Committee+-+A+sub-Committee+of+the+Standards+of+Care+Committee+of+the+British+Thoracic+Society%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">The British Thoracic Society Bronchoscopy Guideline Committee - A sub-Committee of the Standards of Care Committee of the British Thoracic Society.</a> Thorax. 56 (Suppl I), 1-21 (2001).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+recommendations+and+guidelines+for+bronchoalveolar+lavage+%28BAL%29+report+of+the+European+Society+for+Pneumology+Task+Group%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir%22%5BJournal%5D)">Technical recommendations and guidelines for bronchoalveolar lavage (BAL) report of the European Society for Pneumology Task Group.</a> Eur. Respir. , 561-585 (1989).</li>
<li>Gordon, S. B., Irving, G. R., Lawson, R. A., Lee, M. E., Read, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+trafficking+and+killing+of+Streptococcus+pneumoniae+by+human+alveolar+macrophages+are+influenced+by+opsonins%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Intracellular trafficking and killing of Streptococcus pneumoniae by human alveolar macrophages are influenced by opsonins.</a> Infect. Immun. 68, 2286-2293 (2000).</li>
<li>Gordon, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+immunoglobulin+responses+to+Streptococcus+pneumoniae+are+altered+but+not+reduced+in+human+immunodeficiency+virus-infected+Malawian+adults%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Pulmonary immunoglobulin responses to Streptococcus pneumoniae are altered but not reduced in human immunodeficiency virus-infected Malawian adults.</a> J. Infect. Dis. 188, 666-670 (2003).</li>
<li>Fullerton, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Domestic+smoke+exposure+is+associated+with+alveolar+macrophage+particulate+load%5BTitle%5D)+AND+%22Trop.+Med.+Int.+Health%22%5BJournal%5D)">Domestic smoke exposure is associated with alveolar macrophage particulate load.</a> Trop. Med. Int. Health. 14, 349-354 (2009).</li>
<li>Jambo, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+CD4%2B+T+cell+responses+to+respiratory+antigens+are+impaired+in+HIV-infected+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar CD4+ T cell responses to respiratory antigens are impaired in HIV-infected adults.</a> Thorax. 66, 375-382 (2011).</li>
<li>Eagan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+fluid+immunoglobulin+from+HIV-infected+subjects+has+impaired+opsonic+function+against+pneumococci%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Lung fluid immunoglobulin from HIV-infected subjects has impaired opsonic function against pneumococci.</a> Clin. Infect. Dis. 44, 1632-1638 (2007).</li>
<li>Rose, A. S., Knox, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+lavage+as+a+research+tool%5BTitle%5D)+AND+%22Sem.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar lavage as a research tool.</a> Sem. Respir. Crit. Care Med. 28, 561-573 (2007).</li>
<li>Wright, A. K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Nasal+Challenge+with+Streptococcus+pneumoniae+is+Immunising+in+the+Absence+of+Carriage%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Human Nasal Challenge with Streptococcus pneumoniae is Immunising in the Absence of Carriage.</a> PLoS Pathog. , (2012).</li>
<li>Bolliger, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERS%2FATS+statement+on+interventional+pulmonology+European+Respiratory+Society%2FAmerican+Thoracic+Society%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir.+J%22%5BJournal%5D)">ERS/ATS statement on interventional pulmonology European Respiratory Society/American Thoracic Society.</a> Eur. Respir. J. 19, 356-373 (2002).</li>
<li>Ettensohn, D. B., Jankowski, M. J., Duncan, P. G., Lalor, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+lavage+in+the+normal+volunteer+subject.+I.+Technical+aspects+and+intersubject+variability%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar lavage in the normal volunteer subject. I. Technical aspects and intersubject variability.</a> Chest. 94, 275-280 (1988).</li>
<li>Ettensohn, D. B., Jankowski, M. J., Redondo, A. A., Duncan, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+lavage+in+the+normal+volunteer+subject.+2.+Safety+and+results+of+repeated+BAL%2C+and+use+in+the+assessment+of+intrasubject+variability%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar lavage in the normal volunteer subject. 2. Safety and results of repeated BAL, and use in the assessment of intrasubject variability.</a> Chest. 94, 281-285 (1988).</li>
<li>De Brauwer, E. I., Jacobs, J. A., Nieman, F., Bruggeman, C. A., Drent, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+lavage+fluid+differential+cell+count.+How+many+cells+should+be+counted%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Quant.+Cytol.+Histol%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar lavage fluid differential cell count. How many cells should be counted.</a> Anal. Quant. Cytol. Histol. 24, 337-341 (2002).</li>
<li>Mtunthama, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malawians+permit+research+bronchoscopy+due+to+perceived+need+for+healthcare%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Ethics%22%5BJournal%5D)">Malawians permit research bronchoscopy due to perceived need for healthcare.</a> J. Med. Ethics. 34, 303-307 (2008).</li>
<li>Pereira, W., Kovnat, D. M., Snider, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+prospective+cooperative+study+of+complications+following+flexible+fiberoptic+bronchoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">A prospective cooperative study of complications following flexible fiberoptic bronchoscopy.</a> Chest. 73, 813-816 (1978).</li>
<li>Huang, Y. C., Bassett, M. A., Levin, D., Montilla, T., Ghio, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+phase+reaction+in+healthy+volunteers+after+bronchoscopy+with+lavage%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Acute phase reaction in healthy volunteers after bronchoscopy with lavage.</a> Chest. 129, 1565-1569 (2006).</li>
<li>Gritzfeld, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+Human+Pneumococcal+Carriage%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Experimental Human Pneumococcal Carriage.</a> J. Vis. Exp. (72), (2013).</li>
</ol>

Andrea M. Collins Bill ve Melinda Gates Vakfı, ve potansiyel hiçbir çatışan çıkarları tarafından finanse edilmektedir. O konferans ve ders ücretleri katılmak için Merck (MSD) ve GSK para aldı. 50 araştırma BALlar bağımsız gerçekleştirilir. Jamie Rylance Wellcome Trust tarafından finanse edilen ve herhangi bir çıkar çatışması vardır. O, başka bir fon aldı. 70 araştırma BALlar bağımsız gerçekleştirilir. Daniel G. Wootton bir NIHR Doktora Bursu tarafından finanse edilen ve çıkar çatışmaları vardır. 40 araştırma BALlar bağımsız gerçekleştirilir. Angela D. Wright hiçbir potansiyel çatışan çıkarları vardır. 100&#39;den fazla araştırma BAL ile destekli. Adam KA Wright hiçbir potansiyel çatışan çıkarları vardır. O 50 BAL örneğinin üzerinde işledi. Duncan G. Fullerton </strong&gt; Hiçbir potansiyel çatışan çıkarları vardır. 100 araştırma BALlar bağımsız gerçekleştirilir. Stephen B. Gordon hiçbir potansiyel çatışan çıkarları vardır. O konferanslara katılmak için Merck (MSD) ve Novartis fon aldı. 400 araştırma BALlar bağımsız gerçekleştirilir.

İyi sonuçlar elde etmek için, aşağıdaki faydalıdır: <ol><li> Dil ve posterior orofarinksin dibinde iyi anesthetisation. Bu konunun usul hoşgörü ve genel rahatlığı artırır, çünkü bu önemlidir. </li><li> Bir çocuk (dış çapı 3,4-3,6 mm) veya yetişkin bronkoskop (dış çapı 4,8-5,9 mm) da kullanılabilir. </li><li> Nazal entübasyon sırasında herhangi bir rahatsızlık varsa, ağızdan entübasyon tercih edilir. Genelde burun entübasyon basit bir tekniktir ya ya terk edilmelidir. </li><li> Orofarenks lidokain ilk uygulamasından sonra, konu bronkoskop ağızdan sokulur, özellikle anestezi başlangıcı bekleyen çekilmesini bronkoskop tercih edebilir. </li><li> En az 10 x 10 ml şırınga lidokain 2-4 ml ile doldurulmuş emin olun. Hava doğrudan kordonlar ve endobronşiyal muco üzerine anestezi geliştirilmiş teslimini sağlayan şırıngalar bırakılmalıdırsa. </li><li> İşlem sırasında öksürme yana önemli ölçüde BAL verimi azaltır; ısıtılmış tuzlu su kullanılarak ve iyi mukozal anestezi bu azaltmak için önemli olan. </li><li> 50 ml şırıngalar ısıtıldı tuzlu su ile doldurulmuş olması gerekir. Bu ölü alan kaybı ve terminal solunum yolları içine çalıştıran kalanına bağlı olarak 10-20 arasında ml elde etmek için aşılanan normal tuzlu su, ilk 50 ml yaygındır. Bundan başka alikotları sıvı daha büyük bir kısmının geri döner. </li><li> Operatör, her zaman steril serum fizyolojik aspire etkili emme sağlanması da dahil olmak üzere, entübasyon öncesi bronkoskop kontrol etmelisiniz. Emme kaybı yaygın nedeniyle bronkoskop veya emme cihazı ile bağlantıları etrafında tüp veya sızıntı dolaşmasının oluşabilir. </li><li> Manuel emme sırasında, ideal hava yolu daraltmak gerekir. Emme tekrarlı havayolunu çökerse, BAL döner bir valf mekanizması azalır ve lokal inflamasyon ve kanama olasılığı daha yüksektir vardır: Bu da solunum yolları m yaparcevher sinirli ve öksürük daha muhtemeldir. En uygun RML Subsegmental şube seçimi ve düşük emiş basıncı kullanarak bu nedenle önemlidir hem de. </li><li> Hava sürekli aspire edildiğinde bronkoskopa şırınganın bağlantısını ve aynı zamanda uzak solunum yollarında bronkoskop konumunu yeniden kontrol edin. Bu tekrarlayan bir sorun olup olmadığını, işlem sonrası bronkoskop kendisi hiçbir delik olmadığından emin olmak. </li><li> Sigara içenlerin BAL nedeniyle sık sık hücre içi partikül varlığı koyu. Sigara içenler daha az iyi bronkoskopi tahammül ve artan öksürük olabilir. </li><li> Tercih BAL hacim verimi&gt; 100 ml. &gt; 150 ml&#39;lik bir verimi mükemmeldir. Biz&gt; 170 ml herhangi bir verim yaşamamış. Hücre verimi ve BAL hacim verimi arasında doğrusal bir ilişki yoktur. </li><li> &lt;100 ml Verimleri, bizim deneyim, öksürük, göğüs ağrısı ve ateş gibi yan etkilere yol olasılığı daha yüksektir. Biz &lt;100 verimle konular Reco olması ml öneririzsol lateral pozisyonda Vered, bu kalan akciğer sıvısının drenajını yardımcı olabilir. </li><li> Klinik temas yan etkileri sağlamak için 1-5 gün içinde konu ile yapılmalıdır. </li><li> Midazolam sedasyon İngiltere&#39;de deneklerin% 50 ve Malavi &lt;% 5 &lt;için kullanılır. Midazolam doğrudan tolerabiliteyi artırmak için görünmüyor, bazı operatörler sedasyon bazen konu ile tutarlı (ve güven verici) diyalogu sürdürmek ters olabileceğini hissediyorum. </li><li> Bizim tecrübelerimize göre, bu teknik ile önemli bir öğrenme eğrisi vardır. Örneğin doktor ve hemşire arasında koordinasyon zaman alır ve verimleri öğrenme sürecinin başında genellikle düşüktür. </li><li> HIV pozitif kişilerde, biz profilaktik prebronchoscopy antibiyotik kullanın. </li></ol>

Arka plân Fiberoptik bronkoskopi klinik uygulama için geliştirilmiş olan ve yaygın olarak hem tanı hem de tedavi 1,2 kullanılır. Bronkoalveoler lavaj (BAL) yapışkan olmayan hücreler ve mukoza yüzeyinden akciğer astar sıvıyı ortadan kaldırır, biyopsi ve mukozal dokuları submukozal örnek için kullanılır. Araştırma ortamlarında, BAL akciğer içinde, (akciğer makrofajlar 3-5) doğuştan gelen bir hücre (B-ve T-hücreleri, 6) örnekleme ve humoral (immunoglobulin 7) yanıt sağlar. BAL uluslararası araştırma amaçlı 8 için kabul edilir ve 1999 yılından bu yana teknik grubumuz tarafından İngiltere ve Malavi&gt; 1.000 konularda yapılmıştır. Bu deney, insan pnömokok taşıyıcı 9,17, biyokütle duman 5, HIV ve aşılama ve ilave tedavi de dahil olmak üzere Stu pnömokok antijene, doğal hücresel ve humoral bağışıklık tepkilerinin çalışmalarda bu tekniği kullanmakpnömoni kurtarma içine ölür. Bizim teknik aranan sıvıya nazik el vakum kullanır, bu dönen BAL hacmini maksimuma çıkarmak ve BAL sıvısı içindeki hücrelerin yapısını ve fonksiyonunu korumak için kirpikli epitelya az kesme kuvveti uygulamak için tasarlanmıştır. Bir araştırma bağlamında BAL tanı veya tedavi parası kazanmak hedefliyoruz solunum ve yoğun bakım doktorları (sık olarak adlandırdığı bronşiyal yıkama, yıkamalar lavaj veya BAL) tarafından uygulanan farklı bir tekniği kullanır. Araştırma teknik hücreler hasat ve ex vivo kültür içinde hücrelerin büyümesini kolaylaştırmak için canlılığını korumak için tasarlanmıştır. Bu nedenlerle araştırma tekniği (genellikle 200 ml sırayla) daha büyük bir hacim instillate kullanır ve hücre hasarını azaltmak için el emme kullanır. Hastalar, lokal anestezi verilir bilinçli sedasyon (midazolam) sunulan ve minimal yan etkileri ile de işlemi tolere edilir. Sözlü ve yazılı subjektift bilgi toleransını arttırır ve yazılı bilgilendirilmiş onam 1. zorunludur. Hedef Genel amacı prosedür güvenli ve etkili olmasıdır. Denekler herhangi bir fizyolojik rahatsızlık yaşamazsınız ve operatörler sürekli konulardan BAL 100 ml aşan toplamak gerekir. İşlemden sonra, denekler minimal yan etkileri deneyim gerekir. Güvenlik Konunun güvenlik her şeyden önemlidir. Konular dikkatle net katma ve dışlama kriterleri kullanılarak seçilir. Bu protokol, potansiyel riskler ve bunları hafifletmek için atılan adımlardan bir açıklamasını içerir. Araştırma bronkoskopi Kontrendikasyonları mutlak veya göreceli olarak ifade edilebilir, ve ve dışlama kriterleri olarak çalışma protokolüne dahil edilmiştir. Bizim konular tüm tam sağlığını sağlamak için taranır. Mutlak kontrendikasyonlarkararsız servikal omurga, tepkisiz hipoksi, kararsız angina, kanama diyatezi, ve malign kardiyak aritmi içerir. Artmış komplikasyon oranları ile ilişkili durumlar dahil olmak üzere Göreceli kontrendikasyonlar, şunlardır: Genel: kötü kooperatif konu 1, önemli bir genel tıbbi bir sorun, örneğin epilepsi, lidokain veya midazolam, hamilelik, kötü beslenme olumsuz tepkiler bilinen önceki tolere bronkoskopi,. Solunum:, hiperkapni, kararsız astım 1, önemli ölçüde bozulmuş solunum fonksiyonu 1 (FEV 1 &lt;1 L), pulmoner hipertansiyon hipoksi [havanın &lt;% 94 üzerine doygunlukları (sats)]. Kardiyovasküler: üremi, miyokard enfarktüsü 1, vena kava tıkanıklığı 6 hafta içinde. Diğer: immunmodulatör (bizim grup düzenli olarak bu prosedürü gerçekleştirirHIV pozitif kişilerde dure). Araştırma için BAL ile ilgili riskler - Bakınız Tablo 1.

<table><tbody><tr><td>Fiberoptik bronkoskop, ışık ve emme kaynağı</td><td>belirtilmemiş</td><td></td><td> </td></tr><tr><td> Cerrahi önlük, steril eldiven </td><td>belirtilmemiş</td><td> <</td><td>p> </td></tr><tr><td> Tansiyon aleti </td><td>belirtilmemiş</td><td></td><td> Sürekli hasta izleme için </td></tr><tr><td> Nabız oksimetresi </td><td>belirtilmemiş</td><td></td><td> Sürekli hasta izleme için </td></tr><tr><td>3 derivasyonlu EKG monitörü</td><td>belirtilmemiş</td><td></td><td> Sürekli hasta izleme için </td></tr><tr><td>Nazal oksijen iletimi 2-4 L/dk</td><td>belirtilmemiş</td><td></td><td> </td></tr><tr><td> Lidokain% 10 sprey (Ksilokain) </td><td>AstraZeneca</td><td><</td><td>p>Topikal anestezi için</td></tr><tr><td> Lidokain hidroklorür% 2 </td><td>belirtilmemiş</td><td></td> <td> Topikal anestezi için</td></tr><tr><td> Lidokain jeli (Instillagel) </td><td>Farco-Pharma, Almanya</td><td></td><td> Diğer tedarikçilerden temin edilebilen alternatif ürünler</p</td></tr><tr><td>> Normal tuzlu su, steril, 200 ml</td><td>belirtilmemiş</td><td></td><td>30 &# 176'ya kadar ısıtın; C</td></tr><tr><td>10 ml konik uçlu şırınga (x10)</td><td>belirtilmemiş</td><td></td><td> Lidokain uygulaması için </td></tr><tr><td>İntravenöz kanül 18 G</td><td>belirtilmemiş</td><td></td><td> Midazolam uygulaması için </td></tr><tr><td> Midazolam </td><td>belirtilmemiş</td><td></td><td> Sedasyon için </td></tr><tr><td> flumazenil </td><td>belirtilmemiş</td><td></td><td> Benzodiazepin sedasyonunun tersine çevrilmesi (sadece acil kullanım) </td></tr><tr><td> 60 ml konik uçlu şırınga (x4) </td><td>belirtilmemiş</td><td></td> <td> Normal tuzlu su enjeksiyonu ve BAL sıvısı çekilmesi için. konektörün takılması gerekebilir bronkoskopun enjeksiyon portu.</td></tr><tr><td> Steril gazlı bez </td><td>Vernaid, İngiltere<</td><td>p></td><td> Diğer tedarikçilerden temin edilebilen alternatif ürünler </td></tr><tr><td> BAL sıvısı için steril kap </td><td>Metin ve yorumlar</td><td></td><td>silikonlu cam şişeler makrofaj aderansını azaltır. Alternatif olarak, 50 ml'lik santrifüj tüpleri kullanılabilir (toplam kapasite 200 ml)</td></tr><tr><td> Sigmacote </td><td>Sigma, UK</td><<td>p>SL2</td><td> Sadece silikonlu cam şişeler kullanılıyorsa. Not: Zararlı ve yanıcı. Kullanılıyorsa, üreticinin belgesinde ayrıntılı olarak açıklanan önlemleri izleyin. s MSDS </td></tr><tr><td> Santrifüj </td><td>belirtilmemiş</td><td></td><td> En az 4 x 50 ml tüp kapasitesi. 4 & # 176'ya kadar soğutma; C tercih edilir.</td></tr><tr><td> Shandon Cytospin santrifüj </td><td>Thermo Scientific, İngiltere<</td><td>p></td><td> Yalnızca diferansiyel sayım için </td></tr><tr><td> RPMI 1640 L-glutaminli orta </td><td>Sigma, İngiltere<</td><td>p>R8758</td><td> Diğer tedarikçilerden temin edilebilen alternatif ürünler </td></tr><tr><td> Fetal sığır serumu </td><td>Sigma, İngiltere</td><<td>p>F6178</td><td> Diğer tedarikçilerden temin edilebilen alternatif ürünler </td></tr><tr><td> Penisilin-Streptomisin </td><td>Sigma, İngiltere</td><<td>p>P4333</td><td> Diğer tedarikçilerden temin edilebilen alternatif ürünler </td></tr><tr><td> Amfoterisin B </td><td>Sigma, UK</td><<td>p>A2942</td><td> Diğer tedarikçilerden temin edilebilen alternatif ürünler </td></tr><tr><td> Doku kültürü plakaları </td><td>Greiner Bio-One, İngiltere</td><td>662160</td><td> Diğer tedarikçilerden temin edilebilen alternatif ürünler </td></tr><tr><td> Cam mikroskop slaytları </td><td>belirtilmemiş</td><td></td><td> Yalnızca diferansiyel sayım için </td></tr><tr><td> Shandon sitohunisi </td><td>Thermo Scientific, İngiltere<</td><td>p>A78710003 </td><td> Yalnızca diferansiyel sayım için </td></tr><tr><td> Shandon cytoclip </td><td>Thermo Scientific, İngiltere<</td><td>p>59910052</td><td> Yalnızca diferansiyel sayım için </td></tr><tr><td> Hemacolor boyama seti (fiksatif, kırmızı ve mavi reaktifler) </td><td>Merck, Almanya</td><td>111661</td><td> Üreticiye göre kullanın S talimatları</s> </td></tr></tbody></table>

araştırma bronkoalveoler lavaj (bal); yeterli Örnek verim alma

Bronchoalveolar Lavage (BAL) for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

Biz mukozal yüzeyinden yapışmayan hücreler ve akciğer astar sıvıyı çıkarmak için manuel el düzenlenen emme kullanarak bronkoalveoler lavaj (BAL) ile fiberoptik bronkoskopi için bir araştırma tekniği açıklar. Araştırma ortamlarında, BAL akciğer içinde doğuştan (akciğer makrofaj) örnekleme, hücre (B-ve T-hücreleri) ve humoral (immunoglobulin) yanıt sağlar. BAL uluslararası araştırma amaçlı kabul edilen ve 1999 yılından bu yana teknik grubumuz tarafından İngiltere ve Malavi&gt; 1.000 konularda yapılmıştır. Bizim teknik aranan sıvıya nazik el vakum kullanır, bu BAL hacim döndü üst düzeye çıkarmak ve BAL sıvısı içindeki hücrelerin yapısını ve fonksiyonunu korumak ve büyümeyi kolaylaştırmak için canlılığını korumak amacıyla kirpikli epitelya az kesme kuvveti uygulamak için tasarlanmıştır ex vivo kültür içinde hücreleri. Araştırma tekniği bu nedenle daha büyük hacimli eklentileri kullanırtillate (tipik olarak 200 ml sırayla) ve hücre hasarı azaltmak için elle emme kullanmaktadır. Hastalar, lokal anestezi verilir bilinçli sedasyon (midazolam) sunulan ve minimal yan etkileri ile de işlemi tolere edilir. Sözlü ve yazılı konu bilgi toleransını arttırır ve yazılı bilgilendirilmiş onam zorunludur. Konunun güvenlik her şeyden önemlidir. Konular dikkatle net katma ve dışlama kriterleri kullanılarak seçilir. Bu protokol, potansiyel risklerin bir açıklama ve bunları azaltmak için atılan adımları, kontrendikasyonlar listesi öncesi ve işlem sonrası kontrolleri, yanı sıra hassas bronkoskopi ve laboratuvar tekniklerini içerir.

Iyi klinik sonuç 100 ml üzerinde bir BAL hacmi ve en deneyimli olan bir konu, küçük bir rahatsızlık (bkz. Tablo 1) vardır. Bu rahat ve kooperatif konuyu gerektirir. Klinisyen, (Malzemeleri) tam hazır emin olmak ve anlayış gönüllü doğru olmalıdır. (Diferansiyel sayımı da dahil olmak üzere), hücresel verimle arası ve denekler arası değişkenlik tarif edilmiştir. Sağlıklı deneklerden Diferansiyel hücre sayımları, tipik haliyle&gt;% 90, nötrofillerin az sayıda ile makrofajlar (&lt;% 2) ve lenfositler (% 5-10) &#39;dir. Mikroskop lamı üzerine santrifüj BAL hücreleri bu bilgiyi (Şekil 1) elde etmek için bir diferansiyel nükleer boyası ile boyanmış olabilir. Şekil 1 &#39;de, BAL hücreleri sabit ve üreticinin talimatlarına göre Hemacolor lekeleme kullanılarak boyandı edilmiştir. En az 300 hücre makrofajlar için güvenilir sonuçlar elde etmek için sayılmalıdır,nötrofiller ve lenfositler, nadir hücre tipleri için 500 hücre. <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Tehlike </td><td> Risk </td><td> : Bu protokolde İndirimli </td></tr><tr><td colspan="3"> Bronkoskopi ve BAL 1, 14 Etkisi </td></tr><tr><td> Hafif rahatsızlık </td><td> &lt;25% 14 # </td><td> Uygun analjezi ve sedasyon. Konuya güvenen ve şefkatli bir yaklaşım. </td></tr><tr><td> Epistaksis </td><td> &lt;% 1 # </td><td> Sadece nazal entübasyon için hafif basınç. Eğer konu rahatsızlık veya daralmış diyafram - Oral entübasyon yerine. </td></tr><tr><td> Endobronşiyal kanama (hemoptizi) </td><td> &lt;% 0.1 * 15 </td><td> Hiçbir biyopsi alınır. Bronkoskopi sırasında dikkatli kontrolü - solunum mukozasını kaçınarak. </td></tr><tr><td> Nausadet, kusma ve aspirasyon pnömonisi </td><td> &lt;0.02% 14, # </td><td> Katı gıda&gt; 4 saat uygulama öncesi 1 Oruç. Yeterli lokal anestezi. İşlem sırasında Semirecumbent konumu. Dikkatli sonrası prosedür gözlem. </td></tr><tr><td> Ateş </td><td> 0.01 14-1% # 16 </td><td> Inflamasyon ile ilgilidir ve BAL maksimal toplama minimize edebilir. Tek lob BAL sadece. # </td></tr><tr><td> Boğaz burun / boğaz ve ses kısıklığı </td><td> &lt;25% 14 # </td><td> Burun, boğaz ve gırtlak (öksürük minimize) Yeterli lokal anestezi. </td></tr><tr><td> Enfeksiyon </td><td> &lt;Negatif HIV içinde% 0.1, HIV pozitif 14, # 1% </td><td> Standart bronkoskop yıkama prosedürü 1.. Tek lob BAL sadece. # Enfeksiyonun erken tanınması: 1 saat An içinde klinik muayene1-5 gün sonra bronkoskopi d klinik temas. </td></tr><tr><td> Göğüs ağrısı / öksürük </td><td> &lt;0.2% 14, # </td><td> Tek lob BAL sadece. Maksimal BAL koleksiyonu. # </td></tr><tr><td colspan="3"> İlaçların etkileri: lidokain, midazolam </td></tr><tr><td> Aritmi </td><td> * Çok nadir </td><td rowspan="3"> 5 mg / maksimum kullanılan 14 lidokain kg. Telkin ısındı normal tuzlu su. # Pulse oksimetre (oksijen takviyesi ile sats&gt;% 90), işlem boyunca kardiyak izleme. Benzodiazepin antagonisti (flumazenil) hemen kullanılabilir. </td></tr><tr><td> Dezoryantasyon / ajitasyon </td><td> &lt;% 0.1 † # </td></tr><tr><td> Kardiyo solunum depresyonu </td><td> * Çok nadir </td></tr></tbody></table> * 1.500 &#39;den fazla araştırma işlemleri Grubumuzun deneyimli değil. † idiosdaha çok doza bağımlı bir tepki daha yncratic. # 1500 üzerinde araştırma işlemleri Bizim grubun deneyim. Tablo 1. Araştırma için BAL ile ilgili riskler. Bu tehlike ya da risk içeren ve bu anlatılan tekniği kullanarak nasıl azaltılır. Bronkoskopi / BAL ve kullanılan herhangi bir tıbbi ilaçların etkileri etkileri dahildir. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/4345/4345fig1highres.jpg" width="500" /> Şekil 1. BAL makrofaj ve sıra Nötrofiller gösteriliyor Bir Mikroskop Slayt. BAL hücreleri, metanol içinde sabitlendi ve Hemacolor kırmızı (eosin-Y) ve mavi (gök B) ile boyanmış edilmiştir.

Biz düşük basınçlı emme kullanarak fiberoptik bronkoskopi ve bronkoalveoler lavaj için bir araştırma tekniği açıklar. Bu teknik, akciğer bronkoalveoler yüzeylerinden bağışıklık hücreleri hasat etmek için kullanılır. Lokal anestezik ve hafif bilinçli sedasyon (midazolam) kullanılır. Denekler prosedür iyi ve deneyim minimal yan etkileri tolere.

Araştırma Bronkoalveoler Lavaj (BAL); Yeterli Örnek Verim Alma

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy with bronchoalveolar lavage (BAL) using manual hand held suction in order to remove ...

Bu prosedürün genel amacı, bronkoalveoler lavajı güvenli ve etkili bir şekilde gerçekleştirmektir. Bu, öncelikle net dahil etme ve hariç tutma kriterleri kullanılarak seçilen deneklerin güvenliğinin, iş birliğinin ve konforunun sağlanmasıyla gerçekleştirilir.Prosedür öncesi kontroller ve gözlemler de gerçekleştirilir. Ardından, bronkoskopi odasına geçildiğinde ve tüm ekipmanlar kontrol edildikten sonra, deneğe lokal anestezik uygulanır ve bilinçli sedasyon teklif edilir. Sonrasında, vokal kordların entübasyonundan sonra, bronkoskop RML içinde uygun bir konuma kadar ilerletilir.Bu işlem, iyi bir BAL sıvısı hacim verimi sağlar. Son olarak, BAL sıvısı nazik bir el tipi aspiratörü kullanılarak alınır ve ardından hızlı laboratuvar işlemleri için gecikmeden buz üzerinde taşınır. Nihayetinde bu teknik, hücreleri toplar ve ex vivo kültürde hücre gelişimini kolaylaştırmak için canlılığı korur.Bu tekniğin, tanısal veya terapötik fayda sağlamayı amaçlayan solunum ve yoğun bakım hekimleri tarafından sıklıkla bronşiyal yıkama veya bronkoalveoler lavaj olarak adlandırılan mevcut yöntemlere göre temel avantajı, tekniğimizin verilmiş sıvının nazik bir el tipi vakumla geri çekilmesini kullanmasıdır. Bu yöntem, geri alınan lavaj hacmini maksimize etmek ve lavaj sıvısındaki hücrelerin yapı ve işlevini korumak amacıyla silli epitellere minimum kayma kuvveti uygulamak için tasarlanmıştır. Bronkoalveoler lavaj prosedürü, yazılı onam formunun doğru şekilde imzalandığından ve tarihlendiğinden emin olmak da dahil olmak üzere, standart hastane politikasına uygun prosedür öncesi ve sonrası kontrollerle birlikte günübirlik vaka olarak gerçekleştirilir.Varışta, denek solunum araştırmaları hemşiresi tarafından karşılanır ve ardından hemşire, deneğin katı gıdalar için en az dört saat ve sıvılar için iki saat boyunca aç kaldığından emin olmak da dahil olmak üzere gerekli tüm işlem öncesi kontrolleri gerçekleştirir. Eğer denek gerekli tüm kriterleri karşılıyorsa, hastane önlüğü giyer ve kan basıncı, kalp hızı ve oksijen satürasyonu ölçümleri dahil olmak üzere işlem öncesi gözlemler yapılır. İdeal olarak sol ele küçük ayarlı bir kanül yerleştirilir.Bu durum, işlem sonrası iyileşme süreci sona erene kadar C iki'de devam edecektir. Ardından denek, deneyimli bir solunum araştırması bronkoskopistinin bulunduğu bronkoskopi odasına nakledilir. Daha sonra deneğe izleme ekipmanları bağlanır.Buna üç derivasyonlu bir EKG, A, fig o manometre ve bir pulse oksimetre dahildir. Anestezik desteğe gerek yoktur. Bronkoskop yerleştirilmeden önce tüm gönüllülere nazal kanül uygulanır ve saturasyonlar %96'nın altına düştüğünde dakikada dört litreye kadar oksijen verilir.Bu noktada, operatör bronkoskop üzerinde işlem öncesi kontrolleri gerçekleştirir. Bu kontroller, steril normal salini aspire ederek etkili vakumun sağlandığından emin olmayı içerir. Operatör, bronkoskopun optimal şekilde çalıştığından emin olduktan sonra, sırasıyla instill gel ve Xylocaine uygulanarak deneğin burun pasajlarına ve ağız mukozasına topikal anestezi uygulanır.Sedasyon uygunsa ve denek tarafından talep edilmişse, uygun dozda midazolam intravenöz olarak uygulanır. Anestezi içeren tüm prosedürlerde olduğu gibi, uygun bir geri döndürücü ajan hemen erişilebilir durumda olmalıdır. Ayrıca, resüsitasyon ekipmanının da hazır olduğundan emin olun.Denek burun yoluyla entübe edilir. Bunun mümkün olmadığı durumlarda, larinkste uygun bir ağız kartı kullanılması şartıyla denek ağız yoluyla entübe edilebilir. Ses telleri geçildikten sonra 4% lidokainin dört ila altı mililitresi kullanılarak topikal analjezi uygulanır.Ayrıca, karinada, sağ alt lob ile sağ orta lobun (SML) ayrım noktasında ve SML girişinde, %2 lidokainin iki mililitrelik alıkotları kullanılarak mukozal analjezi uygulanır. Son olarak, bronkoskop sağ orta loba ulaşır ve ideal olarak medial segmentte, güvenli bir distal pozisyona yerleştirilir. Bronkoskopun, havayolu kollapsına neden olabilecek kadar fazla distal bir pozisyonda olmadığından emin olmak için aspirasyon düğmesini kullanarak göz kırpma testi (wink test) gerçekleştirin.Dört adet 60 mililitrelik şırınga; ısıtılmış normal steril salin ile sırasıyla 60 mililitre, iki adet 50 mililitre ve bir adet 40 mililitre hacimlerde önceden doldurulur. Denek ve bronkoskopsist hazır olduğunda, bronkoskopi asistanı tarafından ilk salin şırıngası uygulanır. Bronkoskopsist RML'deki pozisyonunu korurken, asistan aynı port ve şırıngayı kullanarak nazikçe el ile aspirasyon gerçekleştirir.Prosedür, her bir şırınga sırayla kullanılarak üç kez daha tekrarlanır ve bu özel teknikte maksimum 200 mililitre hacim kullanılır; elde edilen BAL sıvısı, buz üzerinde tutulan ve önceden silikonize edilmiş olabilecek plastik kaplara nazikçe aktarılır. Silikonizasyon, hücre yapışmasını engeller ve hücre geri kazanımını maksimize eder. BAL sıvısı, proteinler ve sürfaktanlar tarafından oluşturulan yüzey sabun köpükleriyle birlikte ışığa karşı bulanık görünür.Son olarak, bronkoskop yavaşça ve tamamen geri çekilir. Denek, gözlem altında iyileşme sürecine alınır ve BAL sıvısı vakit kaybedilmeden buz üzerinde taşınır. Hemen işleme almak için, deneğin bir solunum araştırmaları hemşiresinin gözetiminde dört saate kadar iyileşmesine izin verin.Bu süre zarfında, deneğin dinlenmesine izin verin ancak işlemden sonra en az 60 dakika geçene kadar bir şey yemesine veya içmesine izin vermeyin. Yutma yeteneğinin güvenli olduğu değerlendirildiğinde, bu işlem aspirasyon riskini azaltmak içindir. İşlem sonrası gözlemler takip edilir ve kaydedilir.Taburcu edilmeden önce klinik muayene yapılır. Denek ayrıca yaygın yan etkiler hakkında bilgilendirilir ve önemli yan etkilerin ortaya çıkması durumunda başvurabileceği bir iletişim numarası verilir. Prosedürden bir ila beş gün sonra, bir doktor veya hemşire tarafından denek ile takip randevusu gerçekleştirilir.Bu işlem telefonla veya yüz yüze gerçekleştirilebilir. Araştırma laboratuvarına girildiğinde, mümkün olduğu sürece tüm manipülasyonlar ıslak buz üzerinde yapılmalıdır.Öncelikle bronkoalveoler lavaj sıvısının hacmini kaydedin. Ardından, mukus tıkaçlarını temizlemek için sıvıyı çift katmanlı steril gazlı bezle süzün ve süzüntüyü steril 50 mililitrelik santrifüj tüplerine toplayın. Hücreleri 4 °C'de 500 G kuvvetinde 5 ila 10 dakika boyunca santrifüjleyerek çöktürün.Süpernatanı uzaklaştırın ve 50 mililitre soğuk normal salin ile yıkayın. Santrifüj işlemini tekrarlayın. Hücreleri bir kez daha uygun hacimdeki kültür ortamında yeniden süspande edin.Genellikle iki mililitre, sayım için uygun bir hücre yoğunluğu sağlayacaktır. Ardından, standart prosedürlere uygun olarak bir hemositometre ve tripan mavisi kullanarak hücre sayımı gerçekleştirin ve uygun hacimde besiyeri ekleyerek hücre süspansiyonunun yoğunluğunu 1 × 10⁶ hücre/mL olacak şekilde ayarlayın. Daha sonra, hücre süspansiyonundan bir mililitreyi 24 kuyucuklu bir plakanın her bir kuyucuğuna transfer edin.Lenfosit çalışmaları için makrofajların yapışmasını sağlamak amacıyla, hücreleri kuyucuklu plakta 37 °C'de üç saat boyunca inkübe edin. Üç saatlik inkübasyonun ardından, kültür ortamı pipetle nazikçe üç kez yukarı aşağı çekilip itilerek toplanır. Bu ortam lenfositleri ve yapışmamış makrofajları içerir ve lenfosit fonksiyonlarını değerlendirmek için kullanılabilir.Makrofaj çalışmaları için sonraki saflaştırma adımlarında da kullanılabilir. Üç saatlik inkübasyonun ardından, medyumu dikkatlice aspire edin ve antibiyotik içermeyen taze, sıcak ortam ile değiştirin; makrofajlar bu aşamada doku kültürü plakasına yapışmış durumdadır. BAL hücreleri, bir thermo shandin cyto santrifüj kullanılarak mikroskop lamı üzerine santrifüjlenmiş ve hücre tiplerini belirlemek için diferansiyel nükleer boyama ile boyanmıştır.Hücrelerin çoğu M ile işaretlenmiş hücreler gibi makrofajlardır, ancak ara sıra N ile işaretlenmiş nötrofil ve L ile işaretlenmiş lenfositler görülür. Bu videoyu izledikten sonra, bu tekniği kullanarak araştırma amaçlı bronkoskopi ve BAL'ı nasıl güvenli ve etkili bir şekilde gerçekleştireceğiniz konusunda; özellikle dil kökünün ve posterior orofarenksin iyi anestezi edilmesi, işlem öncesinde bronkoskopun etkili aspirasyon ve hava kaçağı yokluğu açısından kontrol edilmesi ve en uygun sağ orta lob subsegmental dalın seçilmesi dahil olmak üzere kapsamlı bir anlayışa sahip olmanız gerekir. Operatörler, minimal yan etki yaşayan deneklerden tutarlı bir şekilde 100 mL'den fazla BAL toplamalıdır.

bronchoalveolar-lavage-bal-for-research-obtaining-adequate-sample

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kaynak: Venuprasad, K., ve diğerleri. Hava Yolu Enflamasyonunu İncelemek İçin Fare Modellerinde Haemophilus influenzae'nin Trakeal İçi Uygulaması. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, aşağı akış analizi için tiplendirilemeyen Haemophilus influenzae ile enfekte ötenazi uygulanmış bir fareden bronkoalveoler lavaj sıvısının toplanmasını ve işlenmesini göstermektedir.

Tiplendirilemeyen Haemophilus influenzae ile Enfekte Bir Fare Modelinden Bronkoalveoler Lavaj Sıvısı Toplanması

Bu video, bronkoalveoler lavaj sıvısındaki çeşitli bağışıklık hücrelerini tanımlamak ve saymak için akış sitometrisinin kullanımını göstermektedir. Başlangıçta, tek bağışıklık hücreleri bir canlılık boyası kullanılarak tanımlanır, ardından yüzey işaretleyici proteinlerin diferansiyel boyanması ile her hücre tipinin kesin sayımı sağlanır.

Bronkoalveoler Lavaj Sıvısındaki İmmün Hücrelerin Flow Sitometri ile Tanımlanması ve Sayımı

Patojen enfeksiyonuna karşı konak bağışıklık tepkisi sıkı bir şekilde düzenlenmiş bir süreçtir. Farelerde bir lipopolisakarit akciğer maruz modeli kullanarak, bu hastalığın patojenezi ile ilgili kompleks mekanizmalar yüksek çözünürlüklü değerlendirme yapmak mümkündür.

Farelerde Host immün yanıtı değerlendirmek için Orofarengeal intratrakeal PAMP İdaresi ve Bronchoalveolar Lavage Kullanımı

Biz akut akciğer hasarı modeli, nebülizasyonu tarafından aerosolleşmiş lipopolisakkaride meydan tarafından nötrofilik akciğer inflamasyonu uyarılması için bir yöntem açıklanmaktadır. Buna ek olarak, akciğer izolasyonu, entübasyon ve bronkoalveoler lavaj temel cerrahi teknikler de tarif edilmiştir.

Aerosolize Lipopolisakarid kullanma Yaratma Pulmoner nötrofilisi için bir yöntem

Bu makalede deneysel koşullar altında sığır bronkoskopik teknikler, yani bronkoskopik güdümlü aşılama, bronkoalveoler lavaj, bronş fırçalama ve transbronşiyal akciğer biyopsisi açıklanır.

Biyomedikal Araştırma Sığır Akciğer: Görme Kılavuzlu Bronkoskopi, intrabronşiyal Aşılama ve<em&gt; In Vivo</em&gt; Örnekleme Teknikleri

Akciğerin sağlık durumu, akciğer bronşiollerinde bulunan bağışıklık hücrelerinin türüne ve sayısına göre yansıtılır. Farelerin alt solunum yollarından yapışkan olmayan hücrelerin ve çözünür faktörlerin izolasyonunu ve çalışılmasını sağlayan bir bronkoalveolar lavaj tekniğini açıklıyoruz.

İnflamatuvar Hücre İnfiltrasyonunu İncelemek İçin Murin Akciğerlerin Bronkoalveoler Lavajı

Burada, iki hücre dışı vezikül yalıtım protokol, Ultrafiltrasyon Santrifüjü ve ultrasantrifüj ile yoğunluk gradient Santrifüjü ekstraselüler veziküller fare bronchoalveolar lavaj sıvı örneklerinden izole etmek, açıklamak. Fare bronchoalveolar lavaj sıvı her iki yöntem tarafından türetilmiş hücre dışı veziküller sayılabilir ve karakterize.

Üzerinden Ultrafiltrasyon tekniği Santrifüjü kullanarak fare Bronchoalveolar lavaj sıvı ekstrasellüler veziküller yalıtım

Biz Bronkoalveoler Lavaj sıvısı işleme için bir yöntem tarif ve pulmoner HıV rezervuarları değerlendirmek için antiretroviral tedavi kronik HıV enfekte bireylerin periferik kan eşleşen. Bu yöntemler, son derece saf CD4 T hücrelerinin satın alınması ve daha sonra ultrason polimeraz zincir reaksiyonu ile immünofenotipleme ve HIV DNA/RNA ölçülerinde kullanılabilir alveoler makrofajlar sonuçlanır.

Alveoler Makrophaj ve CD4+ T-Cell Immünophenotyping ve HIV rezervuar değerlendirmesi Için Bronkoalveolar lavaj sıvısı ve eşleştirilen kanın işlenmesi

Bu el yazması, hava kirletici bir kriter olan ozon maruziyetinin alveoler makrofaj efferositozisinin in vivo'yu bozup bozmadığını belirleyen bir protokolü açıklamaktadır. Bu protokol yaygın olarak kullanılan reaktifler ve teknikler kullanır ve alveoler makrofaj eferositoz üzerindeki etkilerini belirlemek için pulmoner yaralanma birden fazla modeladapte edilebilir.

Ozon Maruziyetinden Sonra Alveoler Makrofaj Eferositozun Vivo Değerlendirilmesi

Bu el yazması, farelerde enfeksiyöz bir pnömoni modelinin oluşturulmasını ve bakteri yetiştirme ve intratrakeal damlatma yöntemleri ile birlikte yaralanma çözünürlüğünün ilgili karakterizasyonunu açıklamaktadır. Bağışıklık ortamını değerlendirmek için yüksek boyutlu akış sitometrisi kullanan yeni bir yaklaşım da açıklanmaktadır.

Pnömoni Çözünürlüğünü Değerlendirmek için Deneysel Model

Öğrenin bronkoalveoler lavaj tekniğini; düşük basınçlı aspirasyonla akciğer immün hücreleri toplanır. Yerel anestezi ve hafif sedasyonla hasta güvenliği sağlanır, hücre canlılığı korunur.

Araştırma Bronkoalveoler Lavaj (BAL); Yeterli Örnek Verim Alma

Daha fazla video keşfet