Name: Fare Kalpten İlköğretim Melanocyte gibi Hücreleri Ayırma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: Keşfedin fare kalbinden melanosit benzeri hücreleri izole etme yöntemini. Enzimatik sindirim ve santrifüjasyon kullanarak bu hücreleri ayırın ve atriyal aritmi araştırmaları için kullanın.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma VVPMDL için Sağlık ödülü R01 HL105734 Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenen Sağlık Araştırma Kariyer Ödülü K08 HL094748 Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından, kısmen desteklenmektedir. VVP hibe 11IRG900384 tarafından desteklenen Amerikan Kalp Derneği&#39;nin Yenilikçi Araştırmacı olduğunu.

1. Gerekli Çözümler ve Ekipmanları hazırlanması <ol><li> İlk olarak, 15 dakika boyunca onları otoklav ile cerrahi aletler (düz şekli forseps, kavisli şekli forseps, düz şekli makas ve kavisli şekli makas) sterilize. 121 ° C &#39;de. Doku kadar kıyma için kullanılacak bir set kalplerini ve diğer set dışarı Anatomi için kullanılan araçların, 2 set hazırlayın. </li><li> Steril, filtrelenmiş su 900 ml MCDB153 kültür ortamı 1 paket çözülür ve toz çözününceye kadar yavaş yavaş karıştırılır. 1.2 gr sodyum bikarbonat ya da 15.7 mL sodyum bikarbonat solüsyonu, orta nihai her bir litre hacim için hazırlanmış ve çözünene kadar karıştırınız olması [ağ / hac% 7.5] ekleyin. Daha sonra, doku kültürü kaputu (biyo-güvenlik kabini) steril koşullar altında bir 0.2 mikron filtre içinden şişe iyi ortamı dökün, 1 N HCI veya 1 N NaOH eklenerek 7.2 &#39;da pH ayarlayın. Sonra medya toplamak ve 4 ° C&#39;de saklayın. </li><li> Takviyeleri hazırlanınkültür ortamı (Malzeme Listesi) ekleyin. Ek ortam hücreleri kaplama için gerekli olan hemen önce ortama ilave edilmelidir. </li><li> % 10 FBS artı antibiyotik (penisilin ve streptomisin) ile DPBS hazırlayın. </li><li> DPBS artı antibiyotik (penisilin ve streptomisin), 100 ml, sonra, 0.25 g tripsin (USB sığır pankreası, aktivite&gt; 2500 USP birim / mg, son derece saf) eklenmesi ile% 0.25 tripsin solüsyonu hazırlanır. </li><li> Bu yordamı tamamlamak için gerekli diğer gerekli ekipmanı Stereomikroskopta, Petri yemekler (10 cm), 50 ml konik tüpler, 40-mikron hücre süzgeçler, DPBS artı antibiyotik, 60-mm kültür yemekleri ve 35-mm kültür yemekler bulunmaktadır. </li></ol> 2. Yenidoğan Fare Yavrularının dan Hearts Yalıtımlı <ol><li> İlk olarak, P2 bebek sıçan yavrularına P0 elde edilir (N = 6-8). EYFP alel veya etiketlemek için Z / EG alel: Bu R26R biri için heterozigot erkeklerde ile Dct-CRE homozigot kadın damızlık tarafından oluşturulan yavrular kullanılması tavsiye edilirmelanosit-benzeri hücreler. Hem R26R: EYFP ve Z / EG farenin Jackson Laboratories (stok numaraları sırasıyla 006.148 ve 003.920) mevcuttur. </li><li> Sonra, yenidoğan fare yavrular euthanize alkollü bir bezle sandıkları silin ve ardından DPBS ile 10 cm Petri kabındaki yavrular yerleştirin. </li><li> Göğüs üzerindeki deriyi kesin ve sterilize forseps ve makas ile sternum ve sonra steromikroskopla dikkatle kutuyu açın. Yenidoğan fare yavrularının kalpleri ekli kulakçıklardan ile tüm kalp kaldırmak için emin olmak için dikkatli olmak bu yüzden çok küçük. </li><li> DPBS&#39;de kalpleri yıkayın ve yeni bir 10-cm Petri aktarabilirsiniz. </li></ol> 3. enzimatik sindirme <ol><li> Bir doku kültürü kaputu (biyogüvenlik kabini) için kesilip kalpleri ile Petri çanak getirmek ve daha sonra kaputu steril teknikleri kullanarak aşağıdaki adımları izleyin. </li><li> İlk olarak, steril DPBS&#39;de artı antibiyotikler kalpler üç kez yıkayın. </li><li> Bir (n = 6-8) kalpleri yerleştirin60-mm kültür çanak ve çanak% 0.5 tripsin çözeltisi 6-8 ml ekleyin. </li><li> Daha sonra, (boyut olarak 1-mm &#39;den az) küçük parçalar halinde kesilmiş ve kalpleri% 5 CO2 atmosferinde 30 dakika boyunca 37 ° C&#39;de inkübe. </li><li> Kuluçka süresi tamamlandıktan sonra bir steril 50 ml konik tüp içine kardiyak doku ve çanak tripsin edilen dökün. </li><li> Sonra, çabuk ama yavaşça 10 ml steril pipet kullanarak, 50 ml konik tüp 30-50 kere çözümü çiğnemek. </li><li> Süzüntüyü toplamak için bir yeni ve temiz bir 50 ml konik tüp üzerine 40 mikron hücre süzgecinden elde edilen solüsyon filtre. </li><li> Daha sonra, oda sıcaklığında 5 dakika boyunca masa üstü bir santrifüj içerisinde 240 x g&#39;de 50 ml tüp santrifüj. Sonra, yavaşça süpernatant aspire ve steril DPBS 6-8 ml kalan pelletini. Bu adımı 2 kez daha tekrarlayın. Bu adım atriyal miyositleri ve kardiyak melanosit pelet ama fi aşağı getirmezfibroblastlar yana broblasts daha küçüktür ve süpernatan içinde kalır. </li></ol> 4. Kaplama Kardiyak Melanocyte-benzeri hücreler <ol><li> Dikkatli bir şekilde tahliye ya da yıkama çözeltisi (DPBS) aspire ve MCDB kültür ortamı 6 ml pelet tekrar süspansiyon santrifüje edildikten sonra, üçüncü durulama sonrasında hangi katkı ilave edilmiş. </li><li> Şimdi, steril bir transfer pipet içine yeniden süspansiyon haline getirilmiş çözelti yararlanmak ve bir 35 mm tabak hücreleri yer ya da bir 6-yuvalı plakanın bir kuyuda, ve bir 35 mm tabak 3 neonatal fareden izole edilmiş kalp hücreleri havuzda veya iyi. </li><li> , Bir% 5 CO2 atmosferinde, gece boyunca 37 ° C&#39;de inkübe yemekler birleşmeyen hücreleri ile birlikte kültür ortamı aspire ardından DPBS ile bir kez durulama plakaları. Sonra plakalar taze medya eklemek ve Ortam 2 günde değiştirin. Hücreleri yetişkin duymak izole ise yenidoğan kalpleri veya embriyonik hücreler izole edilmiş, en fazla 3 hafta boyunca kültür içinde muhafaza edilebilirts en fazla 10 gün boyunca kültür içinde muhafaza edilebilir. </li></ol> Yetişkin Fare Kalpten 5. Yalıtımlı Kardiyak Melanocyte-benzeri hücreler <ol><li> İlk olarak, olgun farelerin kalpleri çıkarın (3-4 hafta yaşında, n = 3) farelerine, 100 U heparin karın içinden tatbik edilmesini ve daha sonra bunların ötenazi sonra, bir orta hat sternotomi ile. Bu işlem için fareler euthanize pentobarbitaldir kullanılması tavsiye edilir, ancak bu ilaç her yerde mevcut değildir. </li><li> Sonraki, bir doku kültürü kaputu (biyogüvenlik kabini) antibiyotik içeren steril DPBS&#39;de kesilip kalpleri yıkayın. Onlardan kalan kan kaldırmak ve daha sonra DPBS&#39;de bir kez daha kalpleri durulama kavisli kesme forseps ile hafifçe kalpleri sıkın. </li><li> Kalplerinden Atriumlarm ve atriyoventriküler halkaya çıkarın (bu yapılar melanosit-benzeri hücreler içeren) ve 35-mm çanak kesilmiş doku örneklerinin yerleştirin. </li><li> Kavisli makas ve kuvvet kullanarak küçük parçalar halinde kalpleri kestiPS ve daha sonra çanak% 0.5 tripsin çözeltisi 6-8 ml ekleyin. Daha sonra, 45-60 dakika boyunca 37 ° C&#39;de inkübe yemekler. </li><li> Şimdi, adımdan sonrasını 3.6 başlayarak yukarıdaki prosedür adımları izleyin. </li></ol>

<ol><li>Hornyak, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitf+dosage+as+a+primary+determinant+of+melanocyte+survival+after+ultraviolet+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Res%22%5BJournal%5D)">Mitf dosage as a primary determinant of melanocyte survival after ultraviolet irradiation.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 22, 307-318 (2009).</li>
<li>Yonetani, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+expansion+of+immature+melanoblasts+and+their+ability+to+repopulate+melanocyte+stem+cells+in+the+hair+follicle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">In vitro expansion of immature melanoblasts and their ability to repopulate melanocyte stem cells in the hair follicle.</a> J. Invest. Dermatol. 128, 408-420 (2008).</li>
<li>Levin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanocyte-like+cells+in+the+heart+and+pulmonary+veins+contribute+to+atrial+arrhythmia+triggers%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Melanocyte-like cells in the heart and pulmonary veins contribute to atrial arrhythmia triggers.</a> J. Clin. Invest. 119, 3420-3436 (2009).</li>
<li>Patel, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+insights+in+the+cellular+basis+of+atrial+fibrillation%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev.+Cardiovasc.+Ther%22%5BJournal%5D)">Novel insights in the cellular basis of atrial fibrillation.</a> Expert Rev. Cardiovasc. Ther. 8, 907-915 (2010).</li>
<li>Sviderskaya, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+neurons+and+melanocytes+induced+from+immortal+lines+of+postnatal+neural+crest-like+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Functional neurons and melanocytes induced from immortal lines of postnatal neural crest-like stem cells.</a> FASEB J. 23, 3179-3192 (2009).</li>
<li>Sviderskaya, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P16Ink4a+in+melanocyte+senescence+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Natl.+Cancer.+Inst%22%5BJournal%5D)">P16Ink4a in melanocyte senescence and differentiation.</a> J. Natl. Cancer. Inst. 94, 446-454 (2002).</li>
<li>Cook, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+melanoblasts+in+culture%3A+Expression+of+BRN2+and+synergistic+regulation+by+fibroblast+growth+factor-2%2C+stem+cell+factor%2C+and+endothelin-3%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Human melanoblasts in culture: Expression of BRN2 and synergistic regulation by fibroblast growth factor-2, stem cell factor, and endothelin-3.</a> J. Invest. Dermatol. 121, 1150-1159 (2002).</li>
<li>Fang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+conditions+for+the+generation+of+melanocytes+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Defining the conditions for the generation of melanocytes from human embryonic stem cells.</a> Stem Cells. 24, 1668-1677 (2006).</li>
<li>Brito, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timeline+and+distribution+of+melanocyte+precursors+in+the+mouse+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Res%22%5BJournal%5D)">Timeline and distribution of melanocyte precursors in the mouse heart.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 21, 464-470 (2008).</li>
<li>Yajima, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+isolation+of+heart+melanocytes+is+specified+and+the+level+of+pigmentation+in+the+heart+may+correlate+with+coat+color%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Res%22%5BJournal%5D)">The isolation of heart melanocytes is specified and the level of pigmentation in the heart may correlate with coat color.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 21, 471-476 (2008).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Kardiyak melanosit sık atriyal aritmi tetikler doğuran kalp içindeki anatomik yerlerde bulunurlar. Bu bölgeler pulmoner venler, atriyoventriküler halkasını, posterior sol atrium ve foramen ovale (Şekil 4) içerir. Bu hücreler aritmogenez oynadıkları rolü anlamak için, onları tecrit ve fizyolojisini incelemek için teknikler geliştirmek. Ancak, biz bu tekniği geliştirerek kalp melanosit sağlıklı ve daha büyük miktarlarda eksojen uyaranlara kardiyak melanosit yanıtını araştırmak için daha fazla çalışmaları ...

Biz son zamanlarda melanin sentezi enzimleri ifade ve morfolojik deri melanosit benzer farelerin ve insanların kalbinde yeni bir hücre popülasyonu tespit. Biz bu hücrelerin kalp melanosit &#39;olarak adlandırılan ve atriyal aritmi genellikle insanlar köken tetikler hangi anatomik yerlerde bulunurlar bulundu. Biz de kalp melanosit DCT germline silinmesi ile farelerde atriyal aritmi katkıda bulundu. Kardiyak melanosit seyrek hepsi atriyal hücrelerin en az% 0.1 içerirler fare atriyum boyunca dağıtılır. Kardiyak melanosit elektriksel ve biyolojik özelliklerinin incelenmesi için biz Cre-uyarılabilir melanosit spesifik işaretlerini kullanarak fare kalp onları izole etmek için bir prosedür geliştirmiştir. Bizim ilk işlemi yenidoğan kemirgen kardiyomiyositlerin ve yama kelepçe kayıtları veya PCR analizi için uygun hücrelerin vermiştir çok az sayıda izole etmek için kullanılan geliştirildi. Ancak, iyileşmek geliştirmek içininci ve elektrofizyolojik analiz veya biyokimyasal çalışmalar daha derinlemesine kardiyak melanosit, canlılığı, biz deri melanosit yalıtmak için tasarlanmış olanlar bir rafine prosedür geliştirmiştir. Bu derlemede anlatılan ve gösterilen prosedür saf nüfus olarak veya kardiyomiyositlerin ile kaplı olabilir sağlıklı kalp melanosit üretme avantajına sahiptir.

<table><tbody><tr><td>MCDB 153</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7403</td><td>Suda çözün</td></tr><tr><td>DPBS, kalsiyumsuz, magnezyumsuz</td><td>Invitrogen</td><td>14190136</td><td>Stok kons.: 1x&lt;br/&gt; Çalışma kons.: 1x</td></tr><tr><td>Penisilin-streptomisin </td><td>Invitrogen</td><td>15140163</td><td>Stok kons.: 100x&lt;br/&gt; Çalışma kons.: 1x</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Life Technology</td><td>Sertifikalı</td><td>Çalışma kons.: 4%</td></tr><tr><td>TPA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1585</td><td>DMSO'da çözün&lt;br/&gt;Stok kons.: 3.2 &amp;mu;M&lt;br/&gt;Çalışma kons.: 32 nM</td></tr><tr><td>Transferrin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8158</td><td>DPBS'de çözün&lt;br/&gt;Stok kons.: 0.1 mg/ml&lt;br/&gt;Çalışma kons.: 1 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>Dibütiril siklik AMP</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D0627</td><td>DPBS'de çözün&lt;br/&gt;Stok kons.: 0.5 mM&lt;br/&gt;Çalışma kons.: 5 &amp;mu;M</td></tr><tr><td>İnsülin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I6634</td><td>10 mM asetik asitte çözün&lt;br/&gt;Stok kons.: 1 mg/ml&lt;br/&gt;Çalışma kons.: 5 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>Bazik FGF</td><td>BD Biosciences</td><td>354060</td><td>Suda çözün&lt;br/&gt;Stok kons.: 4 ng/&amp;mu;l&lt;br/&gt;Çalışma kons.: 4 ng/ml</td></tr></tbody></table>

fare kalpten İlköğretim melanocyte gibi hücreleri ayırma

Isolating Primary Melanocyte-like Cells from the Mouse Heart

Biz farelerde atriyal aritmi tetikler katkıda farelerin ve insanların kalplerinde (aynı zamanda kardiyak melanosit olarak da bilinir) melanosit benzeri hücrelerin yeni bir nüfus tespit. Kardiyak melanosit elektriksel ve biyolojik özelliklerinin incelenmesi için biz yenidoğan kemirgen kardiyomiyositlerin yalıtmak için tasarlanmış olanlar türetilen fare kalpleri onları izole etmek için bir prosedür geliştirmiştir. Daha geniş olduğunda, yamalı kenetleme ve biyokimyasal çalışmalar için uygun sağlıklı kalp melanosit elde etmek amacıyla, ilk olarak izole edilmesi ve deri melanositleri izole etmek için tasarlanmış olanlar göre kalp melanosit kaplama için zarif bir prosedür geliştirilmiştir. Rafine işlemi bu incelemede gösterdi ve saf bir nüfus olarak veya kardiyomiyositlerin ile kaplı olabilir sağlıklı melanosit benzeri hücrelerin daha fazla sayıda üretir.

Bu makalede açıklanan protokol daha önce sıçangil kalp, kalp melanosit izole etmek için yayınlanmış bir oranla geliştirilmiş bir tekniktir. Bu prosedür, kardiyak melanosit-benzeri hücreleri etiketlemek için melanin sentezi, enzim spesifik Kre-rekombinaz tarafından tahrik floresan belirteçlerin kullanımına başvurmaktadır. Atriyal miyositlerden kalp melanosit ayırt morfolojik farklılıklar henüz (Şekil 1A) geliştirdik değil çünkü, taze izole edilmiş embriyonik veya neonatal hücreler çalışırken kalp melanos...

Bu protokolde, w e atriyal aritmi farelerde tetikler katkıda farelerin ve insanların kalplerinde (aynı zamanda kardiyak melanosit olarak da bilinir) melanosit benzeri hücrelerin yeni bir nüfus tespit.

Fare Kalpten İlköğretim Melanocyte gibi Hücreleri Ayırma

Farelerin ve insanların kalplerinde, atriyal ... katkıda bulunan, melanosit benzeri hücrelerin (kardiyak melanositler olarak da bilinir) yeni bir popülasyonunu tanımladık.

Bu prosedürün genel amacı, fare kalbinden canlı kardiyak melanosite benzer hücreleri izole etmektir. Bu işlem, öncelikle ötanazi uygulanmış farelerden kalplerin hasat edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adımda ise kalpler ince kıyılır ve enzimatik sindirim ile mekanik ajitasyon kullanılarak hücreler ayrıştırılır.Ardından, hücre süspansiyonu santrifüjlenir ve kardiyomiyositler ile melanosit benzeri hücreleri içeren pelet yeniden süspanse edilir. Son adım, hücrelerin ekilmesi ve kültüre edilmesidir. Nihayetinde izole edilen kardiyak melanosit benzeri hücreler, hücresel uyarılabilirliği veya transkriptomun durumunu değerlendirmek amacıyla, patofizyolojik stresörlere yanıt olarak yama çalışmaları veya mikroarray analizleri için kullanılabilir.Bu tekniğin, kardiyomiyositleri izole etmek ve kültüre etmek için tasarlanmış mevcut yöntemlere göre temel avantajı, çok sayıda işlevsel kardiyak melanosit benzeri hücrenin izole edilmesini sağlamasıdır. Aslında bu yöntem için ilk fikri, fare kalbinde yeni bir hücre popülasyonu keşfettiğimizde ve bunun fizyolojisini araştırmak istediğimizde edindik. Başlamak için, biri kalpleri çıkarmak ve diğeri dokuyu kıymak için kullanılacak iki set steril cer

isolating-primary-melanocyte-like-cells-from-the-mouse-heart

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu videoda, doğum sonrası fare yavrusunun derisinden melanositleri ve fibroblastı aynı anda izole etmek ve kültürlemek için hızlı yöntem açıklanmaktadır. Bu hücreler, cilt hücresi biyolojisini, yara iyileşmesini ve melanomu incelemek için in vitro olarak korunabilir ve manipüle edilebilir.

Primer Murin Melanositlerinin ve Fibroblastlarının Hızlı Kültürlenmesi: Tüm Murin Deri Örneğinden Melanositlerin ve Fibroblastların İzole Edilmesi

Yabani tip ve mutant farelerden alınan bireysel kardiyomiyositler, kasılmalarını ve kalsiyum geçişlerini incelemek için kalpten izole edilebilir. Bu, hücresel disfonksiyonun herhangi bir nedenden dolayı kalp disfonksiyonuna katkısının karakterizasyonuna izin verir.

Fare kardiyomiyositlerde İzolasyon ve Fizyolojik Analizi

Biz yetişkin fare kardiyomiyositlerin izolasyonu için güvenilir bir yöntem açıklanmaktadır. Bu protokol, genetik olarak tadil edilmiş farelerin çeşitli fonksiyonel yetişkin kardiyomiyositlerde kültürü için tutarlı bir sonuç elde edilir.

İzolasyon ve Kültür Yetişkin Fare Hücre Sinyal için kardiyomiyositlerin ve<em&gt; In vitro</em&gt; Kalp hipertrofisi

Yetişkin kök hücre biyolojisini incelemek için ideal bir model fare kılı folikülüdür. Burada, fare sırt derisinin enzimatik sindirimini ve ardından FACS analizini kullanarak farklı saç folikülleri kök hücre ve epidermal keratinosit popülasyonlarını izole etmek için bir protokol sunuyoruz.

Dorsal Fare Cilt Saç Folikül Kök Hücreler ve epidermal keratinositler Ayırma

Bu protokol, yüksek verim, saflık ve canlılığa sahip yetişkin fare kardiyomiyositlerinin tekrarlanabilir izolasyonu ve uzun süreli kültürü için adım adım bir yöntemi açıklar.

İzolasyon, Kültür ve Yetişkin Fare kardiyomiyositlerde İletimi

Bu protokol, 0-4 gün eski farelerin derisinden melanosit ve fibroblast kültürlerini eşzamanlı olarak oluşturmak için hızlı bir yöntem özetliyor. Bu primer kültürler, cilt hücresi biyolojisi, pigmentasyon, yara iyileşmesi ve melanom dahil olmak üzere fizyolojik olarak ilgili süreçlerin çeşitli çalışma için muhafaza ve manipüle edilebilir.

Primer Murine melanosit ve fibroblast kültürlerinin hızlı üretimi

Miyositlerin ve miyosit olmayanların tek bir yetişkin fare kalbinin hem atria hem de ventriküllerinden eşzamanlı izolasyonu için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu protokol, yüksek oranda uygulanabilir kardiyak miyositlerin ve miyosit olmayanların tutarlı verimini sağlar ve fenotipleme ve in vitro analiz için en uygun hücreye özgü kültür koşullarını detaylandırmaz.

Yetişkin Fare Kalbinden Atriyal Miyositler, Ventrikül Miyositleri ve Miyosit Olmayanların Eşzamanlı İzolasyonu ve Kültürü

Antegrad perfüzyon tekniği ile yüksek kaliteli bireysel fare kalp hücrelerini izole etmek için basit bire yöntemi geliştirdik. Bu yöntem Langendorff içermez ve kardiyak fibroblastlar veya progenitörler gibi ventrikül ve atriyal miyositleri veya interstisyel hücreleri izole etmek için yararlıdır.

Farelerden Kardiyomiyosit İzolasyonu için Antegrad Perfüzyon Yöntemi

Kardiyolojide hücresel ve moleküler fonksiyonel deneyler için altın standart kardiyomiyositlerdir. Bu makalede, fare kardiyomiyositlerini izole etmek için Langendorff dışı tekniğe yapılan uyarlamalar açıklanmaktadır.

Fare kardiyomiyositlerini sürekli olarak izole etmek için basit ve etkili bir yöntem

Burada, miyokard enfarktüsü sonrası (MI) fare kalbinden yüksek canlılığa sahip yeterli miktarda tek kardiyomiyosit olmayan izole etmek için bir protokol açıklanmaktadır. Bu, sonraki tek hücreli dizileme, akış sitometri analizi ve birincil hücre kültürü için kullanılabilir.

Miyokard Enfarktüsü Sonrası Yetişkin Fare Kalbinden Tek Hücreli RNA Dizilimi için Kardiyomiyosit Olmayan Hücre Süspansiyonunun Hazırlanması

Burada, hücre çekirdeği hazırlığını tanımlayan bir protokol sunuyoruz. Kardiyak dokunun mikrodiseksiyonu ve enzimatik ayrışmasından sonra, progenitör hücreler donduruldu, ardından tek çekirdekli RNA dizilimi için kullanılan saf canlı hücrelerin izolasyonu ve yüksek verimli dizileme analizleri ile transpozaz erişilebilir kromatin için tek çekirdekli tahlil yapıldı.

Epigenom ve Tek Hücre Çözünürlüğünde Gen Ekspresyon Profillemesi için Fare Kardiyak Progenitör Hücrelerinden Çekirdek İzolasyonu

Keşfedin fare kalbinden melanosit benzeri hücreleri izole etme yöntemini. Enzimatik sindirim ve santrifüjasyon kullanarak bu hücreleri ayırın ve atriyal aritmi araştırmaları için kullanın.

Fare Kalpten İlköğretim Melanocyte gibi Hücreleri Ayırma

Daha fazla video keşfet