Name: İnsan bağırsak mukozasının eksplantlar Kültür ve Polarize Uyarım için Yeni Bir Yöntem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-01T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Keşfedin, insan bağırsak mukozası eksplantlarını kültürde 24-36 saat canlı tutarak apikal uyarım ile immün yanıtları analiz etme yöntemini. Bu teknik, aynı anda 20 koşulu inceleyerek mukoza immünolojisi araştırmalarını ilerletir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz oksijen odaları sağlamak için mükemmel teknik destek ve Dr Antonio Di Sabatino için Erika Mileti teşekkür ederim. Finansman: MR ve Fondazione Cariplo ve Marie Curie uluslararası eğitim hareketlilik ağ (Çapraz-Talk, hibe anlaşması No: 21553-2) destek için: Bu çalışma, 7. AB çerçeve programı (Dendroworld IBDase, ERC) hibe tarafından desteklenmiştir KT.

1. Elde ve Doku hazırlanması <ol><li> Doku (sağlıklı veya İBH mukoza) ameliyat sırasında elde edilir. Bir kez numune 4 ° C&#39;de veya buz üzerinde Kalem / Strep ile desteklenmiş Ca + + / Mg + + ücretsiz HBSS tampon tutarak, en kısa sürede laboratuara transferi eksize edilir. </li></ol> Numunenin * boyutu doku bulunmasına bağlıdır: elde edilen doku parçası, tanı için gerekli değildir ne sıkı ve sağlıklı ve IBD konular arasında büyük ölçüde değişebilir. Sağlıklı doku kolon kanseri nedeniyle ameliyat geçiren hastalarda eksize edilir. <ol start="2"><li> Hafifçe doku yıkayın ve tüm mezenterik malzeme temizleyin. Bir Petri kabı (mutlaka immerged değil) HBSS tampon doku tutarken steril makas ve forseps kullanarak submukozadan mukoza tabakası ayırın. Mümkün olduğunca az forseps ile mukoza yüzeyine dokunmayın. </li><li> En az 1 C çizgili mukoza Kesmem genişliğinde ve mümkün olduğunca uzun süre. Eğer gıda kesim sanki çok, iki steril neşter kullanın. </li><li> HBSS hafifçe mukoza temiz ve yukarı bakacak şekilde apikal yüzü bir Petri kabı üzerine uzatmak yıkayın. </li></ol> 2. Doku Montaj <ol><li> Taze orta (tisDMEM) hazırlayın. DMEM, glutamin (2 mM) ve NaPyr (1 mM) ile desteklenmiş kullanın ve FBS-Na% 15 ekleyin (Fetal Sığır Serumu - Kuzey Amerika), 1% ITS-X ve kullanım sırasında 200 ng / ml, EGF. </li><li> FBS-Na (metal ızgaralar tamamen sular altında olacak şekilde yaklaşık 30 ml kullanın) ve batığın metal ızgaraları geri kalanı ile bir 10 cm Petri kabı doldurun. Plaka kendi musluğu plastik silindir açın ve destek tutun. </li></ol> * Metal ızgaraları demirdir. Örgü, 0.5 mm bir tarafı ile kare-şekillidir. <ol start="3"><li> 10 veya 20 ul pipet ile cerrahi yapıştırıcı 3 ul alın. Bu f tutarken plastik bir silindirin sınırları birine dikkatle uygulayınforseps ile IRM. </li><li> Yavaşça mümkün olduğu kadar yakın olan şeridin sınırları birine, mukoza apikal tarafındaki silindir yerleştirin. </li><li> Iyi merkezinde orta 850 ul-1 ml koyun ve plaka merkezi kuyunun kenarlarında metal ızgara destek: sıkıca doku üzerinde silindir takmak için tutkal zaman vermek, merkez de organ kültürü plaka hazırlamak. </li><li> Uzakta daha önce olduğu gibi iki steril neşter kullanarak silindirin sınırlarından aşırı doku kesin. </li><li> Yavaşça bağlı doku ile kaldırma silindiri ve plakanın ortasına metal ızgara üzerinde bazolateral yan. </li></ol> 3. Uyarım <ol><li> Tercih konsantrasyon seçtiğiniz uyaranlara kullanın. </li><li> Pipet ile silindir ya da mukoza yüzeyi bozmadan plastik silindirin merkezine uygun hacim uygulanır. Seçtiğiniz hacmi eşit silindir içindeki yüzeyini kaplayan emin olun. Içindeendikedir hacimleri: Büyük plastik silindir: 200 ul Orta plastik silindir: 100 ul Küçük plastik silindir: 50 ul </li><li> Kadar geleneksel bir inkübatör 3 saat için inkübe edin. </li></ol> * Daha uzun zaman noktalarında inkübe isterseniz, (3.5) Eğer uyaranlara çok daha küçük bir hacim (10-20 ul) kullandığınızdan emin olun ve doğrudan 1 Atm baskısı% 100 O 2 bir ortamda mendilini . <ol start="4"><li> Apikal yüzünde orta kalın bir tabaka gaz değişimi engelliyorsa, doku 2 O yeterli almaz, çünkü doku apikal yüzeyinden uyaranlara ile orta alın ve taze orta DEĞİŞTİR. Kapak plakası. </li><li> 1 atm basınçta% 100 O2 atmosferi içinde doku yerleştirin. </li></ol> 4. Hasat <ol><li> Toplam kültür süresi (± 2,5 saat) 24 saat sonra dikkatli bir şekilde inci silindir çıkarınE bir neşter hafifçe kazıyarak tutkal yardımı ile doku ve (RNA saflaştırma ve gen ekspresyon profili ya da protein saflaştırma ve Batı benek deneyleri için sıvı N2 içinde immünohistokimya ve / veya imünoflüoresan deneylerinde ya da ek dondurulmasını düzeltmek istenen analizine bağlı olarak depolamak .) </li><li> Sitokin salgılanması profil için bazolateral orta hasat. Pelet enkaz 7 dakika 8.000 rpm&#39;de santrifüj, bir Eppendorf tüp (alternatif kısım) olarak süpernatant aktarmak ve hemen -20 ° C&#39;de saklayın </li></ol> * Daha uzun süre süpernatanlar tutmak istiyorsanız, -80 saklayın ° C

<ol><li>Schuller, S., Lucas, M., Kaper, J. B., Giron, J. A., Phillips, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ex+vivo+response+of+human+intestinal+mucosa+to+enteropathogenic+Escherichia+coli+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The ex vivo response of human intestinal mucosa to enteropathogenic Escherichia coli infection.</a> Cell. Microbiol. 11, 521-530 (2009).</li>
<li>Tsilingiri, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probiotic+and+postbiotic+activity+in+health+and+disease%3A+comparison+on+a+novel+polarised+ex-vivo+organ+culture+model%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Probiotic and postbiotic activity in health and disease: comparison on a novel polarised ex-vivo organ culture model.</a> Gut. , (2012).</li>
<li>Tsilingiri, K., Rescigno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Should+probiotics+be+tested+on+ex+vivo+organ+culture+models%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Should probiotics be tested on ex vivo organ culture models?</a> Gut Microbes. , Manuscript in preparation (2012).</li>
<li>Mileti, E., Matteoli, G., Iliev, I. D., Rescigno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+immunomodulatory+properties+of+three+probiotic+strains+of+Lactobacilli+using+complex+culture+systems%3A+prediction+for+in+vivo+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Comparison of the immunomodulatory properties of three probiotic strains of Lactobacilli using complex culture systems: prediction for in vivo efficacy.</a> PLoS One. 4, e7056(2009).</li>
<li>Cencic, A., Langerholc, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+cell+models+of+the+gut+and+their+applications+in+food+microbiology--a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Food+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Functional cell models of the gut and their applications in food microbiology--a review.</a> Int. J. Food Microbiol. 141, Suppl 1. S4-S14 (2010).</li>
<li>te Velde, A. A., Verstege, M. A., Hommes, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+appraisal+of+the+current+practice+in+murine+TNBS-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm.+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Critical appraisal of the current practice in murine TNBS-induced colitis.</a> Inflamm. Bowel Dis. 12, 995-999 (2006).</li>
<li>Senior, P. V., Pritchett, C. J., Sunter, J. P., Appleton, D. R., Watson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crypt+regeneration+in+adult+human+colonic+mucosa+during+prolonged+organ+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anat%22%5BJournal%5D)">Crypt regeneration in adult human colonic mucosa during prolonged organ culture.</a> J. Anat. 134, 459-469 (1982).</li>
<li>Browning, T. H., Trier, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+culture+of+mucosal+biopsies+of+human+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Organ culture of mucosal biopsies of human small intestine.</a> J. Clin. Invest. 48, 1423-1432 (1969).</li>
<li>Besselink, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probiotic+prophylaxis+in+predicted+severe+acute+pancreatitis%3A+a+randomised%2C+double-blind%2C+placebo-controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Probiotic prophylaxis in predicted severe acute pancreatitis: a randomised, double-blind, placebo-controlled trial.</a> Lancet. 371, 651-659 (2008).</li>
<li>Lakhdari, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+NF-kappaB+modulation+capabilities+within+human+intestinal+commensal+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Identification of NF-kappaB modulation capabilities within human intestinal commensal bacteria.</a> J. Biomed. Biotechnol. 2011, 282356(2011).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

İnsan bağırsak mukozası için tedaviler geçerli olarak test edilebilir hangi fizyolojik ilgili modelleri olan ihtiyaç uzun vurgulanmıştır. Birçok araştırmacı bu amaçla bugüne kadar kullanılan cep 5 ve fare modellerinde 6 hem de potansiyel eserler ve kusurları belirledik. Umut verici klinik öncesi veriler genellikle elde olsa bile Gerçekten de, bu nadiren önemli klinik fayda çevirmek. Bu çalışmada açıklanan bir yöntem olup, bir kültür ve polarize tarzda insan bağırsak muk...

<table><tbody><tr><td colspan="4">&lt;güçlü&gt;Reaktifler&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>10X HBSS</td><td>Eurocalne</td><td>ECM4006XL</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin/Streptomisin</td><td>Lonza</td><td>DE17602E</td><td></td></tr><tr><td>Gentamisin</td><td>Gibco</td><td>15750-037</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Lonza</td><td>BE12614</td><td></td></tr><tr><td>FBS-Na</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>100X ITS-X</td><td>Gibco</td><td>51500-056</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Tebu-bio</td><td>100-15</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Lonza</td><td>BE17605E</td><td></td></tr><tr><td>Esansiyel olmayan aminoasitler 100X</td><td>Gibco</td><td>11140-035</td><td></td></tr><tr><td>NaPyr</td><td>Gibco</td><td>11360-039</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;güçlü&gt;Materyaller&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Klonlama silindirleri 6x8 mm</td><td>BellCo</td><td>2090-00608</td><td></td></tr><tr><td>Klonlama silindirleri 8x8 mm</td><td>BellCo</td><td>2090-0080</td><td></td></tr><tr><td>Klonlama silindirleri 10x10 mm</td><td>BellCo</td><td>2090-01010</td><td></td></tr><tr><td>Metal ızgaralar</td><td>Ev yapımı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Merkezi kuyucuklu organ kültür plakası</td><td>BD Falcon</td><td>353037</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi yapıştırıcı (Vetbond)</td><td>3M</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Oksijen Kavanozları</td><td>Ev yapımı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oksijen tüpleri</td><td>Hava Sıvı Sterilizasyonu&amp;#224;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan bağırsak mukozasının eksplantlar kültür ve polarize uyarım için yeni bir yöntem

A Novel Method for the Culture and Polarized Stimulation of Human Intestinal Mucosa Explants

Birkaç model şu anda gerçekçi etkileşimleri çeşitli yer alan karmaşık insan bağırsak mikro-çevre, simüle etmek için var. Aynı zamanda yanlışlıkla gıda ile yutulur patojen mikroplara karşı etkili bir bağışıklık yanıtları montaj yaparken de gıda antijenlerine karşı bütün bir immünolojik tepki neden olan tolerans şekil olarak uygun dengesini doğrudan, bu etkileşimlerin bağlıdır. Bağırsak homeostasis mukus eki / bozulması düzenleyen Mikrobiyota (gıda ile ilişkili yararlı bakteri suşlar dahil) ve ev sahibi, arasında çeşitli karmaşık etkileşimler aracılığıyla da korunur, epitel bariyer tarafından antimikrobiyal peptidler üretimi, ve &quot;eğitim&quot; nüfus &#39;benzersiz, gut yerleşik lenfoid hücrelerin tolerojenik veya immünojenik fenotip kontrol&#39; epitel hücreleri. Bu etkileşimler, in vitro tahlillerde ile yeniden oluşturmak için şimdiye kadar çok zor olmuşturkültürlenmiş hücre çizgileri ya da periferal kan tek-çekirdekli hücreleri ya kullanılarak. Buna ek olarak, fare modelleri, insan bağırsak ile ilgili olarak, bağırsak mukozası (mukus tabakası organizasyon, ortakçı bakteri eden) bileşenleri önemli ölçüde farklılık gösterir. Böylece, irritabl bağırsak sendromu, enflamatuar barsak hastalığı veya kolorektal kanser gibi önemli stresle ilişkili veya patolojik durumlar için klinikte getirilmesi için çeşitli tedaviler çalışmalarını gerçekleştirmek zor olmuştur. Bu sorunları çözmek için, bize bir polarize şekilde, ev sahibi Mikrobiyota ve immün yanıt ile yerinde klima kendi korumak insan bağırsak mukozasının eksplantlarının teşvik sağlayan yeni bir sistem geliştirdi. Polarize apikal stimülasyon sonucu için büyük önem taşımaktadır immün yanıt ortaya çıkardı. Bu tekrar tekrar bağırsak epi apikal yüz atlamak zaman aynı uyaranlara tamamen farklı tepkiler üretebilir gösterilmiştirsentezlenen, basolaterally epitel hücreleri uyararak ya da lamina propria bileşenleri ile doğrudan temas, tolerojenik gelen immünojenik için fenotip geçiş ve bölgede gereksiz ve aşırı enflamasyon neden olur. Bu yapıştırma mukoza apikal yüzünde stimülasyon alanı olarak protokolde tarif edilecektir ayrılmış bir mağara silindir polarize uyarılması sağlanır. Biz diğerleri, üç farklı Laktobasillerin suşlarının diferansiyel etkileri arasında, incelemek için bu model kullanılır. Bu model sistem sağlıklı ve hastalık koşullarında probiyotiklerin bağışıklık özelliklerini değerlendirmek için çok güçlü olduğunu göstermektedir.

Bu doku sağlığını koruyan en az 24 saat boyunca kültür sağlıklı ve IBD de insan bağırsak mukozasında korumuştur. Kültür zaman çoğunluğu (toplam en az 85%) O 2 yer aldı önceki gözlemler 1 uyarınca, bu doku geleneksel kuluçka 24 saat (Şekil 2) için hayatta değildi gibi, mümkün oldu. Ayrıca eksplant farklı tepkiler uyarılması (apikal vs bazolateral) ve uyarı 2,3 immünojeniklik polaritesine bağlı olarak bu modelde gözlenebilir göstermiştir. Bu pr...

En az 24 saat boyunca çeşitli uyaranlara yanıt kültürü ve izleme insan bağırsak mukozasının korunması için yeni bir yöntem getirmektedir. Bizim yöntem ile, doku kutup apikal yolla fizyolojik bir uyarım sağlayan, korunur.

İnsan bağırsak mukozasının eksplantlar Kültür ve Polarize Uyarım için Yeni Bir Yöntem

Çeşitli etkileşimlerin gerçekleştiği karmaşık insan bağırsağının mikro çevresini gerçekçi bir şekilde simüle edebilecek çok az model mevcuttur. Uygun...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, insan intestinal mukozasının stimülasyonu için in vivo durumunu taklit etmektir. Bu, stimulusun bazolateral temas kurmasını önlemek amacıyla dokunun apikal tarafına bir kave silindiri yapıştırılarak gerçekleştirilir. İkinci adım olarak stimulus uygulanır ve bu sayede tetiklenen immün yanıtın analizi sağlanır.Ardından, dokunun 24 ila 36 saat boyunca canlı kalmasını sağlamak amacıyla uyaran, dokunun apikal tarafından kaldırılır. Elde edilen sonuçlar; immünohistokimya verileri, sitokin sekresyonu, profil analizi ve benzeri verilere dayanarak çeşitli probiyotik suşların farklı etkilerini gösterebilir. Bu tekniğin ASIC kamarası gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, aynı anda 20'ye kadar farklı koşulun analiz edilmesine olanak tanımasıdır.Kültür süresinin 36 saate kadar uzatılmasına olanak tanır ve ayrıca DNA/RNA analizi, immünohistokimya, sitokin salınımı vb. gibi çeşitli okuma analizleri için yeterli materyal sağlar. Bu yöntem probiyotik alanında içgörü sağlayabildiği gibi, diğer teknolojiler için ve biyolojikler, antiinflamatuar ilaçlar gibi diğer immünomodülatörlerin etkilerini incelemek için de kullanılabilir. Sağlıklı bireylerden veya inflamatuar bağırsak hastalığı olan kişilerden intestinal mukoza dokusu cerrahi sırasında elde edilmelidir.Örnek eksize edildikten sonra, pen strep içeren HBSS içerisinde soğuk tutularak hızla laboratuvara nakledilir. Ardından, doku tampon ile yıkanarak başlanır ve tüm mezenterik materyaller uzaklaştırılır. Sonrasında, doku HBSS tamponunda tutulurken steril makas ve pens kullanılarak mukoza tabakası submukozadan ayrılır.Bir Petri kabında dokunun tamamen daldırılmış olarak tutulması gerekli değildir, ancak forseps ile mukozal yüzeye mümkün olduğunca az dokununuz. Ardından, mukozayı en az bir santimetre genişliğinde ve mümkün olduğunca uzun şeritler halinde, iki steril skalpeli yiyecek keser gibi kullanarak kesin. Kesme işlemi tamamlandıktan sonra, mukozayı kalsiyum ve magnezyum içermeyen HBSS ile nazikçe yıkayıp temizleyin.Son olarak, mukoza şeritlerini apikal yüzeyleri yukarı bakacak şekilde bir Petri kabına yayın. Taze TIS DMEM hazırlayarak başlayın. Ardından, 10 santimetrelik bir Petri kabını yaklaşık 30 mililitre F-B-S-N-A ile doldurun ve bir demir ızgarayı tamamen çözeltinin içine daldırın.Plakayı açık tutun ve plastik silindirleri plaka üzerine yerleştirin. Kapatın. Şimdi, üç µL cerrahi yapıştırıcıyı bir pipete çekin ve pensle sıkıca tutarken yapıştırıcıyı plastik silindirin kenarlarından birine dikkatlice uygulayın. Ardından, yapıştırıcı kururken silindiri mukoza üzerindeki apikal tarafa, şerit kenarlarından birine mümkün olduğunca yakın olacak şekilde nazikçe yerleştirin.Doku plakasının merkez kuyucuğuna 850 ila 1000 µL besiyeri ekleyin ve demir ızgarayı plaka merkez kuyucuğunun kenarlarına yerleştirerek destekleyin. İki neşter kullanarak, silindirin kenarlarındaki fazla dokuyu kesin. Ardından, ekli dokuyla birlikte silindiri nazikçe kaldırın ve dokunun bazolateral tarafını plakanın merkezindeki demir ızgara üzerine yerleştirin.Ardından, doku stimülasyonuna geçiniz. İlgilenilen stimülileri, plastik silindirin merkezine istenen konsantrasyonda uygulayınız. Pipet ucuyla silindiri veya mukoza yüzeyini rahatsız etmeyiniz ve silindirin içindeki yüzeyi homojen bir şekilde kaplayınız.Şimdi dokuyu üç saate kadar inkübe edin. Daha küçük bir hacimde stimülasyon çözeltisi kullanılarak üç saatten daha uzun süreli inkübasyon da mümkündür. İnkübasyonun ardından, stimülasyon maddelerini dokunun apikal yüzeyinden uzaklaştırın ancak yerine taze besiyeri eklemeyin.Besiyeri eklemek dokunun nefessiz kalmasına neden olur. Şimdi oksijen kavanozunu, 24 saatlik kültür süresi boyunca bir atmosfer basıncında %100 oksijen ile doldurun. Oksijen tüpünü kullanırken her zaman dikkatli olun ve kullanımdan sonra düzgünce kapattığınızdan emin olun.24 saatlik stimülasyon kültürünün ardından, yapıştırıcıyı nazikçe kazıyarak silindiri dokudan dikkatlice çıkarmak için bir skalpel kullanın. Ardından, IHC veya immünofloresan analizler için dokuyu fikse edin. Gen ekspresyonu veya protein analizi için ise dokuyu sıvı azot içerisinde şok dondurun.Ardından, sitokin salgılama profillemesi için bazal lateral medyumu toplayın. Bunu takiben, medyumu bir santrifüj tüpüne aktarın ve belirtilen protokolü kullanarak kalıntıları çöktürün. Sağlıklı ve IBD'li insan intestinal mukozaları, dokuların refahı korunarak en az 24 saat boyunca kültüre edilmiştir.Bu durum, ancak kültür süresinin en az %85'inin oksijen açısından zengin bir ortamda gerçekleşmesi durumunda mümkün olmuştur. Geleneksel yöntemlerle kültüre edilen mukoza aynı derecede iyi sonuç vermemektedir. Sağlıklı doku daha sonra pro-inflamatuar invaziv salmonella ile stimüle edilmiştir.İnokülasyondan iki saat sonra, kontrollere kıyasla epitelin üst tabakasındaki yıkım halihazırda görünür hale gelmişti. 24 saat sonra, dejenerasyon oldukça geniş bir alana yayıldı. Yayınlanmış sonuçlarla birlikte deneysel uygulamaların daha ayrıntılı bir tartışması, yazılı taslağın geliştirilmesinin ardından sunulacaktır.Bu teknik, gastroenteroloji alanında çalışan araştırmacıların gastrointestinal sistemdeki konakçı-mikrop etkileşimini incelemelerinin önünü açmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, insan intestinal mukozasının kültürde nasıl tutulacağı ve topikal olarak nasıl stimüle edileceği konusunda kapsamlı bir anlayış kazanmış olmalısınız. İnsan örnekleriyle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu prosedür gerçekleştirilirken gerekli önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.

a-novel-method-for-culture-polarized-stimulation-human-intestinal

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Kaynak: J. G. ve diğerleri. Patojenler, kommensallar ve konak bağırsak epitelleri arasındaki etkileşimleri incelemek için insan kolonoid monokatmanlar. J. Vis. Exp. (2019).Bu video, kolajen kaplı bir Transwell sisteminde kolondan kaynaklı epitel hücrelerinin kültürlenmesi prosedürünü gösteriyor; böylece bağırsak bariyerini modelleyen ve konak-patojen-patojenler etkileşim çalışmalarını mümkün kılan mukus üreten bir monotabaka oluşturuluyor.

Konak-Patojen Etkileşimlerini İncelemek İçin Bariyer Fonksiyonlu İnsan Kolonoid Monotabakasının Oluşturulması

Bu videoda, fare bağırsak dokusu parçaları ile spesifik bağırsak bakterileri arasındaki etkileşimleri incelemek için bir ex vivo bağırsak organ kültürü sistemi kurma metodolojisini açıklıyoruz. Cihaz, ilki bağırsak dokusu lümenini birbirine bağlayan ve içine spesifik bakteri süspansiyonunu sağlayan ve ikincisi ex vivo doku canlılığını korumak için cihazın kuyularına sürekli olarak ortam sağlayan iki çift giriş-çıkış portundan oluşur.

Konak-mikrobiyota etkileşimlerini incelemek için bir ex vivo bağırsak organ kültürü sistemi

İnce bağırsak kriptlerinden insan enteroidlerini ve hem cerrahi dokudan hem de biyopsilerden toplanan kolon kriptlerinden kolonoidleri oluşturmak için bir yöntem tarif ediyoruz. Bu metodolojik makalede, insan enteroidlerinin ve kolonoidlerinin başarılı bir şekilde büyümesi ve sürdürülmesi için gerekli olan kültür modalitelerini sunuyoruz.

Tüm Doku ve Biyopsi İnsan Epitelyal Enteroids ve Colonoids kurulması

Burada, hasat korumak ve patojen ilişkili moleküler modelleri (PAMPS) ve Listeria monocytogenes fare ince bağırsak organoids tedavisi için bir protokol da gen ifadesi ve protein için uygun normalizasyon ağırlıklı olarak, tarif edilmektedir.

<em&gt; Ex Vivo</emFare Bağırsak Organoids ve&gt; Kültür ve Desen Tanıma Reseptör Uyarım

Biz, insan bağırsak-on-a-chip microphysiological sistemi kullanılarak uzun bir süre için bir in vitro protokole ko-kültür bağırsak mikrobiyomları ve bağırsak villi açıklar.

içinde Microengineered İnsan Bağırsak Villi Oturma mikrobiyomu Co-kültür, bir Gut-on-a-Chip mikroakışkan Aygıt

Bu protokol karışık fare küçük bağırsak hücrelerinin izolasyonu ve kültürü anlatılmaktadır. Bu primer bağırsak kültürler bir takım teknikler kullanılarak bağırsak peptidi salgısının temel sinyal yollarının inceleme sağlar.

Enteroendokrin Hücre Gut Hormon salgısını Çalışması ve Canlı Hücre Görüntüleme için Amaçlanan Kemirgen Küçük Bağırsak Karışık İlköğretim Kültürler

Burada, bir protokol kültür insan enteroid veya ana bilgisayar microbiota epitel etkileşimleri hücresel ve biyokimyasal düzeyde çalışmaya sağlam bariyer fonksiyonu var colonoid monolayers mevcut.

Patojenler, Commensals ve ana bilgisayar bağırsak epitel arasındaki etkileşimler çalışmaya insan Colonoid Monolayers

Bu protokol, insan kök hücresi türeyen ileal monolayerlerde M hücrelerinin farklılaşmasını ve gelişimini değerlendirmek için yöntemleri nasıl açıklar.

Insan kök hücresinde M hücre benzeri hücrelerin kaynaklı farklılaşma-türev ıleal Enteroid Monolayers

Burada bağırsak apikal spesifik etkileşimlerin modellenmesine izin veren iki protokol sunuyoruz. Organoid türevli bağırsak monolayerleri ve Hava-Sıvı Arayüzü (ALI) kültürleri, hem aydınlık hem de bazolateral taraflardan erişilebilen iyi ayırt edilmiş epitellerin üretilmesini kolaylaştırırken, polarite ters bağırsak organoidleri apikal yanlarını ortaya çıkarır ve yüksek verim testlerine uygundur.

Bağırsak Organoid Modellerini Kullanarak Apikal Spesifik Etkileşimleri İncelemek için Kültür Yöntemleri

Çalışma, doku kök hücresinden türetilen bağırsak organoidleri kullanılarak bakteriyel enfeksiyonun in vitro incelenmesi için bir yöntem sunmaktadır. Protokol, organoidlerin iki boyutta nasıl kültürleneceğini ve farklılaştırılacağını, onları yapışkan-invaziv Escherichia coli ile enfekte edeceğini ve epitel bariyer sızıntısı, enfeksiyon görüntüleme ve epitel RNA yanıtı gibi önemli okumaları nasıl değerlendireceğini açıklar.

Konak-bakteri etkileşimlerini incelemek için invazin veya bazal zar ekstraktı üzerine iki boyutlu organoid kültürü

Keşfedin, insan bağırsak mukozası eksplantlarını kültürde 24-36 saat canlı tutarak apikal uyarım ile immün yanıtları analiz etme yöntemini. Bu teknik, aynı anda 20 koşulu inceleyerek mukoza immünolojisi araştırmalarını ilerletir.

İnsan bağırsak mukozasının eksplantlar Kültür ve Polarize Uyarım için Yeni Bir Yöntem

Daha fazla video keşfet