Name: Open-kitap Hazırlıklarında Dii Enjeksiyon tarafından geliştirilmesi Nöral Tüp ve fenotipleri Değerlendirilmesinde miRNA tabanlı Plazmidler arasında ovo Elektroporasyon yılında (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-16T12:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 41 s
Description: Öğrenin, tavuk embriyosunda in ovo elektroporasyon ile mikroRNA tabanlı plazmidler kullanarak gen ekspresyonunu hücre tipine özgü şekilde düşürme ve nöral tüp gelişiminde komissüral akson kılavuzluk kusurlarını değerlendirme yöntemini.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ES laboratuarında Çalışma İsviçre Ulusal Bilim Vakfı tarafından destekleniyor. Biz filme yardım için Dr bitirin Kunz teşekkür etmek istiyorum.

<ol><li>Chédotal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Further+tales+of+the+midline%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Further tales of the midline.</a> Current Opinion in Neurobiology. 21, 68-75 (2011).</li>
<li>Avraham, O., Hadas, Y., Vald, L., Zisman, S., Schejter, A., Visel, A., Klar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+control+of+axonal+guidance+and+sorting+in+dorsal+interneurons+by+the+Lim-HD+proteins+Lhx9+and+Lhx1%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Development%22%5BJournal%5D)">Transcriptional control of axonal guidance and sorting in dorsal interneurons by the Lim-HD proteins Lhx9 and Lhx1.</a> Neural Development. 4, 21(2009).</li>
<li>Wilson, N. H., Stoeckli, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+type+specific%2C+traceable+gene+silencing+for+functional+gene+analysis+during+vertebrate+neural+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Cell type specific, traceable gene silencing for functional gene analysis during vertebrate neural development.</a> Nucleic Acids Research. 39, e133(2011).</li>
<li>Das, R. M., van Hateren, N. J., Howell, G. R., Farrell, E. R., Bangs, F. K., Porteous, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+system+for+RNA+interference+in+the+chicken+using+a+modified+microRNA+operon%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">A robust system for RNA interference in the chicken using a modified microRNA operon.</a> Developmental Biology. 294, 554-563 (2006).</li>
<li>Perrin, F. E., Stoeckli, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+lipophilic+dyes+in+studies+of+axonal+pathfinding+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Microscopy+Research+and+Technique%22%5BJournal%5D)">Use of lipophilic dyes in studies of axonal pathfinding in vivo.</a> Microscopy Research and Technique. 48, 25-31 (2000).</li>
<li>Timmer, J., Johnson, J., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+in+ovo+electroporation+for+the+rapid+analysis+of+neural-specific+murine+enhancers%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">The use of in ovo electroporation for the rapid analysis of neural-specific murine enhancers.</a> Genesis. 29, 123-132 (2001).</li>
<li>Kieleczawa, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+modifications+of+the+standard+DNA+sequencing+protocol+allow+for+sequencing+through+siRNA+hairpins+and+other+repeats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomolecular+Techniques%22%5BJournal%5D)">Simple modifications of the standard DNA sequencing protocol allow for sequencing through siRNA hairpins and other repeats.</a> Journal of Biomolecular Techniques. 16, 220-223 (2005).</li>
<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Morphology%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88, 49-92 (1951).</li>
<li>Boulland, J., Halasi, G., Kasumacic, N., Glover, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenotransplantation+of+Human+Stem+Cells+into+the+Chicken+Embryo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Xenotransplantation of Human Stem Cells into the Chicken Embryo.</a> J. Vis. Exp. (41), e2071(2010).</li>
<li>Kim, B. G., Dai, H. -N., McAtee, M., Vicini, S., Bregman, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labeling+of+dendritic+spines+with+the+carbocyanine+dye+DiI+for+confocal+microscopic+imaging+in+lightly+fixed+cortical+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Labeling of dendritic spines with the carbocyanine dye DiI for confocal microscopic imaging in lightly fixed cortical slices.</a> Journal of Neuroscience Methods. 162, 237-243 (2007).</li>
<li>Murphy, M. C., Fox, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterograde+tracing+method+using+DiI+to+label+vagal+innervation+of+the+embryonic+and+early+postnatal+mouse+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Anterograde tracing method using DiI to label vagal innervation of the embryonic and early postnatal mouse gastrointestinal tract.</a> Journal of Neuroscience Methods. 163, 213-225 (2007).</li>
<li>Helms, A. W., Abney, A. L., Ben-Arie, N., Zoghbi, H. Y., Johnson, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoregulation+and+multiple+enhancers+control+Math1+expression+in+the+developing+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Autoregulation and multiple enhancers control Math1 expression in the developing nervous system.</a> Development. 127, 1185-1196 (2000).</li>
<li>Li, X., Lufkin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cre+recombinase+expression+in+the+floorplate%2C+notochord+and+gut+epithelium+in+transgenic+embryos+driven+by+the+Hoxa-1+enhancer+III%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Cre recombinase expression in the floorplate, notochord and gut epithelium in transgenic embryos driven by the Hoxa-1 enhancer III.</a> Genesis. 26, 121-122 (2000).</li>
<li>Mauti, O., Baeriswyl, T., Stoeckli, E. T. G. ene <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silencing+by+Injection+and+Electroporation+of+dsRNA+in+Avian+Embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Silencing by Injection and Electroporation of dsRNA in Avian Embryos.</a> Cold Spring Harbor Protocols. , (2008).</li>
<li>Krull, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+primer+on+using+in+ovo+electroporation+to+analyze+gene+function%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">A primer on using in ovo electroporation to analyze gene function.</a> Developmental Dynamics. 229, 433-439 (2004).</li>
<li>Cullen, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+and+confirming+the+specificity+of+RNAi+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Enhancing and confirming the specificity of RNAi experiments.</a> Nature Methods. 3, 677-681 (2006).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu basit, vektör tabanlı bir yapay stratejinin miRNA ifade tavuk nöral tüp içinde devirme endojen gen ekspresyonu için kullanılabilir. Bu fonksiyonel araçlar karmaşık bir gelişimsel yolların aydınlatılmasında kolaylaştırmak için, birden fazla gen susturulması, zamansal kontrolü ve hücre tipi özgüllük sunuyoruz. Plazmitler commissural nöronlar ya da kendi ara hedef, zemin plakası 3 devirme gen için kullanılır dolayısıyla ayrıntılı olarak,, commissural akson yönlendirme, bu plazmid yarar göstermiştir. <p cl...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> 0,5 mm cam kapilerleri </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> 1B120F-4 </td></tr><tr><td> Cam iğne çektirme </td><td> Narishige </td><td> PC-10 </td></tr><tr><td> Elektroporatör </td><td> BTX </td><td> ECM 830 </td></tr><tr><td> Sylgard silikon elastomer </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> SYLG184 </td></tr><tr><td> Tungsten tel, 0.075 mm </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> TGW0325 </td></tr><tr><td> Böcek iğne, 0,20 mm </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 26002-20 </td></tr><tr><td> Böcek iğne, 0,10 mm </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 26002-10 </td></tr><tr><td> Bahar makas </td><td> Için Güzel Bilimols </td><td> 15003-08 </td></tr><tr><td> Dumont # 5 forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11252-20 </td></tr><tr><td> Dumont # 55 forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11255-20 </td></tr><tr><td> Hızlı DII </td><td> Molecular Probes </td><td> D-7756 </td></tr><tr><td> Floresan mikroskop </td><td> Olimpos </td><td> SZX12, BX51 </td></tr></tbody></table>

open-kitap hazırlıklarında dii enjeksiyon tarafından geliştirilmesi nöral tüp ve fenotipleri değerlendirilmesinde mirna tabanlı plazmidler arasında ovo elektroporasyon yılında

In ovo Electroporation of miRNA-based Plasmids in the Developing Neural Tube and Assessment of Phenotypes by DiI Injection in Open-book Preparations

Commissural DI1 nöronlar yoğun gelişim 1,2 sırasında akson rehberliği altında yatan mekanizmaları aydınlatmak çalışılmıştır. Bu nöronlar dorsal omurilikte bulunan ve basmakalıp yörüngeleri boyunca aksonları gönderebilirsiniz. Commissural akson başlangıçta yönünde ve daha sonra zemin plakası üzerinde ventral proje. Midline geçtikten sonra, bu aksonlar uzunlamasına beyin doğru keskin bir dönüş rostral ve proje yapmak. Bu adımların her biri çekici ve itici rehberlik ipuçlarının koordineli faaliyetler düzenlenir. Bu ipuçlarının doğru yorumlanmasını kendi sınırları çizilmiş yol boyunca akson rehberlik için çok önemlidir. Böylece, kılavuz commissural akson için belirli bir molekülün fizyolojik katkı ideal olarak canlı embriyo bağlamında incelenmiştir. Buna göre, in vivo gen demonte hassas dikkatle birden oynayabilir genlerin akson rehberlik faaliyetleri ayırt etmek için kontrol edilmelidirgelişimi sırasında rolleri. Burada, bir hücre tipine özgü, izlenebilir bir şekilde tavuk nöral tüp knockdown gen ekspresyonu için bir yöntem açıklanmaktadır. Biz 3 hücre tipine özgü yararlanıcı / Bir floresan protein marker ekspresyonu sürücü arttırıcılar, barındıran bir miR30-RNAi transkript 4 (cDNA floresan protein 3&#39;-UTR içinde bulunan) (tarafından doğrudan takip roman plazmid vektörler kullanın Şekil 1). Gelişmekte olan nöral tüp içine electroporated, bu vektörlerin gen ifadesinin verimli baskılanması ortaya çıkarmak ve demonte 3 karşılaştığınız hücrelerin izleme doğrudan etkinleştirmek için parlak floresan işaretleyici proteinleri ifade. Elektroporasyon önce farklı RNAi vektörler Karıştırma omurilik bağımsız bölgelerinde iki ya da daha fazla genin eşzamanlı devirme izin verir. Bu hızlı bir şekilde, s, geliştirme aşamasında ele alınacak kompleks hücresel ve moleküler etkileşimler izin, uygu hassas ve ucuz. Açık kitap hazırlıkları 5 commissural akson yörünge Dii izleme ile birlikte, bu yöntem commissural akson büyüme ve rehberlik hücresel ve moleküler mekanizmalar in vivo çalışmalar için yararlı bir araçtır. Ilke olarak, herhangi bir hızlandıncı / kuvvetlendirici potansiyel olarak geliştirme 6 sırasında gen fonksiyonu in vivo çalışmaları için yöntem daha geniş çapta uygulanabilir hale kullanılabilir. Bu video ilk nasıl işleneceğini gösterir ve pencere yumurta, nöral tüp içine DNA plazmid enjeksiyon ve elektroporasyon prosedürü. Commissural akson rehberlik araştırmak için, spinal kord, açık-kitap hazırlanması gibi embriyo kaldırılır sabit ve akson yollar izlenebilir sağlamak için Dii ile enjekte edilir. Omurilik lamelleri arasına monte ve konfokal mikroskopi kullanılarak canlandırılmaya çalışılır.

Nöral tüp içinde gen ekspresyonunu bir hücre tipine özgü, izlenebilir bir şekilde aşağı regüle olabilen göre bir yöntem tarif edilmektedir. Biz nasıl gösterilmektedir<em&gt; Ovo</emSpatiotemporally kontrollü bir RNA girişim ortaya microRNA tabanlı bir plazmid&gt; elektroporasyon gelişen nöral tüp içinde commissural akson kılavuz araştırmak için kullanılabilir.

Open-kitap Hazırlıklarında Dii Enjeksiyon tarafından geliştirilmesi Nöral Tüp ve fenotipleri Değerlendirilmesinde miRNA tabanlı Plazmidler arasında ovo Elektroporasyon yılında

Gelişim sırasında akson kılavuzluğunun altında yatan mekanizmaları aydınlatmak için komissural dI1 nöronları kapsamlı bir şekilde çalışılmıştır1,2. Bu nöronlar...

Bu prosedürün amacı, hücre tipine özgü izlenebilir bir şekilde gen ekspresyonu aşağı düzenlendikten sonra civciv nöral tüpündeki akson kılavuzlama kusurlarını değerlendirmektir. Bu işlem, yumurta kabuğuna bir pencere açılarak döllenmiş tavuk yumurtalarının in ovo elektroporasyon için hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım ise, mikroRNA'ları kodlayan DNA konstrüktlarının nöral tüpe enjekte edilmesi ve elektroporasyon uygulanmasıdır.Ardından, elektro-derecelendirilmiş spinal kordonlar diseke edilir ve düz montajlı açık kitap preparatları şeklinde sabitlenir. Son adım, aksonal projeksiyonları görselleştirmek için floresan bir boya enjekte etmektir. Nihai olarak, hem gen susturulması yaşayan hücreleri göstermek hem de komissür akson yönlendirmesi üzerindeki sonraki etkileri değerlendirmek için floresan mikroskopi kullanılır.Bu tekniğin mevcut yöntemlere göre temel avantajı, genlerin hücre tipine özgü olarak susturulabilmesidir. Plazmidlerin hazırlanması için yazılı protokoldüki talimatları kontrol edin. Yumurtaları, istenilen gelişim evresine ulaşılana kadar 38.5 °C sıcaklıkta ve yaklaşık %45 nemde inkübe edin. Komissüral nöronların akson yönelimini incelemek için embriyoları, H

in-ovo-electroporation-mirna-based-plasmids-developing-neural-tube

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video nöronların genetik olarak tanımlanan gruplar aksonal yollar kullanarak embriyonik civciv omurilik görselleştirmek için nasıl...

Nöronlar, Genetik Tanımlı Gruplar Aksonal tanımında kullanılması Civciv Nöral Tüp Deşifre Ovo Elektroporasyon

Utero elektroporasyon nöronal progenitör hücrelerinin in vivo transfecting için değerli bir yöntemdir. Elektrotlar ve elektroporasyon gelişimsel timepoint yerleştirme bağlı kortikal hücrelerin bazı altkümelerini hedeflenebilir. Hedeflenen hücreler daha sonra in vivo veya in vitro genetik değişiminin etkileri analiz edilebilir.

In utero Elektroporasyon Kortikal nöronlar Altküme Gen Fonksiyonu Öğrenmenin İlköğretim Nöronal Kültür takip

Utero elektroporasyon gelişmekte olan merkezi sinir sistemi (MSS) bir mekansal ve zamansal olarak kontrollü bir şekilde hızlı bir gen teslimat için izin verir. Burada son derece uyarlanabilir tarif telencephalon diensefalon ve retina da dahil olmak üzere birden fazla embriyonik MSS etki alanı ifade yapıları sunmak için kullanılabilir utero elektroporasyon protokol.

Verimli kullanarak birden çok CNS Topraklar&#39;da Gen Teslimat In Utero Elektroporasyon

Midgestation Fare Embryolarının Alt Rombik Dudak in vitro Elektroporasyon yılında

Işlevi ve orta beyin dopaminerjik nöron gelişimi sırasında genlerin düzenlenmesi değerlendirmek için, içeren bir yöntem...

Dopaminerjik Nöron Geliştirme Gen Fonksiyonunun Çalışılması için Chick orta beyin içinde ovo Elektroporasyon yılında

Somatik kök hücre genişleme kontrolü kendi çalışma ve tedavide kullanımı engelleyen önemli bir faktördür. Burada geçici olarak fare beyin üretilen nöron sayısını artırmak için kullanılabilir geliştirme ve yetişkinlik döneminde nöral kök hücrelerinin genişlemesi, kontrol etmek için bir sistemi tanımlamak.

Tarafından Embriyonik ve Erişkin Nöral Kök Hücre Genişletme<em&gt; In Utero</em&gt; Elektroporasyon veya Viral Stereotaksik Enjeksiyon

Dış ifade beyin gelişiminde microRNA rolünü izah etmek için bir tekniktir. Ancak, ovo elektroporasyon kullanarak belirli alanları hedefleyen zordur. Burada, biz verimli bir şekilde seçici electroporate ventral ve dorsal orta beyin bölgeleri göstermek.

Ventral Chick orta beyin içinde MikroRNA ovo İfade

Biz Ciona intestinalis, mikroenjeksiyon ve elektroporasyon teknikleri kullanarak omurgalılar bir kordalısı kardeş grubunda, geçici transgenesis ve gen demonte sunuyoruz. Bu tür yöntemler Notokordun ve baş duyusal epitel ve insan hastalıklarla ilişkili genlerin pek ortologlar dahil omurgalıların ilkel özellikleri, özellikleri bu basit omurgasız fonksiyonel genomik kolaylaştırır.

Kordalı embriyo Mikroenjeksiyon ve Elektroporasyon<em&gt; Ciona intestinalis</em

İn ovo elektroporasyon ve Tol2 transpozon sistemini kullanarak yapay mikro-RNA dizilerinin civciv embriyolarına sokulmasını ve genomik entegrasyonunu içeren yeni bir fonksiyon kaybı yaklaşımı geliştirdik. Bu teknik, geliştirme sırasında gen fonksiyonu çalışmaları için sağlam ve kararlı bir gen yıkım metodolojisi sağlar.

Yapay mikroRNA'ların Tol2 Transpozon Aracılı Transgenik Ekspresyonu Kullanılarak Embriyonik Civciv Retinasında Fonksiyon Kaybı Yaklaşımı

Bu protokolde, E7.5'teki fare amniyotik boşluğunun lentivirüs ile nasıl enjekte edileceğini açıklıyoruz, bu da tüm sinir plakasının düzgün bir şekilde transdüksiyonuna yol açarak, hayatta kalma veya embriyonik gelişim üzerinde minimum zararlı etkiye sahiptir.

Embriyonik Gün 7.5'te In Utero Nano-Enjeksiyon (NEPTÜN) ile Murin Nöral Plaka Hedefleme

Öğrenin, tavuk embriyosunda in ovo elektroporasyon ile mikroRNA tabanlı plazmidler kullanarak gen ekspresyonunu hücre tipine özgü şekilde düşürme ve nöral tüp gelişiminde komissüral akson kılavuzluk kusurlarını değerlendirme yöntemini.

Open-kitap Hazırlıklarında Dii Enjeksiyon tarafından geliştirilmesi Nöral Tüp ve fenotipleri Değerlendirilmesinde miRNA tabanlı Plazmidler arasında ovo Elektroporasyon yılında (Video) | JoVE Journal

Open-kitap Hazırlıklarında Dii Enjeksiyon tarafından geliştirilmesi Nöral Tüp ve fenotipleri Değerlendirilmesinde miRNA tabanlı Plazmidler arasında ovo Elektroporasyon yılında

Daha fazla video keşfet