INTERCEPT Kan Sistemi kullanılarak hazırlanması ve Çift Doz Buffy Coat Trombosit Ürünleri Patojen inaktivasyon

Bu videoda, yedi adet buffy coat havuzundan çift doz trombosit konsantresi hazırlanacak ve ardından intercept ile işlenecektir. Bu videoyu izledikten sonra, patojenleri inaktive edilmiş çift doz trombosit konsantresinin nasıl üretileceği konusunda kapsamlı bir bilgiye sahip olacaksınız. İlk olarak şematik bir genel bakış sunacak, ardından uygulamalı gösterime geçeceğiz.

Bağışlanan tam kanın ilk yedi ünitesi, hacim ve hematokrit hedeflerini karşılayan yedi büffy coat ünitesi elde etmek için santrifüjlenir ve ayrıştırılır. Büffy coat'lar birbirine bağlanır, havuzlanır ve santrifüjlenir. Ardından, patojenleri ve lökositleri inaktive etmek amacıyla çift doz trombosit konsantresi üretmek için trombosit süspansiyonu, kalıntı eritrositlerden ayrıştırılır.

Çift doz trombosit konsantresi, nükleik asitleri çapraz bağlayan intercept sistemi kullanılarak işlenir. Sonuç olarak bu prosedür; pH, glukoz, laktat, PO₂ ve PCO₂ ile standart kontrollerin değerlendirilmesiyle belirlendiği üzere, yedi günlük saklama süresi boyunca kabul edilebilir in vitro kaliteye sahip iki terapötik trombosit dozu sağlar. Kan merkezinden bir teknisyen prosedürü gösterecek, biz ise işlem gerekliliklerini açıklayacağız.

Öncelikle, çift doz trombosit konsantresinin 300 ila 420 mililitre arasındaki intersept işleme spesifikasyonlarını karşıladığından emin olun. Hacim 2,5 ila 7 × 10¹¹ trombosit dozu ve mililitre başına 4 × 10⁶'dan az eritrosit olmalıdır. Bu prosedüre, 450 mililitrelik üstten alta toplama setleri ile toplanmış yedi ünite tam kan ile başlayın.

Kan ünitelerini santrifüj kaplarına yerleştirin ve üretici talimatlarına uygun olarak oda sıcaklığında, B5 fren ayarıyla 4.880 RCF'de 11 dakika boyunca yüksek hızlı santrifüj işlemi gerçekleştirin. Santrifüj sonrası kan; eritrositler, buffy coat ve plazma olmak üzere üç tabakaya ayrılacaktır. Plazmayı üst uydu torbasına, eritrositleri ise alt uydu torbasına aktararak, yaklaşık 48 ml buffy coat ve %37 hematokriti toplama kabında bırakın.

Buffy coat'ları oda sıcaklığında gece boyunca bir trombosit ajitatörüne yerleştirin; yedi buffy coat ve 300 mililitre SSP artı trombosit katkı solüsyonunu steril olarak bağlayın. Katkı solüsyonunun en üstte olduğu bir drenaj konfigürasyonunda, burada gösterildiği gibi katkı solüsyonu ile ilk buffy coat arasındaki hattı klempleyin. Buffy coat üniteleri arasındaki kaynakları açın ve bunların son buffy coat kabına boşalmasını sağlayın.

Ardından, katkı çözeltisi ile ilk buffy coat arasındaki klempi ve kaynağı açın; klempi kapatmadan önce, yaklaşık 100 mililitrelik katkı çözeltisinin yaklaşık üçte birinin her bir Buffy coat kabından sırasıyla geçerek durulama yapmasını sağlayın; yıkama işlemini, her seferinde yaklaşık 100 mililitre katkı çözeltisi kullanarak iki kez daha tekrarlayın. Havuzlanmış buffy coat kabını boş kaplardan ayırın. Katkı çözeltisi dahil toplam Buffy coat havuz hacmi yaklaşık 600 mililitre olmalıdır.

Havuzlanmış buffy coat'ları oda sıcaklığında bir saat boyunca ajitatöre yerleştirin. Ardından, entegre lökosit azaltma filtresine sahip bir trombosit saklama kabını, buffy coat havuzunu içeren torbaya bağlayın. Havuzlanmış buffy coat'ları ve trombosit saklama kabını bir santrifüje yerleştirin ve 462 RCF hızında dokuz dakika 20 saniye boyunca döndürün.

Santrifüj işleminin ardından, trombosit süspansiyonunu Luca redüksiyon filtresi aracılığıyla trombosit saklama kabına aktarın. Sonuç, 420 mililitrede yaklaşık yedi x 10¹¹ trombosit içeren ve patojen inaktivasyonu için Intercept ile patojen inaktivasyonuna tabi tutulabilen çift dozluk bir trombosit konsantresidir. Çift dozluk trombosit konsantresi; antoin kabı, aydınlatma kabı ve çift saklama kaplarından oluşan bir Intercept işlem seti kullanılarak işlenir.

Trombosit süspansiyon kabını, intercept işlem setindeki amin kabına bağlayın. Ardından trombositleri asın. Çözeltinin aydınlatma kabına akmasını sağlamak için amin kabındaki alt kanülü kırın.

Ardından, trombositlerin Amin kabından aydınlatma kabına akmasını sağlamak için Amin kabındaki üst kanülü kırın. Trombosit ve am tosin karışımını nazikçe karıştırın. Aydınlatma kabındaki havayı dışarı atmak için kabı hafifçe sıkın.

Aydınlatma ve amato ile kap arasındaki tüpü, aydınlatma kabından dışarıya dört santimetreden fazla tüp uzanmayacak şekilde mühürleyin. Boş kapları çıkarıp atın. İşleme setini, aydınlatma kabı soldaki büyük bölmede ve düzenleyici sağ taraftaki daha küçük bölmede olacak şekilde aydınlatıcıya yerleştirin.

Bağış kimliğini tarayın. Ürün kodu ve işlem. Lot numarasını aydınlatıcıya girin.

Metal kapağı ve çekmeceyi kapatın. Aydınlatmayı başlatmak için start düğmesine basın. Aydınlatıcı, aydınlatma kabındaki trombosit amin karışımına kontrollü bir UVA ışığı dozu sağlar.

Amin, trombosit ünitesinde bulunabilecek patojenlerin nükleik asit baz çiftleri arasına yerleşir. Aydınlatma üzerine, DNA veya RNA'yı birbirine kilitleyen kalıcı çapraz bağlar oluşur; böylece patojenler artık replike olamaz ve kan ürünü alan kişide hastalığa yol açamaz. Aydınlatma işleminden sonra, işlem setini çıkarın.

Ardından, kapları düzenleyiciden çıkarın, trombositleri ve işlem setini asın. Işıklandırma kabının çıkışındaki kanülü kırın ve trombositlerin CAD kabına akmasını sağlayın. CAD kabının içinde, kan ürünündeki kalıntı amin seviyelerini azaltan, immobilize makrogözenekli polistiren boncuklar içeren bir wafer bulunmaktadır.

CAD gofretini bükmemeye dikkat edin. CAD kabındaki havayı aydınlatma kabına aktarın. CAD kabının giriş portunun yakınındaki tüpleri mühürleyin.

Boş aydınlatma kabını çıkarıp atın. Ekli saklama kaplarıyla birlikte CAD kabını altı saat ile 16 saat boyunca bir trombosit karıştırıcıya yerleştirin. Bu işlem, kalıntı amlin konsantrasyonunun iki micromolar veya altına düşmesini sağlayacaktır.

CAD işlemi tamamlandıktan sonra, trombosit ünitelerini ajitatörden çıkarın, trombositleri asın, CAD kabının çıkışındaki kanülü kırın ve trombositlerin iki depolama kabına akmasını sağlayın. Ardından, depolama kaplarındaki havayı tahliye edin. Y bağlantısının üzerindeki tüpü mühürleyin ve CAD kabını çıkarın.

Sonuçta, in vitro trombosit fonksiyonunu değerlendirmek için patojenlerden arındırılmış iki trombosit konsantresi elde edilmiştir. İnterseptin trombosit dozu, pH, PO₂ , iki PC O₂ laktat üretimi ve glikoz tüketimi belirlenmiştir. Trombosit konsantreleri, yedinci depolama gününe kadar takip edilmiştir.

Bu şekil, intersept tedavisi öncesindeki çift doz trombosit konsantrasyonunun ortalama başlangıç trombosit dozunu ve tedavi edilmiş bölünmüş ürünlerin her birindeki ortalama trombosit dozunu saklama süresinin yedinci gününe kadar göstermektedir. Burada görülebileceği üzere, saklama sırasındaki trombosit kaybı yaklaşık %9 olmuştur. Bu azalma, konvansiyonel trombositlerin saklanması sırasında beklenen trombosit kaybından farklı değildir. Avrupa gereklilikleri uyarınca, trombositlerin pH değeri raf ömrünün sonuna kadar 6.4'ün üzerinde kalmalıdır.

İşlem sırasında, trombosit konsantrelerinin pH değeri, trombosit konsantrasyon hacmine ve trombosit saklama kabının gaz geçirgenliğine bağlı olarak hafifçe düşer. Bu şekil, ayrıştırılmış trombosit ürünlerinin yedi günlük saklama süresi boyunca pH değerlerini göstermektedir; saklama sırasında pH stabil kalmakta ve işlem gereklilikleri dahilinde iyi bir şekilde korunmaktadır. Saklanan trombositlerde aerobik metabolizmanın devam etmesi beklenir ve bu durum, trombositlerin bir hastaya transfüzyon yapıldıktan sonra in vivo işlev görme yeteneğinin bir göstergesidir.

Trombositlerin O2 tüketimi ve CO2 üretimi, PL 24 10 kabındaki intersept trombositlerin yedi günlük saklama süresi boyunca solunuma devam ettiğini göstermektedir. Benzer şekilde, saklanan trombositlerde anaerobik metabolizma da devam etmelidir. Bu nedenle, glukoz tüketimi ve laktat üretimi de trombositlerin transfüzyon sonrası fonksiyon görme yeteneklerinin göstergeleridir.

Bu iki şekil, yedi günlük saklama süresi boyunca laktat ve glukoz seviyelerini göstermektedir. Trombosit glukoz tüketimi ve laktat üretimi birbiriyle tutarlıdır. Yedi günlük saklama süresi boyunca, beş ünitenin glukoz seviyeleri, glukoz analizinin alt sınırı olan litre başına 1.11 milimolün altındaydı.

Buffy coat hazırlama ve havuzlama doğrulaması; hacim, trombosit sayısı, plazma oranı ve eritrosit kontaminasyonu gibi intersept tedavisi giriş kriterlerini karşılayan trombosit konsantreleri üretmiştir. Nihai üniteler, trombosit dozu ve pH dahil olmak üzere yedi günlük saklama süresince doğrulama kriterlerini karşılamaktadır. Tek dozluk trombosit konsantresi üreten geleneksel buffy coat hazırlama yöntemine kıyasla bu tekniğin temel avantajı; kan alımlarından bileşen verimini maksimize etmesi, çift doz tekniği kullanarak işletme giderlerini azaltması ve transfüzyonla bulaşan patojenleri inaktive ederek hasta güvenliğini artırmasıdır.