Name: Zebra balığı larvalarının Microgavage (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 53 s
Description: Öğrenin, Danio rerio larvalarına maddeleri oral yoldan vermek için mikrogavaj tekniğini. Bu yöntem, bağırsak lümenine kontrollü dozajda madde iletimi sağlayarak gelişim biyolojisi ve nörobilim araştırmalarında kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

İçerikle ilgili faydalı önerileri için Rawls laboratuvarı üyelerine, sıkı bağlantı boyut geçirgenliği ve bozulma yöntemleri üzerine değerli tartışmaları için Dr. Alan Fanning'e teşekkür ederiz. Ayrıca, konfokal mikroskop desteği için Michael Hooker Mikroskopi Tesisi'nden Dr. Michael Chua ve Dr. Neal Kramarcy'ye teşekkür ederiz. Bu çalışma, National Institutes of Health grantleri T32 DK007737-15 (J.L.C. eğitim gören), F32 DK094592 (J.L.C.'ye) ve R01 DK081426 (J.F.R.'ye) tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>Kuhlman, J., Eisen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+screen+for+mutations+affecting+development+and+function+of+the+enteric+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Genetic screen for mutations affecting development and function of the enteric nervous system.</a> Dev. Dyn. 236, 118-127 (2007).</li>
<li>Pack, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+affecting+development+of+zebrafish+digestive+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mutations affecting development of zebrafish digestive organs.</a> Development. 123, 321-328 (1996).</li>
<li>Wallace, K. N., Pack, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+and+conserved+aspects+of+gut+development+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Unique and conserved aspects of gut development in zebrafish.</a> Dev. Biol. 255, 12-29 (2003).</li>
<li>Wallace, K. N., Akhter, S., Smith, E. M., Lorent, K., Pack, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+growth+and+differentiation+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Mech.+Dev%22%5BJournal%5D)">Intestinal growth and differentiation in zebrafish.</a> Mech. Dev. 122, 157-173 (2005).</li>
<li>Ng, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+the+digestive+system+in+zebrafish%3A+III.+Intestinal+epithelium+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Formation of the digestive system in zebrafish: III. Intestinal epithelium morphogenesis.</a> Dev. Biol. 286, 114-135 (2005).</li>
<li>Hama, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+zebrafish+digestive+organ+function+using+multiple+quenched+fluorescent+reporters%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of zebrafish digestive organ function using multiple quenched fluorescent reporters.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 296, 445-453 (2009).</li>
<li>Carten, J. D., Bradford, M. K., Farber, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+digestive+organ+morphology+and+function+using+differential+fatty+acid+metabolism+in+live+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Visualizing digestive organ morphology and function using differential fatty acid metabolism in live zebrafish.</a> Dev. Biol. 360, 276-285 (2011).</li>
<li>Rich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+high-content+model+system+for+studies+of+gastrointestinal+transit%3A+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterol+Motil%22%5BJournal%5D)">A new high-content model system for studies of gastrointestinal transit: the zebrafish.</a> Neurogastroenterol Motil. 21, 225-228 (2009).</li>
<li>Bagnat, M., Cheung, I. D., Mostov, K. E., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+control+of+single+lumen+formation+in+the+zebrafish+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Genetic control of single lumen formation in the zebrafish gut.</a> Nat. Cell Biol. 9, 954-960 (2007).</li>
<li>Bagnat, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cse1l+is+a+negative+regulator+of+CFTR-dependent+fluid+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cse1l is a negative regulator of CFTR-dependent fluid secretion.</a> Curr. Biol. 20, 1840-1845 (2010).</li>
<li>Shepherd, I., Eisen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+zebrafish+enteric+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of the zebrafish enteric nervous system.</a> Methods Cell Biol. 101, 143-160 (2011).</li>
<li>Brugman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxazolone-induced+enterocolitis+in+zebrafish+depends+on+the+composition+of+the+intestinal+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Oxazolone-induced enterocolitis in zebrafish depends on the composition of the intestinal microbiota.</a> Gastroenterology. 137, 1757-1767 (2009).</li>
<li>Oehlers, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inflammatory+bowel+disease+%28IBD%29+susceptibility+genes+NOD1+and+NOD2+have+conserved+anti-bacterial+roles+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">The inflammatory bowel disease (IBD) susceptibility genes NOD1 and NOD2 have conserved anti-bacterial roles in zebrafish.</a> Dis. Model Mech. 4, 832-841 (2011).</li>
<li>Oehlers, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chemical+enterocolitis+model+in+zebrafish+larvae+that+is+dependent+on+microbiota+and+responsive+to+pharmacological+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">A chemical enterocolitis model in zebrafish larvae that is dependent on microbiota and responsive to pharmacological agents.</a> Dev Dyn. 240, 288-298 (2011).</li>
<li>Faro, A., Boj, S. F., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fishing+for+intestinal+cancer+models%3A+unraveling+gastrointestinal+homeostasis+and+tumorigenesis+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Fishing for intestinal cancer models: unraveling gastrointestinal homeostasis and tumorigenesis in zebrafish.</a> Zebrafish. 6, 361-376 (2009).</li>
<li>Fleming, A., Jankowski, J., Goldsmith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+analysis+of+gut+function+and+disease+changes+in+a+zebrafish+larvae+model+of+inflammatory+bowel+disease%3A+a+feasibility+study%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm.+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">In vivo analysis of gut function and disease changes in a zebrafish larvae model of inflammatory bowel disease: a feasibility study.</a> Inflamm. Bowel Dis. 16, 1162-1172 (2010).</li>
<li>Kanther, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+colonization+induces+dynamic+temporal+and+spatial+patterns+of+NF-kappaB+activation+in+the+zebrafish+digestive+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Microbial colonization induces dynamic temporal and spatial patterns of NF-kappaB activation in the zebrafish digestive tract.</a> Gastroenterology. , (2011).</li>
<li>Rawls, J. F., Samuel, B. S., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gnotobiotic+zebrafish+reveal+evolutionarily+conserved+responses+to+the+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Gnotobiotic zebrafish reveal evolutionarily conserved responses to the gut microbiota.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 4596-4601 (2004).</li>
<li>Rawls, J. F., Mahowald, M. A., Goodman, A. L., Trent, C. M., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+and+genetic+analysis+link+bacterial+motility+and+symbiosis+in+the+zebrafish+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging and genetic analysis link bacterial motility and symbiosis in the zebrafish gut.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104, 7622-7627 (2007).</li>
<li>Kanther, M., Rawls, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-microbe+interactions+in+the+developing+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Host-microbe interactions in the developing zebrafish.</a> Curr. Opin. Immunol. 22, 10-19 (2010).</li>
<li>Bates, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+signals+from+the+microbiota+promote+different+aspects+of+zebrafish+gut+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Distinct signals from the microbiota promote different aspects of zebrafish gut differentiation.</a> Dev. Biol. 297, 374-386 (2006).</li>
<li>Cheesman, S. E., Guillemin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((We+know+you+are+in+there%3A+conversing+with+the+indigenous+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Microbiol%22%5BJournal%5D)">We know you are in there: conversing with the indigenous gut microbiota.</a> Res Microbiol. 158, 2-9 (2007).</li>
<li>Bates, J. M., Akerlund, J., Mittge, E., Guillemin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+alkaline+phosphatase+detoxifies+lipopolysaccharide+and+prevents+inflammation+in+zebrafish+in+response+to+the+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Intestinal alkaline phosphatase detoxifies lipopolysaccharide and prevents inflammation in zebrafish in response to the gut microbiota.</a> Cell Host Microbe. 2, 371-382 (2007).</li>
<li>Camp, J. G., Jazwa, A. L., Trent, C. M., Rawls, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intronic+cis-regulatory+modules+mediate+tissue-specific+and+microbial+control+of+angptl4%2Ffiaf+transcription%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Intronic cis-regulatory modules mediate tissue-specific and microbial control of angptl4/fiaf transcription.</a> PLoS Genetics. , In Press (2012).</li>
<li>Cheesman, S. E., Neal, J. T., Mittge, E., Seredick, B. M., Guillemin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cell+proliferation+in+the+developing+zebrafish+intestine+is+regulated+by+the+Wnt+pathway+and+microbial+signaling+via+Myd88%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Epithelial cell proliferation in the developing zebrafish intestine is regulated by the Wnt pathway and microbial signaling via Myd88.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 4570-4577 (2011).</li>
<li>Field, H. A., Kelley, K. A., Martell, L., Goldstein, A. M., Serluca, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+gastrointestinal+physiology+using+a+novel+intestinal+transit+assay+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterol.+Motil%22%5BJournal%5D)">Analysis of gastrointestinal physiology using a novel intestinal transit assay in zebrafish.</a> Neurogastroenterol. Motil. 21, 304-312 (2009).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book%22">The Zebrafish Book</a>. , 4 edn, University of Oregon Press. (2000).</li>
<li>Pham, L. N., Kanther, M., Semova, I., Rawls, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+generating+and+colonizing+gnotobiotic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Methods for generating and colonizing gnotobiotic zebrafish.</a> Nat. Protoc. 3, 1862-1875 (2008).</li>
<li>Shen, L., Weber, C. R., Raleigh, D. R., Yu, D., Turner, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tight+junction+pore+and+leak+pathways%3A+a+dynamic+duo%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Tight junction pore and leak pathways: a dynamic duo.</a> Annu. Rev. Physiol. 73, 283-309 (2011).</li>
<li>Van Itallie, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+density+of+small+tight+junction+pores+varies+among+cell+types+and+is+increased+by+expression+of+claudin-2%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Sci%22%5BJournal%5D)">The density of small tight junction pores varies among cell types and is increased by expression of claudin-2.</a> J. Cell. Sci. 121, 298-305 (2008).</li>
<li>Van Itallie, C. M., Anderson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+size-dependent+permeability+of+the+tight+junction+using+PEG+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Measuring size-dependent permeability of the tight junction using PEG profiling.</a> Methods Mol. Biol. 762, 1-11 (2011).</li>
<li>Watson, C. J., Rowland, M., Warhurst, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+modeling+of+tight+junctions+in+intestinal+cell+monolayers+using+polyethylene+glycol+oligomers%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Functional modeling of tight junctions in intestinal cell monolayers using polyethylene glycol oligomers.</a> Am. J. Physiol. Cell Physiol. 281, 388-397 (2001).</li>
<li>Rodgers, L. S., Fanning, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+epithelial+permeability+by+the+actin+cytoskeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Cytoskeleton+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Regulation of epithelial permeability by the actin cytoskeleton.</a> Cytoskeleton (Hoboken). 68, 653-660 (2011).</li>
<li>Gonzalez-Mariscal, L., Chavez de Ramirez, B., Cereijido, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tight+junction+formation+in+cultured+epithelial+cells+%28MDCK%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Membr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Tight junction formation in cultured epithelial cells (MDCK).</a> J. Membr. Biol. 86, 113-125 (1985).</li>
<li>Palant, C. E., Duffey, M. E., Mookerjee, B. K., Ho, S., Bentzel, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ca2%2B+regulation+of+tight-junction+permeability+and+structure+in+Necturus+gallbladder%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Ca2+ regulation of tight-junction permeability and structure in Necturus gallbladder.</a> Am. J. Physiol. 245, C203-C212 (1983).</li>
<li>Holmberg, A., Schwerte, T., Pelster, B., Holmgren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ontogeny+of+the+gut+motility+control+system+in+zebrafish+Danio+rerio+embryos+and+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Ontogeny of the gut motility control system in zebrafish Danio rerio embryos and larvae.</a> J. Exp. Biol. 207, 4085-4094 (2004).</li>
<li>Rich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kit-like+immunoreactivity+in+the+zebrafish+gastrointestinal+tract+reveals+putative%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Kit-like immunoreactivity in the zebrafish gastrointestinal tract reveals putative.</a> 236, 903-911 (2007).</li>
<li>Holmberg, A., Olsson, C., Hennig, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TTX-sensitive+and+TTX-insensitive+control+of+spontaneous+gut+motility+in+the+developing+zebrafish+%28Danio+rerio%29+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">TTX-sensitive and TTX-insensitive control of spontaneous gut motility in the developing zebrafish (Danio rerio) larvae.</a> J. Exp. Biol. 210, 1084-1091 (2007).</li>
<li>Hennig, G. W., Costa, M., Chen, B. N., Brookes, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+peristalsis+in+the+guinea-pig+small+intestine+using+spatio-temporal+maps%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of peristalsis in the guinea-pig small intestine using spatio-temporal maps.</a> J. Physiol. 517 (Pt 2), 575-590 (1999).</li>
<li>Flynn, E. J. 3rd, Trent, C. M., Rawls, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ontogeny+and+nutritional+control+of+adipogenesis+in+zebrafish+%28Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Ontogeny and nutritional control of adipogenesis in zebrafish (Danio rerio.</a> J. Lipid Res. 50, 1641-1652 (2009).</li>
<li>Clifton, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+novel+inhibitors+of+dietary+lipid+absorption+using+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Identification of novel inhibitors of dietary lipid absorption using zebrafish.</a> PLoS One. 5, e12386(2010).</li>
<li>Jin, S. W., Beis, D., Mitchell, T., Chen, J. N., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+molecular+analyses+of+vascular+tube+and+lumen+formation+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Cellular and molecular analyses of vascular tube and lumen formation in zebrafish.</a> Development. 132, 5199-5209 (2005).</li>
<li>Berghmans, S., Hunt, J., Roach, A., Goldsmith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+offer+the+potential+for+a+primary+screen+to+identify+a+wide+variety+of+potential+anticonvulsants%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsy+Res%22%5BJournal%5D)">Zebrafish offer the potential for a primary screen to identify a wide variety of potential anticonvulsants.</a> Epilepsy Res. 75, 18-28 (2007).</li>
</ol>

Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmemiştir.

Bu çalışmada, mikro-gavaj yoluyla zebra balığı larvaları bağırsaklarına materyallerin doğrudan iletimi için yeni bir protokol tanımlıyoruz. Prosedür boyunca göz önünde bulundurulması gereken birkaç kritik adım vardır. İlk olarak, tedaviyle ilgisiz ölümleri önlemek için zebra balığı larvaları gavaj deneyinden önce sağlıklı durumda olmalıdır. Bir diğer önemli faktör ise gavaj iğnesinin kalitesidir. Protokolün en zor kısımlarından biri, keskin ve pürüzlü kenarlar oluşturmadan iğneyi uygun yerden kesmektir. Daha tutarlı bir ...

<table><tbody><tr><td>Finquel (Tricaine methanesulfonate)</td><td>Argent Chemical Laboratories</td><td>MS-222</td><td>Larva anestezisi</td></tr><tr><td>Fenol Kırmızısı Çözeltisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0290-100 ml</td><td>DPBS içinde %0.5, hücre kültürü testli</td></tr><tr><td>Mineral yağı, hafif, beyaz (yüksek saflıkta)</td><td>Amresco</td><td>J217-500 ml</td><td>İğne geri dolumu ve hacim testi için</td></tr><tr><td>TxRed-Dextran, 10,000 MW, lizine fikslenebilir</td><td>Invitrogen/ Molecular Probes</td><td>D-1863</td><td>1x PBS/fenol kırmızısı içinde %1 süspansiyon</td></tr><tr><td>FM4-64FX</td><td>Invitrogen/ Molecular Probes</td><td>F34653</td><td>Su içinde 5 mM stok</td></tr><tr><td>Metilselüloz</td><td>MP Biochemicals</td><td>0215549590</td><td></td></tr><tr><td>Borosilikat cam kılcal tüpler</td><td>Drummond Scientific</td><td>3-000-203-G/X</td><td>OD 1.14 mm, ID 0.53 mm, 3.5 inç uzunluk</td></tr><tr><td>Kalıp yapımı için plastik form</td><td>Adaptive Science Tools</td><td>TU-1</td><td></td></tr><tr><td>Nanoject II mikroenjeksiyon ünitesi</td><td>Drummond Scientific</td><td>3-000-204</td><td></td></tr><tr><td>Flaming Brown Mikropipet Çekici, 3.0 mm geniş oluklu filament</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>P-97, FT330B</td><td>İğne üretimi</td></tr><tr><td>Öğrenci tipi Dumont #5 pens</td><td>Fine Science Tools</td><td>91150-20</td><td>0.1 x 0.06 mm, iğne kesimi</td></tr><tr><td>Oküler Retikülü, 5 mm - 100 bölme</td><td>Leica</td><td>10394771</td><td>İğne kesimi</td></tr><tr><td>Mikroforj</td><td>Narishige</td><td>MF-900</td><td>İğne kesimi ve ateşle cilalama</td></tr><tr><td>Tüberkülin SlipTip şırınga iğnesi</td><td>Becton Dickinson</td><td>309626</td><td>1 ml, 25G 5/8-iğne</td></tr><tr><td>Fluoresbrite YG Mikroküreler (2.0 &amp;mu;m)</td><td>Polysciences, Inc.</td><td>18338</td><td>Bağırsak motilite analizi</td></tr><tr><td>Diseksiyon Mikroskobu</td><td>Leica</td><td>S6E</td><td>Gavage işlemi</td></tr><tr><td>Floresan Stereomikroskop</td><td>Leica</td><td>M205C</td><td>Dekstran bariyer testi</td></tr><tr><td>Konfokal mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>LSM510</td><td>Sirkülasyondaki dekstranın görüntülenmesi</td></tr></tbody></table>

zebra balığı larvalarının microgavage

Microgavage of Zebrafish Larvae

Zebra balığı; bağırsak gelişimi1-5, fizyolojisi6-11, hastalıkları12-16 ve konak-mikrop etkileşimlerinin17-25 incelenmesi için güçlü bir model organizma olarak ortaya çıkmıştır. Bağırsak biyolojisini incelemeye yönelik deneysel yaklaşımlar genellikle seçilen materyallerin bağırsak lümenine in vivo olarak verilmesini gerektirir. Larva zebra balığı modelinde bu işlem tipik olarak balıkların seçilen materyalin bir çözeltisine daldırılmasıyla veya abdominal duvar üzerinden enjeksiyonla gerçekleştirilir. Daldırma yöntemi kullanıldığında, materyalin bağırsağa iletilme yolu veya zamanlamasını doğru şekilde izlemek veya kontrol etmek zordur. Bu nedenle, daldırma yoluyla maruz bırakma; bağırsak dışı dokularda istenmeyen toksisiteye ve diğer etkilere neden olarak bağırsağa iletilebilecek materyal miktarlarının potansiyel aralığını kısıtlayabilir. Ayrıca, daldırma yoluyla maruz kalma sırasında alınan materyal miktarı, bireysel larvalar arasında önemli ölçüde farklılık gösterebilir26. Abdominal duvar üzerinden yapılan doğrudan enjeksiyonlarda bu sorunlarla karşılaşılmasa da, uygun enjeksiyon yapmak zordur ve deneysel sonuçları etkileyebilecek doku hasarına yol açar. Zebra balığı larvaları için bir mikrogavage yöntemi sunuyoruz. Bu yöntemin amacı, larva zebra balıklarında materyallerin ön bağırsak lümenine kontrollü zamanlamayla doğrudan iletilmesi için güvenli, etkili ve tutarlı bir yol sağlamaktır. Mikrogavage; zebra balığı araştırmaları yapan çoğu laboratuvarda bulunan standart embriyo mikroenjeksiyon ve stereomikroskopi ekipmanlarını kullanır. Balıklar metilselüloz içerisinde uygun şekilde konumlandırıldıktan sonra, gavage işlemi dakikada yaklaşık 7-10 balık hızında hızlıca gerçekleştirilebilir ve gavage sonrası sağkalım oranı, verilen materyale bağlı olarak %100'e yaklaşır. Ayrıca mikrogavage'ın, daldırma yoluyla maruz bırakıldığında balıklar için öldürücü olan yüksek konsantrasyonlardaki materyallerle bağırsak lümeninin doldurulmasına olanak tanıdığını gösteriyoruz. Bu yöntemin kullanışlılığını kanıtlamak için, bağırsak lümeninden bağırsak dışı boşluklara geçişi nicelendirmek için kullanılabilecek bir floresan dekstran mikrogavage testi sunuyoruz. Bu test, mikrogavage prosedürünün doğru uygulandığını doğrulamak için kullanılabileceği gibi, farklı deneysel koşullar altında (örneğin genetik manipülasyon, ilaç tedavisi veya çevresel faktörlere maruz kalma) bağırsak epitel bariyer bütünlüğünü incelemek için yeni bir zebra balığı testi sağlar. Ayrıca, floresan mikroküreler verilerek ve bunların sonraki geçişleri izlenerek, gavage yönteminin bağırsak motilitesini değerlendirmek için nasıl kullanılabileceğini gösteriyoruz. Mikrogavage; canlı mikroorganizmalar, salgılanan mikrobiyal faktörler/toksinler, farmakolojik ajanlar ve fizyolojik problar gibi çeşitli materyallerin iletilmesi için uygulanabilir. Bu yeteneklerle, larva zebra balığı mikrogavage yöntemi, zebra balığı model sistemini kullanan geniş bir araştırma alanını geliştirme potansiyeline sahiptir.

Gavage işlemi uygun şekilde gerçekleştirildiğinde, iletilen materyalin tamamı ön bağırsağın içinde yer almalı ve özofagusta çok az veya hiç kalıntı materyal bulunmamalıdır (Şekil 3). Ön bulb tarafından karşılanabilecek ve kloaka veya özofagus yoluyla dışarı sızmayacak bir iletim hacmi seçilmelidir. Materyal hacmi veya iletim basıncı çok yüksek olursa, gavajın fiziksel kuvveti epitelde hasara veya sızıntıya yol açabilir. Ayrıca, lokal biyokimyasal ortamı değiştirerek sonuçları potansiyel olarak bozabilece...

Standart embriyo mikroenjeksiyonu ve stereomikroskopi ekipmanları kullanılarak, zebrafish larvalarının mikrogavage işlemi için yeni bir yöntem sunuyoruz. Mikrogavage işleminin, çeşitli materyallerin kontrollü miktarlarda özellikle zebrafish larvalarının intestinal lümenine iletilmesi için kullanışlı, güvenli ve etkili bir teknik olduğunu gösteriyoruz.

Zebra balığı larvalarının Microgavage

Zebrafish; intestinal gelişim1-5, fizyoloji6-11, hastalık12-16 ve konak-mikrop ... çalışmalarında güçlü bir model organizma olarak ortaya çıkmıştır.

Bu prosedürün genel amacı, zebrafish larvalarının intestinal lümenine oral yolla materyal uygulamaktır. İlk olarak, larvalar anestezi altına alınır ve metil selüloz ile kaplanmış bir enjeksiyon kalıbına yerleştirilir. Ardından, larvalar nazikçe kalıba daldırılır ve gavage iğnesi ile mikro manipülatörün açısına göre hizalanır.Ardından iğne larvanın ağzına yerleştirilir ve bağırsak bulbuna doğru yönlendirilir. Yerleştiğinde, materyal lümene bırakılır. Son adım, larvanın metil selülozdan çıkarılması ve anesteziden kurtulması için taze besiyerine yerleştirilmesidir.Nihayetinde bu yöntem, bağırsak içindeki veya bağırsak dışı dokulardaki taşıma süreçlerinin incelenebildiği zebrafish larvalarının bağırsak lümenine spesifik olarak materyal iletmek için kullanılabilir. Bu tekniğin, ilgili materyali içeren suya daldırma gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, hayvana iletilen materyal miktarının yanı zamanda zamanlamanın ve dozajın kesin bir şekilde kontrol edilebilmesidir. Bu durum, deneysel değişkenliği ve bazı durumlarda belirli materyallerle ilişkili toksisiteyi azaltır.Bu yöntemle ilgili ilk fikrimiz, belirli floresan probları, mikroskopi ile intestinal epitelyumda tespit edilebilec

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video morfolino veya mRNA sonraki gelişimi sırasında spesifik gen ürünlerinin seviyesini azaltmak veya artırmak için tek hücreli aşamada zebrafish embriyoların nasıl enjekte edilebilir gösterir.

Gen Fonksiyon Analiz Zebra balığı Embriyolar Mikroenjeksiyon

Kaynak: Li, J. ve diğerleri.  Clostridioides difficile için larva zebrafish enfeksiyonu modelinin geliştirilmesi. J. Vis. Exp. (2020).Bu video, anestezi edilmiş zebrafish larvasının agarozda immobilize edilip izleyici yönlendirmeli iğne kullanılarak patojenik bir bakteriyle oral enjekte edildiği mikrogavaj prosedürünü gösteriyor. İnvaziv olmayan teslimat, doğal enfeksiyonu taklit eder ve bakteriyel çoğalması, toksin salınımı ve bağırsak epitel hasarının analizini mümkün kılar.

Mikrogavaj kullanarak Zebrafish larva enfeksiyonu modelinin geliştirilmesi

Bir hayvan modeli olarak zebrabalıkları artan kullanımı bileşikler ve çözeltiler bilinen miktarlarda teslimat için etkili yöntemlerin geliştirilmesini gerektirmektedir. Aşağıda açıklanan sonda prosedür yetişkin zebrafish için güvenli ve verimli bir şekilde, güvenilir bir çözüm hassas hacimleri sözlü teslimat için izin verir.

Yetişkin Zebra balığı Gavaging

Zebra balığı, genetik ve gelişimsel çalışmalar için mükemmel bir model sistemdir. Boncuk implantasyonu, lokal hücresel ortamlarda değişiklikler yaparak gelişimsel mekanizmaları sorgulamak için kullanılabilecek değerli bir doku manipülasyon tekniğidir. Bu protokol, zebra balığı embriyosunda mikroboncuk implantasyonunun nasıl gerçekleştirileceğini açıklar.

Zebra balığı Embriyo microbead İmplantasyonu

Tek tek hücrelerde yönlendirilmiş strese veya ölüme neden olacak hedefli manipülasyonların gerçekleştirilmesi nispeten zor olmuştur. Burada, hücre kültüründe ve canlı hayvanlarda tek tek hücreleri seçici olarak strese sokmak ve öldürmek için tek hücre çözünürlüklü bir ablasyon yaklaşımı, standart bir konfokal UV lazere dayalı olarak açıklanmaktadır.

Konvansiyonel UV Lazer konfokal mikroskopi kullanılarak Tetikleme Hücre Stres ve Ölüm

Burada, Zebra balığı seks farklılaşması ve bakım soruşturmaları kolaylaştıracaktır larva zebrabalıkları, gonadal doku izole etmek için bir protokol mevcut.

Larva Zebra balığı Gonadal Doku Diseksiyon

Lazer ablasyon biyolojik sistemlerde rejenerasyon eğitimi için yaygın olarak uygulanan bir teknolojidir. Sunulan protokol, lazer ablasyon için standart bir lazer tarama konfokal mikroskobu ve zebrabalığı lateral hattında ki internöromast hücrelerinin yenilenmesinin daha sonra zaman atlamalı görüntülemesini açıklar.

Zebrabalığı İnternöromast Hücrelerinde Konfokal Mikroskop Tabanlı Lazer Ablasyon ve Rejenerasyon Tonu

Optik berraklık, zebra balıklarında hücre biyolojik ve fizyolojik çalışmaları için önemli bir avantajdır. Bireysel hayvanlarda hücre büyümesinin ölçülmesi için sağlam yöntemler, iskelet kasının ve komşu dokuların büyümesinin tüm vücut büyümesiyle nasıl bütünleştiğine dair yeni bilgiler sağlayan tanımlanmıştır.

Değiştirilmiş elektriksel aktiviteye maruz kalan bireysel canlı zebra balıklarında iskelet kası büyümesinin gerçek zamanlı ve tekrarlanan ölçümü

Bu protokol, ortaya çıkan nöroinflamatuar yanıtı ve nörotoksisiteyi incelemek için bir zebra balığı larva modelinde beyin ventriküler bölgesine lipopolisakkaritin mikroenjeksiyonunu göstermektedir.

Nöroinflamasyon ve Nörotoksisiteyi Değerlendirmek için Larva Zebra Balıklarına Lipopolisakkaritin Beyin Ventriküler Mikroenjeksiyonları

Gelişmekte olan zebra balığı optik tektumunda mikroglia hücrelerinin canlı görüntülemesini gerçekleştirmek için hızlı taramalı konfokal mikroskopiden yararlanan ve bu hücrelerin dinamiklerinin in vivo analizine olanak tanıyan bir yöntem gösteriyoruz.

Zebra Balığı Embriyosunda Mikroglia Dinamiğinin Canlı Görüntülenmesi ve Karakterizasyonu

Bu protokol, zebra balığı larvalarında döllenmeden 3-7 gün sonra bir ilaç tarama prosedürünü ve ardından morfolojik değerlendirmeyi tanımlar.

Erken Evre Zebra Balığı Larvalarında Küçük Molekül Taraması ve Toksisite Testi

Öğrenin, Danio rerio larvalarına maddeleri oral yoldan vermek için mikrogavaj tekniğini. Bu yöntem, bağırsak lümenine kontrollü dozajda madde iletimi sağlayarak gelişim biyolojisi ve nörobilim araştırmalarında kullanılır.

Zebra balığı larvalarının Microgavage

Daha fazla video keşfet