Name: C. elegans Kemotaksis Deneyi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 28 s
Description: Keşfedin Caenorhabditis elegans kemotaksis deneyi ile davranışsal biyolojide nicel analiz yapma yöntemini. Bu basit ve ekonomik teknik, solucanların kimyasal uyaranlara yanıtını ölçerek nörobilim araştırmalarında güvenilir veri sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz Yaşam Bilimleri ve bu iş için fon Kraliçe&#39;nin Üniversitesi Sanat ve Bilim Fakültesi teşekkür ederim. Yanı sıra, biz gerekli çözeltiler, ekipman ve teknik destek sağlamak için Chin-Sang laboratuvar teşekkür ederim. Ayrıca tartışmaya katkılarından dolayı O, özellikle Tony, QGEM 2.011 teşekkür ederim.

1. Worms hazırlanması / yıkama <ol><li> Genç erişkin 11 solucanlar senkronize. </li><li> Bir 5 cm Kemotaksis plaka üzerine S Bazal Pipet 2 ml sadece OP50 E. çim temizlendiğini solucanlar düzenledi coli. Solucanlar tampona plaka yüzeyinden yıkanır sağlamak için gerektiği gibi plaka yatırın. </li><li> Bir mikrosantrifüj tüp içine solucan-S Bazal çözüm pipet 1 ml. </li><li> 10 sn 6.600 rpm bir picofuge kullanmak için santrifüj. </li><li> Rahatsız solucanlar pelet bırakarak, S Bazal aspire. </li><li> Solucanlar yıkamak için birkaç kez ters, mikrosantrifüj tüpüne 1 ml S Bazal çözüm ekleyin. </li><li> Adımları 1,4-1,6 başka üç kez tekrarlayın. </li><li> 10 saniye, beşinci kez, yaklaşık bir nihai hacme süpernatan aspire bu süre santrifüjleyin. 100 ul. </li><li> Her 2 ul örnek 50 ila 250 solucanlar olmadığından emin olmak için bir NGM plaka üzerine solucanlar Pipet 2 ul. AyarlamakG Bazal daha küçük ya da daha büyük hacimde solucanlar yeniden süspansiyona tabi olarak, S Bazal solucanlar konsantrasyonu. </li><li> Hemen 1 saat için solucan yıkandıktan sonra tahlilinde solucanlar kullanın. </li></ol> 2. Test Tabaklar hazırlanması <ol><li> 5 cm plakanın alt işaretleme, 4 eşit parçaya bölünür çanak bölmek. Kemotaksis NGM agar veya kullanılabilir. 3 çalışmaların en az test edilen genetik gerginlik başına gerekmektedir. </li><li> Kökeni etrafında yarıçapı 0.5 cm (Şekil 1) bir daire işaretleyin. </li><li> &quot;Test&quot; veya siteleri kökeni ve birbirinden eşit uzaklıkta olmasını sağlamak için bir &quot;C&quot; &quot;Kontrol,&quot; için ya bir &quot;T&quot; ile her kadranda bir nokta işaretleyin. Noktaları en az 2 cm uzakta kökenli olmalıdır. Testi kadran ve sağ üst ve kontrol grubu olarak sol alt kadran (Şekil 1) olarak sol üst ve sağ alt kadran işaretleyin. </li></ol> 3. Testi Koşu </p&gt; <ol><li> Test bileşiği ve 0.5 M azit (bir anestezik bir kadran erişme üzerine solucanlar tutmak için kullanılan), eşit hacimlerde birleştirerek test çözeltisi karıştırın. 0.5 M azid ile, test bileşiğinin seyreltmek için kullanılan çözücü ile birleştirilmesi ile kontrol solüsyonu karıştırın. </li><li> Kalkış üzerine pelet solucan çözeltisi (1.8 &#39;de hazırlanan) (iki satır kesiştiği) Pipet 2 ul. </li><li> Iki &quot;T&quot; siteleri üzerine test çözeltisinin hemen sonra, pipet 2 ul. Benzer şekilde, iki &quot;C&quot; siteleri üzerine kontrol solüsyonu ile aynı miktarda pipetle. </li><li> Solucan ve odorant damla agar emilir edildikten sonra, kapakları yerine ve plakalar ters. </li><li> 60 dakika sonra, 4 ° C inkübatör solucanlar yerleştirin. Bu sayılabilir yalnızca inkübatör bir tabak çıkarın. Oda sıcaklığında solucanlar bırakarak onları tekrar harekete izin verebilir. </li><li> Tamamen iç Ortam geçti her kadranda solucan sayısını kaydedinle. </li><li> Test ve kontrol kadran hem de kontrol çözeltisi kullanılarak adımları 3,2-3,6 tekrarlayın. Bu kontrol plaka olarak görev yapacak. Üç tür plakalar yapılmış ve uygun bir kontrol olarak hizmet çalıştırılmalıdır. </li></ol> 4. Skorlar Sözlü / Kemotaksis Endeks belirlenmesi <ol><li> Denklem 1 kullanarak kemotaksis indeksi hesaplayın. Bu -1.0 ve +1.0 arasında bir kemotaktik indeksi verecektir. </li></ol> (1) Kemotaksis İndeksi = (Test bölgeleri Her iki içerisinde Worms - Her iki kontrol bölgeleri içerisinde Worms) / (Attı Worms # Toplam) Bir +1.0 puan hedefe doğru maksimum çekim gösterir ve kimyasal hedef içeren kadran gelen solucanlar% 100 temsil eder. -1.0 Bir dizin maksimum itme kanıtıdır. Benzer test yöntemleri zaten 3 (Tablo 1) istihdam edilmiştir. <ol start="2"><li> Ortalama Kemotaksi rapors Endeksi (CI) ve standart hata (SEM) anlamına gelir. Öğrenci T-testi test ve kontrol plakaları verileri karşılaştırarak yapın. </li></ol>

<ol><li>Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odorant-selective+genes+and+neurons+mediate+olfaction+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans.</a> Cell. 74, 515-527 (1993).</li>
<li>Bargmann, C. I., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemosensory+neurons+with+overlapping+functions+direct+chemotaxis+to+multiple+chemicals+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Chemosensory neurons with overlapping functions direct chemotaxis to multiple chemicals in C. elegans.</a> Neuron. 7, 729-742 (1991).</li>
<li>Lee, J., Jee, C., McIntire, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+preference+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">Ethanol preference in C. elegans.</a> Genes Brain Behav. 8, 578-585 (2009).</li>
<li>Swierczek, N. A., Giles, A. C., Rankin, C. H., Kerr, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+behavioral+analysis+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput behavioral analysis in C. elegans.</a> Nat. Methods. 8, 592-598 (2011).</li>
<li>Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+by+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%3A+identification+of+attractants+and+analysis+of+the+response+by+use+of+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis by the nematode Caenorhabditis elegans: identification of attractants and analysis of the response by use of mutants.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 70, 817-821 (1973).</li>
<li>Colbert, H. A., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odorant-specific+adaptation+pathways+generate+olfactory+plasticity+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Odorant-specific adaptation pathways generate olfactory plasticity in C. elegans.</a> Neuron. 14, 803-812 (1995).</li>
<li>Kauffman, A., Parsons, L., Stein, G., Wills, A., Kaletsky, R., Murphy, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C.+elegans+Positive+Butanone+Learning%2C+Short-term%2C+and+Long-term+Associative+Memory+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays.</a> J. Vis. Exp. (49), e2490(2011).</li>
<li>Troemel, E. R., Kimmel, B. E., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reprogramming+chemotaxis+responses%3A+sensory+neurons+define+olfactory+preferences+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Reprogramming chemotaxis responses: sensory neurons define olfactory preferences in C. elegans.</a> Cell. 91, 161-169 (1997).</li>
<li>Pierce-Shimomura, J. T., Morse, T. M., Lockery, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fundamental+role+of+pirouettes+in+Caenorhabditis+elegans+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The fundamental role of pirouettes in Caenorhabditis elegans chemotaxis.</a> J Neurosci. 19, 9557-9569 (1999).</li>
<li>Frokjaer-Jensen, C., Ailion, M., Lockery, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ammonium-acetate+is+sensed+by+gustatory+and+olfactory+neurons+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Ammonium-acetate is sensed by gustatory and olfactory neurons in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS One. 3, e2467(2008).</li>
<li>Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Cerón, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+Caenorhabditis+elegans+Methods%3A+Synchronization+and+Observation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation.</a> J. Vis. Exp. (64), e4019(2012).</li>
<li>Sengupta, P., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+fate+specification+and+differentiation+in+the+nervous+system+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Cell fate specification and differentiation in the nervous system of Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Genet. 18, 73-80 (1996).</li>
<li>Hart, A. C. Behavior. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHart%2C+AC+%22WormBook%22">WormBook</a>. , (1895).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Kemotaksis, nöronal ve hücresel mekanizmalar karmaşık bir dizi tarafından kontrol edilen, ancak kolay ve objektif kemotaksi deneyleri kullanılarak belirlenebilir. Testleri en iyi sonuçları elde etmek için, bazı kritik adımlar alınmalıdır. İlk olarak, solucanlar evreleme tutarlı deneysel sonuçlar veren esastır. Farklı yaşam aşamalarında Worms farklı 13 davranırlar, bu yüzden karışık aşamada solucanlar olabilir çarpık deneysel sonuçlar. İkinci olarak, tüm E. sağlanması artık bakteri tetkiki ile etkileş...

Ward, 1973 5 kemotaksis testi geliştirdi, ve o zamandan beri geniş kapsamlı uygulamalar olmuştur. Nörobiyoloji kemotaksi testleri kullanarak çeşitli yararlanmıştır olan bir alandır. Koku uyum, öğrenme ve bellek basit bir formu, C. gösterilmiştir kemotaksi testleri 6 kullanarak elegans. Ayrıca göstermek için kullanılmış olduğunu ° C. elegans etanol solucanlar davranışsal plastisite gösterir sadece hoşgörü-bir sonucu gelişebilir, ama bu da solucanlar insanlarda 3 alkol bağımlılığının çalışmada çok yararlı olabilir göstermektedir. Tahliller da C yeteneğini göstermek için geliştirilmiştir elegans dernekler chemoattractants ve gıda (OP50) 7 arasındaki solucanlar tarafından yapılmış olduğunu göstererek kısa ve uzun süreli hafıza depolamak için. Ayrıca C, ilgili mevcut geniş bilgi verilir elegans genomunun, KemotaksiC. s davranış elegans mutasyonlar 1,8 uyararak defalarca değiştirilmiş. Bu, C. geliştirilmesi gibi birçok heyecan verici mühendislik olanakları, sağlar bir biyoremidasyon aracı olarak elegans. Böylece, 1973 yılında kemotaksis testin ilk geliştirme yana, sık sık değişmiş ve disiplinlerden çeşitli gizemleri aydınlatmak için kullanılmıştır. Bazı testler bir hedefe doğru solucanlar tarafından alınan belirli bir rota keşfetmek amaçladık. Bu tür prototip testi Ward 5 tarafından geliştirilmiştir. Üç solucanlar 15 dakika boyunca erimiş agar üzerine yerleştirilmiştir. Onların hareketleri onlar plakasının merkezinde bir çekici bir degrade kadar plaka çevre gitti onlar sol baskı tarafından takip edildi. Plaka üzerinde tüm solucanlar her deneme sonunda kloroform kullanılarak gözaltına alındı. Bu yöntemin bir alt çekici ve kontrol ile bir levhanın ortasında bir tek solucan yerleştirilmiştirkökeni 2 t eşit ve zıt mesafelerde. Pierce-Shimomura&#39;nın ve ark. Kemotaksis 9 dahil hareketinin tam doğası gözlemlemek için bir analiz geliştirdik. Bağımsız solucanlar çekici madde kaynağı ile sonuçlanan, 9 cm Petri tabakları çekici veya radyal şekilli degrade bir konsantrasyonunu ihtiva eden ya da yerleştirilmiştir. Solucan tanınan bir bilgisayar yazılım programı gözlenen davranışı kaydetmek için kullanıldı. Mikroskop bağlı bir video kamera tahlil solucan görüş alanında kaldı sağlamak için koştu otomatik olarak Petri kabı ayarlamak için sahne ile birlikte çalıştı. Buradan, daha ayrıntılı bilgi C. tarafından görüntülenen pirouettes nedeni ile ilgili keşfedildi elegans. Burada açıklanan daha yakın bir şekilde diğer analizler, test bileşikleri için solucanlar büyük bir nüfusun yanıt olarak test edilmiştir. İki çeyrek kemotaksi deneyleri olmuşturÇeşitli nöronlar, reseptörler, ve sinyal iletim molekülleri, C &#39;oynadığı roller keşfetmek için kullanılan elegans çeşitli bileşikler 1 maruz kalmıştır. 20-50 arasında yıkanır solucanlar, anestetik, sodyum azit (NaN3) birlikte polar ucunda bir çekici ve bir kontrol plakasının merkezine yakın yerleştirilmiştir. 60 dakika sonra, -1.0 den +1.0 değerleri ile bir kemotaktik indeksi cezbedici veya kontrol yapıştırılmış kaç solucan arasındaki fark esas alınarak oluşturulmuştur. Daha önce tahlil katı non-motil solucanlar değerlendirmek için başarısız olsa da benzer bir kemotaktik indeksi, bu makalede rapor tahlilinde kullanılmıştır. Bu deney, daha sonra daha fazla kemotaksisidir nöronal ablasyon etkilerini test uygulandı. 100-200 solucanlar dört kadran 3 içeren bir tabak ortasına yerleştirildi nerede söz konusu testin başka bir varyasyonu yapıldı. Bitişik çeyrek daireler ya ya da test yermadde kontrol. Önceki deneylerde olduğu gibi, solucanlar atılan önce sodyum azid hareketi ile hareketsizleştirildi. Benzer bir yöntem, C cevabı değerlendirmek için bir yol olarak burada açıklanan çeşitli bileşikler için elegans. Ancak, aşağıdaki yöntemi yalnızca hareketsiz solucanlardan mobil ayıran bir eşik mesafe geçti solucanlar değerlendirilmesi yararı vardır. Diğer testler hareketsiz solucanlar görmezden için benzer yönergeleri dahil etmişlerdir. Frøkjær-Jensen ve diğerleri. Uçucu ve su hem de çözünebilir bileşikler 10 test etmek için kullanılabilecek bir analiz geliştirdik yönlü. Bir Petri kabı dört parçaya bölündü. Üst ve alt çeyrek solvent içermemektedir. Sol kadran su içerdiği ve doğru cezbedici içeriyordu. Suda çözünen bileşikler aga doğrudan yerleştirildi ise uçucu koku test ederken, analit, uygun kadran üzerinde, çanak kapağı yerleştirildir. C. kemotaktik tepkiyi değerlendirmek için şu anda var olan yöntemler elegans sürekli kullanımı, verimlilik ve doğruluk kolaylığı optimize etmek için rafine edilmektedir. Burada açıklanan tahlil solucanlar en fazla (. Maksimum verim: 250 solucanlar / plaka başına saat, Lee ve ark 3 gösterdiği verim biraz daha fazla) değerlendirmek yeteneğine sahipken Yani,, bu yöntemin gerçek gücü olan Daha önce testleri (Tablo 1) özelliklerini birçok kısa doruk noktası.

<table><tbody><tr><td>S Bazal (- kolestrol) [5.8 g NaCl; 1 M K fosfat tamponu, pH 6.0; dH2O 1 litre kadar.] Otoklav</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PicoFuge</td><td>Stratagene</td><td>400552</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskoplar</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P1000 Pipet</td><td>Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P10 Pipet</td><td>Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.5 M Sodyum Azit</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kemotaksis Agar [1.6% BBL-agar (Benton-Dickinson) veya 2% Difco-agar. Otoklav. 5 mM potasyum fosfat, pH 6.0; 1 mM CaCl2, 1 mM MgSO4 ekleyin.]</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etanol/Damıtılmış Su</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Test Bileşikleri (örn. 0.5% diasetil)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Bio-Rad</td><td>166-0600</td><td></td></tr><tr><td>NH4Cl</td><td>Amresco</td><td>CA97062-046</td><td></td></tr><tr><td>MOPS</td><td>VWR</td><td>CA12001-120</td><td></td></tr><tr><td>NH4OH</td><td>BDH</td><td>CABDH8641-2</td><td></td></tr><tr><td>0.25% Tween 20</td><td>Bio-Rad</td><td>170-6531</td><td></td></tr></tbody></table>

c. elegans kemotaksis deneyi

C. elegans Chemotaxis Assay

Birçok organizma kemotaksis, gıda kaynakları bulmak zararlı maddeler önlemek ve arkadaşları bulmak için kullanın. Caenorhabditis elegans etkileyici kemotaksis davranış vardır. Bir odorant için solucanlar yanıtı test arkasında öncül bir alanda koyun ve bir odorant yanıt olarak uyarılmış hareketi gözlemlemektir. Hatta mevcut olan birçok deneyleri ile, önemli örnek boyutu korunarak birbirleriyle solucanlar etkileşimi en aza indirirken, kontrol ve test alanları hem de göreli konumu başlangıç ​​solucan optimize ilerleme 1-10 bir çalışma devam etmektedir. Burada anlatılan yöntemi Bargmann ve ark. 1. tarafından geliştirilen test değiştirerek bu konuları ele amaçlamaktadır. Bir Petri kabı dört parçaya bölünür, &quot;Test&quot; ve iki işaretli iki zıt kadran &quot;Kontrol&quot; belirlenir. Anestezik tüm test ve kontrol sitelerinin yerleştirilir. Solucanlar bir Circl ile plaka ortasına yerleştirilire non-motil solucanlar yok sayılır sağlamak için kökenli etrafında oldu. Dört kadran sistemi kullanılarak yerine bir 2 ya da iki 1 bakılmaksızın başladı kökeni hangi tarafında, onlar test ve kontrol örnekleri eşit uzaklıkta olduğu gibi, solucanlar hareketi önyargı ortadan kaldırır. Bu solucan gecikme ya da amaçlanan yolun yanlış yorumlanması verimli, daha dolambaçlı yol almaya zorlayabilir bir odorant, cevap diğer solucanlar bir küme ile seyahat etmek zorunda olan solucanlar sorunu circumvents. Bu yöntem aynı zamanda daha büyük bir örneklem büyüklüğü olan ve araştırmacı katılımsız tahlil çalıştırın ve ayrılan zaman süresi bitiminde solucanlar puan için izin vererek pratik avantajlar gösterir.

Yabani tip (N2) C Karşılaştırılması ODR-10 (KY10) mutant için elegans. Biz, bilinen bir C diasetil el elegans kemoatraktan, diasetil 1,12 için reseptör olmayan bir mutantı olduğu için vahşi tip solucanlar karşılaştırma. Doğal tipte (N2) solucanlar için kemotaktik indeksi etanol ve 0,839-0,100 ± 0.066 idi ± 0,031-0,5% diasetil. Beklendiği gibi, diasetil yabani tip solucanlar (p &lt;0.003) anlamlı bir chemoattractive tepkisi açığa ç...

Niceliksel kemotaktik tepkiyi değerlendirmek için bir yöntem<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Tarif edilmektedir. Bir kemotaktik indeksi (CI) tam olarak belli hedeflere solucanlar yanıtı değerlendirmek ve suşları ve ilgi bileşikler arasında karşılaştırma bir platform olarak hizmet için bir yol olarak kullanılmıştır.

C. elegans Kemotaksis Deneyi

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates.  Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, basit ve ucuz bir yöntem kullanarak C. elegans'ın kemotaktik tepkisini ölçmektir. Bu, aşamalı olarak izole edilen solucanları işaretli bir plakanın ortasına yerleştirerek elde edilir. Tüm test ve kontrol bölgelerine eşit uzaklıkta, her bölgeye ilgi çekici bir bileşik veya kontrol bileşiği, her ikisi de solucanların yaklaştıklarında onları durduran bir anestetik ile birleştirilir.60 dakika sonra, plakanın üzerindeki solucanların son dağılımı sayılır ve solucanların konum oranı, bir deney endeksi sağlamak için kullanılır. Sonunda, deniz şıklığının belirli bileşiklere çekilmesini ölçmek, altta yatan deneysel manipülasyonların davranışsal sonuçlarını değerlendirmek için kullanılabilir. Bu tekniğin ana avantajı, öncüllerinin birçok faydalı yönünü içerirken, kullanım kolaylığını büyük ölçüde artırmasıdır.Bu deney, deniz şıklığının davranışı hakkında bilgi sağlar ve nöro-genetik manipülasyonlar ve diğer nörobiyolojik deneylerle birleştirildiğinde özellikle yararlıdır. Beş santimetrelik kimyotaksi agar veya NGM ile yüklenmiş plakalar ile başlayın. Plakaların altını dört eşit dörde bölün.Test edilen genetik suş ve test edilen her koşul için en az üç plaka hazırlayın. Ardından, orijin çevresinde 0,5 santimetre yarıçapında bir daire işaretleyin. Ardından, zıt dörtlerde, noktaları T ile test veya C ile kontrol olarak işaretleyin, böylece noktaların orijine ve birbirine eşit uzaklıkta olduğundan emin olun.Bu deney için noktalar orijinin en az iki santimetre uzağında olmalıdır. Senkronize gelişimde beş santimetrelik kimyotaksi plakalarda hazırlanmış genç yetişkin solucanlara sahip olun. Farklı gelişim aşamalarında olan solucanlar analitlere farklı tepki verebilir.Sonuç olarak, deneyde kullanılan tüm solucanların aynı gelişim aşamasında olması çok önemlidir. Solucanlar OP 50 e coli çimi temizledikten sonra, plakaya iki mililitre S bazal tamponu pipetleyin. Solucanları yıkamak için tüm solucanları tampona almak için plakayı manipüle edin.Worm süspansiyonundan bir mililitreyi bir mikro santrifüj tüpüne pipetleyin ve 10 saniye boyunca santrifüj yapın. 6.600 RPM'de bir pico fuge kullanarak, basil'i aspire edin ve solucanların peletini bozulmadan bırakın. Şimdi bu solucanları aynı yöntemle üç kez daha yıkayın.S basil tamponunu tüpe ekleyerek ve tüpü ters çevirerek solucanları çözeltiye geri koymaya başlayın. Son yıkamadan sonra, solucanları tekrar 10 saniye boyunca santrifüj yapın ve ardından süpernatantı 100 mikrolitreye kadar son hacme aspire edin. Ardından, yeterli solucan yoğunluğunu sağlamak için pelettekien yıkanmış solucanların iki mikrolitresini NGM plakasına pipetleyin.En az 50 solucan, ancak 250 solucandan fazla olmamalıdır. Çok fazla solucan varsa, ESP basil çözeltisinin hacmini artırın. Ve çok az solucan varsa, onları aşağı çevirin ve daha düşük bir hacimde yeniden süspanse edin.Solucan tüpünü bir duman başlığına yerleştirin. Hazırlandıktan sonra, solucanlar kimyotaksik deneyde bir saate kadar kullanılabilir. Önce çözeltileri hazırlayın.Test çözeltisini test bileşiği ile anestezik 0.5 molar azid eşit hacimlerde karıştırarak karıştırın. Ardından, test bileşiğini seyreltmek için kullanılan solventin 0.5 molar sodyum azid ile bir kontrol çözeltisi karıştırın. Şimdi bir test plakası hazırlayın.İlk olarak, peletten iki mikrolitre solucan çözeltisini test plakasının orijine pipetleyin. İkincisi, kokuları ekleyin, iki T noktasına iki mikrolitre test çözeltisi ve iki T noktasına iki mikrolitre kontrol çözeltisi pipetleyin. Solucanlar ve koku damlaları agar tarafından emilene kadar kapakları değiştirin, plakaları ters çevirin ve deney süresi için 60 dakika bekletin.Sodyum. ASI difüzyon süresinin denemeler arasında standartlaştırılması için. Solucanların hemen kokulardan önce eklenmesi önemlidir.Ayrıca, her plaka tamamen hazırlanmalı ve sonraki plakayı hazırlamadan önce deney başlatılmalıdır. 60 dakikalık denemeden sonra solucanları dört derece Celsius'luk bir buzdolabına yerleştirin. Daha sonra, sayılabileceğinde buzdolabından plakayı çıkarın.Onları hemen saymamak ve solucanları oda sıcaklığında bırakmak, hareket etmelerine izin verebilir. Tekrar. İçerden çıkmış olan solucanların konumunu verilerden çıkarın. Kemotaksi indeksini hesaplayın.Değer, maksimum itmeden maksimum çekime kadar negatif bir'den pozitif bir'ye değişecektir. Kontrol çözeltisi hem test hem de kontrol dörtlerinde kullanılarak süreci tekrarlayın. Bu, kontrol plakası olarak hizmet edecektir. Üç.Her deneysel koşul için bu tür plakalar yapılmalı ve çalıştırılmalıdır. Diacetyl. Bilinen bir C. elegans kemoçekici madde, diyasetil reseptörünü olmayan mutantlara karşı vahşi tip solucanları karşılaştırmak için kullanıldı. Beklentilere göre, diyasetil vahşi tip solucanlardan önemli bir kemoçekici tepki elde etti.Öte yandan, ODR 10 mutantları diacetyl'e kontrol bileşiği etanol kadar çekilmedi.

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Burada yöntemleri C. elegans ilişkisel öğrenme ve kısa ve uzun vadeli çağrışımlı hafıza test etmek için açıklayın. Bu nüfus Testler uçucu koku doğru chemotax solucanlar yetenekleri istihdam ve kemoatraktan bütanon gıda eşleştirme üzerine olumlu dernek kurma. Klima dönemlerinin sayısının artırılması uzun vadeli bellek neden olur.

C. elegans Pozitif bütanon Öğrenme, Kısa vadeli ve uzun vadeli ilişkilendirilebilir Bellek Tahliller

ECIS / Taksiler sistemi hücresel kemotaksis ölçer otomatik, gerçek zamanlı bir testtir. Bu deneyde, bir hedef hücreler elektrot varmak için agaroz bir katmanı altındaki hareket eder. Hücresel hareketi AC akım 0 direnç başlangıcı ile ölçülür.

ECIS / Taksiler ile Hücresel Kemotaksis Ölçümü

Bu video, nematod C. elegans'ta kemotaksisi tanıtıyor ve bakır sülfata karşı kemotaktik kaçınmayı test eden örnek bir protokolü gösteriyor.

C. elegans Kemotaksis Testi: Solucanlarda Kemosensasyonu Test Etmek İçin Bir Yöntem

Araştırmacılar, solucanların algıladığı ve tepki verdiği bir elektrik alanı uygulayarak C. elegans'ta isteğe bağlı hareketi tetikleyebilir. Bu videoda elektrotaktik davranış tanıtılır ve mikroakışkan bir cihazda yapılan örnek bir protokol gösterilir.

Elektrotaksi Deneyi: C. elegans'ta Hareketi Gözlemlemek İçin Bir Yöntem

Içinde isteğe bağlı hareket ikna etmek için bir yarı-otomatik mikro-elektro-akışkan...

On-talep Kantitatif Analiz için mikroakışkan tabanlı Electrotaxis<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; &#39;Locomotion

Biz solucan amylopathies yönlerini incelemek için yöntemler...

Bir<em&gt; Caenorhabditis elegans</emAmylopathy Çalışmaları&gt; Model Sistemi

Nematodun, Caenorhabditis elegans'ın , nüfusa dayalı bir deneyde çözünür bileşikler için tercihinin otomatik analizini sağlayan bir davranış kayıt kurulumu ve protokolü sunuyoruz. Bu makale bir davranış odasının inşasını, davranışsal analiz protokolünü ve video analiz yazılımının kullanımını anlatıyor.

Nematod Popülasyona Dayalı Kemoterapi Tercihi Testinin Otomatik Analizi

Daha önce Caenorhabditis elegans'ın sırasıyla kitlesel ve aralıklı eğitim yoluyla kısa ve uzun vadeli ilişkisel anılar oluşturması için protokoller geliştirdik. Burada, C. elegans'ın koşullandırılması için, 1-propanol ve hidroklorik asidi, sırasıyla koşullu ve koşulsuz uyaranlar olarak eşleştirerek, engelleyici ilişkisel hafıza oluşturmak için ayrıntılı protokoller açıklanmaktadır.

Caenorhabditis elegans'ta İki Kimyasalın Eşleştirilmesiyle Engelleyici İlişkisel Öğrenme ve Hafıza Oluşumu

Burada, model organizma C. elegans'ta klasik koşullandırma gerçekleştirerek ilişkisel öğrenmeyi test etmek için bir protokol sunuyoruz. Paradigma, ortamdaki tuz konsantrasyonunu, kemotaksislerini tuza doğru veya tuzdan uzaklaştıran gıdanın varlığı veya yokluğu ile eşleştirmeye dayanır.

Nematod Caenorhabditis elegans'ın Kemotaksisinde İlişkisel Öğrenmenin Ölçülmesi

Bu protokol, C. elegans'taki uçucu seks feromonuna verilen yanıtların çıkarılması ve ölçülmesi için yöntemler oluşturur ve kimyasal iletişim ve navigasyon yörüngesini incelemek için araçlar sağlar.

Caenorhabditis elegans'ta Uçucu Seks Feromon Ekstraksiyonu ve Kemocazibe Testi

Keşfedin Caenorhabditis elegans kemotaksis deneyi ile davranışsal biyolojide nicel analiz yapma yöntemini. Bu basit ve ekonomik teknik, solucanların kimyasal uyaranlara yanıtını ölçerek nörobilim araştırmalarında güvenilir veri sağlar.

C. elegans Kemotaksis Deneyi

Daha fazla video keşfet