Name: Larva Zebra balığı olarak önbeyin Elektrofizyolojik Kaydı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-24T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min
Description: Öğrenin larval zebra balığı önbeyininde ekstraselüler alan potansiyelleri kaydetme yöntemini. Bu teknik, genetik modifiye edilmiş veya konvülzan ilaçlara maruz kalan balıklarda nöbet benzeri aktiviteyi izlemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazar laboratuarda zebrafish kurmak onların erken çabalarına Peter Castro ve Matthew Dinday teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma Sağlık EUREKA hibe (# R01NS079214-01) Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından finanse edildi.

1. Yumurta Üretim ve Toplama <ol><li> Zebra balığı yetiştiriciliği daha önce 8 açıklanan standart prosedürleri izler. Kısaca, yetişkin zebrafish yerde bölücüler ile tanklar üreme kurulur. Oda ışıkları ertesi sabah geldiğinde, bölücüler tank ve balık rahatsız çiftleşme zamanı yaklaşık 20 ila 60 dakika izin üreme kaldırılır. </li><li> Yetiştirme tanklarından Yumurta bir süzgeç toplanır ve yumurta su ile durulanır. Yumurta sonra yumurta su ile bir Petri kabı aktarılır. Döllenmemiş yumurtalar ve enkaz bir transfer pipet kullanarak kaldırılır. </li><li> Küvözde toplanan yumurtalar (28-32 ° C) içeren Sıra Petri. Yumurta iki gün sonrası fertilizasyon (DPF) etrafında, yumurtadan sonra, bir transfer pipet ile koryon ve diğer pislikleri temizleyin. </li><li> İstediğiniz gün sonrası fertilizasyon (3 ila 8 DPF) oda sıcaklığında laboratuarlarında serbestçe yüzme larva ve yeri içeren Petri çıkarın. </li></ol><ol><li> Bir mikropipet çektirmenin kullanarak, 1.2 mm OD borosilikat cam aptalca macun rampalarda koyarak bir 150 mm Petri kabında ya da boş pipet kutusunda iki iğne ve mağaza içine kılcal çekin. İğneler önceden çekilebilir. Farklı OD cam kılcal mevcut amplifikatör headstage türüne bağlı olarak kullanılabilir. </li><li> Nalgene bir şırınga filtresi (4-mm) ve Mikrofil filaman (Warner Precision Instruments) takılı olan bir 1 ml şırınga kullanarak hücre dışı kayıt solüsyonu (2 M NaCl) ile Backload mikroelektrot. Kalan az veya hiç kabarcığı kalmayıncaya kadar iğne ucuna doğru bolus çalkalayın ya dokunun. </li></ol> 3. Agar İmmobilizasyon <ol><li> Yumurta suda% 1.2 düşük erime noktası agar taze bir çözüm hazırlayın. ~ 37 ° C&#39;de bir su banyosunda grubu içinde yer agar çözeltisi </li><li> Dondurucuya kayıt odasına ve yeri (5-10 dk) ile bir lamel hazırlayın. Kayıt odasına Matc gerekirh bu elektrofizyoloji teçhizat kullanılır. Biz Warner Instruments (Model RC-26GLP) bir düşük profilli açık elmas hamamı görüntüleme odası kullanın. </li><li> Pasteur veya transfer pipet, temiz bir Petri plaka yumurta su küçük bir damlacık yer biri larva zebrafish kullanma. Bu damlacık için, bir anestetik (% 0.02 tricaine) ve felç edici ajan (1 mg / ml α-bungarotoxin) ihtiva eden bir çözelti damla ilave edin. </li><li> Hareket kaybı (5-10 dk) için zebrafish izler. </li><li> Dondurucu lamel / kayıt odasına çıkarın. Stereomikroskopta evresine odasına yerleştirin. Bir transfer pipet kullanarak, damlacık ve lamel / kayıt odasına aktarım çözümü (balık) ile% 1.2 düşük erime noktası agaroz birkaç ml karıştırın. </li><li> Bir pipet veya ince künt iğne, balık dorsalinde agaroz jel yüzeyine maruz böylece stereomikroskop altında pozisyon larva kullanma. Sonra düz bir spatula transferi agar b kullanarak, sertleşmeye (5-10 dk) agaroz İzinBir elektrofizyoloji kulesi kurmak bir kayıt odasına kilitleyin. </li></ol> 3. Ekstrasellüler Alan Kaydı <ol><li> Kayıt odasına zebrafish kayıt ortamı 2-5 ml ekleyin. Ilaç değişiklikler yaklaşık 1 ml / dak &#39;lık bir hızla kayıt solüsyonu ile gerektiğinde, perfuse bölme ise. Kayıt çözelti No oksijen gereklidir. </li><li> , Üç boyutlu bir mikromanipülatör üzerine monte edilmiş olan amplifikatör headstage içine bir mikroelektrot (yaklaşık 1 mikron uç çapı, MΩ 2-7) takın. Mikromanipülatör hareketi ve ayar bir dizi için izin vermek için uygun bir konumda olup olmadığını kontrol edin. Sahneden yüksek mikroskop görünümü düzlem, ve sadece yukarıda ve biraz zebrafish kafası önünde bir noktaya daha düşük kaba ayarı kullanarak içine mikroelektrot ucu getir. </li><li> &quot;Akım-kelepçe&quot; modunda sıfır elektrodunda amplifikatör ile. </li><li> Sadece s dokunacak şekilde kaba ayarı düşük elektrot ucu kullanarakhafifçe ön beyin önünde zebrafish urface. </li><li> Bu zebrafish cildi delen, kadar ince ayar adımları kullanarak elektrot ucu ilerlemek. Önbeyin içine birkaç mikron yerleşmek ve sonra elektrot ilerlemek için izin ver. </li><li> Axoscope yazılımını kullanarak akım-klemp modunda elektriksel aktivite kaydedin. Veri 10 kHz örnekleme hızında elde edilir. </li></ol>

<ol><li>Clark, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stressing+zebrafish+for+behavioral+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Reviews+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Stressing zebrafish for behavioral genetics.</a> Reviews in Neuroscience. 22 (1), 49(2011).</li>
<li>Rinkwitz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+an+integrative+system+for+neurogenomics+and+neurosciences%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: an integrative system for neurogenomics and neurosciences.</a> Progress in Neurobiology. 93 (2), 231(2011).</li>
<li>Penberthy, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+as+a+model+for+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioscience%22%5BJournal%5D)">The zebrafish as a model for human disease.</a> Frontiers in Bioscience. 7, d1439(2002).</li>
<li>Letamendia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+an+automated+high-throughput+system+for+zebrafish+in+vivo+screenings%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development and validation of an automated high-throughput system for zebrafish in vivo screenings.</a> PLoS One. 7, e36690(2012).</li>
<li>Nasevicius, A., Ekker, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+targeted+gene+%27knockdown%27+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Effective targeted gene 'knockdown' in zebrafish.</a> Nature Genetics. 26 (2), 216(2000).</li>
<li>Haffter, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+affecting+development+of+the+zebrafish+inner+ear+and+lateral+line%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mutations affecting development of the zebrafish inner ear and lateral line.</a> Development. 123, 1(1996).</li>
<li>Suster, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenesis+in+zebrafish+with+the+tol2+transposon+system%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Transgenesis in zebrafish with the tol2 transposon system.</a> Methods Molecular Biology. 561, 41(2009).</li>
<li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinjection+of+Zebrafish+Embryos+to+Analyze+Gene+Function%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function.</a> J. Vis. Exp. (25), e1115(2009).</li>
<li>Baraban, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pentylenetetrazole+induced+changes+in+zebrafish+behavior%2C+neural+activity+and+c-fos+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression.</a> Neuroscience. 131 (3), 759(2005).</li>
<li>Baraban, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+large-scale+mutagenesis+screen+to+identify+seizure-resistant+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">A large-scale mutagenesis screen to identify seizure-resistant zebrafish.</a> Epilepsia. 48 (6), 1151(2007).</li>
<li>Williams, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+radiotelemetry+to+evaluate+electrographic+seizures+in+rats+with+kainate-induced+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">The use of radiotelemetry to evaluate electrographic seizures in rats with kainate-induced epilepsy.</a> Journal of Neuroscience Methods. 155 (1), 39(2006).</li>
<li>Marsh, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interictal+EEG+spikes+identify+the+region+of+electrographic+seizure+onset+in+some%2C+but+not+all%2C+pediatric+epilepsy+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">Interictal EEG spikes identify the region of electrographic seizure onset in some, but not all, pediatric epilepsy patients.</a> Epilepsia. 51 (4), 592(2010).</li>
<li>Zhu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+and+application+of+modularly+assembled+zinc-finger+nucleases+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Evaluation and application of modularly assembled zinc-finger nucleases in zebrafish.</a> Development. 138 (20), 4555(2011).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Burada sunulan ekstraselüler kayıt yöntemi, beyin aktivitesinde çok hassas ve hızlı analizine olanak sağlar. Bu kayıtlar genellikle epilepsi 11 ve hastaların 12 kemirgen modellerinde anormal elektriksel deşarj (yani, nöbet) varlığını değerlendirmek için kullanılan elektroensefalografi (EEG) izleme ile benzerdir. Burada gösterildiği gibi ekstraselüler kayıtları, farmakolojik manipülasyonlar ile kombine edilebilir. Kayıtları Bu tip de genetik olarak modifiye edilmiş zebrafish potansiyel epil...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> Agaroz düşük erime </td><td> Fisher-Bilimsel </td><td> BP1360-100 </td><td> % 1,2 embriyo ortamda çözülür </td></tr><tr><td> Kayıt ortamı </td><td> Fisher-Bilimsel </td><td> BP3581, P330-3, BP410-1, BP214-500, D16-1, C77-500 </td><td> 1 mM NaCI, 2.9 mM KCI, 10 mM HEPES, 1.2 mM MgCl2, 10 mM dekstroz, 2.1 mM CaCl2 1 N NaOH ile pH değeri yaklaşık olarak 7.3 ile </td></tr><tr><td> Tricaine </td><td> Argent Laboratuvarları </td><td> MS-222 </td><td> % 0.02 &#39; </td></tr><tr><td> α-bungarotoxin </td><td> Bioscience Tocris </td><td> 2133 </td><td> 1 mg / ml </td></tr><tr><td> Kılcal cam boru </td><td> Warner Instruments </td><td> G120TF-3 </td><td> MΩ 2 -7 bir direnç çekin </td></tr><tr><td> Yama kelepçe amplifikatör </td><td> Warner Instruments </td><td> PC-505B </td><td> Biz mevcut-klemp modunda bir Warner amplifikatör kullanmak; Kazanç 2K ayarlanır 2 mV / pA ve Bessel filtre ayarlanmıştır. Karşılaştırılabilir model üreticinin talimatlarına göre kullanılır. </td></tr><tr><td> Filtre / amplifikatör </td><td> Kuğu Teknoloji </td><td> FLA-01 </td><td> 10-20 ayarlanır Kazanç;; 1-2K ayarlanmış Kesim frekansı; Notch filtresi IN Biz Cygnus pre-amplifikatör kullanın. Karşılaştırılabilir model üreticinin talimatlarına göre kullanılır. </td></tr><tr><td> Akson A / D kurulu ve Axoscope yazılımı </td><td> Molecular Devices </td><td> Akson Digidata 1320A; Axoscope 8.2 </td><td> Veri boşluğu serbest edinimi modunu kullanarak Axoscope toplanır; 10 kHz örnekleme. Karşılaştırılabilir modelleri ve programları üreticinin talimatlarına göre kullanılır. </td></tr><tr><td> Yumurta su </td><td&gt; Anında Okyanus </td><td></td><td> 3 g Anında Okyanusu deniz tuzu, 10 ml deiyonize su içinde 2 mL% 0.1 &#39;lik metilen mavisi </td></tr></tbody></table>

larva zebra balığı olarak önbeyin elektrofizyolojik kaydı

Forebrain Electrophysiological Recording in Larval Zebrafish

Epilepsi Amerika Birleşik Devletleri yaklaşık 3 milyon kişi kadar ve 50 milyon kişi dünya çapında etkiler. Spontan nöbetlerle oluşumu olarak tanımlanan, epilepsi beyin ya da genetik bir mutasyon bir hakaret sonucunda elde edilebilir. Hayvanlarda modeli nöbet çabaları öncelikle kullanılan kemirgenlerde hakaret (konvülsan ilaçlar, uyarılma ya da beyin hasarı) ve genetik manipülasyonlar (antisens demonte, homolog rekombinasyon veya transgenesis) almış. Zebra balığı kemirgen tabanlı epilepsi araştırma için değerli bir alternatif sunabilecek bir omurgalı model sistem 1-3 vardır. Zebra balığı omurgalı genetik veya geliştirme çalışmalarında yaygın olarak kullanılan, memeliler için genetik benzerlik yüksek dereceli ve bilinen insan tek gen epilepsi mutasyonların ~% 85 homologları ifade. Çünkü onların küçük boyutlu (4-6 mm uzunlukta) arasında zebrafish larva erken gelişim ve arra sırasında 100 ul gibi düşük sıvı hacmi muhafaza edilebilirçok oyuklu plakalar içinde yapabilirler. Reaktifler embriyolar ilaç uygulaması basitleştirilmesi ve test bileşiklerinin in vivo 4 tarama hızlı sağlayan, geliştiği çözeltiye doğrudan ilave edilebilir. Sentetik oligonükleotidler (morpholinos), mutagenez, çinko parmak nükleaz ve transgenik yaklaşımlar hızla 5-7 zebrafish gen devirme veya mutasyon oluşturmak için de kullanılabilir. Bu özellikler zebrafish çalışmalarda epilepsi gibi nörolojik hastalıkların çalışmada kemirgenler üzerinde görülmemiş bir istatistiksel güç analizi avantajı göze. Epilepsi araştırma için &quot;altın standart&quot; merkezi bir beyin yapısı (yani, nöbetler), verimli larva zebrafish beyin aktivitesini kaydetmek için bir yöntem menşeli anormal elektrik deşarjı izlemek ve analiz etmek için burada tanımlanmıştır. Bu yöntem geleneksel ekstraselüler kayıt teknikleri bir uyarlamasıdır ve sağlam zebrafish larvaları beyin aktivitesinin istikrarlı, uzun vadeli izleme için izin verir. Sbol kayıtları bir genetiği değiştirilmiş balık kaydedilen konvülsan ilaçlar ve spontan nöbetlerin banyo uygulaması ile oluşturulan akut nöbetler için gösterilmiştir.

Bir agar-gömülü zebrafish larvalarının ön beyin kaydedilen elektrografik nöbet gibi deşarj örnekleri Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. Veya 1 mM picrotoxin (B; 8 dpf); bu örneklerdeki Büyük genlikli çoklu başak patlama boşalma konvülsan ilacın banyo uygulaması, 40 mM pilokarpin (6 dpf&#39;e A) tarafından uyarılmış oldu. Bu kayıtlar içinde, immobilize ve agar-gömülü zebrafish sürekli 90 dk kadar izlenir. Balık kadar 24 saat için bu kayıt koşullarında canlı kalır. İlaçlar banyo ortamı ve 30-45 dakika içinde...

Larva zebrafish önbeyin ekstrasellüler alanın potansiyellerini kaydetmek için basit bir yöntem tarif edilmiştir. Yöntem, bir sağlam içerir<em&gt; In vivo</em&gt; Salt üzerinden aktivite nöbet gibi. Bu teknik, epilepsi ile ilişkili genlerin ya da konvülsan ilaçların verilmesi ile uyarılmış nöbetler taşıyan genetik olarak modifiye edilmiş zebrafish larvaları ile birlikte de kullanılabilir.

Larva Zebra balığı olarak önbeyin Elektrofizyolojik Kaydı

Epilepsy affects nearly 3 million people in the United States and up to 50 million people worldwide. Defined as the occurrence of spontaneous unprovoked ...

Bu prosedürün genel amacı, sağlam bir larva zebra balığının ön beyninden hücre dışı alan kayıtları elde etmektir. Bu, önce larva zebra balığının bir aros bloğunda hareketsiz hale getirilmesiyle gerçekleştirilir. Daha sonra, doğrudan görselleştirme altında ön beyne bir kayıt mikro elektrodu yerleştirilir.Son adım, ön beyin elektriksel aktivitesini kaydetmektir. Sonuç olarak, sonuçlar, bozulmamış zebra balığı larvalarında anormal elektrografik nöbet aktivitesini izlemek için kullanılabilir. Bu yöntem için ilk olarak, larva zebra balıklarında nöbetlerin ortaya çıkabileceğini göstermeye çalışırken aklıma geldi Zebra balığı yetiştiriciliği, daha önce açıklanan standart prosedürleri takip eder. Kısaca.Yetişkin zebra balıkları, bölücüler yerinde bulunan üreme tanklarına kurulur. Ertesi sabah odadaki ışıklar yandığında, bölücüler çıkarılır ve balıklara 20 ila 60 dakikalık kesintisiz çiftleşme süresi verilir. Yumurtalar daha sonra tanklardan toplanır, yumurta suyu ile bir Petri kabına aktarılır ve bir transfer pipeti ile döküntülerden arındırılır, şimdi yumurtaları bir kuluçka makinesine yerleştirin ve yaklaşık iki gün içinde yumurtalar çatlayacaktır.Yumurtadan çıktıktan sonra, corion'u ve diğer kalıntıları bir transfer pipeti ile temizleyin ve ardından larvaları istenen gelişimsel zaman noktasına ulaşana kadar kuluçka makinesine geri koyun. Hazırlık olarak, 1,2 milimetre dış çaplı bo silikat cam kılcal damarları bir mikro pipet çektirme kullanarak iğnelere çekin. İğneleri 150 milimetrelik bir Petri kabında macun rampaları üzerinde saklayın.Şimdi paketleyin, mikro elektrodu iki molar sodyum klorür çözeltisi ile yükleyin. Dört milimetrelik bir şırınga filtresi ve bağlı filamenti olan bir litrelik bir şırınga kullanarak, çok az kabarcık kalana veya hiç kabarcık kalmayana kadar bolusu iğne ucunun yanına hafifçe vurun. Yumurta suyunda taze bir %1.2 LMP agar çözeltisi hazırlayın ve 37 santigrat derece banyoda eritin.Ardından, uygun kayıt haznesi ile bir kapak fişi hazırlayın ve beş ila 10 dakika boyunca bir dondurucuya koyun. Bu örnekte, düşük profilli bir açık elmas banyosu görüntüleme odası kullanılır: temiz bir Petri kabı plakasına batırın, bir larva seabra'ya batırın, balıkları bir transfer pipeti kullanarak bir damla yumurta suyuna batırın. Daha sonra, anestezik ve felç edici bir ajan içeren bir damla çözelti içinde beş ila 10 dakika karıştırın.Zebra balığını hareket kaybı açısından izleyin. Ardından kapak fişini ve kayıt haznesini dondurucudan çıkarın. Stereo mikroskop tablasındaki odayı hazneye yerleştirin.Bir transfer pipeti kullanarak, suya balığa birkaç mililitre agros ekleyin ve bir mikro pipet ucu veya ince künt iğne kullanarak bunları karıştırın. Larvaları, balığın sırt kısmı agros durgun yüzeyine maruz kalacak şekilde konumlandırın. Agros sertleştikten sonra, larvalarla birlikte agro bloğunu bir elektrofizyoloji teçhizatı üzerine kurulmuş bir kayıt odasına aktarmak için düz bir spatula kullanın.Teçhizatta, kayıt odasına iki ila beş mililitre zebra balığı kayıt ortamı ekleyin. İlaç değişiklikleri gerekliyse, hazneyi dakikada yaklaşık bir mililitre hızında bir kayıt çözeltisi ile perfüze edin, oksijenasyon gerekmez. Ardından, üç boyutlu bir mikro manipülatör üzerine monte edilmiş amplifikatör kafası aşamasına bir mikro elektrot yerleştirin.Yüklendikten sonra, mikrom manipülatörünün iyi bir hareket ve ayar aralığına sahip olup olmadığını kontrol edin. Daha sonra mikro elektrot ucunu sahneden yüksekte mikroskobun görüş düzlemine getirin ve rota ayarını kullanarak zebra balığının başının hemen üstünde ve biraz önünde bir noktaya indirin. Mikro elektrot yerindeyken, amplifikatörü akım kelepçesi moduna getirin ve elektrodu görüş alanında sıfırlayın.Elektrot ucunu, ön beynin hafifçe önündeki zebra balığının yüzeyine değecek şekilde indirmek için rota ayarını kullanın. Daha sonra ince ayar adımı ile elektrot ucunu zebra balığının derisini delene kadar ilerletin. Delindikten sonra, mikro pipetin elektrodu ön beyne birkaç mikron ilerleterek yavaşça yerleşmesine izin verin.Şimdi elektriksel aktiviteyi kaydetmek için aScope yazılımını kullanın. Mevcut kelepçe modunda, 10 kilohertz örnekleme hızında veri alın. Balık, ilaçları uygulamak, iki ila beş mililitrelik hacimlerde eklemek ve ilaçların agar yoluyla zebra balığına yayılması için 30 ila 45 dakika beklemek için 24 saatlik kayıt için canlı kalır.Dört beyin. Statik bir banyo konfigürasyonu kabul edilebilir, bu da sürekli perfüzyonu gereksiz kılar. Bu yöntemler kullanılarak optik tumdan hücre dışı kayıtlar da elde edilebilir.Döllenmeden sekiz gün sonra ön beyinde elektrografik nöbet benzeri deşarjlar kaydedildi, zebra balığı larvaları, büyük genlikli multis spike patlamaları, konvülsan bir ilaç olan 40 milimolar pilokarpin banyosu uygulamasıyla iptal edildi. Benzer patlamalar konvülsan bir ilaçla üretildi. Ritoksin bir milimolar da uygulanır.Döllenmeden üç gün sonra genetiği değiştirilmiş bir zebra balığından spontan bir patlama akıntısı gözlendi. Bu hayvanda, bir ila iki hücre aşamasında morfo oligonükleotid enjeksiyonları, nöbetler ve otizm ile ilişkili pediatrik bir epilepsi formu olan tuberoskleroz kompleksi için bir genin ekspresyonunu yıkmak için kullanıldı. Doğru yapılırsa, bu prosedür 30 dakika veya daha kısa sürede tamamlanabilir.

forebrain-electrophysiological-recording-in-larval-zebrafish

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Protokol, yetişkin zebra balıklarında elektrofizyoloji gerçekleştirme prosedürünü açıklar. Bu yöntem, in vivo olarak nöral aktiviteyi ölçmek için kullanılabilir.

Yetişkin Zebra Balığı Elektrofizyolojisi: İn Vivo Nöronların Hücre Dışı Elektriksel Aktivitesini Ölçmek İçin Bir Yöntem

Bu video, felçli bir zebra balığı larvasındaki afferent nöronlardan gelen elektrik sinyallerinin, lateral hat ganglionunun yakınına bir mikropipet yerleştirerek ve sinyal yakalama için gevşek bir conta oluşturarak kaydedilmesini göstermektedir. Hücre dışı çözelti, bu işlem sırasında nöronal canlılığı korur.

İmmobilize Bir Zebra Balığı Larvasında Afferent Nöronlardan Gelen Elektrik Sinyallerinin İzlenmesi

Bu video, karmaşık nöral devreleri koruyan bir bütün beyin hazırlık, belirlenen tek nöronlardan elektriksel aktivite kayıt nasıl gösterecektir. Biz gonadotropin salgılatıcı hormon (GnRH) nöronlar genetik sağlam beyin hazırlanmasında tanımlama için bir floresan protein ile etiketlenmiş edildiği transgenik balık kullanabilirsiniz.

Transgenik Balık Sağlam Beyin Tespit Edilen nöronlar Elektrik Aktivitesi Kayıt

Bu çalışma, bir yetişkin zebra balığı, hareketsiz entübe ve kayıtları ve bozulmamış bir hayvanda nöral faaliyet işleme izin vermek için in vivo elektrofizyolojik deneyler için nasıl kullanılabileceğini açıklar.

Sağlam Yetişkin Zebra balığı Beyin Elektrofizyolojik Kayıt

Bu yazıda zebra balığı embriyolarının ve larva spinal nöronların elektrofizyolojik kayıtları için yöntemleri tarif eder. Hazırlık yerinde nöronları korur ve genellikle asgari diseksiyonu kapsar. Bu yöntemler, erken larva aşamalarında ilk elektrik uyarılma alımından spinal nöronların çeşitli elektrofizyolojik çalışmaları için izin verir.

Zebra balığı<em&gt; Situ</em&gt; Omurilik Omurilik duyusal ve motor nöronlar gelen Elektrofizyolojik Recordings Hazırlık

Burada, DEPDC5 geninin geçici inhibisyonundan kaynaklanan bir zebra balığı epilepsi modelinin geliştirilmesi ve karakterizasyonu için bir protokol sunuyoruz.

Zebra balığı epilepsi modelinde davranışsal ve fizyolojik analiz

Burada, larva Zebra balığı ışık çatışmaya electroretinogram tepkiler ölçüm kolaylaştırır bir iletişim kuralı mevcut. Bir roman koni şeklindeki sünger-uç elektrot larva Zebra balığı electroretinogram ERG güvenilir sonuçlar ve daha düşük maliyet ile elde etmek için daha kolay kullanılmasını görsel geliştirme çalışma yapmak yardımcı olabilir.

Larva A roman koni şeklindeki sünger-uç elektrot kullanarak Zebra balığı Electroretinogram kayıt

Burada zebra balığı embriyonik beynini larva ve çocuk evrelerine kadar in vivo olarak görüntüleyen bir yöntem sunuyoruz. Elektrofizyolojik yaklaşımlardan uyarlanan bu mikroinvaziv prosedür, olgun nöronun hücresel ve hücre altı ayrıntılarına erişim sağlar ve beyin fonksiyonu ve ilaç müdahalesini karakterize etmek için optogenetik ve nörofarmakolojik çalışmalarla birleştirilebilir.

Kafatası ve Deri Temizleme ile Uyanık Zebra Balığı Larvaları ve Yavrularında Tam Aktif Beyin Dokusunun In vivo Görüntülemesi

Burada, larva zebra balıklarının üç boyutlu floresan mikroskobu kullanılarak in vivo tüm beyin görüntülemesi için bir protokol sunulmaktadır. Deneysel prosedür numune hazırlama, görüntü toplama ve görselleştirmeyi içerir.

İn Vivo Üç Boyutlu Floresan Mikroskobu Kullanılarak Zebra Balığı Larvalarının Tüm Beyin Görüntülemesi

Burada, yetişkin zebra balıklarının dorsal ön beyninde iki fotonlu kalsiyum görüntüleme yapmak için bir protokol sunuyoruz.

Davranan Yetişkin Zebra Balıklarında Ön Beyin Aktivitesinin İki Fotonlu Kalsiyum Görüntülemesi

Burada, konfokal mikroskopi kullanarak GCaMP kalsiyum göstergelerini eksprese eden transgenik zebra balıklarının beyin bölgelerindeki nöral aktiviteyi incelemek için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz.

In vivo (İn canlı) Kısmen Kısıtlanmış Larva Zebra Balıklarında Duyusal Stimülasyonla İndüklenen Nöral Aktivitenin Konfokal Floresan Görüntülemesi

Öğrenin larval zebra balığı önbeyininde ekstraselüler alan potansiyelleri kaydetme yöntemini. Bu teknik, genetik modifiye edilmiş veya konvülzan ilaçlara maruz kalan balıklarda nöbet benzeri aktiviteyi izlemeyi sağlar.

Larva Zebra balığı olarak önbeyin Elektrofizyolojik Kaydı

Daha fazla video keşfet