Name: İlköğretim İnsan fibroblast Kültürler gelen naif Erişkin Kök Hücre İzolasyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 39 s
Description: Öğrenin, primer insan fibroblast kültürlerinden çok yönlü cilt kaynaklı öncü hücreleri izole etme yöntemini. Bu teknik kök hücre biyolojisi ve rejeneratif tıp araştırmalarında değerli uygulamalar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma Alexander von Humboldt Vakfı (5090371), Anti Araştırma ve Eğitim Christine Kühne Merkezi (CK-CARE) ve Bayerischen Staatsministerium (KD için) tarafından desteklenmiştir.

1. İlköğretim Fibroblast Kültürler gelen SKP İzolasyon <ol><li> Hücre bankaları veya doğrudan deri biyopsileri elde edilen ya da fibroblast fibroblast büyüme ortamı DMEM,% 15 fetal dana serumu, 2 mM glutamin, 10 mg / ml penisilin ve 10 mg / ml streptomisin ihtiva eden kültür içinde muhafaza edilir. </li></ol> İnsan fibroblast GMO3349C ve GMO8398A Tıbbi Araştırma Enstitüsü Coriell (Camden, NJ) &#39;den elde edildi ve bu çalışmada kullanılmıştır. <ol start="2"><li> Nüfus çiftleştirmeyi kültürlerinde (PPD) 20-35% 80 arasında bir katışma az SKP kültürler kullanılmıştır. Bir 10 cm doku kültürü çanak (BD Falcon) yaklaşık 1.5x10 6 hücre içerir. </li><li> 37 ° C&#39;de 1 saat boyunca 2 ml tripsin çözeltisi (% 0.25, Invitrogen) ° C PBS ile inkübe edilir ve hücreleri yıkayın </li><li> 5 ml PBS ile plaka hücreleri toplamak ve bir 15 ml Falcon tüpüne hücre süspansiyonu aktarın. </li><li> 24 saat boyunca 4 ° C&#39;de inkübe hücreleri. </li><li> DMEM-F12, 03:01 (v / v) ve 40 ng / ml &#39;FGF2 (BD Biosciences, 20 ng / ml EGF (BD Biosciences), B27 serumsuz takviyesi% 2 (Invitrogen), 1 ug oluşan SKP büyüme ortamı hazırlamak / ml Fungizone (Invitrogen) ve 25 mm / ml gentamisin (Invitrogen). </li><li> Pelet 5 dakika boyunca 1,200 rpm&#39;de hücreleri ve 4 ml SKP büyüme ortamı içinde, doğrudan hücre pelletini. 25 cm 2 doku kültürü şişesi (BD Falcon) için hücre süspansiyonu aktarın. </li><li> 37 ° C&#39;de inkübe edin ve şişeye 3-4 hafta boyunca günlük olarak küre oluşumu için kültür izler. </li></ol> 2. Küre Kültür Koşullar <ol><li> 37 ° C,% 5 CO 2 az 25 cm 2 şişesi (BD Falcon) Kültür hücreleri. </li><li> Şişenin dibine bağlı hücre önlemek için kuvvetli bir şekilde günlük olarak çalkalanır. Gerekirse, yapışık hücreleri ayırmak ve yeni bir balona kültür aktarmak için 2 ml steril pipet ile aşağı yukarı pipet ve. </li><li> İlk küre 3 t içinde oluşturmaya başlayabilirsinizo 4 gün. </li><li> Orta her 3 günde bir şişeye ve değişim yarım dibine küreler tortu izin. Büyüme faktörleri, aynı nihai konsantrasyonda tutmak için taze hazırlanmış SKP besiyerine 2X büyüme faktörleri ekleyin. </li><li> 4 ml maksimum hacmi sabit tutun. </li><li> Küreler ~ 200 mm boyutu ulaştığında onlar güçlü bir 2 ml pipet ile aşağı yukarı pipetleme ve daha küçük boyuta küreler parçalayarak geçişli olmalıdır. </li><li> Kültür adım 2.4) açıklandığı gibi yem iki 25 cm 2 matara (BD Falcon) ve küreler kültürler ayrılmıştır. </li><li> Küreler 21 gün 16 ile tarama kök hücre belirteçleri için toplanır. </li></ol> 2.6) ve 2.7) gelen prosedüre küre yayılma tarif (1) SKP orta dahil besin ve büyüme faktörleri her alanı içinde tüm hücreleri erişim sağlar ve (2) önce kullanım SKP küre kültür genişletin. Bizim cu altında genellikle Küre kültürLTURE şartlar, üç aylık bir süre boyunca büyüme kapasitesini korumak ve 3-4 kez arasında tatbik edilir. 3. Kök Hücre Markers için İmmünositokimya <ol><li> Küre kültürler gün 16 ile 21 PBS içinde hasat edilir. Kültürler 5 dakika boyunca 1000 rpm&#39;de pellet haline getirilir. </li><li> Küreler PBS küçük bir hacim içinde tekrar süspanse edilir. </li><li> Mikroskop slaytlar (Fisher marka) üzerinde çapı yaklaşık 0.5 mikron bir DAKO kalemle iki daire çizin. </li><li> Daire içine küre süspansiyonu 50 ul ekleyin. </li><li> Her damla küreler varlığı için ışık mikroskobu ile kontrol edin. </li><li> Başlık altında damla kurumasını bekleyin. </li><li> Ya -80 ° C&#39;de slaytlar dondurmak veya Immunoflorans boyama protokolü ile devam edin. </li><li> Immünofloresan boyama için, 10 dakika boyunca -20 ° C&#39;de önceden soğutulmuş metanol (% 100) ile slaytlar düzeltmek. </li><li> PBS ile slaytlar yıkayın. </li><li> PBS/10% Fetal sığır serumu / 0.02% Triton X100 ile slaytlar Bloken az 1 saat boyunca kanştınldı. </li><li> PBS/10% 4, 2 saat oda sıcaklığında veya gece boyunca FBS ° C: tampon engelleme seyreltilmiş birincil antikor (örneğin, bir anti-Nestin, anti-Oct4, anti-TG30, anti-Nanog antikorlar, Tablo 3) ile inkübe </li><li> Tampon engelleme ile 3 kez yıkanır ve oda sıcaklığında 1 saat boyunca sekonder antikor ile inkübe edin. </li><li> PBS ile 3 kez tampon ve engelleme ile 3 kez yıkanır. </li><li> Vectashield montaj orta (Vektör Inc) ile montaj slaytlar. </li><li> Mikroskobi ile kök hücre belirteçleri ifade örnekleri analiz edin. </li></ol> 4. Kök Hücre belirteçlerinin İfade Düzeylerinin gerçek zamanlı PCR Analizi <ol><li> 21 gün 18 yaklaşık 2-3 ml Küre kültürleri alın. </li><li> Pelet 5 dakika boyunca 1.200 rpm&#39;de küreler ve tüm orta aspire. </li><li> RNeasy Minikit (Qiagen, Valencia, CA) kullanılarak kürelerden RNA izole edin. </li><li> Spektrometresi ve agaroz jel RNA saflık değerlendirin. &lt;/ Li&gt; <li> Şablon olarak toplam hücresel RNA kullanarak (Omniscript Reverse Transcriptase (Qiagen)) cDNA sentez. </li><li> 20 ul her bir primerden 375 nM ve 50 ng şablon bir konsantrasyon ile bir güç SYBR Green PCR master (Applied Biosystems) kök hücre işaretleyicileri (Tablo 1 &#39;de gösterildiği gibi) için gerçek zamanlı PCR kullanılarak primerleri ile kök hücre belirteçleri doğrulamak reaksiyon hacmi. GAPDH endojen kontrol olarak kullanılır. </li><li> Amplifikasyon 20 saniye boyunca 5 saniye 60 ° C 95 ° C&#39;de 40 döngü, ardından 2.5 dakika boyunca 95 ° C&#39;de bir ilk denatürasyon ° C kullanın. </li><li> 2 (ΔΔCt) yöntemi 8 ile çalışma analiz edin. </li></ol> 5. Düz Kas Hücreleri içine Yönetmen Farklılaşma <ol><li> 21. gün ile 26 küreler SKP ortam içinde 6 bölümlü kültür tabaklarında (BD Falcon) içine ekildi. </li><li> Hücreler, 72 saat boyunca ortam içinde SKP kürelerden yapışır ve büyümek için izin verildi. </li><li> Düz kas hücreleri (SMC&#39;lere) diferansiyeiyon% 5 FBS, 5 ng / ml PDGF-BB (Invitrogen) ve 2.5 ng / ml TGF-B1 (Invitrogen) içeren yüksek glukoz Dulbecco&#39;nun modifiye Eagle ortamında (Invitrogen) &#39;dan oluşan SMC farklılaşma ortamı ile orta değiştirilmesi tarafından başlatılan başladı . </li><li> Orta kültürlerde 3-4 haftalık bir süre boyunca taze hazırlanmış SMC farklılaşma ortamı ile her 3 günde bir değiştirildi. </li><li> SMC işaretleri için tarama immünohistokimya ile 3-4 hafta sonra gerçekleştirilmiştir. </li><li> Hücreler, 10 dakika boyunca PBS içinde% 4 paraformaldehid solüsyonu ile tespit edilmiştir. </li><li> Hücreler PBS 30 dakika için% 0.3 Triton X-100 ihtiva eden permeabilize edilmiştir. </li><li> Hücreler, oda sıcaklığında 1 saat ve daha fazla olarak 3.15) 3.12 &#39;de açıklandığı gibi işlenmiş) için αSMA (MO851, Dako, 1:100) veya calponin (M3556, Dako, 1:100) karşı antikorlar ile inkübe edildi. </li></ol>

<ol><li>Jahoda, C. A., Whitehouse, J., Reynolds, A. J., Hole, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hair+follicle+dermal+cells+differentiate+into+adipogenic+and+osteogenic+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Hair follicle dermal cells differentiate into adipogenic and osteogenic lineages.</a> Exp. Dermatol. 12, 849(2003).</li>
<li>Watt, F. M., Celso, L. o, C,, Silva-Vargas, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+stem+cells%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Genet.+Dev%22%5BJournal%5D)">Epidermal stem cells: an update.</a> Curr. Opin. Genet. Dev. 16, 518(2006).</li>
<li>Blanpain, C., Horsley, V., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+stem+cells%3A+turning+over+new+leaves%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Epithelial stem cells: turning over new leaves.</a> Cell. 128, 445(2007).</li>
<li>Hunt, D. P., Jahoda, C., Chandran, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+skin-derived+precursors%3A+from+biology+to+clinical+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Vurr.+Opin.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Multipotent skin-derived precursors: from biology to clinical translation.</a> Vurr. Opin. Biotechnol. 20, 522(2009).</li>
<li>Toma, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+multipotent+adult+stem+cells+from+the+dermis+of+mammalian+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of multipotent adult stem cells from the dermis of mammalian skin.</a> Nat. Cell Biol. 3, 778(2001).</li>
<li>Fernandes, K. J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dermal+niche+for+multipotent+adult+skin-derived+precursor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A dermal niche for multipotent adult skin-derived precursor cells.</a> Nat. Cell Biol. 6, 1082(2004).</li>
<li>Wenzel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Na%C3%AFve+adult+stem+cells+from+patients+with+Hutchinson-Gilford+progeria+syndrome+express+low+levels+of+progerin+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Bio.+Open%22%5BJournal%5D)">Naïve adult stem cells from patients with Hutchinson-Gilford progeria syndrome express low levels of progerin in vivo.</a> Bio. Open. 1, (2012).</li>
<li>Livak, K. J., Schmittgen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+relative+gene+expression+data+using+real-time+quantitative+PCR+and+the+2%28-Delta+Delta+C%28T%29%29+Method%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method.</a> Methods. 25, 402(2001).</li>
<li>Biernaskie, J. A., McKenzie, I. A., Toma, J. T., Miller, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+skin-derived+precursors+%28SKPs%29+and+differentiation+and+enrichment+of+their+Schwann+cell+progeny%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocol%22%5BJournal%5D)">Isolation of skin-derived precursors (SKPs) and differentiation and enrichment of their Schwann cell progeny.</a> Nature Protocol. 1, 2803(2006).</li>
<li>Toma, J. G., McKenzie, I., Bagli, D., Miller, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+multipotent+skin-derived+precursors+from+human+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of multipotent skin-derived precursors from human skin.</a> Stem Cells. 23, 727(2005).</li>
<li>Fernandes, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+neurogenic+potential+of+multipotent+skin-derived+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Analysis of the neurogenic potential of multipotent skin-derived precursors.</a> Electrophoresis. 201, 32(2006).</li>
<li>Hill, lK. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cell-derived+vascular+progenitor+cells+capable+of+endothelial+and+smooth+muscle+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Hematol%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cell-derived vascular progenitor cells capable of endothelial and smooth muscle cell function.</a> Exp. Hematol. 38, 246(2010).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Bu tarifnamede anlatılan yöntem kullanılarak, naif dermal kök hücrelerin, birincil deri fibroblast izole edilebilir. Bu yaklaşımı kullanarak, son zamanlarda nadir görülen genetik bir sendrom, Hutchinson-Gilford progeria sendromu 7 hastalarda elde edilen fibroblast kültürlerden erişkin kök hücrelerin izolasyonu ve karakterizasyonu rapor. Gibi bu öncü hücreler ifade kök hücre belirteçleri kendini yenileme yeteneğine sahiptir ve (lütfen Wenzel ve ark. Tarafından 4 bkz., 2012) fibroblast...

<table><tbody><tr><td>DMEM yüksek glikoz</td><td>Invitrogen</td><td>31966-047</td><td></td></tr><tr><td>DMEM düşük glukoz</td><td>Invitrogen</td><td>21885-108</td><td></td></tr><tr><td>fetal sığır serumu</td><td>Invitrogen</td><td>10270-106</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamin</td><td>Invitrogen</td><td>25030-024</td><td>Son sonuç: 200 mM</td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin</td><td>İnvitrogen</td><td>15140-122</td><td>Son konsantrasyon: 10 mg / ml / 10 mg / ml</td></tr><tr><td>tripsin çözeltisi (% 0.25)</td><td>Invitrogen</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>F-12 Besin Karışımı (Jambon)</td><td>Invitrogen</td><td>21765-029</td><td></td></tr><tr><td>FGF2</td><td>BD Biosciences</td><td>4114-TC-01M</td><td>Son konsantrasyon: 40 ng/ml</td></tr><tr><td>EGF</td><td>BD Biosciences</td><td>236-EG-200</td><td>Son konsantrasyon: 20 ng/ml</td></tr><tr><td>PDGFBB</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>PHG0043 Son konsantrasyon: 5 ng/ml</td></tr><tr><td>TGF-b1</td><td>Invitrogen</td><td>PHG9204</td><td>Son konsantrasyon: 2,5 ng/ml</td></tr><tr><td>25 cm2 şişesi</td><td>Omnilab</td><td>FALC353109</td><td></td></tr><tr><td>CaMg</td><td>Invitrogen</td><td>14190-169</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Invitrogen</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Roth</td><td>8388.2</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield montaj ortamı</td><td>Vector Inc.</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy Minikit</td><td>Qiagen, Valencia, CA</td><td>74104</td><td></td></tr><tr><td>Omniscript Ters Transkriptaz</td><td>Qiagen</td><td>205113</td><td></td></tr><tr><td>SsoFast EvaGreen Supermix</td><td>BioRad</td><td>172-5201</td><td></td></tr><tr><td>Fungizone</td><td>Invitrogen</td><td>15290-018</td><td>Son konsantrasyon: 1 mg / ml</td></tr> <tr>< td colspan = "4 ">< güçlü> Tablo 2. Spesifik reaktifler ve ekipmanlar.</td></tr></tbody></table>

İlköğretim İnsan fibroblast kültürler gelen naif erişkin kök hücre İzolasyon

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

Son on yılda, birçok yetişkin kök hücre popülasyonlarının insan derisi 1-4 tespit edilmiştir. Multipotent yetişkin dermal öncüleri izolasyonu ilk Miller F. D laboratuarı 5, 6 tarafından bildirildi. Bu ilk çalışmalar yetişkin memeli dermis 5 Bir multipotent öncül hücre popülasyonu nitelendirdi. Bu hücreler - adlandırılan SKPS, cilt kaynaklı öncüleri için - izole ve kemirgen ve insan derisi genişletilmiş ve bu nöronlar 5 gibi deride bulmadım hücre tipleri de dahil olmak üzere sinir ve mezodermal hem döl, içine ayırt edildi. Kültür SKPS üzerinde immünositokimyasal çalışmalar hücre fibronektin ve multipotent kök hücre işaretleyicileri 6 ek olarak vimentin ve Nestin, sinir ve kas öncüleri olarak ifade bir ara filaman proteini ifade olduğunu ortaya koymuştur. Şimdiye kadar, yetişkin kök hücreleri nüfus SKPS yeni toplanmış memeli biyopsi izole edilmiştir. ve_content &quot;&gt; Son zamanlarda, kurulan ve cilt elde öncü hücreler nüfusu biyopsi 7 kurulan primer fibroblast kültürlerinde mevcut kalabileceklerini bildirdi. birkaç somatik kök hücreleri erken nüfus çiftlenmeler birincil fibroblast kültürlerinde ikamet olabilir varsayım oldu Aşağıdaki gözlemlerine dayanarak: (1) SKPS ve primer fibroblast kültürleri dermis türetilmiştir ve SKP hücrelerin bu nedenle az sayıda birincil dermal fibroblast kültürlerinde mevcut kalamayacağını ve (2) primer fibroblast kültürleri olmuştur dondurulmuş alikotları büyüdü 7 yaşayabilecek durumda kalır küçük bir hücre sayısı bulunan depolama ve nakil sırasında uygun olmayan bir sıcaklığa maruz. Bu nadir hücreleri birkaç kez genişletmek ve geçişli olabilir başardık. Bu gözlem, önerilen, yüksek proliferasyon gücü ve strese karşı direnci olan küçük bir hücre sayısı insan fibroblast kültürlerinde 7 mevcuttu. Biz dünya çapında doku bankaları (Şekil 1) temin edilebilir primer fibroblast kültürlerden yetişkin kök hücrelerin hızlı izolasyonu için bir protokol oluşturmak için bu bulguların yararlandı. Deri örnekleri erişilemez zaman fibroblast kültürleri içinde moleküler nadir genetik hastalıkların altında yatan mekanizmaların yanı sıra modelleme hastalıkları incelemek için yeni fırsatlar açılması, böylece, doku bankalardan bulunabilir ederken öncü hücrelerin izolasyonu sağlayan bu yöntem önemli bir öneme sahip çanak.

Biz son 7 raporlanan seçici EGF ve FGF2 oluşan kontrollü büyüme koşul altında SKP küreler oluşturmak için genişletmek hücre populasyonunun birincil dermal fibroblast kültürleri (Şekil 1) mevcut olduğunu göstermektedir. Tipik olarak hücre bankaları temin primer fibroblastlar suşları uygun PPD 15 ile 25 fibroblast bu çalışmada kullanılmıştır. Bu yöntem, anlatılan 24 saat süre ile yiyecek tüketimi ile birlikte soğuk tedavi oluşan çift işleme tabi fibroblast olarak be...

Birincil insan fibroblast ikinci naif multipotent ten türetilmiş öncü (SKP) hücreleri izole etmek için bir yöntem sunulmaktadır. Biz fibroblast kültürleri elde edilen bu SKPS insan deri biyopsisi doğrudan elde benzeyen kök hücre özelliklerini paylaşmak olduğunu göstermektedir. Bu hücreler, örneğin Oct4 ve Nanog olarak multipotent işaretleri ek olarak nöral tepe işaretleyici, Nestin, ifade eder.

İlköğretim İnsan fibroblast Kültürler gelen naif Erişkin Kök Hücre İzolasyon

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Bu prosedürün genel amacı, primer insan fibroblast kültürlerinden naif multipotent, cilt kaynaklı öncül hücreleri izole etmektir. İlk olarak, primer bir fibroblast kültürü oluşturun ve sıcaklık değişimleri ile besin tükenmesi gibi stres koşullarına karşı dirençlerine dayanarak naif cilt kaynaklı öncül hücreleri seçin. Ardından, hücreleri kontrollü büyüme koşulları altında sferler oluşturacak şekilde kültüre edin; sfer kültürlerini birkaç hafta boyunca büyütmeye ve genişletmeye devam ederek bu öncül hücrelerin erişkin kök hücrelerle benzer özellikler taşıdığını kanıtlayın.Nihayetinde, SKP hücreleri düz kas hücrelerine farklılaşmaya yönlendirilebilir. Bu yönteme dair fikri ilk kez, saklama veya nakliye sırasındaki sıcaklık değişimleri nedeniyle stres yaşayan primer fibroblast yapılarının dondurulmuş OT'lerinde birkaç hücrenin ilerleme yeteneğini koruduğunu gözlemlediğimde edindim. Bu durum, az sayıda hücrenin strese karşı dirençli olduğunu ve prosedürün uygun olacağını gösteren dermal kök hücreler olabileceğini düşündürdü.Laboratuvarımdaki, insan fibroblast kültürlerinden SKP izolasyon yönteminin geliştirilmesinde yer alan bir lisansüstü öğrencisi tarafından; SKP izolasyon kültürü iç

nave-adult-stem-cells-isolation-from-primary-human-fibroblast-cultures

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu makalede, izolasyon ve bakım, cilt ve akciğer dokusunda yaban kemirgenler birincil fibroblast kültürlerinin için bir protokol tanımlamaktadır.

Kemirgenler itibaren İlköğretim Yetişkin Fibroblast Kültürleri kurulması

Insan derisi canlı yetişkin epitelyal kök hücreleri izole bir hızlı, sağlam bir şekilde açıklanmıştır. Bu yöntem cilt kollajen matriks enzimatik sindirim, saç folikülleri ve hücre kültürü için, tek bir hücre süspansiyonları ya da doku parçalarının izolasyonu koparma kullanır.

İnsan Cilt Yetişkin Epitel Kök Hücre İzolasyonu ve Kültür

Bu makale, insan saç köklerinin gelen nöral krest kök hücrelerin izolasyonu ve kültür için sağlam bir protokol sunar.

İnsan Saç köklerinin arasından Sinir Crest Kök Hücre İzolasyonu ve Kültür

Geçiş kültürlere besleyici-özgür koşullarda devam eden çabalarına rağmen, insan embriyonik kök hücreleri (hESC) ve türetme ve kültürü fare embriyonik besleyiciler (MEFS) ile işbirliği kültürler büyük oranda bağımlı kalır. Burada, biz hızla öncesi deneylere hESC kültürlerden besleyiciler kaldırmak için yeni bir metodoloji göstermektedir.

Yüksek Yoğunluklu İnsan Embriyonik Kök Hücre Kültürleri gelen Rapid Fibroblast Kaldırma

Bu video, yetişkin insan fibroblastlarından türetilen indüklenmiş nöral progenitör hücreleri (iNPC'ler) izole etmek için bir tekniği göstermektedir. iNPC kolonilerinin izole edilmesi ve iNPC popülasyonunun sürekli çoğalmasını ve genişlemesini kolaylaştıran uygun kültür ortamının varlığında laminin kaplı çok kuyulu plaka kuyularında kültürlenmesi ile ilgili adımları ana hatlarıyla belirtir.

Yetişkin İnsan Fibroblastlarından Türetilen İndüklenmiş Nöral Progenitör Hücre Kolonilerinin İzole Edilmesi

Uyarılmış pluripotent kök hücrelerin üretilmesi otolog nakli türetilmesi için ilginç umutları sağlar. Ancak, pluripotent devlet ve zahmetli yeniden farklılaşma yoluyla ilerleme hala klinik çeviri engellemektedir. Burada erişkin insan fibroblast türetme ve uyarılmış nöral progenitör hücrelerin içine doğrudan dönüşüm ve nöral soy içine sonradan farklılaşmayı açıklar.

Yetişkin İnsan Fibroblastları türetilmesi ve Genişletilebilir Sinir Progenitör Hücreler içine Doğrudan Dönüşüm

Fibroblast davranışı, bir klinik antite spektrumunun temelini oluşturur, ancak büyük ölçüde doğal heterojenlikleri nedeniyle zayıf karakterize edilirler. Geleneksel fibroblast araştırmaları, in vivo fibroblast davranışını maskeleyen in vitro manipülasyona dayanır. Hücre kültürü gerektirmeyen fare derisi fibroblastlarının izolasyonu için FACS tabanlı bir protokol tanımladık.

FACS ile Murin Dermal fibroblast İzolasyonu

İnsan kaynaklı pluripotent stem (hiPS) hücrelerinin sağlam türetilmesi, entegre edilmeyen Sendai virüsü (SeV) vektörü aracılığıyla dermal fibroblastların yeniden programlanması kullanılarak gerçekleştirilmiştir. HiPS hücre bakımı ve klonal genişleme, rekombinant insan lamınin 521 (LN-521) matrisi ve Esansiyel E8 (E8) Ortamı ile kseno içermeyen ve kimyasal olarak tanımlanmış kültür koşulları kullanılarak gerçekleştirildi.

Laminin 521 Matrisini Kullanarak İnsan Tarafından Oluşturulan Pluripotent Kök Hücrelerin Entegrasyon Serbest Türevi

Burada biz insan birincil fibroblastlar değiştirilmiş mRNA'ların programlama faktörler kodlama kullanarak indüklenmiş pluripotent kök hücre yeniden programlamak için klinik, yüksek verimli, besleyici-Alerjik bir yöntemi açıklamak ve olgun mikroRNA-367/302 taklit eder. Ayrıca programlama verimlilik, değerlendirmek için yöntem klonal IPSC kolonileri genişletin ve pluripotency işaretin TRA-1-60 ifade onaylamak bulunmaktadır.

RNA tabanlı insan birincil fibroblastlar indüklenmiş Pluripotent kök hücre yeniden programlama

Birincil erişkin fibroblastları, yeni başlayanlar tarafından (örn. öğrenciler) kolay, hızlı ve güvenilir bir şekilde ayırmak için bir protokol sunuyoruz. Prosedür primer fibroblastlar elde etmek için enzimatik doku sindirim ve ultrasonik dalgalar ile mekanik ajitasyon birleştirir. Protokol, belirli deneysel gereksinimlere (örn. insan dokusu) kolayca adapte edilebilir.

Ultrasonik-Augmented primer yetişkin fibroblast yalıtım

Hücre yeniden programlama, pluripotent hücre durumunu düzenleyen ve koruyan anahtar genlerin tanıtılmasını gerektirir. Açıklanan protokol, insan dermal fibroblastlarından viral/entegre yöntemler olmadan ancak modifiye edilmeyen RNA'lar (NM-RNA) kullanarak hücresel savunma mekanizmalarını azaltan immün kaçırma faktörleri ile birlikte indüklenen pluripotent kök hücrelerin (iPSCs) kolonilerinin oluşmasını sağlar.

Erişkin İnsan Dermal Fibroblastlarının Abdominal Deriden İzolasyon ve İndüklenen Pluripotent Kök Hücrelerin Indüklenen Alacalı Kök Hücrelerin Indükleyici Olmayan Yöntemle Üretilmesi

Öğrenin, primer insan fibroblast kültürlerinden çok yönlü cilt kaynaklı öncü hücreleri izole etme yöntemini. Bu teknik kök hücre biyolojisi ve rejeneratif tıp araştırmalarında değerli uygulamalar sunar.

İlköğretim İnsan fibroblast Kültürler gelen naif Erişkin Kök Hücre İzolasyon

Daha fazla video keşfet