Name: Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 15 s
Description: Öğrenin sıçanlarda inme modellerinde serebral perfüzyon izleme için optimize edilmiş lazer Doppler sistemi. Bu yöntem, çok bölgeli kan akışı ölçümü ve serebral hemodinamiği değerlendirmek için güvenilir bir yaklaşım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz video üretimi ona yardım için voice-over ve Bayan Elena Pirovano için Bayan Caroline Robertson ederim. Bu çalışma, Milano Bicocca Üniversitesi, &quot;Fondo di Ateneo 2011&quot; tarafından desteklendi.

1. Prob Tutucu (Tek Site veya Multi-site) nasil yapilir <ol><li> Gerekli malzemeler, doğal kauçuk, küçük plastik borular ve bir metal stileyi vardır. Prob tutucu hayvanın boyutu, Lazer Doppler probların sayısı ve boyutu ve izlenmesi gerekir serebral vasküler topraklarına özelleştirilebilir. </li><li> Ihtiyaç duyulan boyut (yaklaşık 10 mm bir sıçan için, 300 g x 10 mm), doğal kauçuk kesin. </li><li> İstenen stereotaksik koordinatlar göre, sondanın (ler) ve doğal kauçuk bregma bir şekilde işaretleyin; orta serebral arter oklüzyonu, iskemik çekirdek için tipik koordinatlar bregma -1 mm ile 5 mm yanal beklenir midline; periferik iskemik borderzone bölge için, beklenen koordinatlar bregma +2 mm, orta hat için lateral 2 mm olabilir. </li><li> Çok net bir X bregma yerini işaretleyin, bu kafatası için prob tutucu bağlamak için bir dönüm noktası olduğunu. &lt;/ Li&gt; <li> Küçük bir plastik tüp (boyutu prob boyutuna eşit olması gerekir) içine stile yerleştirin. </li><li> Sonda yerleştirilmelidir noktada doğal kauçuk içine stileyi yerleştirin; plastik boru da lastik içine sokulduğu kadar lastik içine itmek stileyi. </li><li> Stile çekin. </li><li> Birden probları gerekiyorsa, tekrar diğer prob pozisyonlar için 1.5-1.7 adımları. </li><li> Birden problar için Opsiyonel: probları daha iyi bir istikrar sağlamak amacıyla plastik tüpler etrafında bir bant sarın. </li><li> İsteğe bağlı: gelecekteki kullanımlar için çeşitli prob yuvaları kimyasal sterilizasyon gerçekleştirin. </li></ol> 2. Preoperatif Hazırlık <ol><li> MCAO inme modeli genellikle sağkalım cerrahi olarak yapılır. Bu durumda, hem bizim video gösterildiği (yaşam süresi 24 saat sonrası ameliyat), cerrah steril alet ve malzemeleri ile aseptik bir teknik kullanır. </li><li> Izofluran ile anestetize sıçan (% 3 simültanen faz,% 1.5 bakım). </li><li> Ameliyat masasında yüzüstü sıçan yerleştirin. </li><li> Yavaşça sıçan tıraş. </li><li> Bir gazlı bez antiseptik bir solüsyon uygulayın ve cildin dezenfekte edin. </li><li> % 2 Lidokain uygulayınız 5 subkutan kranialinde mg / kg. </li></ol> 3. Prob yerleştirme ve bozulmamış Kafatası üzerinde Güvenliğini <ol><li> Sağ paramedian cilt kesisi (sağ MCAO için) yapın ve kraniyal fasya (galea aponeurotica) ulaşmak için subkutan doku teşrih. </li><li> Kranial fasyaya sağ paramedian kesi yapın ve kafatası kemiği ulaşmak için künt diseksiyon; prob tutucu uygulaması için yeterince büyük bir kafatası kemiği alanı hazırlamak. </li><li> Lütfen dikkat: sondaj veya kemik incelmesi gerek. </li><li> Kafatası yüzeyi dezenfekte ve kurumaya Merbromin çözümü uygulayın. </li><li> Kafatası yüzeyinde kuruma hızlandırmak için bir saç kurutma makinesi (soğuk hava için ayarlanmış) kullanın. </li&gt; <li> Bu noktada, kranial sütürler ve bregma açıkça görülebilir. </li><li> Steril makasla kenarları keserek prob tutucu özelleştirin. </li><li> Dikkatle plastik tüplerin alt açılış (lütfen kaçınarak, prob tutucu altındaki yüzeye cerrahi yapıştırıcı küçük bir miktar (veteriner onaylı, Siyanoakrilat) Uygula: tutkal önemli miktarda optik prob yüzeyi arasındaki kalırsa kafatası, bu) bir düşük sinyal üretebilir ve çoklu kullanımdan sonra probun zarar verebilir. </li><li> Dikkatle X işareti ile bregma eşleşen, kafatası yüzeyinde prob tutucu uygulayın. Prob tutucu üzerinde hafif basınç uygulayın. </li><li> Cerrahi yapıştırıcı kurutma hızlandırmak için bir saç kurutma makinesi (soğuk hava için ayarlanmış) kullanın. </li><li> Prob tutucu ve hayvanın başının etrafında bir ameliyat ipliği bağlayarak prob tutucu sabitleyin; mandibula üzerinde cerrahi diş konumlandırmak için dikkatli olun, submandibular bölge ve inci kaçınarake boyun. </li><li> İsteğe bağlı: Bir optik jel (ortak bir ultrason veya elektrokardiyografi jel gibi) ile prob tutucu plastik tüp (ler) doldurun, bu LD sinyalin kalitesini artıracaktır. </li><li> Prob tutucu içinde sonda (s) yerleştirin ve LD debimetrenin gerçek okuma kontrol edin. Üreticinin talimatlarına göre LD debimetre kullanın. </li><li> Submandibular bölge ve boyun kaçınarak, mandibula üzerinde cerrahi diş konumlandırmak için dikkatli olun; hayvanın başının etrafında onları bağlıyor prob (lar) sabitleyin. </li></ol> 4. MCAO Serebral Perfüzyon İzleme <ol><li> Dikkatli bir sonda (ler) i ya da prob tutucu üzerinde çekiş kuvvetleri kaçınarak, yatar pozisyonda sıçan yerleştirin. </li><li> MCAO sırasında serebral perfüzyon izleme başlayın. </li></ol> 5. Prob Temizleme (lar) ve Prob Tutucu <ol><li> Sonda (s), prob tutucu ve hayvanın başı çevresinde dikişler kesin. </li><li> Yavaşça prob tutucu doğal kauçuk tabanı etrafında kraniyal yumuşak doku ve cildi teşrih künt. </li><li> Prob tutucu çıkarın. </li><li> Kafatası yüzeyi bir antiseptik solüsyon uygulayın. </li><li> Kranial cilt dikin. </li></ol> 6. Post-operatif Bakım <ol><li> Subkutan dehidratasyonu önlemek ve gaz anestezi durdurduktan sonra bir ısıtma pedi kullanarak hayvan sıcak tutmak için salin solüsyonu 2.5 ml uygulayın. </li><li> Sağkalım cerrahi için: subkutan Ketoprofen 4 mg / kg ile preemptif analjezi sağlamak ve 12 saat ameliyat sonrası aynı doz tekrarlanmalıdır </li><li> Bizim deneysel koşullar altında, ötenazi CO 2 inhalasyon ile 24 saat sonrası ameliyat yapıldı. </li></ol>

<ol><li>Sutherland, B. A., Papadakis, M., Chen, R. L., Buchan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+blood+flow+alteration+in+neuroprotection+following+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cerebral blood flow alteration in neuroprotection following cerebral ischemia.</a> J. Physiol. 589, 4105-4114 (2011).</li>
<li>Prinz, V., Endres, M. Chapter 3 Modeling focal cerebral ischemia in rodents: Introduction and overview. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPrinz%2C+V+%22Rodent+models+of+stroke%22">Rodent models of stroke</a>. Dirnagl, U. , Human Press. (2010).</li>
<li>Schmid-Elsaesser, R., Zausinger, S., Hungerhuber, E., Baethmann, A., Reulen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+reevaluation+of+the+intraluminal+thread+model+of+focal+cerebral+ischemia%3A+evidence+of+inadvertent+premature+reperfusion+and+subarachnoid+hemorrhage+in+rats+by+laser-Doppler+flowmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">A critical reevaluation of the intraluminal thread model of focal cerebral ischemia: evidence of inadvertent premature reperfusion and subarachnoid hemorrhage in rats by laser-Doppler flowmetry.</a> Stroke. 29, 2162-2170 (1998).</li>
<li>Riva, M., Pappadà, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemodynamic+monitoring+of+intracranial+collateral+flow+predicts+tissue+and+functional+outcome+in+experimental+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Hemodynamic monitoring of intracranial collateral flow predicts tissue and functional outcome in experimental ischemic stroke.</a> Exp. Neurol. 233, 815-820 (2012).</li>
<li>Menon, B. K., Smith, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+leptomeningeal+score+on+CT+angiography+predicts+clinical+and+imaging+outcomes+in+patients+with+acute+anterior+circulation+occlusions%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Neuroradiol%22%5BJournal%5D)">Regional leptomeningeal score on CT angiography predicts clinical and imaging outcomes in patients with acute anterior circulation occlusions.</a> Am. J. Neuroradiol. 32, 1640-1645 (2011).</li>
<li>Bang, O. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collateral+flow+predicts+response+to+endovascular+therapy+for+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Collateral flow predicts response to endovascular therapy for acute ischemic stroke.</a> Stroke. 42, 693-699 (2011).</li>
<li>Shuaib, A., Butcher, K., Mohammad, A. A., Saqqur, M., Liebeskind, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collateral+blood+vessels+in+acute+ischaemic+stroke%3A+a+potential+therapeutic+target%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Collateral blood vessels in acute ischaemic stroke: a potential therapeutic target.</a> Lancet Neurol. 10, 909-921 (2011).</li>
<li>Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+Stroke+Model+Guidelines+for+preclinical+stroke+trials+%281st+edition%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Stroke+Transl.+Med%22%5BJournal%5D)">Rodent Stroke Model Guidelines for preclinical stroke trials (1st edition).</a> J. Exp. Stroke Transl. Med. 2, 2-27 (2009).</li>
<li>Shepherd, A. P., Öberg, P. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShepherd%2C+AP+%22Laser-Doppler+Blood+Flowmetry%22">Laser-Doppler Blood Flowmetry</a>. , Kluwer Academic Publishers. (1990).</li>
<li>Uluç, K., Miranpuri, A., Kujoth, G. C., Aktüre, E., Başkaya, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+Cerebral+Ischemia+Model+by+Endovascular+Suture+Occlusion+of+the+Middle+Cerebral+Artery+in+the+Rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat.</a> J. Vis. Exp. (48), e1978(2011).</li>
<li>Garcia, J. H., Wagner, S., Liu, K. F., Hu, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurological+deficit+and+extent+of+neuronal+necrosis+attributable+to+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats.+Statistical+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Neurological deficit and extent of neuronal necrosis attributable to middle cerebral artery occlusion in rats. Statistical validation.</a> Stroke. 26, 627-634 (1995).</li>
</ol>

Bu video-makale üretim için finansman bizim deneysel çalışmada gösterilmiştir Lazer Doppler aletleri üreten Moor Aletleri Ltd (Axminster, Devon, İngiltere), tarafından sağlanmıştır. Deneysel protokol (2010/63/EU laboratuar hayvanlarının kullanımı (DL 116/1992) ile ilgili ulusal kurallar uyarınca ve hayvan deneyleri için Avrupa Birliği Direktifi, Milano Bicocca Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylanmıştır ), İtalyan Sağlık Bakanlığı, proje lisans (n. 219/2011-B) altında.

Biz in-house bir veya MCAO prosedürü sırasında farelerin sağlam kafatasına birden (derin penetrasyon) ikiz fiber LD problar güvenli bir bağlanma için basit ve düşük maliyetli bir sistem geliştirdi. Düzgün bir sinyal algılama ve serebral perfüzyon başarılı bir izleme için ön koşuldur yana görünüşte önemsiz bir sorun olsa, kafatasına LD prob güvenilir bir eki almak, aslında bu deneysel ortamda önemli bir konudur. Böyle burr hole ve kemik vidaları gibi invazif işlemler, genellikle cerrahi süresini uzatmak ve kraniotomi ile ilgili daha fazla deneysel değişkenlerin tanıtmak ve bu araştırmacıların cesaretini ve LD izleme kullanarak onları kaçınabilir. Öte yandan, tek bir fiber kullanımı (düşük penetrasyon) kafatasının yüzeyine direkt olarak yapıştırılmış olması daha ince ve göreceli olarak kolay olan sondalar, düşük kalitede bir sinyal verir ve kafatası delme veya inceltme olmadan yetişkin fareler ile güvenli bir şekilde kullanılamaz. Biz doğal kauçuk, plastik borular ve metal bir stile gibi basit ve düşük maliyetli malzemeler kullanılır. Ismarlama prob tutucu birkaç dakika içinde üretilmiş ve deneysel koşullara adapte edilebilir. Bu prob yuvaları iskemik çekirdek veya aynı yarımkürede veya iki hemisfer arasında farklı arteriyel bölgede birden çok site izleme için klasik tek site izleme için, bir veya daha derin penetrasyon LD problar ağırlayacak. Birçok prob yuvaları üretilir, kimyasal sterilize ve gelecekte kullanılmak üzere saklanabilir. Soğuk hava ile hızlandırılmış Veteriner tarafından onaylanmış cerrahi yapıştırıcı (cyanoacrilate), istenen kafatası koordinatlara göre, sıçan kafatasının yüzeyine sağlam prob tutucu bağlamak için kullanılır. Son olarak, prob set-up daha sık dikişlerle yerine sabitlenir. Set-up bu LD prob genel zaman, mastering bu teknik sonra, yaklaşık 10 dk. As i gösterilirve periferik MCA topraklarında (LD prob 2: ağırlıklı bir halkalı bölge): n Bu video, rutin merkezi MCA topraklarında (iskemik çekirdek LD probu 1) serebral perfüzyon izlemek. Bizim son çalışmada LD probu 2 (% 52 ±% 16 SD, başlangıca göre ortalama) kan akımı değişiklikleri ve değişkenliği ile karşılaştırıldığında LD probu 1 (% 31 ± 6% SS, kıyasla daha yüksek olduğunu göstermiştir bazal) ve inme sonucu 4 tahmin etmek için de kullanılabilir. Biz bizim in-house geliştirilen sistem kullanmak istiyorum araştırmacılar için bazı sorun giderme önerileri sunabilir. Denemenin başında, erken dekolmanı önlemek için prob tutucu takmadan önce çok iyi kafatası yüzeyi (Merbromin ve soğuk hava ile) kuru dikkatli olun. Ayrıca, plastik tüpün açık ucu ve LD prob optik yüzey ile teması önlemek için, doğal kauçuk üzerinde yapıştırıcı uygulamak için zayıf bir sinyal verir ve sonda ile potansiyel zarar görmesini önlemek için emin olun. Hayvanın başı çevresinde dikiş bağlama işleminde (bu, çene kemiği üzerinden dikiş konumlandırma ile önlenir) solunum yolu obstrüksiyonu önlemek için dikkat edin. Problar konumlandırılması ve güvence sonra, çekişi değil prob kabloları için dikkatli olmak servikal cerrahi için sırtüstü pozisyonda hayvan açarken, bu adım genellikle iki kişi, bir hayvan tutan kişi ve prob kabloları tutan ikinci bir kişi gerektirir ve onları hafifçe konumlandırma istenen konuma. Son olarak, ikiz-fiber LD prob nihai kan kontaminasyonu kolayca üreticisi tarafından sağlanan temizlik talimatları izleyerek yönetilmektedir. Bu videoyu gösterildiği serebral perfüzyon izleme Bizim optimize sistem, sonda anda bu alanda ticari şirketler tarafından satılan set-up sistemlere daha kolay, daha hızlı ve daha güvenilir bir alternatif sağlayabilir. Ayrıca, diğer araştırmacılar tarafından bu sistemin kullanımı saplama artırabilir inanıyoruzserebral teminat terapötiklerin yeni nesil gelişimini sağlayan deneysel inme alanında serebral hemodinami, y.

Bu önemli bir konu genellikle paradoksal temel araştırma çalışmaları 1 tarafından ihmal edilmektedir yana inme patofizyolojisi ve tedavisi etkileyen hemodinamik faktörlere Translasyonel araştırma, uygulanması gerekmektedir. Serebral perfüzyon izleme doğru iskemik inme modelleme 2 için, gerekli, ancak kapatacağı araçtır. Kenara subaraknoid kanama 3 arteryel damar tıkanıklığı ve dışlama teyidi, sürekli serebral perfüzyon izleme perfüzyon açığı, intrakranial kollateral damarların fonksiyonel durumu ve yeni tedavi yaklaşımları hemodinamik etkisinin derecesi ve tutarlılığı hakkında yararlı bilgiler sağlayabilir. Grubumuzun yeni bir çalışma multi-site hemodinamik izleme intrakranial kollateral dolaşımın değerlendirilmesi ve infarkt ve fonksiyonel açığı 4 tahmin edebilirsiniz kullanılabilir göstermektedir. Bu deneysel bulgular consi vardırserebral kollateral dolaşımın fonksiyonel performans iskemik inme hastalarında 5, 6 klinik sonucunu belirlemede olduğunu gösterdi klinik çalışmalar ile stent. Bu nedenle, serebral teminatlar iskemik inme 7 akut faz potansiyel bir tedavi hedefi olarak savunulmuştur. Laser-Doppler (LD) araçların deneysel iskemik inme ve bunların kullanımı bu tema 8 yeni kurallar tarafından önerilen serebral perfüzyon ölçmek için kullanılan en yaygın araçtır. LD tek lif LD probları 9 kıyasla daha derin bir penetrasyon sağlayan ikiz elyaf LD probları ile küçük kortikal hacim aletleri ölçü mikrovasküler perfüzyon, lif ayrılık genişliği bağımlı olmak kaydedilen sinyal derinliği. Kan akımı değerleri yerine mutlak serebral kan akımı görece daha belirtmek keyfi perfüzyon üniteleri (PU) olarak ifade edilmiştir. PU Kalibrasyon genellikle istimal yapılırg motilite standartları, üreticinin talimatlarına göre. LD flowmetre aynı oturum içinde sürekli dinamik izleme ve nicel veri üretimi sağlar. Şu anda LD kullanımını sınırlamak teknik sorunlar arasında, önemli bir konu hayvanın kafatasına bir derin penetrasyon Lazer Doppler probu bir güvenli ve uzun süreli bağlanma elde edilir. Bu uzun süreli izlenmesi için gerekli olan ve çoklu problar bizim laboratuarında performans gibi farklı serebral arteriyel bölgeler için kullanılır eğer. Problar burr hole veya kranial vidaları kullanarak kafatasına bağlı eğer tek lif (düşük penetrasyon) LD probları basit cerrahi yapıştırıcı ile kafatası ekli ise zayıf sinyal ve güvensiz bağlanma oluşur ise, özellikle, uzamış ameliyat süresi, gereklidir. İkiz lif (derin penetrasyon) LD probları yüksek ve daha tutarlı sinyal verin, ama onlar tek bir fiber problar daha büyük ve az olamazcerrahi yapıştırıcı sadece kullanarak kafatasına tached. Bu videoda, biz sıçan intraluminal filament tarafından geçici orta serebral arter oklüzyon sırasında serebral perfüzyon izlenmesi için Optimize sistemi gösterir. Biz sağlam kafatası üzerinde serebral perfüzyon uzun süreli izlenmesi için kullanılacak tek veya birden fazla çift-fiber (derin penetrasyon) için etkili, özel yapım, düşük maliyetli sahibi LD probları, elde etmek için basit bir yöntem tarif. Sıçanlarda geçici MCAO için cerrahi prosedür Uluç ve arkadaşları tarafından 10 video madde olarak görülebilir ve bu görüntü de gösterilmemiştir.

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> Ekipman </td></tr><tr><td> MoorVMS-LDF 2-kanal Lazer Doppler Monitörü </td><td> Moor Aletleri </td><td></td><td></td></tr><tr><td> VP12 prob </td><td> Moor Aletleri </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Reaktif / Malzeme </td></tr><tr><td> Doccol silikon kaplı filament büyüklüğü 4-0, kaplama 0.39mm çaplı </td><td> Doccol Şirketi </td><td> 403956PK10 </td><td></td></tr><tr><td> Yeni doğmuş bebekler için Doğal kauçuk, örneğin ortak bir emzik </td><td></td><td></td><td> Çoklutedarikçileri </td></tr><tr><td> Metal stile, spinal iğne 18 GA x 90 mm ​​örn. </td><td></td><td></td><td> Birden tedarikçileri </td></tr><tr><td> Infüzyon 25 GA x 20 mm için belirlenen venden örneğin Plastik borular, </td><td></td><td></td><td> Birden tedarikçileri </td></tr><tr><td> Emilmeyen sütür, kaplamalı, örgülü ipek </td><td></td><td></td><td> Birden tedarikçileri </td></tr><tr><td> Siyanoakrilat cerrahi yapıştırıcı </td><td></td><td></td><td> Birden tedarikçileri </td></tr><tr><td> Izofluran (% 100 v / v) veteriner kullanımı için </td><td></td><td></td><td> Birden tedarikçileri </td></tr></tbody></table>

intraluminar orta serebral arter tıkanıklığı ve sıçan strok model serebral perfüzyon İzleme için optimize sistemi

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

Klinik öncesi inme araştırma translasyonel potansiyeli deneysel modelleme doğruluğuna bağlıdır. Akut iskemik inme hayvan modellerinde Serebral perfüzyon izleme başarılı arteriyel oklüzyon onaylamak ve subaraknoid kanama çıkarılmasına izin verir. Serebral perfüzyon izleme de inme sonucu güçlü bir belirleyici ve olası bir tedavi hedefi olarak ortaya çıkmaktadır intrakranial kollateral dolaşım, incelemek için kullanılabilir. Deneysel serebral iskemi için geçerli kurallar çerçevesinde Lazer Doppler perfüzyon izleme tanınan bir rolü olmasına rağmen, teknik zorluklar bir dizi bu sınırı yaygın kullanımı vardır. Önemli konulardan biri hayvanın kafatasına bir derin penetrasyon Lazer Doppler probu bir güvenli ve uzun süreli bağlanma elde edilir. Bu videoda, biz sıçan intraluminal filament tarafından geçici orta serebral arter oklüzyon sırasında serebral perfüzyon izlenmesi için Optimize sistemi gösterir. Biz i geliştirdin-house gerekirse multi-site izleme izin (derin penetrasyon) ikiz fiber Lazer Doppler problar için özel yapılmış tutucu elde etmek basit bir yöntem. Serebral perfüzyon sürekli ve uzun süreli izleme kolayca sağlam kafatası üzerinde elde edilebilir.

Geçici MCAO (60 dk) eksternal karotid arterin bir silikon kaplı filamanın takarak oluşturuldu. Filament sonra LD izleme altında, MCA kökeni internal karotis arter terminal sonuna kadar itildi. Ortak karotis arter ve pterygopalatin arterin geçici filament cerrahi yerleştirme sırasında tıkanmıştır. Cerrahi işlemin bir şematik temsili Şekil 1A &#39;de gösterilmiştir. İki LD problar konumlandırma kraniyal koordinatları yatan arteriyel alana göre seçilmiştir. Kollateral akımı arasındaki borderzone bölgede beklenen ise; jelatin mürekkep perfüzyon ile ön denemeler (Şekil 1B) iskemik çekirdek merkez MCA topraklarında (Probe 1 bregma -1 mm, orta hattan 5 mm) beklendiği olduğunu gösterdi orta ve ön serebral arterlerin kortikal dalları (bregma +2 mm, orta hattan 2 mm; Probe 2). Serebral hemodinami (Şekil 2) sırasında ve MCAO sonra, yani önce, cerrahi işlemin süresi boyunca çok site Laser Doppler problar kullanılarak incelenmiştir. MCAO sırasında serebral perfüzyon açığı küçüktü ve Probe 1 ile karşılaştırıldığında Prob 2 değişkenliğin yüksek bir derecede göstermiştir, iskemik koşullarda intrakranial kollateral fonksiyonel performanstaki arası bireysel farklılıkları ortaya koymak. Çoklu-site Laser Doppler izleme de proksimal ekstra-kranyal serebral arterlerin (karotis arter, internal karotis arter, pterygopalatin arter) oklüzyon sırasında serebral hemodinamik değişiklikleri incelemek için olanak sağlar. İnme sonucu kresil violet (Şekil 3), ve Garcia fonksiyonel neuroscore 11 ile boyanarak 19 ardışık bölümleri üzerinde hesaplanan, infarkt hacmi ile reperfüzyon sonrası 24 saat değerlendirildi. Spesifik belirteçler asso için İmmünohistokimyaiskemik beyin hasarı ile ilişkilidir intrakraniyal dolaşım çok yer hemodinamik izleme ile ilgili nöronal kayıp (Protein 2, map2 ilişkili mikrotübül) ve iskemik penumbra (ısı şoku proteini 70, Hsp70) topografik bir dağılım elde etmek üzere yapılmış, (Şekil 4). <img src="/files/ftp_upload/50214/50214fig1.jpg" alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50214/50214fig1highres.jpg"/> Şekil 1. Sıçan intraluminal MCAO sırasında serebral perfüzyon izleme. Geçici MCAO için cerrahi işlem A. şematik gösterimi. Bir silikon kaplı filamanın eksternal karotis arter tanıtıldıktan sonra, MCA kökeni tıkamak için kullanılan ve internal karotis arter yoluyla itildi. Proksimal servikal arterlerin ya bağlandı (eksternal karotis arter) veya prosedürü sırasında (pterygopalatin arter ve karotis arter) geçici tıkalı edildidure. B. temsilcisi beyin jelatin-mürekkep boyandıktan sonra gösterilir. Jelatin-mürekkep çözümü Transcardiac perfüzyon reperfüzyon olmadan iskemi başlangıcından sonra 60 dk yapıldı. Normalde perfüze beyin jelatin-mürekkep ile boyanmış ve iskemik (perfüze olmayan) alanında boyanmadan kalırken (pembe renkli), siyah lekeli damarları ile gri renkli olarak ortaya çıkmıştır. LD iki prob konumlandırılması için kranyal koordinatlar gösterilmiştir. Probe 1 bregma gelen = -1 mm, orta hattan 5 mm; Prob 2 = bregma, orta hattan 2 mm +2 mm. <img src="/files/ftp_upload/50214/50214fig2.jpg" alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50214/50214fig2highres.jpg"/> Şekil 2. Çoklu-site Laser Doppler problar kullanılarak serebral hemodinamik kayıtları. Iskemik koşullarda işlevsel olarak aktif intrakranial kollateral anlaşılacağı tipik hemodinamik deseni gösterilir. Bu hayvanlarda, LD kayıtlarında küçük gösterdiProb 2 kanal er perfüzyon açığı, CCA oklüzyon ve MCA tıkanıklığı sırasında 1 kanal, Probe&#39;a karşılaştırıldı. MCA-O = orta serebral arter oklüzyonu. CCA-O = karotis arter oklüzyonu. PU = perfüzyon birimleri. <img src="/files/ftp_upload/50214/50214fig3.jpg" alt="Şekil 3" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50214/50214fig3highres.jpg"/> Şekil 3,. Infarkt hacminin hesaplanması için Temsilcisi beyin kesitleri histolojik koronal kesitler (50 um; n 250 mikron aralığı = 19; bregma +2.5 mm -3.0 mm). Kresil violet% 0,1 ile% 4 paraformaldehid ve lekeli giderilmiştir. Infarkt hacmi serebral ödem nedeniyle interhemisferik asimetri için düzeltilmiş ImageJ görüntü işleme yazılımı kullanılarak hesaplanmış ve mm 3 olarak ifade edilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50214/50214fig3large.jpg" target="_blank">büyük bir rakam görmek için buraya tıklayın</a> <img src = &quot;/ files/ftp_upload/50214/50214fig4.jpg&quot; alt = &quot;Şekil 4&quot; fo: content-width = &quot;6in&quot; fo: src = &quot;/ files/ftp_upload/50214/50214fig4highres.jpg&quot; /&gt; Şekil 4. Nöron kaybı ve yarı gölge moleküler belirteçlerin immün Temsilcisi ardışık beyin kesitleri gösterilmeyen, kresil violet% 0.1 (A) ile boyanmış veya nöron kaybı belirteçleri (protein 2, map2 ilişkili mikrotübül; B) ile immünhistokimyasal hangi. Ve iskemik penumbra (ısı şok protein-70, Hsp70; C).

Serebral perfüzyon izleme iskemik inme modelleri doğruluğunu geliştirmek için gösterilmiştir. Teknik zorluklar sıklıkla serebrovasküler araştırma için bu önemli aracının kullanımını sınırlamak. Bu videoda, optimize edilmiş bir sistem sıçanlarda intraluminal orta serebral arter oklüzyonu sırasında tek veya çoklu-site hemodinamik izleme elde etmek gösterilmiştir.

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Serebral perfüzyon monitörizasyonu, deneysel inme modellerinde doğruluğu artırmak ve değişkenliği azaltmak için çok önemlidir. Lazer Doppler teknolojisi, özellikle derin penetrasyon probu kullanıyorsanız, farelerin ve sıçanların sağlam kafatası yoluyla serebral mikrovasküler perfüzyonu kolayca tespit edebilir. Buradaki temel sorun, cerrahi işlem sırasında lazer Doppler probunu kraniyal koordinatlara sabitlemek için güvenilir bir sistem bulmaktır.Bu videoda size kendi geliştirdiğimiz sistemi göstereceğiz. Tek bölgeli ve çok bölgeli serebral hemodinamik monitörizasyon için kullanılabiliriz. Bu videoda gösterilen raf strok modeli, dış karotis artere bir inter luminal filament yerleştirilerek elde edilir.Filament daha sonra orta ceal arterin kökenini tıkamak için internal karotid arterden ilerletilir ve geçici bir fokal seal iskemi oluşturur. Prosedür hakkında daha fazla ayrıntı için lütfen aşağıdaki bağlantıyı ziyaret edin. Tek bölgeli izleme için kraniyal koordinatlar, tek bölgeli izleme için orta hücre arter oklüzyonu sırasında hiper perfüze alanı açıkça tanımlayan jelatin mürekkep perfüzyonu ile yapılan ön deneylerden sonra seçilmiştir.Lazer Doppler probu bir, çok bölgeli izleme için orta ceal arter tarafından sağlanan merkezi bölgeye yerleştirilir. Lazer Doppler prob iki, orta ve anterior ceal arter arasındaki bölgede periferik sınırlara yerleştirilir. İnterkraniyal kollateral akışı incelemek için, lazer doppler problarının konumlandırılması, her bir araştırmacının deneysel ihtiyaçlarına göre değiştirilebilir.Gerekli malzemeler doğal kauçuk, küçük plastik tüpler ve metal stilettir. Pervane tutucu, hayvanın boyutuna, lazer doppler problarının sayısına ve boyutuna ve izlenmesi gereken samur vasküler bölgeye göre özelleştirilebilir. Probların ve fren höyüğünün konumlarını işaretleyin.Orta ceal arter tıkanıklığı için istenen stereotaksik koordinatlara göre doğal kauçuk, iskemik çekirdek için tipik koordinatların Bgma eksi bir milimetre, orta hatta beş milimetre lateralde olması beklenir. Periferik iskemik sınır bölgesi bölgesi için, beklenen koordinatlar bgma artı iki milimetre, orta hatta iki milimetre lateral olarak ayarlanabilir. Bgma'nın konumunu bir X ile çok net bir şekilde işaretleyin.Bu, pervane tutucuyu kafatasına takmak için dönüm noktasıdır.Stileyi küçük bir plastik tüpe yerleştirin. Boyutunun probun boyutuyla eşleşmesi gerekir. Stileyi, probun konumlandırılması gereken noktada doğal kauçuğun içine yerleştirin.Plastik tüp de kauçuğa yerleştirilene kadar stili kauçuğun içine itin. Birden fazla prob gerekiyorsa stili geri çekin. Probların sabit kalmasını sağlamak için diğer prob konumları için aynı adımları tekrarlayın.Plastik tüplerin etrafına hızlı bant, tek prope tutucular sadece bir tüp ile aynı prosedürü izleyerek elde edilir. Gelecekte kullanılmak üzere birkaç prope tutucunun kimyasal sterilizasyonu gerçekleştirilebilir. Farenin başını nazikçe tıraş edin, bir gazlı beze beta dime uygulayın ve cildi dezenfekte edin.Sıçan, ameliyat masasında balo pozisyonuna yerleştirilmelidir: ISO klor anestezisi altında, kraniyal bölgede deri altından kilo başına% 2% beş miligram lidokain uygulayın. Sağ ceal arter tıkanıklığı için sağ paramedian cilt insizyonu yapın ve kranial fasyaya ulaşmak için deri altı dokuyu inceleyin. Kraniyal fasyada sağ paramedian insizyon yapın ve künt bir diseksiyon yapın.Beceri kemiğine ulaşmak için, prob tutucunun uygulanması için yeterince büyük bir beceri alanı hazırlayın. Delme veya kemik inceltme işlemine gerek olmadığını, kafatası yüzeyini dezenfekte etmek ve kurutmak için me broman uyguladığınızı lütfen unutmayın. Kafatası yüzeyinin kurumasını hızlandırmak için soğuk hava için bir saç kurutma makinesi seti kullanın.Bu noktada, kraniyal dikişler ve bgma açıkça görülebilir. Kenarları steril makasla keserek prob tutucuyu özelleştirin. Prob tutucunun altındaki yüzeye az miktarda cerrahi yapıştırıcı siyanoakrilat veteriner onaylı uygulayın ve plastik tüplerin alt açıklığından dikkatlice kaçının.Probun optik yüzeyi ile beceri arasında önemli miktarda yapıştırıcı kalırsa, bunun düşük bir sinyal üretebileceğini ve proba zarar verebileceğini lütfen unutmayın. Birden fazla kullanım ile. Prob tutucuyu beceri yüzeyine uygulayın ve BMA'yı S kara mayını ile dikkatlice eşleştirin.Pervane tutucunun üzerine hafif bir baskı uygulayın. Cerrahi yapıştırıcının kurumasını hızlandırmak için soğuk hava için bir saç kurutma makinesi seti kullanın. Pervane tutucunun etrafına ve hayvanın kafasına cerrahi iplik bağlayarak pervane tutucuyu sabitleyin.Cerrahi ipliği mandibula üzerine yerleştirmeye, submandibular bölgeden ve boyundan kaçınmaya dikkat edin. Prob tutucunun plastik tüplerini optik bir jel ile doldurun. Örneğin, yaygın bir ultrason jeli.Bu, lazer doppler sinyalinin kalitesini artıracaktır. Destekleri prob tutucuya yerleştirin ve lazer Doppler akış ölçerin gerçek okumasını doğrulayın. Probları hayvanın başının etrafına bağlayarak sabitleyin.Submandibular bölgeden kaçınarak cerrahi ipliği mandibula üzerine yerleştirmeye dikkat edin ve CBR perfüzyonu için çok bölgeli sistem İzleme artık tamamlanmıştır Fareleri, problar veya pervane tutucu üzerindeki çekiş kuvvetlerinden dikkatlice kaçınarak besleme konumuna yerleştirin. Orta ceal arter tıkanıklığı için cerrahi prosedür sırasında endovasküler filament orta ceal arterin orijinine ulaştığında profüzyon izlemeye başlayın. Lazer doppler monitörizasyonu sırasında ceal perfüzyonda bir düşüş görülebilir.Multi cy problar kullanılırsa, arteriyel bölgelerine göre ceal profüzyonda farklı değişiklikler görülebilir. Bu temsili perfüzyon izlemeleri, çok bölgeli lazer Doppler probları kullanılarak celebral hemodinamiğin nasıl çalışılabileceğini göstermektedir. Hem yaygın karotis arter tıkanıklığı hem de orta ceal arter tıkanıklığı sırasında iki kanalda sonda tek kanala göre daha az sayıda perfüzyon açığı oluşur.Bu hemodinamik patern, iskemik koşullar altında fonksiyonel olarak aktif interkraniyal kollateralleri düşündürür. Enfarktüs hacmi, %4 perfor, MAGA'da sabitlenmiş ve ceal ödemine bağlı interhemisferik asimetriler için düzeltilmiş ve milimetre küp cinsinden ifade edilen viyole öncesi oh %0.1 ile boyanmış 19 ardışık koronal kesit üzerinde hesaplanır. Nöronal kaybın moleküler belirteçlerinin ve mikro tubal ilişkili protein iki ve ısı şoku proteini 70 gibi iskemik penumbraların immün boyanması, interkraniyal dolaşımın çok bölgeli hemodinamik izlenmesi ile ilişkili olarak incelenebilir.Bu videoda gösterilen satılabilir perfüzyon izleme için optimize edilmiş sistem, deneysel inme alanındaki satılabilir hemodinamik değişiklikleri incelemek için kolay ve etkili bir yol sağlayabilir ve bu da yeni nesil celebral kollateral terapötiklerin geliştirilmesine yol açabilir. İlginiz için teşekkür eder ve deneylerinizde iyi şanslar.

optimized-system-for-cerebral-perfusion-monitoring-rat-stroke-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Sıçan iskemik beyin hasarı Cerrahi indüksiyon inme araştırma için yaygın olarak kullanılan bir model. Burada orta serebral arter oklüzyonu ile fokal serebral iskemi indüksiyon göstermektedir. Histolojik boyama ve manyetik rezonans görüntüleme ile enfarkt Görselleştirme de gösterilir.

Endovasküler Dikiş Rat Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fokal Serebral İskemi Model

Intraluminal orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli deneysel iskemik inme modelleri arasında en sık kullanılan model. Burada Lazer Doppler flowmetre kılavuzu ile ayrıntılı olarak tüm model ve onun temsilcisi sonuçları gösterecektir.

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Kaynak: Larpthaveesarp, A., et. al. P10 Sıçanlarda Neonatal İnmenin Geçici Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, bir sıçan yavrusunda Orta Serebral Arter Oklüzyonu modelinin kurulmasını göstermektedir. İç karotis arter (ICA) açığa çıkar ve kan akışını sınırlamak için bir bağ sabitlenir. Orta Serebral Artere ulaşmak için IKA'dan bir oklüd yerleştirilir. Daha sonra daha fazla analizden önce yavrunun iyileşmesine izin verilir.

Lokal beyin iskemisini indüklemek için bir sıçan yavrusunda orta serebral arter tıkanıklığı oluşturmak

Bu yordamı genel amacı fare modelleri iskemik inme kan - beyin bariyerini bozulma vivo içinde değerlendirmesi için son derece tekrarlanabilir bir teknik sağlamaktır.

Kan - beyin bariyerini bozulma iskemik inme, bir fare modeli Vivo içinde değerlendirilmesi

Bu protokol, aynı kemirgen beyin örnekleri kümesinde iskemik beyin hasarının en önemli üç parametresini ölçmenin yeni bir tekniğini açıklar. Sadece bir beyin örneği kullanmak etik ve ekonomik maliyetler açısından oldukça avantajlıdır.

Tek Bir Kemirgen Beyin Örneklerinde İnme Sonrası Serebral Ödem, Enfarktüs Bölgesi ve Kan-Beyin Bariyeri Kırılımının Ölçülmesi

Sürekli arteriyel kan basıncı kaydı, çeşitli hemodinamik parametrelerin etkilerinin araştırılmasını sağlar. Bu yazıda, iskemik inmenin büyük bir hayvan modelinde sürekli arteriyel kan basıncı izlemenin inme patofizyolojisinin belirlenmesi, farklı hemodinamik faktörlerin etkisi ve yeni tedavi yaklaşımlarının değerlendirilmesi için uygulanması gösterilmiştir.

İskemik inmenin tavşan modelinde kan basıncının gerçek zamanlı izlenmesi ve modülasyonu

Bu protokol, orta serebral arterin intraluminal oklüzyonu yoluyla farelerde geçici fokal serebral iskemi modelini açıklar. Ek olarak, manyetik rezonans görüntüleme ve davranış testleri kullanılarak sonuç değerlendirme örnekleri gösterilmiştir.

İnmenin Geçici Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Bu protokol, araştırmacıların modifiye Longa eksternal karotis arter yöntemini kullanarak fareler üzerinde orta serebral arter oklüzyon prosedürünü gerçekleştirmeleri için adım adım bir kılavuz sunar. Bu makalede sunulan modifikasyonlar orta serebral arter oklüzyonunun doğruluğunu arttırmayı ve tam reperfüzyonu sağlamayı amaçlamaktadır.

Longa Orta Serebral Arter Oklüzyon Yönteminin Tam Reperfüzyon için Optimizasyonu

Burada, geçici MCA oklüzyonu sırasında kan akışını değerlendirmek için lazer Doppler probunun, sıçanlar ve fareler için uygun bir periorbital konum olan orta serebral arterin (MCA) distal bölgesi üzerine kafatasına yerleştirilmesini içeren minimal invaziv bir cerrahi prosedür gösterilmektedir.

Kemirgen Modellerinde Orta Serebral Arter Oklüzyonu Öncesi Serebral Kan Akışının İzlenmesi için Bir Lazer Doppler Probunun Periorbital Yerleştirilmesi

Bu protokol, ortak karotis arter yoluyla orta serebral arter oklüzyonu reperfüzyonu için hazırlık sürecini tanımlar.

Orta Serebral Arter Oklüzyonu Reperfüzyonu için Modifiye Bir Model Hazırlığı

Öğrenin sıçanlarda inme modellerinde serebral perfüzyon izleme için optimize edilmiş lazer Doppler sistemi. Bu yöntem, çok bölgeli kan akışı ölçümü ve serebral hemodinamiği değerlendirmek için güvenilir bir yaklaşım sunar.

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

Daha fazla video keşfet