Name: Içinde Doğuştan gelen ve sirkadiyen Ayarlı Photobehavior Eğitim ışık tercih Testi Drosophila Larva (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 14 s
Description: Öğrenin Drosophila larvalarında doğuştan ve sirkadiyen düzenlenmiş fotodavranışları ışık-karanlık tercih testiyle nasıl ölçülür. Bu yöntem, sirkadiyen ritimler ve duyu işleme araştırmalarında önemli bilgiler sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz verimli tartışmalar için Fribourg Biyoloji, Üniversitesi Bölümü&#39;nde bizim meslektaşları teşekkür ederim. Biz sinek stokları sağlamak için Bloomington Stok Merkezi ederim. Bu çalışma mali İsviçre Ulusal Bilim Vakfı (PP00P3_123339) ve SGS Velux Vakfı tarafından desteklenmiştir

1. Larva Yetiştirme <ol><li> ° C mısır unu orta ışık ve zamanlayıcı ile donatılmış bir sinek inkübatör 12 saat ışık-12-saat karanlık döngüsü altında 25 kitle kültüründe suşları veya genetik haçlar sinek tutun. </li><li> Bir sıvı hamur (H2O damıtıldı 3-4 ml &#39;si ile seyreltildi destek komponenti maya, 10 g) oluşturmak için su içinde destekçisi maya seyreltilir. Mısır yemek yemek için küçük bir damla ekleyin ve şişeleri kapsar. Maya hamuruna yapışmasını yetişkin sinek önlemek için en az bir saat kuruması beklenir. Gıda yüzeyinde su ile seyreltilmiş maya, küçük bir damla koymak ovipozisyon artırabilir. Alternatif olarak fırıncı mayası hamur,% 20 asetik asit (AcOH) (Sigma Aldrich, İsviçre A6283-100 mi) de kullanılabilir. Bunun için, mısır yemek yiyecek yüzeyinde çözüm ve yayılması bir Q-ucu ucu daldırma. </li><li> Mısır yemek yiyecek şişeleri (daha eski on gün en az dört gün eski, ama değil) ergin sinek koyun. Tercih tekrarlamak yeterli larva elde etmek için her bir şişenin içine yeterince yetişkin koyunbirkaç kez test ve istatistiksel karşılaştırma sağlar. Genetik haçlar için, biz genellikle 20 kadın ve şişe başına 5-10 erkek en az kullanmak, ancak bazı çizgiler yeterli larva yavru elde etmek için daha fazla kadın gerektirir. </li><li> 12 saat için yumurtalarını bırakmak ve yeni şişeleri aktarmak için yetişkin izin verin. Yetişkinler sabah ve akşam aktarılabilir. Biz genellikle yedi ile on gün boyunca yetişkin aktarmak ve gerekirse yeni yetişkin alır. </li><li> Inkübatör her 12 saat alınan yumurta koleksiyonları tutun ve 25 larva ° C, 12-saat ışık-12-saat karanlık döngüsü ve% 60 nem büyümesine izin. Yumurta toplama sonra sürekli karanlıkta görsel davranış hareket larva (DD) 48 saat (iki açık-koyu döngüleri karşılık gelen) bir sirkadiyen bileşenleri test etmek için. Bunun için, ışık olmadan ayrı bir kuluçka kullanabilirsiniz ancak sıcaklık ve aynı nem gibi tüm diğer koşullar tutun. Sadece karanlık aşamasına geçiş önce DD inkübatör şişeleri aktarmak için emin olun. Anoth için şişeleri geçmeden önceer inkübatör bir karton kutu içinde şişeleri koymak veya aktarım sırasında ışığa maruz kalma (karton kutu ya da sarma paketleme kuluçka arasındaki geçiş için önce &quot;ışık-on aşaması&quot; sırasında yapılması gereken) önlemek için alüminyum folyo ile şişeleri sarın. Bu noktadan sonra ve deney başlangıcına kadar herhangi bir ışık maruz hayvanlar önleyin. </li><li> 4 gün sonra (yumurtlama 84-108 saat) (4 bakın. Işık tercih testi, nokta. 4.4.) Test edilecek zaman noktalarında erken L3 (beslenme larva) toplamak. </li></ol> 2. Deney Düzeneği <ol><li> Sabit sıcaklık ve nem koşulları ile karanlık bir odada deneyler. </li><li> Karanlıkta Petri kabı iki kadran tutmak için, siyah bant ve alüminyum folyo ile kapağı kapatılır. Bunu yapmak için, kapağın çevresi ortasına işaretleyin. Ayrıca aralarında ayrılık 90 ° ile kapağın sınırında dört puan işaretleyin. Daha kolay hale getirmek için, bir 10 cm uzunluğunda dört kadran bölünmüş bir 20 cm kare çizmekkağıt veya bir bilgisayar yardımıyla sayfası. Alüminyum folyo ve siyah bant (Şekil 1A) 10 cm kareler kesin. Bu kapsayan ilk kat ve siyah bant gibi alüminyum folyo bir kare yapıştırma tarafından iki zıt kadran, Kapak, aynı zamanda kapağın sınır kapsayacak şekilde dikkatli olun. Geçmişte bu tahlillerin iki hafifçe farklı formu kullanılmıştır. Biz burada Petri kabı 10 dört eşit çeyrek ayrılmıştır hangi &quot;Çeyrek plaka&quot; testi, kullanın. Alternatif &quot;yarı-plaka&quot; tayininde Petri kabı bölünür yarısı (yarı ışık, karanlıkta yarım maruz) 1,7,8. Bugüne kadar iki testleri arasında anlamlı bir fark yayınlandı. </li><li> Tutkal gibi sağ masaya ışık kaynağı altında kapak işaretleme için kullanılan biri olarak çeyrek sayfa. Kadran kavşak merkezli bir Petri kabı çevresi işaretleyin. Referans ışık kaynağı altında aynı pozisyonda her zaman test plaka yerleştirmek gibi işaretleri kullanın. </li><li> Bir yüklemelamba, ya basit bir beyaz ampul (Phillips, Softtone 5W) veya demir sopalı (Fisher Scientific, S47808) yardımıyla Petri kabı üzerinde bir LED lambası (LED lamba, 80012 Beyaz, Osram). Tüm test plakası homojen yandığından emin bir şekilde yüksekliğini ayarlayın. Onlar ampullere göre daha spesifik dalga yayan bu yana şiddetle LED lambaların kullanılmasını öneririz. Ayrıca LED daha az ısı yayarlar. </li><li> Bir fotometre (Çevre Metre PCE EM882) yardımı ile ışık yoğunluğunu ayarlayın. Gerektiği gibi 350-760 lux gerekli ışık yoğunluğu elde etmek için, yukarı lamba tutun veya aşağı. Ayarlanabilir bir güç kaynağına lamba takarak lambası (Şekil 1B) taşımadan yoğunlukları değiştirmek için daha fazla esneklik verir. </li></ol> 3. Tabaklar Hazırlık <ol><li> Çift damıtılmış su (Millipore) ile% 2.5 ağar, 200 ml (Sigma-Aldrich, İsviçre A5093-500G) olun. </li><li> Bir tablo (90 mm çapına Petri kapları yerleştirin;Greiner Bio-One GmbH, satır 4550 Kremsmeinster, Avusturya) sıcak agaroz dökme izin vermek. </li><li> Çözüm tamamen şeffaf ve akışkan kadar bir mikrodalga agaroz kaynatın. Sıvı çözüm kabarcıkları içermediğinden emin olun. DİKKAT: dikkatle masaya Ulaştırma çözüm çok sıcak olabilir çünkü! </li><li> Bütün yüzeyi homojen bir çözelti ince bir tabaka ile kaplanana kadar Petri kaplarına sıcak agaroz dökün, iki ya da üç milimetre yeterlidir. Kaplama, tüm plakaları önce güçlendirilerek agaroz önlemek için hızlı olun. Plakaları soğumasını bekleyin. Oda sıcaklığında plakalar Mağaza ve sadece hazırlık aynı gün kullanabilirsiniz. </li></ol> 4. Işık Tercih Testi <ol><li> Drosophila beri testi ışığın kırmızı dalga boyları anlamda mümkün değil önce ışık etkisini önlemek için deney odasında kırmızı ışık koşulları altında çalışmak. T aydınlatmak için bir lamba monte kırmızı bir ampul (Phillips, PFE712E * 8) kullanıno işe yerleştirin. </li><li> 25 tüm deneyler aracılığıyla sıcaklığını korumak ° C Bir ısıtıcı ya da soğutma cihazı vasıtasıyla kumanda oda sıcaklığında Gerekirse. </li><li> Sürekli karanlıkta altında iki günlük bir kür (Bölüm 1) için yetiştirilen şişeleri bazı yiyecek almak. Larvaları, genellikle gıda yüzeyinde kazma olduğundan, bir spatula (Fisher Scientific, 14-373-25A) yardımı ile en üst tabakası (yaklaşık 5 mm derinliğinde) alır. Bir Petri kabı kapağının dış tarafında gıda yayılmış, biraz su ilave edin ve bir spatula ile hafifçe karıştırın. </li><li> Gıda L3 larvaları besleme toplayın. Işık tercih test edilecektir gibi, olumsuz phototaxis güvence altına alınmıştır bu yana sadece L3 larvaları besleme / erken önemlidir seçerek. Dolaşıp / Geç gıda tarama L3 larva veya büyük larva muhtemelen zaten photobehavior açık. Onların ön spiracles açık ve bir parmak benzeri şeklinde dışarıya fırlamıştı çünkü besleme L3 larvaları (negatif phototactic) tanınabilir. Posterior spiracles üç açıklıklar her ve büyük dallı kılların dört grup var. Tükürük bezleri, ikinci karın segment 11 uzanır. Hiçbir beyaz ışık kullanılmalıdır ise mikroskop altında larva Sahneleme uygundur. Bir kırmızı ışık lamba deneyler gereklidir önce stereoskopik mikroskop altında evreleme ise larva aydınlatmak için gereklidir. </li><li> Musluk suyunda kısa bir süre larva yıkayın ve erken-besleme üçüncü evre larvaları (hala kırmızı ışıkta) toplamak. Test plakasına larva aktarmadan önce, ıslak bir fırça ile larva almak ve bir kağıt havlu ya da filtre kağıdı ile aşırı su dikkatli bir şekilde emer. Bu hayvan zarar ve davranışlarını etkileyebilecek bu yana çok aşırı larvaları kurutmayın. </li><li> Islak fırça kullanarak dikkatle plakaları için larva transferi. Plakasının merkezinde yaklaşık 30 larvası bir grup yerleştirin. Kapak zaten kadran ile hazırlanan plaka ile örtün ve (bkz. deney için hazır ışık kaynağı altında plaka ayarlamaktion 2). </li><li> Beyaz ışık lambasını açmak ve Sayacı başlatmak. Larva 5 dakika plaka üzerinde serbestçe hareket edelim, sonra hızlı bir şekilde kapağı çıkarın ve karanlıkta ve ışık kadran içinde larva sayısını. Bir işaretleyici ile her larva konumunu işaretleme sayma azaltabilir. Alternatif plaka bir resim çekmek ve sonradan saymak. Larva duvarlara tarama veya agar içine burrowing gibi, belirsiz ışık tercih gösteren larva nötr tercih olarak kabul edilmelidir ve sadece ışık tercih endeksi hesaplanır larvaların toplam sayısı dahil. </li><li> Sayma sonra, larva ile plaka atmak ve bir sonraki deneme için yeni bir test plakası ile değiştirin. Daha sonra kullanım ve bertaraf için bir otoklav plastik torba kullanılan levhaları toplamak. </li><li> Yeni bir genotip test edilebilir deneyler yeterli sayıda gerçekleştirdik. Genotip başına 10-15 çalışmalarda analiz için yeterlidir. </li></ol> 5. Veri analysis <ol><li> Kolaylık sağlamak için Excel (Microsoft) veya daha ileri istatistiksel analiz için bir bilgisayarda Kökeni (Origin Lab) gibi bir veri sayfasına veri aktarımı. Bir sütunda bir ikinci kolon üzerinde ışık kadranda hayvan sayısı ve plaka (&quot;nötr&quot; larvaları dahil) toplam hayvan üçüncü karanlıkta hayvan sayısı, düzenleyin. </li><li> Aşağıdaki formül kullanılarak her bir deney için karanlık için tercih indeksi (PREF) hesaplayın: PREF (karanlık) = (karanlıkta larva sayısı - larva sayısı ışığında) / larva sayısı </li><li> Gruplar için uygun bir analiz ile istatistiksel veri kümesi karşılaştır. Burada, istatistiksel olarak iki grup karşılaştırmak için Wilcoxon testi kullanın. Bir Tukey çoklu karşılaştırma ile bir ANOVA testi post hoc normal dağılım varsayımı bir manifoldu grup karşılaştırıldığında yerine ise testi, yapılabilir. </li><li> Günün döngüsü boyunca çizgiler ve zaman noktaları arasında açık karşılaştırmalar göstermektedir grafikler olun. WE kullanımı Origin Yazılım (Origin Lab) istatistiksel olarak anlamlı test etmek ve uygun grafikler oluşturmak, ama başka bir istatistik programı yararlı olabilir için. </li></ol>

<ol><li>Sawin-McCormack, E. P., Sokolowski, M. B., Campos, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+genetic+analysis+of+Drosophila+melanogaster+photobehavior+during+larval+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenet%22%5BJournal%5D)">Characterization and genetic analysis of Drosophila melanogaster photobehavior during larval development.</a> J. Neurogenet. 10, 119-135 (1995).</li>
<li>Sprecher, S. G., Pichaud, F., Desplan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+and+larval+photoreceptors+use+different+mechanisms+to+specify+the+same+Rhodopsin+fates%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Adult and larval photoreceptors use different mechanisms to specify the same Rhodopsin fates.</a> Genes Dev. 21, 2182-2195 (2007).</li>
<li>Sprecher, S. G., Desplan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Switch+of+rhodopsin+expression+in+terminally+differentiated+Drosophila+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Switch of rhodopsin expression in terminally differentiated Drosophila sensory neurons.</a> Nature. 454, 533-537 (2008).</li>
<li>Xiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-avoidance-mediating+photoreceptors+tile+the+Drosophila+larval+body+wall%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Light-avoidance-mediating photoreceptors tile the Drosophila larval body wall.</a> Nature. 468, 921-926 (2010).</li>
<li>Diaz, N. N., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptors%3A+unconventional+ways+of+seeing%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Photoreceptors: unconventional ways of seeing.</a> Curr. Biol. 21, R25-R27 (2011).</li>
<li>Emery, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+CRY+is+a+deep+brain+circadian+photoreceptor%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Drosophila CRY is a deep brain circadian photoreceptor.</a> Neuron. 26, 493-504 (2000).</li>
<li>Mazzoni, E. O., Desplan, C., Blau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+pacemaker+neurons+transmit+and+modulate+visual+information+to+control+a+rapid+behavioral+response%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Circadian pacemaker neurons transmit and modulate visual information to control a rapid behavioral response.</a> Neuron. 45, 293-300 (2005).</li>
<li>Keene, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+visual+pathways+mediate+Drosophila+larval+light+avoidance+and+circadian+clock+entrainment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Distinct visual pathways mediate Drosophila larval light avoidance and circadian clock entrainment.</a> J. Neurosci. 31, 6527-6534 (2011).</li>
<li>Gong, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+Pairs+of+Neurons+in+the+Central+Brain+Control+Drosophila+Innate+Light+Preference%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Two Pairs of Neurons in the Central Brain Control Drosophila Innate Light Preference.</a> Science. 330, 499-502 (2010).</li>
<li>Lilly, M., Carlson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((smellblind%3A+a+gene+required+for+Drosophila+olfaction%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">smellblind: a gene required for Drosophila olfaction.</a> Genetics. 124, 293-302 (1990).</li>
<li>Bodenstein, D. The postembryonic development of Drosophila. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBodenstein%2C+D+%22Biology+of+Drosophila%22">Biology of Drosophila</a>. Demerec, M. , John Wiley & Sons. 275-367 (1950).</li>
<li>Pittendrigh, C. S. Circadian systems: Entrainment. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPittendrigh%2C+CS+%22Biological+Rhythms%22">Biological Rhythms</a>. 4 Handbook of Behavioral Neurobiology, Plenum. 95-124 (1981).</li>
<li>Collins, B., Kane, E. A., Reeves, D. C., Akabas, M. H., Blau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balance+of+Activity+between+LN%28v%29s+and+Glutamatergic+Dorsal+Clock+Neurons+Promotes+Robust+Circadian+Rhythms+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Balance of Activity between LN(v)s and Glutamatergic Dorsal Clock Neurons Promotes Robust Circadian Rhythms in Drosophila.</a> Neuron. 74, 706-718 (2012).</li>
<li>Keene, A. C., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seeing+the+light%3A+photobehavior+in+fruit+fly+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Seeing the light: photobehavior in fruit fly larvae.</a> Trends Neurosci. 35, 104-110 (2012).</li>
<li>von Essen, A. M., Pauls, D., Thum, A. S., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capacity+of+visual+classical+conditioning+in+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Capacity of visual classical conditioning in Drosophila larvae.</a> Behav. Neurosci. 125, 921-929 (2011).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Açıklanan ışık tercih testi larva doğuştan photobehavior yararlanır. Tahlil, kurmak kolay düşük maliyetle çok tekrar izin verir ve ışık algılama ve işleme hakkında değerli bilgiler sunar. Deneysel paradigma bireyler açık veya koyu tercih kaç nispeten hızlı ölçümü sağlar. Bu tercih ham yüzde olarak veya alternatif olarak tercih Endeksi (PREF) olarak görüntülenebilir. PREF hayvanların fark olarak ifade edilir tercih karanlık hayvanların toplam bölünmesiyle, bu tercih edilen hafif ve bu hayvanlar. <p class="jove_conten...

Burada karanlık için larva tercih (veya hafif) dayalı bir davranış deneyi açıklar. Larva yiyecek arama aşamaları (erken L3 L1) 1 sırasında güçlü ve stereotipik photonegative tepki ile tepki. Tahlil larva photophobic davranışlarını değerlendirmek amaçlanmıştır ve larvaları agar ile kaplı bir Petri kabındaki serbestçe hareket bir grup açık veya koyu tercih karşılaştırır edilir. Bu davranış tahlil görme sisteminin hassasiyeti, entegrasyon ve zamansal plastisite hakkında bilgi veren değil sadece, daha fazla ışık hassasiyeti ve süreci sirkadiyen sistemi tarafından kontrol edilir nasıl ipuçları sağlar. Drosophila larva göz (da adlandırılır Bowlig Organ, BO), ışık hissi için ana organdır. Her göz 12 fotoreseptör (PR) oluşan, sekiz PR PR mavi duyarlı rhodopsin5 (RH5) 2,3 ifade yeşil duyarlı rhodopsin6 (RH6) ve dört ifade. PR, ALS ek olarak,larva vücut duvarı kapsayacak o sınıf IV multidendritic nöronlar, zararlı ışık yoğunlukları 4,5 yanıt tespit edilmiştir. Ayrıca merkezi larva beyinde yer alan kalp pili nöronların beynin 6,7 içinde saat içsel mavi ışık sensörü gibi davranır ışığa duyarlı protein kriptokrom (Cry) ifade bilinmektedir. Bu testte ile test ederken ilgi çekici vahşi tip hayvanların photophobicity gün ve gece süresince farklı zaman noktalarında bir sirkadiyen bileşeni gösterir. Açık-koyu tercih 7 için test edildiğinde yiyecek arama L3 larva ışığında yanıtlarını alacakaranlıkta şafak vakti güçlü photophobicity ve alt photophobicity gösterdi. RH6-PR vazgeçilebilir ise İlginçtir sadece RH5-PR, ışık kaçınma için gereklidir. , RH5-PR ve RH6-PR hem ışık 8 ile moleküler saat sıfırlama olarak katılıyor. Cry yolu uygun bir davranış çıkış düzenlemek için diğer ışık algılama yolları ile koordine edilmelidirGünün tabii. PR asetilkolin ışık kaçınma davranışı hem de moleküler saat sürüklenmesi önemli bir rol oynar. PR dan sirkadiyen kalp pili nöronlara asetilkolin sinir iletimini engelleme ışık-karanlık tercih tahlil 8 photophobic yanıt azaltır. Aynı testi istihdam, nöronların iki simetrik çift son zamanlarda Drosophila 9 üçüncü larva ışığında tercihi değiştirmek için tespit edilmiştir. Hayvanlar muhtemelen uygun bir pupariation site bulmak için gıda ayrılırken nöronların Bu iki çift, geç larva aşamalarında çalışıyor olabilir. Ancak, görsel yollar etkileşim ve sirkadiyen bir şekilde larva görsel davranışlarını kontrol nasıl çoğaldığı sorusu cevapsız kalmıştır. Işık tercih testi sirkadiyen zaman noktaları arasında karşılaştırmalar, farklı ışık nitelikleri altında hatları ve sirkadiyen devlet sinek sağlar. Tahlil kolay hazırlanabilir ve ucuz ve ben daha önce yararlı olmuşturn birkaç laboratuarları tanımlamak ve larva ışık elde davranışlarını incelemek için.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5093-500G</td><td>%2.5; Sigma-Aldrich, 9471 Buchs, İsviçre </td></tr><tr><td>Petri kapları</td><td>Greiner Bio-One GmbH</td><td>633180</td><td>90 mm çap; Greiner Bio-One GmbH, 4550 Kremsmeinster, Avusturya</td></tr><tr><td>LED Lamba</td><td>OSARAM</td><td>80012 Beyaz</td><td>LED lamba, 80012 Beyaz</td></tr><tr><td>Çevre Ölçer</td><td>PCE</td><td>PCE EM882</td><td>Lux, Sıcaklık, Bağıl Nem%</td></tr><tr><td>Termostatik dolap</td><td>Aqua Lytic (Liebherr)</td><td>ET636-6</td><td></td></tr><tr><td>Işıklı zamanlayıcı</td><td>Zamanlayıcı T</td><td>6185.104</td><td>230V/50HZ (ülkenizin özelliklerini kontrol edin)</td></tr><tr><td>Evrensel termostat</td><td>Conrad</td><td>UT200</td><td></td></tr><tr><td>Nemlendirici</td><td>Boneco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Balck bant</td><td>Tesa</td><td></td><td>5 cm </td></tr><tr><td>Tutkal</td><td>Uhu</td><td></td><td></td></tr><tr><td>lncubator lambası</td><td>Phillips</td><td>Softtone</td><td>5W</td></tr><tr><td>Zamanlayıcı saat</td><td>Ziliss</td><td></td><td>Ziliss, İsviçre</td></tr><tr><td>Excel Yazılımı</td><td>Microsoft</td><td></td><td>Excel</td></tr><tr><td>Origin Software 8.5</td><td>OriginLab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Backer Maya</td><td>Migros İsviçre</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Demir destek standı 17X28CM</td><td>Fisher Scientific</td><td>S47808</td><td></td></tr><tr><td>Asetik asit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A6283-100ML</td><td>H2O içinde seyreltilmiş %20 asetik asit</td></tr><tr><td>Kırmızı ışık lambası</td><td>Phillips</td><td>PFE712E*8C</td><td></td></tr><tr><td>Spatula </td><td>Fisher Scientific</td><td>14-373-25A</td><td></td></tr><tr><td>Güç kaynağı</td><td>EA</td><td>EA PS 2042-06B</td><td>Opsiyonel</td></tr><tr><td>Alüminyum folyo</td><td>Prix Coop</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isıtıcı</td><td>GOON</td><td>NSB200C</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodalga Fırın</td><td>Intertronic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Standart mısır unu sinek gıda</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Damıtılmış su </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

içinde doğuştan gelen ve sirkadiyen ayarlı photobehavior eğitim ışık tercih testi<em&gt; drosophila</em&gt; larva

Light Preference Assay to Study Innate and Circadian Regulated Photobehavior in Drosophila Larvae

Çeşitli düzeylerde hayvan davranışlarını kontrol etmek için çevresel sinyal olarak ışık görür. Drosophila larva sinir sistemi ışık bilgileri işleme ve hızlı ve sirkadiyen davranışları arasında paylaşılır nasıl temel sorulara cevap için eşsiz bir model olarak kullanılır. Işığa maruz kaldığında Drosophila larvaları basmakalıp bir kaçınma davranışı gösterir. Nispeten basit ışık-karanlık tercih testleri uygulanabilir ışık bağımlı davranışları araştırmak. Omurgalı ve eklembacaklılar görsel giriş algılama ve işleme dahil sinir yolları kısmen bu işleme fotik sirkadiyen bilgilerle örtüşmektedir. Işık algılama sistemi ve sirkadiyen sistem davranış çıkışları koordine tutmak için nasıl etkileşimde büyüleyici soru büyük ölçüde keşfedilmemiş kalır. Drosophila beyindeki nöronların az sayıda nedeniyle bu sorulara yaklaşım bir etkileyen biyolojik modeli ve genetik araçları yer olduğunu nöronal dalavereler içintirme. Sunulan açık-koyu tercih tahlil phototaxis sirkadiyen kontrolü de dahil olmak üzere görsel davranışlar bir dizi soruşturma sağlar.

Protokol yukarıda açıklanan ardından, vahşi tip Canton-S erken üçüncü larva stadyumda ışık-karanlık tercih iki farklı sirkadiyen kez CT0 ve CT12 de uçar test. Yetişkin 12-saat ışık-12-saat karanlık yetiştirilen ve 12 saat için yumurtalarını bırakmak kalmıştı. Larva aynı ışık-karanlık rejimi altında ilk iki gün büyür. Biz sabit koşullar (sirkadiyen saat çalışan ücretsiz) altında sirkadiyen modülasyon test etmek istedim çünkü testi (Şekil 3A) yapıldı kadar, larva sonra önümüzdeki üç gün boyunca sürekli ka...

Burada Drosophila larva için bir ışık-karanlık tercih testi açıklar. Bu testte ışık algılama ve işleme photobehavior doğuştan gelen ve sirkadiyen düzenleme hakkında bilgi sağlar.

Içinde Doğuştan gelen ve sirkadiyen Ayarlı Photobehavior Eğitim ışık tercih Testi<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva

Light acts as environmental signal to control animal behavior at various levels. The Drosophila larval nervous system is used as a unique model to answer ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, bir ışık-karanlık tercih testi aracılığıyla drosophila larvaelerinin doğuştan gelen ve sirkadiyen foto davranışlarını test etmektir. Bu, öncelikle deney larvaelerinin, larvalarda başlangıçta bir sirkadiyen saat oluşturmak için tanımlanmış ışık-karanlık koşulları altında yetiştirilmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, larvalar, larval sirkadiyen saatin serbestçe çalışmasına olanak tanıyan sabit karanlığa geçirilir.L3 beslenme aşamasına gelindiğinde, larva farklı sirkadiyen zaman noktalarındaki ışık tercihlerini test etmek amacıyla gruplara ayrılır. Bir tercih indeksi hesaplanarak zaman noktaları ve deneysel gruplar arasında karşılaştırmalar yapılarak, doğuştan gelen ve sirkadiyen ışık tercihini gösteren sonuçlar elde edilir. Bu yöntem, ışık algılamanın ve fotodavranış işlemenin doğuştan gelen ve sirkadiyen düzenlemesi hakkında bilgi sağlayabildiği gibi; koku alma, kemosensör algı, kemotaksi ve termotaksi gibi diğer sistemlere de uygulanabilir.Aynı şekilde, öğrenme ve bellek testleri için de modifiye edilebilir. Prosedürü, laboratuvarımdan mezun olan yüksek lisans öğrencileri Alina ve BMA göstereceklerdir. Yumurtaları toplamak için, çiftleşmiş yetişkin sineklerin taze flakonlar üzerinde 12 saat boyunca yumurtlamasına izin verin ve ardından onları yeni flakonlara aktarın. Yetişkinleri, 12 saat ışık ve 12 saat karanlık döngüsü boyunca her 12 saatte bir aktarmaya devam edin.12 saatlik yumurta toplama örneklerini inkübatörde tutun. Deney için, hayvanları erken L3 larva evresine kadar büyütün. Bunlar, yumurtadan çıktıktan sonra 84 ile 108 saat arasında beslenmeye hazır olanlardır.LAE'nin doğru evrelemesinin sağlanması, deneyin başarısı için kritik öneme sahiptir. Geç L3 evresinden itibaren LAE, görsel davranışın sirkadiyen bileşenlerini test etmek için foto-davranışı değiştirmiştir. Testten 48 saat önce ve larvaların subjektif şafak vaktinden hemen önce, toplanan larvaları karton bir kutuya yerleştirin.Ardından, kutuyu 48 saat boyunca sabit karanlık inkübatörüne aktarın; deneye kadar bu larvalar kendilerine ayrılan alanda rahatsız edilmeden tutulmalıdır. Kılavuz olarak, dört çeyreğe bölünmüş 20 santimetrelik bir kare kullanarak dokuz santimetrelik bir Petri kabı kapağı hazırlayın.Alüminyum folyonun 10 santimetrelik karelerini karşılıklı kadranlara yapıştırın ve üzerlerini siyah bantla kapatın. Kapak kenarını kapladığınızdan emin olun. Ardından, masadaki ışık kaynağının altına dört kadrana bölünmüş 20 santimetrelik bir kare yapıştırın.Tutarlı bir yerleştirme için kılavuz görevi görmesi amacıyla, bir test tabağının çevresini kağıt üzerine işaretleyin. Bir demir destek ayağı kullanarak Petri tabağının üzerine bir LED lamba yerleştirin. Yüksekliği, tüm test plağının homojen bir şekilde aydınlatılacağı şekilde ayarlayın.Lamba yüksekliğini daha fazla ayarlayarak veya ayarlanabilir bir güç kaynağı kullanarak, bir test alanındaki ışık yoğunluğunu 350 ile 760 lüks arasına getirin. Deney odasının kırmızı ışıkla aydınlatılması ve hayvanların yetiştirildiği ortamla aynı sıcaklıkta olması gerekir. Tüpler, iki gün boyunca sürekli karanlık altında bekletilmiştir.Yemlerin üst beş milimetresindeki lavaları bir spatula yardımıyla toplayın. Yemi bir Petri kabı kapağının dış yüzeyine yayın. Yeme bir miktar su ekleyin ve spatula ile nazikçe karıştırın.Bir resim fırçası kullanarak yeni bir kaba bir damla musluk suyu ekleyin. Larvaları yıkamak için su damlasına aktarın. Ardından, larvaları toplamak için ıslak bir resim fırçası kullanın.Sadece erken beslenme evresindeki L3 larvaları seçin ve geç gezinti evresindeki L3 larvalarından kaçının. Seçilen larvaları bir test plağının merkezine aktarın. Beslenme evresindeki L3 larvalarının anterior sferülleri açık ve dışa doğru çıkıktır.Parmak benzeri bir formdadır. Posterior küresel yapılar her birinde üç açıklığa ve dört grup büyük dallanmış kıla sahiptir. Tükürük bezleri ikinci abdominal segmente kadar uzanır.30 larva test plakasının merkezine yerleştirildikten sonra, plakayı hazırlanan kapakla kapatın. LED lambayı açın. Bir zamanlayıcı başlatın ve larvaların plaka üzerinde beş dakika boyunca serbestçe hareket etmelerine izin verin.Ardından kapağı hızla çıkarın ve karanlık ile aydınlık kadranlardaki larva sayısını sayın. Her bir larvanın konumunu işaretlemek sayım işlemini kolaylaştırabilir. Hızlıca bir fotoğraf çekmek de yardımcı olabilir; duvarlarda sürünen veya agara gömülen larvalar gibi net bir ışık tercihi göstermeyen larvalar, nötr tercih olarak sayılmalı ve ışık tercih indeksi hesaplanırken toplam larva sayısına eklenmelidir.Larvaları saydıktan sonra plakayı atın ve bir sonraki deney için yeni bir test plağı kullanın. Genotip başına 10 ila 15 deneme gerçekleştirdikten sonra, protokolü takip ederek analize geçin. Canton ES larvalarının ışık-karanlık tercihi iki farklı sirkadiyen zamanda karşılaştırılmıştır.CT sıfır ve CT 12'de, subjektif olarak, şafak ve gün batımı larvaları standart koşullar altında 48 saat boyunca tutulmuş ve ardından üç gün boyunca sabit karanlığa geçirilmiştir. 350 lüks altındaki ışık-karanlık testleri, CT sıfırda test edilen larvalarda ışık fotosensitivitesinin CT 12'de test edilen larvalara kıyasla daha yüksek olduğunu ortaya koymuştur. Bu formül kullanıldığında, CT sıfır larvalarının karanlık tercihi 0,52 iken, karşılaştırma grubunda bu değer 0,36 olmuştur.CT 12 larvalarının indekslerini wilcoxon testi kullanarak karşılaştırmak, 0,023 şeklinde anlamlı bir P değeri üretmektedir. Bu videoyu izledikten sonra, bu amaca yönelik olarak farklı devre ve zaman noktalarında trofik larvaların ışık tercihini nasıl test edeceğiniz konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Evre F üç oph larvalarını entrain edebilmeli, fotofobik davranışlarını test edebilmeli ve istatistiksel karşılaştırma için ışık tercih indeksini hesaplayabilmelisiniz.

light-preference-assay-to-study-innate-circadian-regulated

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Biz günlük lokomotor aktivite ritimleri kayıt için prosedürler...

Sirkadiyen Rhythms Eğitim ve Parametreler Uyku Lokomotor Aktivitesi Assaying Drosophila</em

&gt;Drosophila larvaları ışığa duyarlıdır ve çevredeki ışıktaki değişikliklere tepki verir. Bu videoda, ışık noktası tahlili adı verilen, ışıktan kaçınma yeteneklerini test eden bir tahlil açıklanmaktadır. Öne çıkan protokol, mavi ışıklı bir LED ile testin nasıl kurulacağını ve ışıkla karşılaşmaya yanıt olarak hayvanın davranışının nasıl kaydedileceğini gösterir.

Işık Noktası Deneyi: Drosophila Fototaktik Davranışını Araştırmak İçin Bir Yöntem

Bu video, Bruchpilot proteinlerinin nörotransmitter salınımındaki rolünü ve bunun sonucunda ortaya çıkan sinaptik aktivite modülasyonunu incelemek için Drosophila melanogaster'in belirli ışık koşulları altında yetiştirilmesini göstermektedir.

Uzun Süreli Işığa Maruz Kaldıktan Sonra Drosophila'da Sinaptik Modülasyon

Bu protokol, Drosophila melanogaster'in yumurtlama tercihlerini tek hayvan çözünürlüğünde test etmek için yüksek verimli bir testi tanımlar.  Bu tahlil, basit bir karar verme sürecini kontrol eden genleri ve devre bileşenlerini tanımlamak için basit, verimli ve ölçeklenebilir bir platform sağlar.

Yüksek Verimli Testi Bireyin Yumurta Yumurtlayan Tercihler incelemek için<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Bu iletişim kuralının amacı ile uzun vadeli Floresans hızlandırılmış görüntüleme moleküler sirkadiyen ritimler izlemek için en iyi duruma getirilmiş ex vivo Drosophila larva beyin kültür kurmaktır. Bu yöntem uygulamaya farmakolojik deneyleri de ele alınmıştır.

Tek hücreli çözünürlük Floresans canlı görüntüleme Drosophila sirkadiyen saatler larva beyin kültür

Bu protokol, Drosophila larva fototaktik davranışını araştırmak için ışık noktası bir test sunar. Bu testte, ışık stimülasyonu olarak bir ışık noktası oluşturulur ve larva ışıktan kaçınma işlemi kızılötesi ışık tabanlı görüntüleme sistemi tarafından kaydedilir.

Drosophila Larva Fototaksisanalizi için Hafif Nokta Tabanlı Tahlil

Burada, Drosophila'yı sirkadiyen bir güne nasıl senkronize edebileceğimizi anlatıyoruz. Bu biyolojik ritim ve kronobiyoloji eğitimi için gerekli ilk ve en önemli adımdır.

Drosophila Melanogaster Sirkadiyen Entrainment

Bu protokol, basit bir yetişkin Drosophila davranış gözlem odasının nasıl yapılır ve gözlem odasındaki farklı meyve sineklerinin morfolojisinin veya davranışının yüksek çözünürlüklü fotoğraflarının / videolarının nispeten basit ve uygun fiyatlı yöntemlerle nasıl çekılacağını açıklar.

Drosophila Yetişkinlerinin Davranışsal Çalışmaları için Ayarlanabilir Yüksek Çözünürlüklü Görüntüleme Sistemi

Bi-stabil fotopigmentleri elektrofizyolojik olarak karakterize etmek için bir protokol sunuyoruz: (i) foton absorpsiyonunu takiben fotopigment molekülleri içindeki yük yer değiştirmelerini ve fotoreseptörlerdeki büyük miktarlarını kullanmak ve (ii) rodopsin ve metarodopsin fotopigment durumlarının emilim-spektrum farklılıklarından yararlanmak. Bu protokoller, bi-stabil fotopigment sistemlerini etkileyen mutasyonları taramak için yararlıdır.

Drosophila Fotoreseptörlerinde Fotopigment Düzeylerini Ölçmek için Elektrofizyolojik Yöntemler

Bu makale, belirli nöronları aktive etmek ve susturmak için CsChrimson ve GtACR2 kullanarak Drosophila melanogaster'de optogenetik manipülasyon yöntemlerini sunmaktadır. Termotaktik ve tat davranışlarını keşfetmek için optogenetiği kullanmak ve bu süreçleri yöneten altta yatan nöral mekanizmalar hakkında bilgi sağlamak için dört deney tanımlanmıştır.

Drosophila melanogaster'de Nöral Devrelerin Optogenetik Manipülasyonu için Davranışsal Testler

Öğrenin Drosophila larvalarında doğuştan ve sirkadiyen düzenlenmiş fotodavranışları ışık-karanlık tercih testiyle nasıl ölçülür. Bu yöntem, sirkadiyen ritimler ve duyu işleme araştırmalarında önemli bilgiler sağlar.

Içinde Doğuştan gelen ve sirkadiyen Ayarlı Photobehavior Eğitim ışık tercih Testi

Daha fazla video keşfet