Name: Fare Embriyonik Yüz Ektoderm ve mesenchyme ayrılması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 36 s
Description: Öğrenin fare embriyonik yüz ektoderm ve mezenkim ayrıştırma yöntemini Dispase II enzimi kullanarak. Bu protokol gelişim biyolojisi araştırmalarında yüz yapı gelişimini incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar Şekil 1 ve yardım ve tartışma için laboratuvarın diğer üyeleri embriyonun kafaları göstermek için Irene Choi teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma NIH hibe DE012728 (TW) tarafından desteklenmektedir

1. Dispase II hazırlayın <ol><li> Hazırlama taze Hepes-tamponlu salin (HBS) (50 mM Hepes / KOH pH 7.4, 150 mM NaCl). 16.8 ml Ultra Saf H 2 O içine 2 ml 0,5 M Hepes / KOH pH 7.4 ve 1.2 ml 2.5 M NaCl ekle </li><li> 10 mg / ml dispase II olun. 0.2 g dispase II (Roche, Kedi # 4942078001) tartılır ve 20 ml HBS içinde çözülür. Uzun süreli depolama için -20 ° C&#39;de bireysel Eppendorf tüpleri ve mağaza içinde 1.0 ml alikotları hazırlayın. </li><li> Kullanımdan önce PBS içinde 10 mg / ml dispase II 1:10 seyreltin. Buz üzerinde seyreltilmiş dispase II koyun. </li></ol> 2. Hamile Kadın CD-1 E10.5 Embriyolar teşrih Tüm hayvan deneyleri Colorado Denver Üniversitesi (UCD) Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanan protokoller çerçevesinde yapıldı. CD-1 (ICR) fareler Harlan Laboratories (Indianapolis, IN) elde edildi. <ol><li> % 70 etanol ile diseksiyon alanı ve araçları temizleyiniz. </li><li> Approv kullanarak hamile CD-1 kadın Euthanizeed protokolleri. </li><li> % 70 etanol ile karın püskürtün sonra karın açın. Rahim mesometrium uzakta gözyaşı rahim ve başka bir çekmek için forseps bir set kullanın. Gövde, uterus çıkarın. Karın diğer tarafında uterin horn için tekrarlayın. </li><li> Kısaca kan yıkamak için 10 cm Petri kabındaki buz PBS ile rahim durulayın. </li><li> Buz gibi soğuk PBS ile bir yeni bir Petri kabı içine rahim aktarın. Implantasyon siteler arasında keserek tek embriyo parçalara ayırın. </li><li> Bir stereomikroskop altında buz gibi soğuk PBS içine bir embriyo transfer. Yolk kesesi ile embriyonun maruz kesim sitelerinden birini başlayan rahim kas duvarı yırttınız ince forseps kullanın. Yolk kesesi ve amniyon soyun. Buz PBS ile 6 cm Petri kabı disseke embriyo transfer. Tüm embriyolar bu şekilde toplanan edilene kadar devam edin. </li></ol> 3. Dispase II Tedavisi <ol><li> 6-santimetrelik bir petri tabağına PBS ile tüm embriyolar yıkayın. DeğiştirmekPBS içinde seyreltilmiş 10 mL dispase II ile PBS ile yıkandı. 25 dakika boyunca 37 ° C&#39;de Petri kabı ve inkübe Kapak - bakteriyel bir inkübatör veya sıcak bir odada yeterli olmalıdır - bu adım için bir CO 2 doku kültürü inkübatör kullanmadım. </li><li> Petri kabı çıkarın ve bir stereomikroskop altında embriyo gözlemlemek. Ektoderm gevşek olması gerektiği, bu doku tabakası ve altta yatan mezenşimi arasında açık bir uçurum tiplemesindeki. Aksi takdirde, 37 bir ek 5 dakika ° C de inkübe Sonra buz üzerinde Petri kabı koyun. </li></ol> 4. Bozulmamış Yüz çıkıntıların üzerinden teşrih <ol><li> (VWR, Kedi # 14.672-380) atılabilir cam pipet kullanın Bir stereomikroskop altında bir dispase II 6-santimetrelik bir petri tabağına buz gibi soğuk PBS içine embriyo tedavi aktarmak için. </li><li> Embriyo tutmak için forseps bir çift kullanın. Kafa ve yüz çıkıntıların sınırları (Şekil 1 sınırlarını göstermektedir kesmek için dikkatli bir şekilde ince forseps bir çift kullanımıyüz çıkıntıları). Bir MNP bir tarafında, daha sonra MXP, ve son olarak FNP başlatın. Bozulmamış üzerinden yüz çıkıntıları (Şekil 2A) incelemek için diğer tarafa aynı işlemi uygulayın. </li></ol> 5. Mesenchyme Ayrı Yüz Ektoderm <ol><li> 3x çalışma mesafesi ile bir stereomikroskop altında yüz çıkıntıları gözlemleyin. Hafifçe yukarı ve aşağı 5 kez yüz çıkıntıları Pipeti uzun bir cam Pasteur pipeti kullanın. Bundan sonra, ektoderm soyulmasına kolaydır. </li><li> Yüz çıkıntıları tutun forseps bir çift kullanın. Çok yavaş ektoderm kalkmasına forseps diğer çifti kullanın. Şekil 2B yüz ektoderm ayrılmış sayfaları gösterir. </li><li> Buz PBS ile bir 1.5 ml Eppendorf tüp içine yüz ektoderm aktarmak için yeni bir uzun cam Pasteur pipeti kullanın. Buz PBS ile başka bir 1.5 ml Eppendorf tüpüne mezenşimi aktarın. </li><li> Her diseksiyon için yeni buz soğuk PBS kullanın. Örnekleri toplayın. </li><li> T yıkayınPBS ile o örnekleri. 4 ° C, 3 dakika boyunca 500 xg&#39;de santrifüjleyin. </li><li> Uzun cam Pasteur pipetler kullanarak PBS aspire. Örnekler ChIP tahlil için kullanılacak ise, 6.1 adım devam edin. RNA ekstraksiyonu için 6.2 adıma geçin. Protein ekstraksiyonu için 6.3 adıma geçin. </li></ol> 6. Daha Deney için Proses Örnekleri <ol><li> ChIP tahlil için örnekler <ol><li> Çapraz bağ ile% 1 formaldehit ile 1 ml PBS ekleyin. Örnekler homojenize edilir. </li><li> Rotasyon ile 10 dakika süreyle oda sıcaklığında inkübe edin. </li><li> Tepkimeye girmemiş formaldehit gidermek için her tüpe 1.25 M Glisin 110 ul ekleyin. </li><li> Karıştırılır ve 5 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edilir. </li><li> 3 dk için 4 ° C sıcaklıkta 500 x g&#39;de Spin. Süpernatantı. </li><li> Dokulara yıkamak için 1 ml soğuk PBS ekleyin. </li><li> 3 dk için 4 ° C sıcaklıkta 500 x g&#39;de Spin. </li><li> PBS çıkarın ve PBS kez yıkayın tekrarlayın. </li><li> Süpernatantı, sıvı azot içinde doku dondurma oturtun. Sa Mağaza-80 ° C daha sonraki havuzu ve işlenmesi için mples. </li></ol></li><li> RNA ekstraksiyonu için Örnekler <ol><li> RNAlater (Ambion) ihtiva eden tüplerde yüz ektoderm ve mezenşimi yerleştirin. </li><li> ° C doku tam nüfuz izin vermek için gece boyunca 4 RNAlater Çözelti, numuneyi inkübe edin. </li><li> Sonraki havuzu ve işlenmesi için -20 ° C&#39;de saklayın. </li></ol></li><li> Protein ekstraksiyonu için Örnekler </li></ol> Sonraki işlemler için örnek lizis tamponu ekleyin. Veya sıvı azot içinde doku dondurma oturtun. -80 ° C daha sonraki havuzu ve işlenmesi için örnekler saklayın. Notlar <ol><li> Zaman kısıtlamaları. Yoluyla diseksiyon baştan Bölüm 6 başlangıcına 4-6 saat üzerinde planlayın. </li><li> Zaman yetkin, bu bölümleri 4 ve 5 (öne diseksiyon ve ektoderm ayırma) gerçekleştirmek için embriyo başına ~ 10-15 dakika sürer. </li><li> Örnekleri RNA izolasyonu, her eriyik için isen ilk Diethylpyrocarbonate ile tedavi edilmelidir. Ayrıca forseps and Away RNaz ile çalışma alanı temizleyin. </li><li> Dispase II tedavi ve diseksiyonu dışında her zaman buz üzerinde örnekler tutun. Diseksiyon için kullanılan PBS soğuk olduğundan emin olmak için her diseksiyon için yeni buz PBS değiştirin. </li><li> Sharp forseps hassas diseksiyon elde etmek için önemlidir. Herhangi bir bulaşmayı önlemek için tamamen forseps temizleyin. </li><li> Farklı çıkıntıların örnekler toplamak için dispase II tedaviden sonra ayrı ayrı öne teşrih. Sonra ektoderm ve mezenşimi ayırın. </li><li> Dispase II ile tedaviden sonra, yüz ektoderm soyulmasına kolaydır. Diğer ektodermden kontaminasyon özellikle dikkat edin. Tüm potansiyel olarak kontamine doku atın. </li><li> Sonra örnekleri 6. Bölümde uygun noktaya ulaşana kadar durmak yok, başlar. Yüz ektoderm ayrılması bitirin ve elinizden geldiğince hızlı olarak tüm embriyolar için mezenşimin. </li><li> Edispase II nzyme faaliyetlerini gruplar ve markalar arasında farklı olabilir. Farklı marka ve dispase II partiler için tedavi süresini ayarlamak için gereklidir. </li></ol>

<ol><li>Wilkie, A. O., Morriss-Kay, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+craniofacial+development+and+malformation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Genetics of craniofacial development and malformation.</a> Nat. Rev. Genet. 2, 458-468 (2001).</li>
<li>Gritli-Linde, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+2+-+The+Etiopathogenesis+of+cleft+lip+and+cleft+palate%3A+usefulness+and+caveats+of+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Chapter 2 - The Etiopathogenesis of cleft lip and cleft palate: usefulness and caveats of mouse models.</a> Current Topics in Developmental Biology. 84, 37-138 (2008).</li>
<li>Schutte, B. C., Murray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+many+faces+and+factors+of+orofacial+clefts%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">The many faces and factors of orofacial clefts.</a> Human Molecular Genetics. 8, 1-7 (1999).</li>
<li>Chai, Y., Maxson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+craniofacial+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Recent advances in craniofacial morphogenesis.</a> Dev. Dyn. 235, 2353-2375 (2006).</li>
<li>Jiang, R., Bush, J. O., Lidral, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+upper+lip%3A+Morphogenetic+and+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Development of the upper lip: Morphogenetic and molecular mechanisms.</a> Dev. Dyn. 235, 1152-1166 (2006).</li>
<li>Reid, B. S., Yang, H., Melvin, V. S., Taketo, M. M., Williams, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ectodermal+WNT%2F%CE%B2-catenin+signaling+shapes+the+mouse+face%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Ectodermal WNT/β-catenin signaling shapes the mouse face.</a> Developmental Biology. 349, 261-269 (2011).</li>
<li>Feng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+and+temporal+analysis+of+gene+expression+during+growth+and+fusion+of+the+mouse+facial+prominences%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Spatial and temporal analysis of gene expression during growth and fusion of the mouse facial prominences.</a> PLoS ONE. 4, e8066(2009).</li>
<li>Chia, R., Achilli, F., Festing, M. F., Fisher, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origins+and+uses+of+mouse+outbred+stocks%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">The origins and uses of mouse outbred stocks.</a> Nat. Genet. 37 (11), 1181-1186 (2005).</li>
<li>Nagai, T., Aruga, J., Takada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+expression+of+the+mouse+Zic1%2C+Zic2%2C+and+Zic3+gene+suggests+an+essential+role+for+Zic+genes+in+body+pattern+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The expression of the mouse Zic1, Zic2, and Zic3 gene suggests an essential role for Zic genes in body pattern formation.</a> Developmental Biology. 182, 299-313 (1997).</li>
<li>Britsch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcription+factor+Sox10+is+a+key+regulator+of+peripheral+glial+development%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">The transcription factor Sox10 is a key regulator of peripheral glial development.</a> Genes Dev. 15 (1), 66-78 (2001).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması veya bu makalenin içeriği ile ilişkili diğer çatışmalar var.

Bu protokol, bir ilk dispase II işlenme adımını esas fare embriyonik yüz ektoderm ve mezenşim ayırmak için basit bir yöntem sağlamaktadır. Daha önceki çalışmalarda, önceden dispase II tedavi yüz çıkıntıları diseksiyonu uygulandı, ama biz sürekli mezenşimi &quot;yapışkan&quot; ve işlemek için daha zor hale gelmesidir bulduk. Bizim yeni protokol bu sorunu önler. Kombinasyon dispase II aşağı yukarı pipetleme ve tarafından nazik fiziksel gücü ile tedavi ektoderm ve kolay mezenşimi ayrımı yapar. Ayrıca, bu protokol aynı zama...

<table><tbody><tr><td>Dispase II (nötr proteaz, derece II)</td><td>Roche</td><td>4942078001</td><td>HBS'de 10 mg / ml Dispase II stok çözeltisi yapın. Aliquot ve -20 &°C'de mağaza; C . </td></tr><tr><td>RNAlater</td><td>Ambion</td><td>AM7021</td><td></td></tr></tbody></table>

fare embriyonik yüz ektoderm ve mesenchyme ayrılması

Separation of Mouse Embryonic Facial Ectoderm and Mesenchyme

Orofasiyal yarıkların 1000 bebekten dünya çapında 1,2 1,5 etkileyen en sık kraniofasiyal defektlerin vardır. Orofasiyal yarıklaşmanın anormal yüz gelişme 3 neden olur. Yüz insan ve fare, ilk büyüme ve desenlendirme içindeki doku birkaç küçük tomurcukları, 4,5 yüz çıkıntıları dayanır. Eşleştirilmiş frontal burun süreçler (FNP), maksiller çıkıntıların (MXP) ve mandibular çıkıntıların (MdP): yüz altı ana çıkıntıların türetilmiştir. Bu çıkıntılar bir örten epitel kaplı bulunmaktadır mezenşimi ve şişlikler oluşur. Birden fazla tür çalışmalar yüz ektoderm ve mezenşimi arasındaki karışma sinyal yüzünü 6 şekillendirme için kritik olduğunu göstermiştir. Ancak, bu sinyal röleleri Genlerdeki ilgili mekanistik ayrıntıları eksiktir. Bir gen ekspresyonu kapsamlı bir anlayış kazanmak için bir yol, bağlayıcı transkripsiyon faktörü ve develo ile ilişkili kromatin işaretleriping yüz ektoderm ve mezenşimi ayrılmış doku kompartmanları izole ve karakterize etmektir. Burada embriyonik gün (E) 10.5, çıkıntıların füzyon öncesinde fare yüz oluşumunda kritik bir gelişimsel aşamada yüz ektoderm ve mezenşimi ayırmak için bir yöntem mevcut. Bizim yöntemi daha önce yüz çıkıntıları 7 diseksiyon için kullanmış yaklaşımı uyarlanmıştır. Bu önceki çalışmada kendilenmiş C57BL istihdam vardı / Bu zorlanma gibi 6 farelerin genetik, genomik ve yüz morfolojisi 8 için bir standart haline gelmiştir. Burada, buna rağmen, uygun bir doku daha sınırlı miktarlarda nedeniyle, biz hayvancılık için, daha sağlam satın almak daha ucuzdur outbred CD-1 suşu kullanılmıştır ve herhangi kendilenmiş daha çöp başına daha fazla embriyo (12-18) üretmek eğilimi var fare zorlanma 8. Embriyo izolasyon takiben, nötr proteaz dispase II bütün embriyo tedavi etmek için kullanılmıştır. Sonra, yüz çıkıntıları teşrih edildied dışarı ve yüz ektodermden mezenşimi ayrıldı. Bu yöntem, yüz ektoderm ve mezenşim her ikisi de bozulmadan muhafaza eder. Bu yöntemi kullanarak elde edilen örneklerin protein tespiti, kromatin immünopresipitasyon (ChIP) tayini, mikroarray çalışmalar ve RNA-seq dahil teknikleri kullanılabilir.

Dispase II Tedaviden sonra, embriyonun ektoderm gevşek olma eğilimindedir. Yüz çıkıntıları diseksiyonu (Şekil 2A) sonra sağlam olmalıdır. İzole yüz ektoderm net ve mezenşimi doku (Şekil 2B) ücretsizdir. Protokolünün etkinliğini belirlemek için ve biz önbeyin için tahlil çapraz kontaminasyon tespit Zic3 9, ektodermal belirli cdh1 5 ve ters transkriptaz PCR kullanarak mezenkimal belirli sox10 10 dile getirdi. Çalışmalarımız yüz ektoderm ve mezenşimi hem be...

Embriyo yüz ektoderm ve mezenşimi ayrılması için bir protokol tanımlanmıştır. Biz, ilk bütün embriyolar tedavisinde tüm yüz çıkıntıları üzerinden incelemek dispase II kullanın ve sonra yüz ektoderm ve mezenşimi ayırın.

Fare Embriyonik Yüz Ektoderm ve mesenchyme ayrılması

 Orofacial clefts are the most frequent  craniofacial defects, which affect 1.5 in 1,000 newborns worldwide1,2. Orofacial clefting is caused by abnormal ...

Bu prosedürün genel amacı, fare embriyonik, yüz ektodermi ve mechy'yi ayırmaktır. Bu, ilk olarak CD bir E 10.5 embriyosunun izole edilmesiyle gerçekleştirilir. İşlemin ikinci adımı, tüm embriyoları dys ile tedavi etmektir.İkinci aşama. Enzimatik tedaviden sonra, yüz çıkıntıları izole edilir ve son adım, yüz dermini mezenşimden dikkatlice ayırmaktır. İzole edilmiş fasiyal derm ve mezenşim daha sonra daha fazla deney için hazırdır.Bu tekniğin, diseke edilmiş yüz belirginliğinin dis space tedavisi gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, tüm embriyonun DYS boşluğu ile tedavi edilmesinin hem yüz kazasını hem de sağlam kalmasıdır. Bu yöntem, diferansiyel gen ekspresyonu, epigenetik modifikasyon ve transkripsiyon faktörü bağlanmasının fasiyal derm ve mezenşim arasındaki moleküler karışmayı nasıl düzenleyebileceği gibi memeli gelişim biyolojisi alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Embriyogenez sırasında, şimdi ve dokuların izolasyonu arasında dört ila altı saat planlayın, diseksiyon alanını ve aletleri% 70 etanol için temizleyin.Ve eğer örnekler RNA izolasyonu içinse, RNA'ları uzakta kullanın. Forsepslerin keskin olması çok önemlidir. Ek olarak, RNA izolasyon

separation-of-mouse-embryonic-facial-ectoderm-and-mesenchyme

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Postimplantation-dönem embriyoların İzolasyon bir gen desenlendirme hücre soy karar verme süreçlerini embriyonik gelişim sırasında çalışma ve analiz etmek için izin verir, fakat erken embriyo uygun diseksiyonu zor olabilir. Bu protokol erken ilkel bir çizgi-dönem embriyoların izole etmek için bir yöntem açıklanır (~ 6.5 gün coitum [DPC).

6.5 DPC Fare Embriyolar diseksiyonu

Bu makale, kraniyofasiyal gelişimi sırasında sinyalizasyon ve yüzey sefalik ektoderm desenlendirme özellikleri test etmek için tasarlanmış bir doku nakli tekniği açıklar.

Kraniofasial Geliştirme sırasında Ektodermal Epiteli Sinyal Özellikleri değerlendirilmesi

Kranial mezenşimi muhtemel nöral kıvrımların yükselmesi için bir itici güç sağlar dramatik morfojenik hareketleri...

Kranial mesenchyme Hücresel Davranış Değerlendirme için bir Eksplantasyon Assay

Tek bir embriyonik hücre kaderi, kalıtsal molekülleri ve / ya da hücrede gelen sinyalleri tarafından etkilenebilir. Klivaj dönemi Xenopus embriyosunun kaderi haritaları kullanarak, tek blastomer hücre-hücre etkileşimleri karşı kalıtsal molekül katkıları değerlendirmek için izole kültür için tespit edilebilir.

Blastomer Eksplantlarından Embriyonik gelişim sırasında Hücre Kader Taahhüt Test Etmek için

Embriyonik nöronlar nöral tüp ventriküler bölgesinde doğmuş, ancak uygun hedeflere ulaşmak için göç edilir. Yüz branchiomotor (FBM) nöronlar nöronal göç incelemek için yararlı bir model vardır. Bu protokol FBM göçünü düzenleyen mekanizmaların araştırılması fare embriyo hindbrains arasında Wholemount ex vivo kültür açıklar.

Fare Beyin<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Kültür Yüz Branchiomotor Nöron Göç Eğitim için

Burada, konfokal mikroskopi kullanarak fare sekonder damak füzyonunun canlı görüntülemesi için bir protokol sunmaktayız. Bu protokol, çeşitli floresan muhabir fare hatları ve mekanik içgörü için yol inhibitörleri ile birlikte kullanılabilir. Bu protokol, diğer gelişimsel sistemlerde canlı görüntüleme için uyarlanabilir.

Fare İkincil Palin Füzyonunun Canlı Görüntüsü

Bu protokol, öncelikle hücre göçü çalışmaları için fare modellerinden kranial nöral krest hücrelerinin diseksiyon ve kültürünü açıklar. Kullanılan canlı görüntüleme tekniklerini ve hız ve hücre şekli değişikliklerinin analizini anlatıyoruz.

Nöral Krest Hücre Delaminasyonu ve Göçü Çalışması İçin Fareden Birincil Kranial Nöral Krest Hücrelerinin Diseksiyonu, Kültürü ve Analizi

İki boyutlu (2D) büyüme ve yara onarım testlerinin hızlandırılmış görüntülemesi için primer fare embriyonik palatal mezenkimal hücrelerin izolasyonu ve kültürü için bir protokol sunuyoruz. Ayrıca hücre akışı oluşumunu ve yönlü hareketliliği belirlemek için zaman atlamalı görüntüleme verilerinin analizi için metodoloji sağlıyoruz.

Kolektif Hareket Niteliklerini Analiz Etmek için Birincil Fare Embriyonik Palatal Mezenkim Hücrelerinin İzolasyonu ve Zaman Atlamalı Görüntülenmesi

Embriyonik ve yetişkin fare dillerinin epitel ve mezenkim/bağ dokusundan çok miktarda yüksek kaliteli tek hücreyi ayrıştırmak için genelleştirilmiş bir protokol geliştirdik.

Embriyonik Gün 12.5 ve 8 Haftalık Farelerin Dil Epitel ve Mezenkim/Bağ Dokusundan Hücre Ayrışması

Protokol, disseke edilmiş fare embriyo yüz süreçlerinden veya kültürlenmiş fare embriyonik palatal mezenkim hücrelerinden tüm hücre protein lizatlarını izole etmek ve fosforile protein seviyelerini değerlendirmek için müteakip batı lekelemesini gerçekleştirmek için bir yöntem sunar.

Fosfoprotein Analizi için Fare Yüz İşlemleri ve Kültürlenmiş Palatal Mezenkim Hücrelerinden Tüm Hücre Protein Lisatlarının İzolasyonu

Burada, fare dokularının geliştirilmesinde sitomem adı verilen özel sinyal filopodiasını tespit etmek için embriyoların fiksasyonu, immün boyama ve bölümlenmesi için optimize edilmiş bir adım adım protokol sağlanmaktadır.

Sitonem analizi için embriyonik fare dokusunun fiksasyonu

Öğrenin fare embriyonik yüz ektoderm ve mezenkim ayrıştırma yöntemini Dispase II enzimi kullanarak. Bu protokol gelişim biyolojisi araştırmalarında yüz yapı gelişimini incelemek için kullanılır.

Fare Embriyonik Yüz Ektoderm ve mesenchyme ayrılması

Daha fazla video keşfet