Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak Murine Direnç Arter Fonksiyon değerlendirilmesi

Aşağıdaki deneyin genel amacı, fareye dirençli arterin in vitro olarak yakın fizyolojik koşullarda gerçek zamanlı vasküler reaktivitesini belirlemektir. Bu, damarın küçük bir segmentinin iki mikro kanül üzerine monte edilmesi ve fizyolojik lümen basıncında tutulmasıyla elde edilir. Damar daha sonra herhangi bir ilacın damarı genişletme yeteneğini incelemek için bir alfa bir reseptör agonisti fenilefrin ile daraltılır.

Daralmış damarı asetilkolin ile zorlamak, endotel bağımlı bir mekanizma yoluyla gerçek zamanlı olarak genişleme yeteneğini değerlendirir. Sonuçlar, asetilkoline yanıt olarak lümen çapındaki yüzde değişimi gösterir ve SGC alfa bir eksikliğinin endotel bağımlı vazodilatasyonun bozulmasına neden olduğunu doğrular. Bu tekniğin tel mamografi gibi mevcut yöntemlere kıyasla en büyük avantajı, basınçlı mamografinin, kan basıncı homeostazının korunmasında daha büyük iletkenlik damarlarına göre daha önemli olan küçük mikro damarların karakterizasyonuna izin vermesidir.

Bu yöntem, makro dirençli damarların kritik bir rol oynadığı hipertansiyon gibi kardiyovasküler alandaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Pentobarbital ile bir fareye ötenazi yaparak başlayın. Şimdi karın boşluğunu açın ve mezenterik dokuyu incelemeye başlayın.

Şimdi üçüncü dereceden bir mezenterik arter tanımlayın ve onu bağ ve yağ dokusundan izole edin. Mikro damarlar düzeyinde atardamarlar ve toplardamarlar arasında ayrım yapmak, damarlarda kan olmadığında sorunludur. Bu yüzden bunu sağlam bir hayvanda yapmak tercih edilir.

Daha sonra, üçüncü dereceden mezenterik arterin iki ila üç milimetre uzunluğunda bir segmentini kesin ve yığınlar içeren bir tabağa yerleştirin. PSS arabelleği. Arteriyel segment herhangi bir dallanma içermemelidir.

Kanülleri giriş ve çıkış valflerinden yığınla PSS solüsyonu ile nazikçe doldurarak myo odasını hazırlayın 10 mililitrelik bir şırıngadan, aşırı basıncın kanüllere bağlı kırılgan dönüştürücüye zarar verebileceğini unutmayın. Kanülleri sıkıca doldurduktan sonra her iki valfi de kapatın. Şimdi izole edilmiş arteriyel segmenti odaya aktarın ve damarın bir ucunu sağ kanül üzerine monte edin.

Bir şırınga kullanarak ince bir naylon sütür teli ile dikkatlice bağlayın, yıkayın ve kabı giriş valfi aracılığıyla yığın çözeltisi ile doldurun. Şimdi damarın diğer ucunu sol kanülün üzerine monte edin ve kanülü naylon dikişle damara sabitleyin. Hazneyi 10 mililitreye kadar yığın çözeltisi ile doldurun.

Bir şırınga yardımıyla yığın çözeltisini giriş valfinden hafifçe iterek sızıntı olup olmadığını kontrol edin. Şimdi odayı video kameranın altına yerleştirin. Oksijeni başlatın ve giriş vanası kapalıyken hazneyi 37 santigrat dereceye ısıtın, ilk yığın çözelti rezervuarından P bir tüpe bağlayın.

Tüpte kabarcık kalmayana kadar herhangi bir kabarcığın ve çözeltinin tüpten geçmesine izin verin. Ardından vanayı açın. P iki borusu ile haznenin sol valfine bağlayın.

Basınç regülatöründen gelen, tüm sistemde kabarcık veya sızıntı olmadığından emin olun. Myo arayüz panelindeki veya yazılımdaki basınç menüsüne gidin ve akışı kapatırken pompayı açın. Programı açın ve topla'ya tıklayın.

Kap lümeninin, damar çapının ve duvar kalınlığının izlenmesi ve analizi artık mümkündür. Luminal arası basıncı kademeli olarak yükseltmek için, P bir basıncını seçin ve bir artan basınç dizisi girin. Beş ila 60 milimetre cıva damarı arasındaki değerler, bazen basınç arttıkça bükülür veya kıvrılır, bu nedenle dikey veya uzunlamasına bir mikro konumlandırıcı yardımıyla gerginliği veya gerilimi buna göre ayarlayın.

Basınç 60 milimetreye ve banyo 37 santigrat dereceye ulaştığında, dengeleme süresi boyunca kabı en az 45 dakika ve bir saate kadar dengeleyin. Banyo solüsyonunu önceden ısıtılmış yığınlarla bir kez değiştirin. Artık arteriyel bölüm dengelendiğine göre, 37 santigrat derecede 10 mililitre potasyum klorür depolarize edici çözelti uygulayın.

Düz kas tamamen depolarize olacak ve maksimum daralma sağlayacaktır. Stabil bir daralma elde ettikten sonra, banyoyu 10 dakikalık aralıklarla üç kez yığın solüsyonu ile durulayın. Şimdi damarın canlılığını ve endotelin bütünlüğünü kontrol edin.

İlk olarak, litre başına negatif beş mol eğilimi göstermek için fenilefrin ekleyerek damarı önceden daraltın. Stabil bir daralma elde edildiğinde, son asetilkolin dozundan sonra litre başına 10'dan negatife, dokuz ila 10'dan negatif beş mol'e artan asetilkolin dozlarının sıralı olarak eklenmesiyle kümülatif bir konsantrasyon vazodilatasyon yanıt eğrisi gerçekleştirin. Preparasyonu 10 dakikalık aralıklarla üç kez yığınlarla durulayın.

Şimdi, kaydedilen izlemelerden litre başına iki milimol EGTA içeren kalsiyumsuz PSS uygulayarak pasif lümen çapını belirleyin. Tüm parametreleri hesaplamak için kullanılacak olan her doz yanıtı için lümen çapını ölçün. Asetilkolin gevşeme yanıtını, agonist ve kalsiyum içermeyen tampon ile tedavi arasında, her birinin fenilefrin kaynaklı daralmadan lümen çapını ne kadar değiştirdiği açısından bir karşılaştırma olarak ifade edin.

S altı ve siyah altı arka plan üzerinde vahşi tip ve SGC alfa bir nakavt farelerden izole edilen ve fenilefrin ile önceden daraltılmış mezenterik direnç arterlerinde asetilkoline yanıt olarak vasküler gevşemeyi incelemek için durum basıncı Miyografisi kullanıldı. SGC alfa bir eksikliği, incelenen farelerin genetik arka planından bağımsız olarak asetilkolinin vasküler gevşemeyi indükleme yeteneğinin azalması ile ilişkilendirildi. Bununla birlikte, SGC Alpha one null farelerin endotel bağımlı gevşemesi, S altı arka planında siyah altı Arka Plandan daha belirgin şekilde bozulmuştur.

Bu bulgular birlikte, vaskülatürün endotelyal bağımlı gevşemeye karşı azalmış duyarlılığının, SGC Alpha one knockout farelerinde suşa özgü hipertansiyona katkıda bulunabileceğini düşündürmektedir. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde gerçekleştirilirse bir veya iki saat içinde yapılabilir. Bu işleme ek olarak, konfokal mikroskopi gibi diğer yöntemler de canlı kan damarları üzerinde eş zamanlı olarak gerçekleştirilebilir. Bu, örneğin, altta yatan sinyal mekanizmalarını tanımlamaya yardımcı olabilecek hücre içi demir konsantrasyonlarının ölçülmesine izin verecektir.