Name: Endophytes olarak Mantar Entomopatojenlerin Kurulması: Endofitik Biyolojik Kontrol Doğru (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 14 s
Description: Öğrenin Beauveria bassiana mantarını Phaseolus vulgaris fasulyesinde endofit olarak kurma yöntemlerini. Yaprak püskürtme ve toprak sızma teknikleri ile sürdürülebilir tarımsal zararlı kontrolü için biyolojik koruma potansiyelini keşfedin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Üretim ve deneysel çalışmalar burada Reynaldo Pareja en sadık ve coşkulu yardım yansıtmaktadır sundu. Kolombiya İdari Bilimler Bölümü, Teknoloji ve Yenilik (Colciencias) tarafından ve Bill &amp; Büyük Zorluklar İncelemeler girişimiyle Melinda Gates Vakfı hibe tarafından finanse edilmiştir.

1. Bitkiler <ol><li> Yüzey sterilize% 0.5 sodyum hipoklorit iki dakika ve% 70 etanol içinde iki dakika için onları daldırarak fasulye tohumları (cv. Calima). Steril distile su ile tohumların üç kez yıkayın. </li><li> Patates dextroxe agar (PDA) medyada son durulama suyuna 100 ul kaplama ve 25, 10 gün boyunca plaka inkübe ederek sterilizasyon başarısının ° C Değerlendirin Herhangi bir büyüme plaka üzerinde görülen ise deney sonlandıralım ve yeniden başlatın. </li><li> 2:1 oranında toprak ve kum steril bir karışımı içeren saksılara üçlü gruplar halinde tohum bitki. 25 bir büyüme odası ° C, ca için tencere aktarın. % 50 bağıl nem ve 12 saat fotoperiyodun. Bir hafta sonra çimlenme, en az iki kuvvetli fideleri ortadan kaldırır. Steril distile su ve NPK 15-15-15 gübre 6 g / L su çözeltisi ile dikimden sonra 10 ve 20 gün dölleme ile Su 2-3 günde. </li></ol> 2. Mantar <ol><li> Bir ticari edininBeauveria bassiana&#39;nın suşu GHA (Mycotrol SE, Laverlam, Cali, Kolombiya) CIAL formülasyonu. </li><li> Tek spor stok kültür oluşturmak için, ca askıya. bir 10 saniye için% 0.1 &#39;lik su Triton-X-100 çözeltisi ve girdap 1 ml Konidyumların tam döngü inokülasyon. 25 de 24 saat süre ile% 2.5 agar ve inkübe Asil üzerinde süspansiyon daha sonra, levha 100 ul ° C. 100 mm levha içeren PDA içine tek bir çimlenme conidium aktarın ve tüm plaka (yaklaşık 3-4 hafta) kapsar kadar büyür. </li><li> Steril koşullar altında, ortam yüzeyinden mantar büyüme kazımak ve 10 ml steril% 0.1 Triton-X-100 içinde askıya. Bir dakika vorteksleyin. Sonra, hif kaldırmak ve stok süspansiyon elde etmek için steril bir tülbentten geçirilerek süspansiyon filtre. </li><li> Stok süspansiyon konidial konsantrasyonu tahmin etmek hemasitometre kullanın. Konidial sayımları kolaylaştırmak için, her seferinde 100 ul o aktarma, stok 10.000 kat seri dilüsyon hazırlamakf konidial% 0.1 Triton-X 100 900 ul süspansiyon ve sonraki seyreltme önce 10 saniye boyunca karıştırın. </li><li> Inokulum üretmek için, aşağıdaki formül kullanılarak 10 8 konidya / ml &#39;lik bir nihai konsantrasyon için stok süspansiyon ayarlayın; <img src="/files/ftp_upload/50360/50360eq1.jpg" alt="denklemi 1" fo:src="/files/ftp_upload/50360/50360eq1highres.jpg"/></li><li> 25 24 saat süreyle% 2.5 Noble Agar ve inkübe üzerinde 10.000 kat seyreltme konidial canlılığı, plaka 100 ul değerlendirmek ° C. Ardından, yüzde çimlenme tahmin etmek 100 Konidyumların üç rasgele grupları inceleyin. Çimlenmiş bir conidium düşünün zaman ondan conidium projelerin yarısından çapından daha görünür bir germ tüp artık. Ortalama yüzde çimlenme% 90 aştığında Sadece süspansiyonu kullanın. </li></ol> 3. Aşılama <ol><li> Onların ilk gerçek yaprak aşamasında (yaklaşık 14 gün ekimden sonra) ulaştığınızda bitkiler inoküle edin. Steril ile toprak kapasitesi Su bitkileri damıtmakaşılar önce ed su 24 saat. </li><li> Yapraktan püskürtme yöntemi için, konidial süspansiyon (tedavi) veya% 0.1 Triton-X 100 (kontrol) yaprakların adaxial (üst) yüzeyine onlar doygunluk ulaşana kadar uygulamak için bir el atomizer kullanın. Toprağa konidial akış önlemek için alüminyum folyo ile pot üstüne örtün. Püskürtme sonra, fungal invazyon kolaylaştırılması nem yüksek düzeyde tutmak için 24 saat boyunca plastik bir torba ile bitkileri kapsamaktadır. </li><li> Toprak ıslatma yöntemi için, konidial süspansiyon (tedavi), 10 ml ya da% 0.1 Triton-X 100 (kontrol) bitki tabanında toprak yüzeyine. Uygulamak için dereceli bir silindir kullanmak </li><li> Aşılar sonra, tesadüf blokları deneme desenine onları düzenliyor büyüme odalarına bitkiler dönün. En az dört ilave deneysel bloklar aynı deney içinde, endofitik kolonizasyon değerlendirme ek olarak, bitki büyüme değerlendirilmesine izin verecek şekilde monte edilmelidir. </li></ol> 4. Evaluations <ol><li> Rastgele sırayla Blokların seçilmesi, bir anda deneme bir blok değerlendirin. Bu, tek bir gün değerlendirmeye edilemez büyük deneyler için özellikle önemlidir. </li><li> Bir bitki işlemeden önce, ölçmek ve tabandan apikal meristem olan yüksekliği kaydedin. Sonra, dikkatle söküp ve akan musluk suyu iyice yıkayın. </li><li> Her bitki, örnek itibaren iki bildiriler, kök iki parça ve kök iki adet. Bitkinin ilk gerçek yaprak rastgele broşür örnekleri seçin. Daha sonra, bitki ortasından ve toprak yüzeyine yakın bir mesafede, iki kök örnekleri, 3 cm uzunluğunda her elde edin. Son olarak, kök orta ve kök ucu arkasında 1 cm de 3 cm uzunluğunda, iki adet kazık kök örnekleri almak. Uygun üç ayrı kağıt torba ve etiket örnekleri yerleştirin. </li><li> Bir blok içinde tüm bitkilerin yıkama ve örnekleme sonra, daha sonra, yaprak işleme göre kökleri başlangıç ​​ve son olarak sapları. </li><li> T sterilize YüzeyeYukarıda 1.1, gibi steril bir laminer akış kaputu konular. Steril distile suya göre her bir örnek üç kez durulayın ve steril havlu kağıt kurumalarını bekleyin. Sonra, teşrih ve endophytes dezenfektanları ile temas nedeniyle elimine edilmiştir nerede olabileceğini, dış kenarları atın. </li><li> Sapları ve kökleri için yaprak ve 6 mm uzunluğundaki için 6x6 mm, ortalama altı bölüme kesilmiş numune kesin. Levha 2 mg / L her birinde antibiyotikler tetrasiklin, streptomisin ve penisilin ile desteklenmiş PDA besiyeri ile 60 mm Petri plaka üzerinde altı bölümden. Parafilm ile plaka mühürleyin ve 25 karanlıkta inkübe ° C Her bitki altı tabak, başına iki bitki parçasını verir. </li><li> Belirli bir bitki parçasını her bloğunun işledikten sonra durulama suyunu değiştirin. Atılmadan önce kullanılan durulama suyu, plaka ° C sterilizasyon başarısının 25 az 10 gün PDA besiyeri ve inkübe üzerinde 100 mikrolitre numune değerlendirmek. Mantar üremesi ensues ise, analiz için gelen numune düşünmüyoruz. </li><li> Fungal büyüme gözlemlemek ve kaydetmek için 20 gün boyunca plakaları 2-3 günde bir kontrol edin. Tüketim ve transfer bitki bölümleri taze PDA içeren tabak mantar endophytes varlığı sergiliyor. Bu orijinal plaka komşu bitki bölümleri kirlenmesini önlemek olacaktır. </li><li> Rekor B. Bitki bölümlerden bassiana büyüme. Beauveria bassiana&#39;nın karakteristik beyaz yoğun Miseller kenarında uçuk sarı krem haline tarafından tespit edilebilir. Şüphe, bir damla su olarak numune monte ve türün karakteristik küresel Konidyumların ve zikzak şekilli konidyoforlar, arıyor, bir mikroskop altında incelemek zaman. </li><li> Bitki biyokütle tedavilerin etkisini değerlendirmek için ilave deneysel blokları kullanın. İlk olarak, taban apikal meristem üst bunların yüksekliği ölçülür. Sonra, dikkatle söküp ve musluk suyu tesisleri yıkama ve kuru ağırlığını belirlemek için üç gün boyunca 45 ° C&#39;de kurumaya bırakın. </li></ol>

<ol><li>Vega, F. E., Meyling, N. V., Luangsa-ard, J. J., Blackwell, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVega%2C+FE+%22Fungal+entomopathogens+in+Insect+Pathology%22">Fungal entomopathogens in Insect Pathology</a>. Vega, F. E., Kaya, H. K. , Elsevier. San Diego. 171-220 (2012).</li>
<li>Vega, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insect+pathology+and+fungal+endophytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+invertebrate+pathology%22%5BJournal%5D)">Insect pathology and fungal endophytes.</a> Journal of invertebrate pathology. 98, 277-279 (2008).</li>
<li>Sasan, R. K., Bidochka, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+insect-pathogenic+fungus+Metarhizium+robertsii+%28Clavicipitaceae%29+is+also+an+endophyte+that+stimulates+plant+root+development%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+botany%22%5BJournal%5D)">The insect-pathogenic fungus Metarhizium robertsii (Clavicipitaceae) is also an endophyte that stimulates plant root development.</a> American journal of botany. 99, 101-107 (2012).</li>
<li>Elena, G. J., Beatriz, P. J., Alejandro, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metarhizium+anisopliae+%28Metschnikoff%29+Sorokin+promotes+growth+and+has+endophytic+activity+in+tomato+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+biological+research%22%5BJournal%5D)">Metarhizium anisopliae (Metschnikoff) Sorokin promotes growth and has endophytic activity in tomato plants.</a> Advances in biological research. 5, 22-27 (2011).</li>
<li>Bing, L. A., Lewis, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+Ostrinia+nubilalis+%28H%C3%BCbner%29%28Lepidoptera%3A+Pyralidae%29+by+endophytic+Beauveria+bassiana+%28Balsamo%29+Vuillemin%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+entomology%22%5BJournal%5D)">Suppression of Ostrinia nubilalis (Hübner)(Lepidoptera: Pyralidae) by endophytic Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin.</a> Environmental entomology. 20, 1207-1211 (1991).</li>
<li>Akello, J., Dubois, T., Coyne, D., Kyamanywa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endophytic+Beauveria+bassiana+in+banana+%28Musa+spp.%29+reduces+banana+weevil+%28Cosmopolites+sordidus%29+fitness+and+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Crop+protection%22%5BJournal%5D)">Endophytic Beauveria bassiana in banana (Musa spp.) reduces banana weevil (Cosmopolites sordidus) fitness and damage.</a> Crop protection. 27, 1437-1441 (2008).</li>
<li>Gurulingappa, P., Sword, G. A., Murdoch, G., McGee, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonization+of+crop+plants+by+fungal+entomopathogens+and+their+effects+on+two+insect+pests+when+in+planta%5BTitle%5D)+AND+%22Biological%22%5BJournal%5D)">Colonization of crop plants by fungal entomopathogens and their effects on two insect pests when in planta.</a> Biological. 55, 34-41 (2010).</li>
<li>Akello, J., Dubois, T., Coyne, D., Kyamanywa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+endophytic+Beauveria+bassiana+on+populations+of+the+banana+weevil%2C+Cosmopolites+sordidus%2C+and+their+damage+in+tissue-cultured+banana+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Entomologia+experimentalis+et+applicata%22%5BJournal%5D)">Effect of endophytic Beauveria bassiana on populations of the banana weevil, Cosmopolites sordidus, and their damage in tissue-cultured banana plants.</a> Entomologia experimentalis et applicata. 129, 157-165 (2008).</li>
<li>Ownley, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beauveria+bassiana%3A+Endophytic+colonization+and+plant+disease+control%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+invertebrate+pathology%22%5BJournal%5D)">Beauveria bassiana: Endophytic colonization and plant disease control.</a> Journal of invertebrate pathology. 98, 267-270 (2008).</li>
<li>Ownley, B. H., Gwinn, K. D., Vega, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endophytic+fungal+entomopathogens+with+activity+against+plant+pathogens%3A+ecology+and+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22BioControl%22%5BJournal%5D)">Endophytic fungal entomopathogens with activity against plant pathogens: ecology and evolution.</a> BioControl. 55, 113-128 (2010).</li>
<li>Akello, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beauveria+bassiana+%28Balsamo%29+Vuillemin+as+an+endophyte+in+tissue+culture+banana+%28Musa+spp.%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+invertebrate+pathology%22%5BJournal%5D)">Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin as an endophyte in tissue culture banana (Musa spp.).</a> Journal of invertebrate pathology. 96, 34-42 (2007).</li>
<li>Gómez-Vidal, S., Lopez-Llorca, L. V., Jansson, H. B., Salinas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endophytic+colonization+of+date+palm+%28Phoenix+dactylifera+L.%29+leaves+by+entomopathogenic+fungi%5BTitle%5D)+AND+%22Micron%22%5BJournal%5D)">Endophytic colonization of date palm (Phoenix dactylifera L.) leaves by entomopathogenic fungi.</a> Micron. 37, 624-632 (2006).</li>
<li>Posada, F., Vega, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+the+fungal+entomopathogen+Beauveria+bassiana+%28Ascomycota%3A+Hypocreales%29+as+an+endophyte+in+cocoa+seedlings+%28Theobroma+cacao%29%5BTitle%5D)+AND+%22Mycologia%22%5BJournal%5D)">Establishment of the fungal entomopathogen Beauveria bassiana (Ascomycota: Hypocreales) as an endophyte in cocoa seedlings (Theobroma cacao).</a> Mycologia. 97, 1195-1200 (2005).</li>
<li>Tefera, T., Vidal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+inoculation+method+and+plant+growth+medium+on+endophytic+colonization+of+sorghum+by+the+entomopathogenic+fungus+Beauveria+bassiana%5BTitle%5D)+AND+%22BioControl%22%5BJournal%5D)">Effect of inoculation method and plant growth medium on endophytic colonization of sorghum by the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana.</a> BioControl. 54, 663-669 (2009).</li>
<li>Posada, F., Vega, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inoculation+and+colonization+of+coffee+seedlings+%28Coffea+arabica+L.%29+with+the+fungal+entomopathogen+Beauveria+bassiana+%28Ascomycota%3A+Hypocreales%5BTitle%5D)+AND+%22Mycoscience%22%5BJournal%5D)">Inoculation and colonization of coffee seedlings (Coffea arabica L.) with the fungal entomopathogen Beauveria bassiana (Ascomycota: Hypocreales.</a> Mycoscience. 47, 284-289 (2006).</li>
<li>Akello, J., Dubois, T., Coyne, D., Kyamanywa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+Beauveria+bassiana+dose+and+exposure+duration+on+colonization+and+growth+of+tissue+cultured+banana+%28Musa+sp.%29+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Biological%22%5BJournal%5D)">The effects of Beauveria bassiana dose and exposure duration on colonization and growth of tissue cultured banana (Musa sp.) plants.</a> Biological. 49, 6-10 (2009).</li>
<li>Posada, F., Aime, M. C., Peterson, S. W., Rehner, S. A., Vega, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inoculation+of+coffee+plants+with+the+fungal+entomopathogen+Beauveria+bassiana+%28Ascomycota%3A+Hypocreales%29%5BTitle%5D)+AND+%22Mycological+research%22%5BJournal%5D)">Inoculation of coffee plants with the fungal entomopathogen Beauveria bassiana (Ascomycota: Hypocreales).</a> Mycological research. 111, 748-757 (2007).</li>
<li>Brownbridge, M., Reay, S. D., Nelson, T. L., Glare, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+Beauveria+bassiana+%28Ascomycota%3A+Hypocreales%29+as+an+endophyte+following+inoculation+of+radiata+pine+seed+and+seedlings%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+control%22%5BJournal%5D)">Persistence of Beauveria bassiana (Ascomycota: Hypocreales) as an endophyte following inoculation of radiata pine seed and seedlings.</a> Biological control. 61, 194-200 (2012).</li>
<li>Posada, F. J., Chaves, F. C., Gianfagna, T. J., Pava-Ripoll, M., Hebbar, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+the+fungal+entomopathogen+Beauveria+bassiana+as+an+endophyte+in+cocoa+pods+%28Theobroma+cacao+L.%29%5BTitle%5D)+AND+%22Revista+U.D.C.A.+actualidad+%26+divulgaci%C3%B3n+cient%C3%ADfica%22%5BJournal%5D)">Establishment of the fungal entomopathogen Beauveria bassiana as an endophyte in cocoa pods (Theobroma cacao L.).</a> Revista U.D.C.A. actualidad & divulgación científica. 13, 71-78 (2010).</li>
<li>Quesada-Moraga, E., Landa, B. B., Muñoz-Ledesma, J., Jiménez-Díaz, R. M., Santiago-Alvarez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endophytic+colonisation+of+opium+poppy%2C+Papaver+somniferum%2C+by+an+entomopathogenic+Beauveria+bassiana+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Mycopathologia%22%5BJournal%5D)">Endophytic colonisation of opium poppy, Papaver somniferum, by an entomopathogenic Beauveria bassiana strain.</a> Mycopathologia. 161, 323-329 (2006).</li>
<li>Biswas, C., Dey, P., Satpathy, S., Satya, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+the+fungal+entomopathogen+Beauveria+bassiana+as+a+season+long+endophyte+in+jute+%28Corchorus+olitorius%29+and+its+rapid+detection+using+SCAR+marker%5BTitle%5D)+AND+%22BioControl%22%5BJournal%5D)">Establishment of the fungal entomopathogen Beauveria bassiana as a season long endophyte in jute (Corchorus olitorius) and its rapid detection using SCAR marker.</a> BioControl. , 1-7 (2011).</li>
<li>Bing, L. A., Lewis, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occurrence+of+the+entomopathogen+Beauveria+bassiana+%28Balsamo%29+Vuillemin+in+different+tillage+regimes+and+in+Zea+mays+L.+and+virulence+towards+Ostrinia+nubilalis+%28H%C3%BCbner%29%5BTitle%5D)+AND+%22Agriculture%2C+ecosystems+%26+environment%22%5BJournal%5D)">Occurrence of the entomopathogen Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin in different tillage regimes and in Zea mays L. and virulence towards Ostrinia nubilalis (Hübner).</a> Agriculture, ecosystems & environment. 45, 147-156 (1993).</li>
<li>Akello, J., Sikora, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+acropedal+influence+of+endophyte+seed+treatment+on+Acyrthosiphon+pisum+and+Aphis+fabae+offspring+development+and+reproductive+fitness%5BTitle%5D)+AND+%22Biological%22%5BJournal%5D)">Systemic acropedal influence of endophyte seed treatment on Acyrthosiphon pisum and Aphis fabae offspring development and reproductive fitness.</a> Biological. 61, 215-221 (2012).</li>
<li>Reddy, N. P., Ali Khan, A. P., Devi, U. K., Sharma, H. C., Reineke, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+millet+crop+plant+%28Sorghum+bicolor%29+with+the+entomopathogenic+fungus+%28Beauveria+bassiana%29+to+combat+infestation+by+the+stem+borer%2C+Chilo+partellus+Swinhoe+%28Lepidoptera%3A+Pyralidae%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Asia+Pacific%22%5BJournal%5D)">Treatment of millet crop plant (Sorghum bicolor) with the entomopathogenic fungus (Beauveria bassiana) to combat infestation by the stem borer, Chilo partellus Swinhoe (Lepidoptera: Pyralidae.</a> Journal of Asia Pacific. 12, 221(2009).</li>
<li>Quesada-Moraga, E., Muñoz-Ledesma, F. J., Santiago-Alvarez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+protection+of+Papaver+somniferum+L.+against+Iraella+luteipes+%28Hymenoptera%3A+Cynipidae%29+by+an+endophytic+strain+of+Beauveria+bassiana+%28Ascomycota%3A+Hypocreales%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+entomology%22%5BJournal%5D)">Systemic protection of Papaver somniferum L. against Iraella luteipes (Hymenoptera: Cynipidae) by an endophytic strain of Beauveria bassiana (Ascomycota: Hypocreales).</a> Environmental entomology. 38, 723-730 (2009).</li>
<li>Cherry, A. J., Banito, A., Djegui, D., Lomer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+the+stem-borer+Sesamia+calamistis+%28Lepidoptera%3B+Noctuidae%29+in+maize+following+seed+dressing%2C+topical+application+and+stem+injection+with+African+isolates+of+Beauveria+bassiana%5BTitle%5D)+AND+%22International+journal+of+pest+management%22%5BJournal%5D)">Suppression of the stem-borer Sesamia calamistis (Lepidoptera; Noctuidae) in maize following seed dressing, topical application and stem injection with African isolates of Beauveria bassiana.</a> International journal of pest management. 50, 67-73 (2004).</li>
<li>Gurulingappa, P., McGee, P. A., Sword, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endophytic+Lecanicillium+lecanii+and+Beauveria+bassiana+reduce+the+survival+and+fecundity+of+Aphis+gossypii+following+contact+with+conidia+and+secondary+metabolites%5BTitle%5D)+AND+%22Crop+protection%22%5BJournal%5D)">Endophytic Lecanicillium lecanii and Beauveria bassiana reduce the survival and fecundity of Aphis gossypii following contact with conidia and secondary metabolites.</a> Crop protection. 30, 349-353 (2011).</li>
<li>van Schoonhoven, A., Voysest, O. Common beans in Latin America and their constraints in Bean production problems in the tropics. Schwartz, H. F., Pastor-Corrales, M. A. , Second, CIAT. Cali. 33-57 (1989).</li>
<li>De Vos, M., Jander, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choice+and+no-choice+assays+for+testing+the+resistance+of+A.+thaliana+to+chewing+insects%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Choice and no-choice assays for testing the resistance of A. thaliana to chewing insects.</a> J. Vis. Exp. (15), e683(2008).</li>
<li>Parsa, S., Sotelo, G., Cardona, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterizing+herbivore+resistance+mechanisms%3A+spittlebugs+on+Brachiaria+spp.+as+an+example%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Characterizing herbivore resistance mechanisms: spittlebugs on Brachiaria spp. as an example.</a> J. Vis. Exp. (52), e3047(2011).</li>
<li>Atamian, H., Roberts, P., Kaloshian, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+and+low+throughput+screens+with+root-knot+nematodes+Meloidogyne+spp%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">High and low throughput screens with root-knot nematodes Meloidogyne spp.</a> J. Vis. Exp. (61), e3629 (2012).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Birçok faktör bir endophyte olarak bir mantar entomopatojenin kurmak için bir denemenin belirli sonucunu etkileyemez. Sonuçlarımız, aşılama yöntemi bunlardan biri olduğunu göstermektedir. Deneme Biyolojik faktörler bitki tür ve çeşidi seçilir ve mantar entomopatojenin türler gerilmesi içeren veya kullanılan izole. Manipülasyonu dikkate alınması gereken diğer faktörler inokulum konsantrasyon, aşılar için tesis yaşı ve bitki yetiştirme koşulları içerir. Bir mantar entomopatojenin 14,17,18,21 tarafından sistemik bitki kolonizasyon neden bir aşılama yöntemi için ideal olacaktır. Bunun yerine, aşılama yöntemleri, yerel kolonizasyonu belirli bir desen tercih eğilimi belirir. Toprak drenches kökte kolonileşme 17, tercih ise kahve, örneğin, yaprak spreyi yaprak kolonizasyonu lehine. Biz ortak fasulye aynı desen bulundu. Sonuçta, inokülasyon yöntemi tercih edilmelidirmuhtemelen hedef otobur ya da bitki patojen niş eşleşen bir tesis içerisindeki endophyte amaçlanan yere göre yönlendirilmelidir. Medya kültürünün esas almasına rağmen yaygın olarak kullanılan, endophyte tespiti ve ölçümü, pahalı zor ve hata eğilimli olabilir. Örneğin, 10.800 bitki bölümleri (1.800 Petri kapları üzerine ekildi) toplam B. optimize etmek için bir deney değerlendirildi muz 16 bassiana aşılar. Bunların dışında, 4.496 bölümleri varsayılan bir B. tarafından kolonize edildi bassiana&#39;nın gibi başlıca koloni morfolojisi ile tanımlanır. Açıktır ki, her koloni için türlerinin mikroskobik doğrulama bir arzu ama kalkılamayacağını adım olurdu. Diğer taraftan, 1.176 bölümleri başka mantarlar tarafından kolonize edildi ve atılır ve veriler 16 eksik olarak tedavi edildi. Olasılığı o B. Bununla birlikte, mevcut bassiana fakir bir rakip ya da büyümek için daha yavaş oldu ve sonunda bu bölümleri ortaya olabilirdi eğerllowed yeterli zamanı. Bu nedenle, medya kültürünün esas endophyte algılama yöntemleri yanlış pozitif ve yanlış negatif tabidir. Buna göre, örneğin daha güvenilir bir şekilde tespiti ve ölçümü yöntemleri, gelişme polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) analizlerinin 20,21,24 dayalı olanlar da daha doğrulamıştır. Inokülasyon deneyler için nihai hedef herbivory ve / veya hastalığa karşı dayanıklı sistemik direnç sağlar etkili bir tedavi geliştirmek olmalıdır. İnandırıcı bir, ama henüz denenmemiş, hipotez endofitik kolonizasyon ölçüde endophyte aracılı direnç derecesi ile pozitif korele gerektiğidir. Aşılama yöntemleri rafine sonra doğal bir sonraki adım, bu nedenle, bu korelasyon incelemek olabilir. Çeşitli Video protokolleri araştırmacılar bir hedef haşere ya da patojen 29-31 için uygun bir direnç testi tasarlamanıza yardımcı olabilir. Sonuçta, bu inokulum başarısını belirleyecek bu ne bir testtirtion, yöntem ve endofitik biyolojik kontrol için ilişkili olması muhtemel.

Mantar Entomopatojenlerin mycopesticides 1 olarak önemli bir potansiyele sahip böcek populasyonları önemli düzenleyiciler vardır. Ancak son zamanlarda, ancak, mantar Entomopatojenlerin endophytes, hem de doğal ve çeşitli aşılama yöntemleri 2 yanıt olarak meydana gösterilmiştir. Endofitik mantar Entomopatojenlerin ve ekolojik işlevleri büyük ölçüde bilinmemektedir, ancak bazı çalışmalar bitki büyüme 3,4, otobur direnci 5-8 ve hastalık direnci 9,10 bunları koymaktadır. Burada sunulan yöntemlerin genel amacı endofitik biyolojik kontrolü müteakip değerlendirmeler için hazırlık, bir endophyte olarak bir mantar entomopatojenin tanıtmaktır. Beauveria bassiana&#39;nın (Balsamo) Vullemin (Ascomycota: Hypocreales) iyi okudu endofitik mantar entomopatojenin 5-9,11-19 olduğunu ve ticari mycopesticide olarak kullanılabilir. Aşılama yöntemleri kurmak için test <em&gt; B. Bir endophyte olarak bassiana toprak drenches 14,17, tohum kaplama 18 ve immersiyonlar 14, radikula sosları 13,15, kök ve köksap immersiyonlar 11,16,18, kök enjeksiyonlar 17, yaprak spreyleri 14,17,20 ve çiçek spreyler 19 içerir. Bu yöntemleri kullanarak, araştırmacılar B. girmiştik bassiana muz 11, fasulye 7, kakao 13, kahve 17, mısır 7, pamuk 7, hurma 12, jüt 21, afyon 20, kabak 7 radiata çam 18, sorgum 14, domates 7 ve buğday 7 içine. Son kanıtlar, endofitik B. göstermektedir bassiana sadece eklembacaklı zararlıları 5-7,22-27 bitkileri korumak için bir potansiyele sahip, ama aynı zamanda bazı bitki patojenleri 9. Ortak fasulye (Phaseolus vulgaris) zararlılara karşı en hassas bitkiler arasında yer alıyorve hastalıklar. Bu kimin krizi bölgelerde 28 genelinde en sınırlayıcı fasulye üretim faktörü olduğu düşünülmektedir 400&#39;den fazla zararlıları ve 200 patojenler, etkilenebilir. Buna göre, ortak fasulye B. tarafından endofitik biyolojik kontrolün tam spektrum incelemek için mükemmel bir model kırpma olabilir bassiana. Bu yönde ilk adım olarak, bu makalede ortak fasulye bir endophyte olarak B.bassiana tanıtmak için aşılama yöntemleri gibi yapraktan sprey ve toprak drenches açıklar.

<table><tbody><tr><td colspan="4">REAGENTS</td></tr><tr><td>Reaktif/Malzeme Adı:</td><td>Şirket</td><td>Katalog Numarası</td><td></td></tr>: <tr><td>Mycotrol SE</td>, <td>Laverlam</td><td>4167</td><td></td></tr><tr><td>Noble agar</td><td>Sigma</td><td>A5431-250G</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin G sodyum tuzu</td><td>Sigma</td><td>P3032-25MU</td><td></td></tr>, <tr><td>Petri kabı (100 x 15 mm)</td><td>Fisher</td><td>08-757-12</td><td></td></tr><tr><td>Petri kabı (60 x 15 mm)</td><td>Fisher</td><td>08-757-13A</td><td></td></tr><tr><td>Patates dekstroz agar</td><td>Difco</td><td>213400</td><td></td></tr><tr><td>Normal ağartıcı (NaOCl)</td><td>CLOROX</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Streptomisin sülfat tuzu</td><td>Sigma</td><td>S6501-25G</td><td></td></tr><tr><td>Tetrasiklin</td><td>Sigma</td><td>T3258-25G</td><td></td></tr><tr><td>Üçlü ayva (NPK)</td><td>ABOCOL</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>X-100</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">EQUIPMENT</td></tr><tr><td>Biyolojik güvenlik kabini</td><td>NuAire</td><td>NU-425-600</td><td></td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>Fisher</td><td>02-671-10</td><td></td></tr><tr><td>Leica DM LB mikroskobu</td><td>Leica</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

endophytes olarak mantar entomopatojenlerin kurulması: endofitik biyolojik kontrol doğru

Establishing Fungal Entomopathogens as Endophytes: Towards Endophytic Biological Control

Beauveria bassiana&#39;nın endophytically bitkileri kolonize etme yeteneğine sahip bir mantar entomopatojenin olduğunu. Bir endophyte, B. gibi bassiana herbivory ve hastalıktan bitkilerin korunmasında rol oynayabilir. Bu protokol B. kurmak için iki aşılama yöntemleri gösterilmektedir endofitik biyolojik kontrol daha sonraki değerlendirmeler için hazırlık sık fasulye (Phaseolus vulgaris), içinde endophytically bassiana. Bitkiler bir B. almadan önce iki hafta boyunca yüzeye sterilize tohumlardan yetiştirilen 10 8 Konidyumların / ml (veya su) bassiana tedavisi bir yapraktan sprey veya toprak ıslatma olarak da uygulanır. İki hafta sonra, bitkiler hasat edilir ve onların yaprakları, sapları ve kökleri endofitik fungal kolonizasyon değerlendirmek için numune alınır. Bunun için, numuneler ayrı ayrı birçok parçaya kesilir, sterilize yüzey ve 20 gün boyunca patates dekstroz agar ortamında bekletilen. Medya olarak mantar üremesi gözlemlemek 2-3 günde denetlenirbitki bölümleri ile sociated ve B. oluşumu kaydetmek bassiana onun endofitik kolonizasyon ölçüde tahmin etmek. Aşılama başarı analizleri B. oluşumu karşılaştırmak tedaviler ve kontroller arasında belirli bir bitki parçası içinde bassiana (yani yaprakları, sapları veya kökleri). Aşılama yöntem ek olarak, deney Belirli bir sonucu hedef mahsul türleri ya da farklı bağlı olabilir, mantar entomopatojenin tür zorlanma veya kullanılan ayırma ve bitki yetiştirme koşulları.

B. bassiana P. endophytically-kolonize başardı gösterdi aşılama tedavileri (Şekil 1) yanıt vulgaris. Yaprak spreyleri ve toprak drenches Hem B. tarafından endofitik kolonizasyonu sonuçlandı tedavi bitkilerin% 80&#39;inden fazlasında bassiana (Şekil 2). Ancak, kolonizasyon ölçüde değerlendirilmiştir bitki parçası ve kullanılan aşılama yöntemi bağlıydı. Yapraklar sprey aşılar en yanıtladı. Kökler, diğer yandan, sadece ıslatma aşılar cevap verdi. Nihayet, sapları hem aşılama yöntemleri benzer şekilde yanıtladı. B. bassiana kontrolü bitki bölümlerden herhangi saptanmadı. B. başka muamele, endophytes bağımsız olarak bassiana değerlendirilen bitki bölümlerin% 15 büyüdü, ancak komşu bölümleri istila ve sonuçlarını etkileyebilecek önce onlar medya plakalar üzerinden diseke edildi. Tedavi ve kontrol bitkilerine iki hafta aşısından sonra gözle ayırt edilemez hale geldi. Hiçbir fark, kuru ağırlığının ve yüksekliği saptandı. <img src="/files/ftp_upload/50360/50360fig1.jpg" alt="Şekil 1"/> Şekil 1. Beauveria bassiana&#39;nın tarafından fasulye bitkilerinin endofitik kolonizasyonu (. Phaseolus vulgaris cv Calima) üzerine aşılama tedavilerinin Temsilcisi sonuçları sol Üst:. Kontrolü yok büyüme ile plakalar. Sağ Üst: Tüm plağı kirleten bir bitki bölümünden Mantar endophyte. Alt sol: B. bassiana iki bitki bölümlerinden büyüyor. Sağ alt: Endofitik B. bassiana Konidyumların ve konidyoforlar gibi mikroskop altında görülebilir. <img src="/files/ftp_upload/50360/50360fig2.jpg" alt="Şekil 2," fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50360/50360fig2highres.jpg"/> Şekil 2. Bea endofitik kolonizasyonu üzerine aşılama tedavilerinin Etkisisuşu GHA ile aşısından sonra Beauveria bassiana&#39;nın iki hafta n bitkiler (Phaseolus vulgaris cv. Calima). Yüzde kolonizasyon kültürlü bölümlerin sayısına bölünmesiyle kolonize bitki bölümlerin sayısını temsil eder.

Bu protokol mantar entomopatojenin tanıtmak için iki aşılama yöntemleri gösterilmektedir<em&gt; Beauveria bassiana&#39;nın</em&gt; Ortak fasulye bir endophyte olarak (<em&gt; Phaseolus vulgaris</em&gt;), Endofitik biyolojik kontrol daha sonraki değerlendirmeler için hazırlık.

Endophytes olarak Mantar Entomopatojenlerin Kurulması: Endofitik Biyolojik Kontrol Doğru

 Beauveria bassiana is a fungal entomopathogen with the ability to colonize plants endophytically. As an endophyte, B. bassiana may play a role in ...

Merhaba. Benim adım Ush Parsa, Uluslararası Tropikal Tarım Merkezi'ndeki SEA bünyesinde entomolog olarak çalışıyorum. Ben de Uluslararası Tropikal Tarım Merkezi'nden ViiV Artiz ve ben de Amerika Birleşik Devletleri Tarım Bakanlığı'ndan Fernando Vega. Bu videonun genel amacı, bir fungal patojenin yerleşiminin nasıl kolaylaştırılacağını ve doğrulanacağını göstermektir.Bir endofit olarak, doğada patojenik bir mantar tarafından enfekte edilmiş bir böcek veya akar bulmak yaygındır ve bu fungal ando patojenlerin biyolojik pestisitler olarak kullanılmasına dair uzun bir geçmiş vardır. Son zamanlarda, fungal ando patojenlerin zaman zaman bitkileri enfekte ettiği, ancak varlıklarına dair herhangi bir belirgin semptom üretmedikleri görülmüştür. Bu keşif, tarımsal zararlılara karşı koruyucu endofitler olarak kullanım potansiyellerine işaret etmektedir.Bu potansiyeli araştırmak için öncelikle, hedef bir üründe fungal bir patojeni endofit olarak güvenilir bir şekilde yerleştiren bir inokülasyon yönteminin geliştirilmesi gereklidir. B Bassiana, en iyi çalışılmış fungal patojenlerden biridir ve ticari bir pestisit olarak kolayca temin edilebilir. Bu mantar; muz, kahve ve muskul dahil olmak üzere birçok bitki türünde endofit olarak tespit edilmiştir.Güncel kanıtlar, B bassiana'nın bitkileri yalnızca eklembacaklı zararlılara karşı değil, aynı zamanda bazı bitki patojenlerine karşı da koruma potansiyeline sahip olduğunu göstermiştir. Bu geniş spektrumlu korumayı açıklayan mekanizmalar henüz yeterince anlaşılamamıştır. Yine de tic valve alanında, bir zararlıya veya patojene karşı genetik direnci olmayan ürünler için umut vaat edebilir; ancak tipik olarak birden fazla düşmanın eş zamanlı saldırısına maruz kalan, fas vulgaris'in yaygın olduğu ürünler bunun için başlıca bir örnektir.Fasulye üretimi için bölgeler genelinde en sınırlayıcı faktör olduğu düşünülen, 400'den fazla zararlı ve 200 patojen tarafından etkilenebilir. Bu nedenle, ortak fasulyenin Endo bbar'ın koruyucu potansiyelini incelemek için uygun bir aday ürün olabileceğini düşünüyoruz. Bu yöndeki ilk adım olarak Arvid, Bana'nın bir endofit olarak yerleşmesini sağlamak için inokülasyon yöntemleri olarak yaprak spreylerinin ve toprak dökümlerinin etkinliğini göstermektedir.TOMA adlı fasulye türünün tohumları, önce 0,5% sodyum hipoklorite iki dakika daldırılarak, ardından %70 etanolde iki dakika bekletilerek ve son olarak steril distile su ile üç kez durulanarak yüzey sterilizasyonuna tabi tutulur. Sterilizasyon başarısını doğrulamak için, durulama suyundan 100 µL örnek alınarak PDA besiyerli 100 mm'lik Petri plaklarına ekilir ve 25 °C'de, karanlıkta 10 gün boyunca inkübe edilir. Bu kontrollerde üreme gözlemlenirse deney durdurulmalı ve yeniden başlatılmalıdır.Tohumlar, ikiye bir oranında toprak ve kumdan oluşan, buharla sterilize edilmiş bir karışım içeren 11,5 santimetre genişliğindeki saksılara üçerli gruplar halinde ekilir. Bitkiler, çimlenmeden bir hafta sonra 25 °C, %50 bağıl nem ve 9.200 lux ışık şiddetine sahip 12 saatlik bir fotoperiyot ile kontrollü koşullar altında yetiştirilir. Canlılığı sağlamak ve rekabeti ortadan kaldırmak için bitkiler, saksı başına bir adet kalacak şekilde seyreltilir.Bitkiler, her iki ila üç günde bir ihtiyaç duyuldukça sulanır ve dikimden 10 ve 20 gün sonra litre başına 6 gram NPK gübresi içeren bir su çözeltisiyle gübrelenir. Mantarlarımızın genetik tekdüzeliğini sağlamak için izolatlar, tekil kanonik kültürlerden yetiştirilmelidir. Mantarın kaynağı mikozlu bir böcek ise, örneği laminer akışlı kabine alırız ve PDA besiyerine sporülasyon gösteren mantardan küçük bir örnek aktarmak için bir ekim özesi kullanırız.Hedef mantar temiz bir kültürde büyüyüp yayıldıktan sonra, kontaminantları uzaklaştırmak için yeni besiyeri plakalarına ardışık transferler yapılması gerekebilir. Medyumdan alınan küçük bir örnek, Triton X 100'ün %0,1'lik su çözeltisinin bir mililitresi içinde süspanse edilir ve vortekslenir; Triton X 100, suyun yüzey gerilimini azaltan ve medyumun dağılmasını sağlayan bir sürfaktandır. Bu süspansiyondan alınan 100 mikrolitrelik bir alikot, stereoskop altında medyumun görselleştirilmesini sağlayacak ince bir %2,5'lik noble acre tabakası içeren 100 milimetrelik bir Petri plağına yayılır.Plaka, karanlıkta oda sıcaklığında 24 saat boyunca inkübe edilir; ardından çimlenen tek bir kalem ortamı PDA içeren medya plakasına aktarılır ve tüm medya plakasını kaplayıp spor oluşturana kadar üç ila dört hafta boyunca büyümesine izin verilir. Bu yöntem, sonraki deneyler için mantarın saf bir kültürünü sağlar. Bu demonstrasyon için, ticari Microt ürününden elde edilen Bavaria Bassiana'nın GH HA suşu olan saf bir kültür kullanıyoruz.İnokülüm steril koşullar altında hazırlanır. Laminar akışlı kabin içerisinde, steril bir spatula kullanarak ortam yüzeyinden yaklaşık bir gram fungal büyüme kazınır ve 10 mililitre steril %0,1 Triton X içerisinde süspanse edilir. Süspansiyon bir dakika boyunca vortekslenir ve konidileri hiflerden ayırmak için steril tülbentten süzülür. Bu işlem, inokülasyonlar için mililitrede 10⁸ konidi nihai konsantrasyonuna ayarlanması gereken stok bir süspansiyon sağlar.İlk olarak, kedia sayımını kolaylaştıran seri bir dilüsyon ile stok konsantrasyonu tahmin edilir. Bir Hema Cytometer'da, stoğun 100 microliters'ı 900 microliters %0,1 Triton X ile seyreltilir ve vortexlenerek 1/10'luk bir dilüsyon elde edilir. 1/10.000'lik bir dilüsyon elde etmek için bu işlem seri olarak üç kez daha tekrarlanır.Kedia'lar ilk dilüsyonda aşırı derecede yüksek sayılarda, son dilüsyonda ise kolayca sayılabilecek düşük sayılarda olacaktır. Hema sayım hücresinin (hemositometre) iki bölmesinin her birine 10 µL 1/10.000'lik dilüsyondan yüklenir ve kedia'ları saymak için mikroskobun altına yerleştirilir. Hema sayım hücresinin çizgili alanı, her biri sırasıyla 100 nL veya 0,0001 mL hacme sahip dokuz büyük kareden oluşur.Örnekteki ED konsantrasyonunu tahmin etmek için, her odacığın dört büyük köşe karesindeki ED'leri sayıp ortalamasını alıyoruz ve bu ortalamayı 0,0001'e bölüyoruz. Bu konsantrasyonu 10 000 olan dilüsyon faktörümüzle çarpmak, stok konsantrasyonunu verir; ardından stoğun ayarlanması gereken nihai hacim hesaplanır. Mililitrede 10 38 edia inokulum elde etmek için formülü uyguluyoruz.Final hacim, stok hacmi ile stok konsantrasyonunun çarpımının final konsantrasyona bölünmesine eşittir. Gösterimimizde, istenen konsantrasyonu elde etmek için stoğun 195.5 milliliters final hacme ayarlanması gerekmektedir. İnokülumu kullanmadan önce, kanal canlılığını değerlendiren bir çimlenme testi yapmak önemlidir.Bu test için, 10.000'de 1'lik dilüsyonun 100 mikrolitresini, %2,5 noble yumurta veya besiyerli 100 milimetrelik bir Petri plakasına yerleştiriyoruz. Örnek, steril bir cam çubukla besiyeri yüzeyine yayılır ve 25 °C'de, karanlıkta 24 saat boyunca inkübe edilir. Canlılık, mikroskop altında, çimlenme tüpü oluşturan hücrelerin yüzdesini tahmin ederek değerlendirilir.Rastgele seçilen 100'lük üç Kanada örneği için, Kanada süspansiyonu ancak ortalama çimlenme %90'ın üzerindeyse inokülasyonlar için kullanılabilir. Bu gösterimde, %97'lik bir ortalama çimlenme oranı bulmaktayız. Bitkiler ilk gerçek yaprak aşamasına ulaştıklarında uygulanan iki inokülasyon yöntemini, yaprak spreyleri ve toprak dökümleri, göstereceğiz. Dikimden yaklaşık 14 gün sonra, yaprak sprey yöntemi, yapraklar doyana kadar süspansiyonu yaprakların alt veya üst yüzeyine yönlendiren manuel bir atomizör ile gerçekleştirilir. Toprağa doğru akışı önlemek için her saksının üstü alüminyum folyo ile kapatılır. Spreylemeden sonra, fungal istilayı kolaylaştıracak yüksek nem seviyelerini korumak amacıyla her bitki 24 saat boyunca plastik bir torba ile kapatılır.Toprak dökme inokülasyon yöntemi, toprak su kapasitesinde gerçekleştirilir. Bitkilerin toprak doygunluğuna ulaşana kadar sulanmasından yaklaşık 24 saat sonra, toprak yüzeyine 10 mililitre hücre süspansiyonu uygulanır. Kontrol grubu bitkilerinin tabanına, ilgili uygulamalarda olduğu gibi aynı yöntemle steril %0,1 Tritton X uygulanır.Bitkiler büyüme odalarına geri getirilir ve her işlem için üç tekrar olacak şekilde randomize tam blok tasarımıyla düzenlenir. İnokülasyonlardan iki hafta sonra, her seferinde bir blok olacak şekilde tutunmayı değerlendirdik. Bitkiler dikkatlice hasat edilir ve her bir bitki musluk suyu altında tek tek yıkanır.İki yaprakçık, iki kök parçası ve iki gövde parçası örneklenir; yaprakçıklar bitkinin ilk gerçek yaprağından rastgele seçilir ve kare şeklinde kesilir. Bitkinin orta kısmından ve toprak yüzeyine yakın bölgeden yaklaşık üç santimetre uzunluğunda gövde örnekleri alınır. Benzer uzunlukta kazık kök örnekleri ise kökün orta kısmından ve kök ucunun bir santimetre gerisinden alınır.Her bir örnek, steril bir kabinde önce %0.5 sodyum hipoklorit ile iki dakika, ardından %70 etanol ile iki dakika boyunca tek tek yüzey sterilizasyonuna tabi tutulur ve kurumaya bırakılmadan önce steril distile su ile üç kez durulanır. Steril havlu kağıt üzerinde sterilize edilen örnek, dezenfektanlarla temas nedeniyle endofitlerin yok olmuş olabileceği dış kenarları atılacak şekilde dikkatlice diseke edilir. Budanan örnek, ardından yapraklar için ortalama altı çarpı altı milimetre, gövdeler ve kökler için ise altı milimetre uzunluğundaki daha küçük parçalara bölünür.Kesitler, her biri 2 mg/L konsantrasyonunda tetrasiklin, streptomisin ve penisilin antibiyotikleri ile desteklenmiş PDA içeren 60 mm'lik Petri plaklarına ekilir. Son olarak plaklar parafinle mühürlenir ve 25 °C'de karanlıkta inkübe edilir. Durulama suyu her blok işlendikten sonra değiştirilir; ancak sterilizasyonun başarılı olup olmadığını belirlemek için 100 µL'lik bir örnek 100 mm'lik bir Petri plağına, PDA besiyerine ekilir ve 25 °C'de 10 gün boyunca inkübe edilir.Bu kontrolde herhangi bir büyüme görülürse, blok atılır ve analiz için dikkate alınmaz. Mantar büyümesini gözlemlemek ve kaydetmek için plaklar 20 gün boyunca her iki ila üç günde bir incelenir. Komşu kesimlerin kontamine olmasını önlemek için kolonize olmuş bitki kesimleri çıkarılır ve tek tek yeni medya plaklarına aktarılır.B bassiana büyümesi, kenarlarda krem veya soluk sarı renge dönen karakteristik beyaz yoğun miselyumlara göre kaydedilir. Şüphe durumunda, örnek bir mikroskop ışığı altında bir damla su içine yerleştirilir ve kolonizasyonun değerlendirildiği aynı gün, türe özgü global scania ve zigzag şekilli kedia force yapıları açısından incelenir. Ayrıca, uygulamalarımızın bitki büyümesi üzerindeki etkisini de tahmin ediyoruz.Önce, bitki boyunu bitkinin tabanından büyüme noktasının tepesine kadar ölçüyoruz. Ardından, bitkileri dikkatlice söküp musluk suyuyla yıkıyor ve kuru ağırlıklarını ölçmek için 45 °C'de üç gün boyunca kurumaya bırakıyoruz. Bu gösterim için, temsili sonuçlar elde etmek amacıyla deneyin tamamını iki kez gerçekleştirdik.Her iki inokülasyon yöntemi de, işlem gören bitkilerin %80'inden fazlasında Bana ile fizikselleşme ile sonuçlandı. Bununla birlikte, kolonizasyonun derecesi değerlendirilen bitki parçasına ve kullanılan inokülasyon yöntemine bağlıydı. Sürgünler en iyi yanıtı verdi.Öte yandan, kökler yalnızca drench (can suyu yoluyla) inokülasyonlarına yanıt verirken, sprey inokülasyonlarına yanıt vermemiştir. Son olarak, gövdeler her iki inokülasyon yöntemine de benzer şekilde yanıt vermiştir. Değerlendirilen bitki kesitlerinin %15'inden gruplandırılan Bana dışındaki endofitlerin, işlemden bağımsız olarak kontrol edilen hiçbir bitki kesitinde tespit edilmediği görülmüş; ancak bunlar, komşu kesitleri istila edip sonuçlarımızı etkilemeden önce medya plaklarından ayrıştırılmıştır.İnokülasyonlardan iki hafta sonra, tedavi edilen ve kontrol grubu bitkiler arasında gözle görülür bir fark oluşmamış; kuru ağırlıkları ve boylarında anlamlı bir farklılık tespit edilmemiştir. Bir deneyin, endo patojeni bir nihai etki olarak belirlemedeki spesifik sonucunu birçok faktör etkileyebilir. Bu videoda gösterildiği üzere, inokülasyon yöntemi bunlardan biridir; deneyle çalışılabilecek biyolojik faktörler arasında seçilen ürün türü veya kültivarı ile OMA patojen türü veya izolat seçimi yer alır. Manipüle edilmesi düşünülebilecek diğer faktörler arasında inokülum konsantrasyonu, inokülasyon sırasında bitkinin yaşı ve bitkinin büyüme koşulları bulunmaktadır.Bu deneylerin nihai hedefi, INE'ye veya hastalığa karşı kalıcı sistemik direnç sağlayan etkili bir tedavi geliştirmek olmalıdır. Endofit aracılı direnci test etmeye hazır olduğunuzda, Journal of Visualized Experiments'ta yayınlanan Herbal Resistance Mechanisms (Bitkisel Direnç Mekanizmaları) karakterizasyon videosunu izlemenizi öneririz. Endofitlerin bitkilerde çok yaygın olduğunu ve hedef bir fungal patojeni endofit olarak kalıcı şekilde yerleştirme ve tespit etme yeteneğinizi etkileyebileceğini lütfen unutmayın.Bu gösterimin faydalı olmasını umuyoruz. Deneylerinizde başarılar dileriz.

establishing-fungal-entomopathogens-as-endophytes-towards-endophytic

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Burada, tarımdaki böcek zararlılarının kontrolü için "en uygun" entomopatojenik mantar Metarhizium anisopliae'nin izolasyonu, belirlenmesi, taranması ve seçimi de dahil olmak üzere etkin bir mikozinsektisid'in bilgi temelli gelişiminde farklı aşamaları bildiriyoruz .

Geliştirilmesi<em&gt; Metarhizium anisopliae</em&gt; Bir Mycoinsecticide Olarak: İzolasyondan Saha Performansına

Burada, toprak örneklerinden entomopatojenik mantarların (EPF) izole edilmesi ve seçilmesi için kullanılan yemek kurdu (Tenebrio molitor)-yem sistemine dayanan bir protokol sunuyoruz. Sahada zararlı mikrobiyal kontrolü için fizyolojik özelliklere göre yüksek strese dayanıklı EPF seçmek için etkili bir konidia sayısı (ECN) formülü kullanılır.

Toprak Örneklerinden İntomopatojenik Mantarların İzolasyonu ve Seçimi ve Böcek Zararlılarına Karşı Mantar Virülansının Değerlendirilmesi

Entomopatojenik mantarlar tarımsal böcek zararlılarının biyolojik kontrol ajanları olarak önem kazanmıştır. Bu çalışmada, hem Metarhizium robertsii hem de M. pinghaense'nin Güney Afrika izolatlarının yeterli sayıda dirençli enfektif propagülünün böcek zararlılarına karşı ticari uygulama için seri üretimi, tarımsal tahıl ürünleri kullanılarak başarıyla gerçekleştirilmiştir.

Entomopatojenik Mantarların, Metarhizium robertsii ve Metarhizium pinghaense'nin Böcek Zararlılarına Karşı Ticari Uygulama İçin Seri Üretimi

Entomopatojenik mantar kolonileri, Tenebrio yemi, Galleria yemi ve seçici yapay ortam, yani kloramfenikol, tiyabendazol ve sikloheksimid (CTC ortamı) ile desteklenmiş maya özü ile zenginleştirilmiş patates dekstroz agarı kullanılarak tropikal toprak örneklerinden izole edilir.

Entomopatojenik mantarları toprak örneklerinden izole etme yöntemlerinin karşılaştırılması

Entomopatojenik nematodlar bakterilerle simbiyoz içinde yaşarlar ve birlikte doğuştan gelen bağışıklık sistemlerini zayıflatarak böcekleri başarılı bir şekilde enfekte ederler. Nematod enfeksiyonunun genetik temeli üzerine araştırmaları teşvik etmek için, entomopatojenik nematodları korumak ve genetik olarak manipüle etmek için yöntemler açıklanmaktadır.

Entomopatojenik Nematodların Kültürlenmesi ve Genetik Olarak Manipüle Edilmesi

Toprağın opaklığı nedeniyle, kurucu mikroplar arasındaki etkileşimler hücresel çözünürlükle kolayca görselleştirilemez. Burada, mantar-mikrobiyal etkileşimleri araştırmak için yeni fırsatlar sunan iki mikroakışkan araç sunulmaktadır. Cihazlar çok yönlü ve kullanımı kolaydır, bu da hücresel düzeyde yüksek mekansal zamansal kontrol ve yüksek çözünürlüklü görüntüleme sağlar.

Hücresel Düzeyde Mantar-Mikrobiyal Etkileşimleri Probalamak için Mikroakışkan Araçlar

Bu makale, bitki ilişkili endofitik mantarların izolasyonu, izolatların uzun süreli korunması, morfolojik karakterizasyon ve sonraki moleküler tanımlama ve metagenomik analizler için toplam DNA ekstraksiyonu için ayrıntılı ve yeterli protokoller sağlamayı amaçlamaktadır.

Mikoheterotrofik Bitkilerde Endofitik Mantarları Tanımlamak için İzolasyon, Karakterizasyon ve Toplam DNA Ekstraksiyonu

Bu protokol, partenogenetik bir böcek olan hardal yaprak bitine (Lipaphis erysimi (Kalt.)) karşı entomopatojenik mantarların (EPF) etkinliğini değerlendirmek için optimize edilmiş bir müstakil yaprak biyo-tahlil sistemi sunar. Yöntem, Petri kabı deneyleri sırasında veri toplama sürecini özetleyerek, araştırmacıların EPF'nin hardal yaprak bitlerine ve diğer partenogenetik böceklere karşı virülansını tutarlı bir şekilde ölçmelerini sağlar.

Entomopatojenik Fungusların Partenogenetik Böcek, Hardal Yaprak Biti, Lipaphis erysimi (Kalt.)

Burada, bir orman odun kurdundan entomopatojenik mantarlar elde etmek için bir protokol ve bir Coleopteran model böcek kullanarak entomopatojenik aktivitelerini değerlendirmek için ikame edici bir yol sunuyoruz. Bu yöntem, doğal ormanlardaki odun delici böcek zararlılarından entomopatojenik mantar kaynaklarını keşfetmek için etkili ve kullanışlıdır.

Bir Orman Ağaç Kurdundan Entomopatojenik Mantarların İzolasyonu, Davranışsal Tanımlama ve Patojenite Değerlendirmesi

Mantar patojenlerine karşı antagonizma gösteren mikrobiyal doğal ürünleri tanımlamak için ince tabaka kromatografisi, doğrudan biyootografi testi ve sıvı kromatografisi-kütle spektrometresinin kullanımını, model sistem olarak patojen Sclerotinia sclerotiorum ve biyopestisit Bacillus izolatlarını kullanarak açıklıyoruz.

İnce Tabaka Kromatografisi-Doğrudan Biyootoografi ile Biyokontrol için Doğal Ürünlerin Biyotahlil Kılavuzluğunda Tanımlanması

Agar içeren cam kaplarda modifiye edilmiş bir müstakil yaprak yöntemi kullanılarak biber tripslerinin toplu olarak yetiştirilmesi için müstakil yapraklı bir biyotahlil protokolü oluşturulmuştur, bu da yüksek sağkalım ve senkronize gelişme sağlar. Bu sistem, entomopatojenik mantar virülansının 2. instar larvalarına karşı verimli bir şekilde taranmasını sağlar ve laboratuvar, sera ve tarla değerlendirmeleri için güvenilir bir trips kaynağı sağlar.

Entomopatojenik Mantarların Virülans Taraması için Biber Thrips (Scirtothrips dorsalis Hood) Yetiştirme Sisteminin Kurulması

Öğrenin Beauveria bassiana mantarını Phaseolus vulgaris fasulyesinde endofit olarak kurma yöntemlerini. Yaprak püskürtme ve toprak sızma teknikleri ile sürdürülebilir tarımsal zararlı kontrolü için biyolojik koruma potansiyelini keşfedin.

Endophytes olarak Mantar Entomopatojenlerin Kurulması: Endofitik Biyolojik Kontrol Doğru

Daha fazla video keşfet