Name: Translational Vaskülarize Kompozit allotransplantasyon (VCA) Araştırma için Modifiye heterotopik Domuz Hind Ekstremite nakli Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-14T08:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: Öğrenin, domuzlarda modifiye heterotopik arka ekstremite nakli modeliyle vaskülarize kompozit allotransplantasyon için immunomodülatör protokolleri nasıl test edilir. Bu yöntem, vaskülarize kemik iliğinin immunolojik özelliklerini incelemeye olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Kakali Sarkar, PhD, Joani Christensen, BS, Kate Buretta, BS, Nance Yuan, BS, William Lehao, MD, Johanna Grahammer, Georg Furtmüller, MD, Erin Rada: Biz bu projeye katkılarından için aşağıdaki kişilere teşekkür eder MD, Mohammed Al-Rakan MD, Karim Sarhane MD, Saami Khalifian, BS, Mao Qi, MD, ve Angelo Leto Barone MD, VCA Laboratuarı, Plastik ve Rekonstrüktif Cerrahi Anabilim Dalı, Tıp, Janis Taube, MD Johns Hopkins Üniversitesi, Mark Fischer, MD, Dermatoloji ve Patoloji, Tıp Johns Hopkins Üniversitesi, Sue Eller, Minimal İnvaziv Cerrahi Eğitim Merkezi, Tıp Johns Hopkins Üniversitesi ve Cheng-Hung Lin, MD Chang Gung Memorial Hastanesi, Linkou, Tayvan Bölümler. Finansman kaynağı: Rejeneratif Tıp Silahlı Kuvvetleri Enstitüsü (DoD W81XWH-08-2-0032)

Bu Video yayında, tüm hayvan prosedürleri Johns Hopkins Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış bir hayvan protokolüne uygun olarak yapılmıştır. 1.. Preoperatif Planlama <ol><li> Biz MGH bir erkek donör iki bayan alıcılar için uzuvları (Şekil 1) temin eder uzuv allotransplantasyon için çeviri çalışmalarında minyatür domuz (15-20 kg) akrabası MHC-tanımlı kullanmaktadır. Ameliyat öncesinde, verici ve alıcı hayvanlar bir veteriner hekim tarafından ayrıntılı bir klinik değerlendirme. </li><li> Anestezi ve iskemi süresini en aza indirmek amacıyla, donör ve alıcı prosedürleri, bir adanmış büyük hayvan ameliyathanede üç faaliyet masalarda aynı anda yapılmaktadır. Cerrahi ekibin yanı sıra veteriner personel arasında ekip çalışması ve koordinasyon bu prosedürün genel başarısı için kritik öneme sahiptir. Cerrahi planı resmi bir toplantıda 1 veteriner ekibi ile tartışılacakÖnce cerrahi güne -2 hafta. </li><li> Bir tünelli santral venöz kateter (7 Fr çift lümen Hickman kateter) önce immünsüpresif ilaç düzeyi izleme ve immunsupresif ve / veya bağışıklık ilaçların intravenöz uygulama için nakli için alıcı her hayvanın bir harici veya dahili jugular ven yerleştirilir. Bu kateterler venöz cut-down tekniği ile direkt görüş altında yerleştirilir ve dorsal boyun ve yüksek çıkmak için posterior tünelli olan monofilament emilemeyen sütürler ve boynuna yapışkanlı bandaj sargı kullanarak güvenli. </li><li> Ameliyattan önce en az 12 saat NPO (hiçbir katı gıda ama su reklam lib izin verilir) hayvanları tutun. </li><li> Ameliyat gününde, ketamin 20 mg / kg ksilazin ve 2 mg / kg ile IM oturaklı hayvanlar. </li><li> Uygun büyüklükte bir endotrakeal tüp yerleştirin ve anestezi makine ve ventilatöre bağlamak (izofluran% 0.5-3 üzerinde muhafaza) </li><li> Marjinal kulak damar damardan kateter koyun ve yönetmekağırlığı prosedür süresince% 0.9 salin göre. </li><li> Rüçhan analjezi (buprenorfin 0.02 mg / kg IV) yönetmek. </li><li> Öncesinde donör ve alıcı hayvanların hem ilk kesi profilaktik antibiyotik (sefazolin 20-25 mg / kg IV) yönetmek. </li><li> Alıcıların ve donörlerin hem de tüm işlemlerde steril tekniği kullanın. Bu otoklava veya gaz steril aletleri, maskeler, baş kapaklar, steril cerrahi önlük ve steril eldiven kullanımını içerir. Rp ile kesi alanı tıraş ve Betadinede çözüm ve alkol alternatif ile dezenfekte edin. </li></ol> İntraoperatif İzleme: <ol><li> Indüksiyon ve entübasyon sonrası, oksijen bir soluma karışımı% 0.5-3 izofluran ile anestezi korumak. </li><li> Kalp hızı, pulse oksimetre, EKG, end-tidal CO 2 ve devamlı rektal sıcaklığını izlemek ve her 15 dakika kayıt. </li><li> Bir Bair Hugger sıcak zorla hava battaniye ile hipotermi önlemek. </li></ol><ol><li> Ameliyat masası üzerine sırt üstü yatırıldı, donör hayvan koyun ve steril bir şekilde asmak. </li><li> Anteromedial cilde delme gemileri belirlemek için yakın-kızılötesi lazer anjiyografi kullanın. Periferal vasküler erişim yoluyla normal tuzlu su içinde 2-5 ml seyreltilmiş indosiyanin yeşili, yaklaşık 0.06 mg / kg enjekte edilir. Yaklaşık 10 saniye sonra, kızıl ötesine yakın kayıtların 30 sec-2 dk gerçekleştirin. Delgi tanımlamak için bu kayıtlar videoyu kullanın. Deliciler göre, izleme için bir deri alanına (yaklaşık 100 cm2) işaretleyin. </li><li> Cilt kürek için işaretler ile süreklilik içinde bir kasık cilt kesisi (Şekil 2) yapmak için bir neşter kullanın. </li><li> Femoral damarları belirlemek ve suprageniculate şube seviyesine ve proksimalde inguinal ligament seviyesinde distaline onları tecrit. </li><li> Preservin ise deri ve deri altı dokusu dissekeg deri raket alanı. Flep hasat sırasında kasılmasını önlemek için kasları altta yatan derinin kenarlarını dikin. </li><li> Sadece bir pistonlu testere (Elektrik Pen Drive, Synthes, West Chester PA) kullanarak tarsus üzerinde bir osteotomi gerçekleştirin. </li><li> Elektrokoter kullanarak uyluk proksimal kasları bölün. </li><li> Vasküler pedikül üzerinde bir osteomyocutaneous kanadı bırakarak orta şaftının femur bölün. Flep cilt kürek, altta yatan uyluk kasları, diz eklemi, distal femur ve eşsiz immünolojik özellikleri ile sağlam vaskülarize kemik iliği içeren proksimal tibia içerir. </li><li> Kemik iliği mekanlarda Hemostaz sağlamak için, kemik mumu kullanın. Düzgün kemik alıcı için hazırlık ronjeurs kullanarak kenarları. </li><li> Alıcının femoral damarlar (Şekil 3) hazırlanıncaya kadar kendi vasküler pedikül perfüzyon greft tutun. </li><li> Alıcı diseksiyon tamamlandıktan sonra, mümkün olduğu kadar proksimal verici femoral damarları ligatend transplantasyon öncesinde histidin-triptofan-ketoglutarat (HTK, Custodiol, Newtown PA) ile greft demlenmeye. NOT: donör ekstremite alıcının sol tarafı için alıcı ve verici sağ bacak) sağ tarafı için sol bacak donör yani alıcının karşı tarafta naklediliyor. </li><li> Şimdi 100 mg / kg IV sodyum pentobarbital kullanılarak ikinci arka uzuv hasat sonrasında donör domuz Euthanize. Ölüm kurulan protokol başına veteriner personeli tarafından teyit edilir. </li></ol> 4. Alıcı Prosedürü (Hind Ekstremite doku yaması) <ol><li> Donör uzuv hasat edilirken alıcı damar hazırlanmasını sağlamak için hemen ilk verici insizyon sonra alıcı uyarılmasını ve entübasyon başlatın. Bu gereksiz bekleme süresini ortadan kaldırır ve donör ve alıcılar için toplam anestezi süresini azaltır. </li><li> Allo işletim tarafında 30 ° rotasyon ile hayvan sırtüstü pozisyondadorsolateral tarafında w maruz kalma. </li><li> Bir kasık kesi yapmak ve femoral damarların ortaya çıkarılması; suprageniculate şube seviyesine ve proksimalde inguinal ligament seviyesinde distaline onları tecrit. </li><li> Greft içerlek için dorsolateral karın duvarı (Şekil 4) kasık bir deri altı cebe oluşturun. </li><li> Donör damarları bağlanır ve HTK ile greft yıkayın. </li><li> Ters bir şekilde greft iç metnini gerçekleştirin: cilt kürek kolay bağışıklık ayakta pozisyonda izleme ve (damarlarda herhangi bir gerginlik olmadan uçtan uca vasküler anastomoz izin caudally bakan femoral damarların kesilmiş uçlara izin dorsolateral bakan mı Şekil 5). </li><li> Varsa, (boyutu 2.5-3.5 10-20 kg hayvanlar için uygun) venöz anastomoz için bir damar bağlama cihazı (Synovis, St Paul, MN) kullanın. Geleneksel yöntemler ile karşılaştırıldığında önemli ölçüde bu iskemi süresini azaltır. </li><li> Arteriyel ANAST gerçekleştirin9-0 sütür (Synovis, St Paul, MN) ile geleneksel bir dikiş tekniği kullanılarak omoses </li><li> Damar açıklığı onaylandıktan sonra, 3-0 PDS sütür (Şekil 5) ile yerde greft sabitleyin. Greft kasları karın duvarı kaslarının dikilir. Bu zararlı olabilir çünkü zaman kafesin etrafında hayvan hareket. Greft kaslar alıcı uyluk kasları dikildi edilmemelidir </li><li> Bağışıklık takibi için dorsolateral tarafına (Şekil 6) üzerinde deri kürek Exteriorize ve 3-0 Vicryl deri altı ve 4-0 monofilament dikiş emilebilir sütürler kesintiye uğramış deri ile bitişik deri için dikiş. </li><li> 3-0 Vicryl deri altı sütür ve 4-0 monofilament emilebilir kesintiye cilt suturlerle katmanları kasık cilt kapatın. </li><li> Post-operatif analjezi için bir 50-100 mcg / saat fentanil yama yerleştirin. </li><li> Arka bacak organ transplantasyonu sonra, onun kalem kez uyanık ve kendi rahatça nefes için hayvan dönün.</li>
</ol>

<ol><li>Barth, R. N., Rodriguez, E. D., Mundinger, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularized+bone+marrow-based+immunosuppression+inhibits+rejection+of+vascularized+composite+allografts+in+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Vascularized bone marrow-based immunosuppression inhibits rejection of vascularized composite allografts in nonhuman primates.</a> Am. J. Transplant. 11 (7), 1407-1416 (2011).</li>
<li>Brandacher, G., Gorantla, V. S., Schneeberger, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hand%2FForearm+transplantation+using+a+novel+cell-based+immunomodulatory+protocol-experience+with+five+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Hand/Forearm transplantation using a novel cell-based immunomodulatory protocol-experience with five patients.</a> Am. J. Transplant. 11, 190(2011).</li>
<li>Brandacher, G., Grahammer, J., Sucher, R., Lee, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+basic+and+translational+research+in+reconstructive+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Res.+C+Embryo+Today%22%5BJournal%5D)">Animal models for basic and translational research in reconstructive transplantation.</a> Birth Defects Res. C Embryo Today. 96 (1), 39-50 (2012).</li>
<li>Brandacher, G., Lee, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hand+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Hand+Clin%22%5BJournal%5D)">Hand transplantation.</a> Hand Clin. 27, xiii-xiv (2011).</li>
<li>Hettiaratchy, S., Mendely, E., Randolph, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerance+to+composite+tissue+allografts+across+a+major+histocompatibility+barrier+in+miniature+swine%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Tolerance to composite tissue allografts across a major histocompatibility barrier in miniature swine.</a> Transplantation. 27, 514-521 (2004).</li>
<li>Ibrahim, Z., Busch, J., Awwad, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selected+physiologic+compatibilities+and+incompatibilities+between+human+and+porcine+organ+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">Selected physiologic compatibilities and incompatibilities between human and porcine organ systems.</a> Xenotransplantation. 13 (6), 488-499 (2005).</li>
<li>Kirk, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crossing+the+bridge%3A+large+animal+models+in+translational+transplantation+research%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Crossing the bridge: large animal models in translational transplantation research.</a> Immunol. Rev. 19, 176-196 (2003).</li>
<li>Lee, W. P., Rubin, J. P., Cober, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+swine+model+in+transplantation+of+vascularized+skeletal+tissue+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Use of swine model in transplantation of vascularized skeletal tissue allografts.</a> Transplant Proc. 30, 2743-2745 (1998).</li>
<li>Mathes, D. W., Hwang, B., Graves, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerance+to+vascularized+composite+allografts+in+canine+mixed+hematopoietic+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Tolerance to vascularized composite allografts in canine mixed hematopoietic chimeras.</a> Transplantation. 92 (12), 1301-1308 (2011).</li>
<li>Mathes, D. W., Randolph, M. A., Solari, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Split+tolerance+to+a+composite+tissue+allotransplant+in+a+swine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Split tolerance to a composite tissue allotransplant in a swine model.</a> Transplantation. 75 (1), 25-31 (2003).</li>
<li>Mezrich, J. D., Haller, G. W., Arn, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histocompatible+miniature+swine%3A+an+inbred+largeanimal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Histocompatible miniature swine: an inbred largeanimal model.</a> Transplantation. 75 (6), 904-907 (2003).</li>
<li>Petruzzo, P., Lanzetta, M., Dubernard, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+International+Registry+on+Hand+and+Composite+Tissue+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The International Registry on Hand and Composite Tissue Transplantation.</a> Transplantation. 90, 1590-1594 (2010).</li>
<li>Sucher, R., Lin, C., Zanoun, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+hind+limb+transplantation%3A+a+new+composite+tissue+allotransplantation+model+using+nonsuture+supermicrosurgery%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Mouse hind limb transplantation: a new composite tissue allotransplantation model using nonsuture supermicrosurgery.</a> Transplantation. 90, 1374-1380 (2010).</li>
<li>Ustüner, E. T., Majzob, R. K., Ren, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swine+composite+tissue+allotransplant+model+for+preclinical+hand+transplant+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Swine composite tissue allotransplant model for preclinical hand transplant studies.</a> Microsurgery. 20, 400-406 (2000).</li>
<li>Ustüner, E. T., Zdichavsky, M., Ren, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+composite+tissue+allograft+survival+in+a+porcine+model+with+cyclosporine%2Fmycophenolate+mofetil+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Long-term composite tissue allograft survival in a porcine model with cyclosporine/mycophenolate mofetil therapy.</a> Transplantation. 661, 581-587 (1998).</li>
<li>Wachtman, G. S., Wimmers, E. G., Gorantla, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biologicals+and+donor+bone+marrow+cells+for+targeted+immunomodulation+in+vascularized+composite+allotransplantation%3A+a+translational+trial+in+swine%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Biologicals and donor bone marrow cells for targeted immunomodulation in vascularized composite allotransplantation: a translational trial in swine.</a> Transplant Proc. 43, 3541-3544 (2011).</li>
</ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Tarihsel, heterotopik arka bacak nakli protokol ventral karın duvarına bir cilt raket dışsallaştırdığını dahil ve damarları uç-yan bir şekilde (Hettiarachty 2004) anastomoz edildi. Ancak, modifiye edilmiş bir yöntemde, bir ters kanat insetting ve uç-uca anastomoz daha fazla yanal olarak cilt kürek getirmek ve dolayısıyla hayvanın bir ayakta durma konumunda bağışıklık izlenmesini kolaylaştırır. Daha yakın kızılötesi lazer anjiyografi ile sural arter belirlenmesi ve en yüksek perfüzyon bölgeleri cilt kürek güvenilirliğini...

El ve yüz nakli gibi Vaskülarize Kompozit doku yaması (VCA) artık dünya çapında 12 Gerçekleştirilen sayıda el ve yüz nakli ile klinik bir gerçeklik vardır. Erken ve ara sonuçlar uygun ve son derece 2 teşvik olduğu gerçeğine rağmen, birden fazla ilaca kronik bağışıklık gereksinimi yaygın klinik uygulama sınırlamaya devam etmektedir. Süper mikrocerrahi anastomoz ve nonsuture manşet teknikleri 13 dahil VCA kemirgen modellerinde gelişmeler, 3 VCA alloimmun yanıtları daha iyi anlaşılmasına yol açmıştır. Immunomodülatör protokolleri onbinlerce VCA immün mekanizmaların daha iyi anlaşılmasına dayalı klinik uygulamalar için önerilmiştir ancak insanlarda 7 performansları oldukça öngörü olurdu bir büyük hayvan modelinde doğrulanmış olması gerekir. Insan ve domuz organ sistemleri arasındaki fizyolojik ve immünolojik benzerlikler dayalı <sup&gt; 6, domuz VCA modelleri 9 Canin güvenilir ve maliyet-etkin alternatifler olarak kabul edilir ve insan olmayan primat modelleri 1. edilebilir. Bu makale VCA immün toleransını uyaran ve dolayısıyla klinik uygulamayı genişletmeyi amaçlayan mevcut ve gelecekteki immünomodülatör stratejileri için zemin olarak hizmet eden MHC-tanımlı domuz heterotopik arka bacak nakli modelinde, kullanılan yöntemlerin ayrıntılı bir bakış sağlar. Biz özellikle transplant ile ilgili araştırma 11 kendi kullanımı için domuz lökosit antijen lokusuna homozigosite için yetiştirilen iyi karakterize edilmiş inbred domuz kullanmaktadır. Biz femoral damarlar dayalı bir vaskülarize osteomyocutaneous flep yükseltmek. Flep distal femur ve proksimal tibia bozulmamış vaskülarize kemik iliği içerir. Anteromedial uyluk deri de greft dahildir ve en immünojenik bileşen, O bağışıklık takibi için alıcı hayvanın dorsolateral yönüne dışarıya alınırf VCA. Dorsolateral konumlandırma pozisyonları ayakta ve otururken klinik muayene kolaylaştırır ve ayrıca nispeten temiz allogreft cildi tutar. Ustener vd. Outbred çiftlik domuzlarda 15 radyal ön ayakları osteomyocutaneous flep nakli ile VCA ilk büyük hayvan öteleme modellerinden birini tanıttı. Grup, bağışıklık kazandırma özelliği yüksek cilt bileşen dahil VCA akut reddi önemli ilaca özgü komplikasyonlar ve yan etkiler olmaksızın gecikmeli ve klinik olarak anlamlı bir strateji ile tedavi edilebilir ki ilk kez göstermek için bu modeli kullanılmıştır. Bu çalışmada elde edilen olumlu sonuçlar sonradan insan rekonstrüktif nakli için ilaç rejimlerinin tasarımında temel bir adım inşa etti. Bu erken domuz VCA modelleri deri, kas, kemik, sinir ve bu tür eklem cartilag gibi özel yapıları yoksun damarlarının reddini önlemek için protokol geliştirmek için de uygun olmasına rağmene ve eklem sinovyal zarlar. Daha sonraki çabaları greft çıkmasını önlemek için 14 tam uzunlukta döküm yerleştirme gerektirdiği hayvanın medial hanesi dahil üzerinde duruldu. Uzuv nakli tüm önemli bileşenler reddini araştırmak için uygun olsa da, bu modelin önemli sınırlamalar bir yerleşim döküm nedeniyle nakil sonrası ayaktan zorluk oldu. Böylece, heterotopik domuz uzuv alotransplantasyon modelleri, tibia oluşan, fibula, diz eklemi, distal femur, çevresindeki kas ve deri kürek, hayvan serbestçe minimal morbidit 8 ile postoperatif yürümelerine izin verirken öncelikle VCA immünolojik yönlerini incelemek için oluşturulan . Dr David H. Sachs öncü çalışmaları ile iyi karakterize SLA-tanımlı kendilenmiş domuz gelişmesi öteleme VCA araştırma yeni bir çığır açmıştır. Küçük bir antijen uyumsuzluğu ortamda, Mat bir heterotopik arka bacak nakli modeli kullanılarakhes ve diğ. 10. siklosporin tedavisinin kısa bir ders ile kas iskelet bileşenlerin belirsiz sağkalım göstermiştir. Hiçbir tedavi kontroller ile karşılaştırıldığında hayatta kalma Cilt bileşeni, ancak, sadece uzun süreli edildi. Greft cilt bileşeninin kaybı epidermise, özellikle bir izole edilmiş ve son derece güçlü bir immün yanıt, atfedilmiştir. Benzer şekilde, T-hücresi azalması, siklosporin ve sadece kas-iskelet sistemi bileşenlerinin ve deri bileşene tolerans sebep olduğu sitokin harekete donor periferal kan tek-çekirdekli hücrelerinin kısa süreli tamamen uyumsuz domuzlar kullanılarak hala 5 reddedildi. &#39;Split hoşgörü&#39; olarak adlandırılan bu olgu, bugüne kadar yapılan rekonstrüktif nakli çoğunluğunun ayrılmaz bir bileşeni olan yüksek immünojenik cilt bileşen, üzerinde daha büyük bir odaklanma ile VCA araştırma bir paradigma değişikliği getirdi. Bu şekilde değiştirilmiş bir modelde, ligatin ile uç-uca anastomoz kullanmaktadırg alıcı femoral arter ve dönen o (Şekil 1) sefalad. Bu, geleneksel bir birleştirme cihazının kullanımına izin vererek, iskemi süresini kısaltır hem de anastomoz başarısızlık şansını azaltır değil. Biz, kollateral dolaşım yerel bacak damarlanma sağlamak için yeterli olduğunu göstermektedir bizim alıcılarında femoral arter ligasyonu, aşağıdaki herhangi bir iskemik olay görülmez. Buna ek olarak, bu değiştirilmiş yöntemde, dışa deri bileşeni temel gemiler delme göre harekete ve geleneksel modeli 10 içinde bir kasık ventral pozisyonda aksine (Şekil 1) yanal olarak yerleştirilir. Bu, ayakta veya hayvanın oturma pozisyonunda bağışıklık takibi için greft kolayca görüntülenmesini sağlar. Bu nedenle, güvenilir ve yeniden üretilebilir bir hayvan modeli büyük VCA cilt bileşeni karşı tolerans indüksiyonu stratejiler araştırmak ve yeni N geliştirmek için gereklidirgreft sağ kalımı daha iyi tahmininde oninvasive bağışıklık izleme stratejileri.

<table><tbody><tr><td colspan="4">REAGENTS</td></tr><tr><td>HTK</td><td>Custodial</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">EQUIPMENT</td></tr><tr><td>Electric Pen Drive</td><td>Synthes, Westchester PA</td><td>05.001.011</td><td>Pistonlu testere</td></tr><tr><td>Vasküler Bağlantı cihazı</td><td>Synovis, Newtown PA</td><td>21003B</td><td></td></tr></tbody></table>

translational vaskülarize kompozit allotransplantasyon (vca) araştırma için modifiye heterotopik domuz hind ekstremite nakli modeli

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

El ve yüz nakli gibi Vaskülarize Kompozit doku yaması (VCA) kompleks iskelet travma ve yıkıcı doku kaybı için uygun bir tedavi seçeneği temsil eder. Olumlu ve son derece cesaret verici erken ve orta fonksiyonel sonuçlara rağmen, bir VCA son derece immünojenik cilt bileşeni ve kronik çoklu ilaç immünosupresyonun potansiyel yan etkileri reddi VCA yaygın klinik uygulama engellemeye devam. Bu nedenle, bu yeni alandaki araştırmalar VCA benzersiz immünolojik özellikleri ile ilgili öteleme çalışmalara odaklanmak ve uzun süreli bağışıklık için gerek kalmadan VCA aşağıdaki immünomodülasyon ve toleransın için yeni immunomodulator stratejiler geliştirmek gerekiyor. Bu makalede, bir MHC-tanımlı domuz heterotopik arka uzuv doku yamasında bir osteomyocutaneous kanat oluşur VCA güvenilir ve yeniden üretilebilir bir translasyon büyük bir hayvan modeli açıklar. BriEFLY, iyi vaskülarize cilt kürek yakın kızılötesi lazer anjiyografi kullanılarak anteromedialinde uyluk bölgesinde tanımlanır. Altta yatan kasları, diz eklemi, distal femur ve proksimal tibia femoral vasküler pedikül üzerinde hasat edilir. Bu, allograft bir VCA ve kendine özgü bir bağışıklık imtiyazlı özelliklere sahip bir vaskülarize kemik iliği nakli hem de kabul edilebilir. Greft bağışıklık takibi için dorsolateral bölgeye ucu dışarıya bir deri bileşeni ile alıcı hayvanda bir deri altı cep abdominal transplante edilir. Üç cerrahi ekipler, böylece bu modelin etkinliğinin artırılmasında ve deneysel protokolleri potansiyel zorlukları azaltarak, anestezi ve iskemi süresini azaltmak için iyi koordineli bir şekilde aynı anda çalışır. Bu model potansiyel olarak azaltmak ve VCA kronik çoklu ilaç bağışıklık ihtiyacını ortadan kaldırmayı amaçlayan gelecekte tedavi stratejileri için zemin olarak hizmet etmektedir.

Yirmi dört SLA tanımlanmış domuz heterotopik arka uzuv transplantasyonu 78 dakika boyunca (: 62-94 dakika Kademe) bir ortalama iskemi süresi ile modifiye edilmiş tekniği kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Greft İçerlek ve dorsolateral cilt kürek pozisyonu tüm hayvanlarda zorlanmadan elde edildi. Yakın kızılötesi lazer anjiyografi tüm alıcılara mükemmel greft perfüzyon gösterdi. Son on iki venöz anastomoz vasküler bir birleştirme cihazı kullanılarak yapıldı ise ilk oniki venöz anastomoz konvansiyonel dikiş teknikleri kul...

Vaskülarize Kompozit allotrans (VCA) klinik bir gerçeklik haline gelmiştir. Bununla birlikte, VCA geniş klinik uygulama kronik çoklu ilaç bağışıklık bastırılması ile sınırlıdır. Yazarlar, en aza indirmek veya potansiyel olarak VCA bağışıklık ihtiyacı ortadan kaldırabilir, yeni bağışıklık stratejileri çevirmek için güvenilir ve yeniden üretilebilir bir büyük hayvan modeli sunar.

Translational Vaskülarize Kompozit allotransplantasyon (VCA) Araştırma için Modifiye heterotopik Domuz Hind Ekstremite nakli Modeli

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, klinik olarak ilgili immünomodülatör protokollerin immünolojik sonuçlarını incelemek için, sağlam vaskülarize kemik iliği içeren, güvenilir ve tekrarlanabilir bir translasyonel büyük hayvan arka ekstremite transplantasyon modeli oluşturmaktır. Bu süreç, öncelikle vaskülarize kompozit allotransplantasyonun (VCA) cilt bileşeninin ve vaskülarize kemik iliğinin benzersiz immünolojik özelliklerini incelemek amacıyla bir osteomyokutanöz flap hasadı ile gerçekleştirilir. Ardından allogreft, alıcının lokomosyonunu engellemeden teknik olarak uygulanabilir bir model sağlayan subcutan abdominal duvar cebine transplant edilir.Ardından, ayaktaki hayvanın doğrudan görsel inceleme yoluyla grefti izleyebilmek için deri bileşeni dorsal lateral abdominal duvara dışa aktarılır. Sonuçlar, bunun hücre tabanlı tedavilerin ve biyolojik ajanların kullanıldığı klinik olarak ilgili immünomodülatör protokolleri test etmek için güvenilir ve tekrarlanabilir bir model olduğunu göstermektedir. Bu tekniğin, VCA'nın köpek ve insan dışı primat modelleri gibi mevcut modellerine karşı temel avantajı, zoonotik enfeksiyon riskinin en düşük seviyede olması ve SLA tanımlı donör ve alıcı suşların varlığı ile daha maliyet etkin olmasıdır.Bu yöntem, vaskülarize kemik iliğinin benzersiz immün ayrıcalıklı özelliğiyle ilgili rekonstrüktif transplantasyon alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir ve immünsupresyonu minimize eden, klinik olarak ilgili bir immünomodülatör protokolün geliştirilmesinin önünü açacaktır. Yaklaşık yirmi yıl önce, bir ekstremite allogreftinin çeşitli bileşenlerinin immünojenisitesini test ettiğimiz ve split tolerans fenomenini ortaya koyduğumuz bu transplantasyon modeli fikrini geliştirdik. Allogreft ekstremite alınmadan önce, donör domuza sedasyon uygulanır ve prosedür boyunca isof, flurin ve oksijen sağlamak için bir ventilatöre bağlanır.Cerrahi bölge tıraş edildikten, yıkandıktan ve dezenfekte edildikten sonra, donör hayvanı ameliyat masasına sırt üstü pozisyonda yerleştirin ve steril bir örtüyle örtün. Ardından, intermedial deriye giden perforatörleri belirlemek için yakın kızılötesi lazer anjiyografi kullanın. Daha sonra, periferik vasküler erişim yoluyla salin içindeki indosiyanin yeşilini enjekte edin.Yaklaşık 10 saniye sonra, 30 saniye ile iki dakika arasında yakın kızılötesi kayıtlar gerçekleştirin. Ardından, tanımlanan perforatörlere dayanarak, daha sonra immünolojik izleme için kullanılacak olan deri flebi için bir cilt alanı işaretleyin. Palpebral refleks ve ayak parmağı sıkıştırma refleksleri aracılığıyla hayvanın anestezi derinliğini kontrol ettikten sonra, işaretlemelerle uyumlu olacak şekilde kasık bölgesindeki deride bir insizyon yapmak için skalpel kullanın. Deri flebi için, deri alanını koruyarak deri ve deri altı dokuyu diseke edin.Flep alımı sırasında kontraksiyonu önlemek için cilt kenarlarını alttaki kaslara sütürleyin. Ardından femoral damarları tanımlayın ve bunları inguinal ligament seviyesinin proksimalinden izole edin. Dalları cilt pedalı seviyesine kadar distalle bağlayın; karşılıklı testere ile dört santimetrelik optimal bir uzunluk elde etmek için ayak bileği ekleminin hemen üzerinde bir osteotomi gerçekleştirin.Ardından, proksimal uyluktaki kasları ayırmak için elektrokoter kullanın. Donörün femurunu şaftın orta seviyesinden kesin ve vasküler bir cilt pedalı üzerinde osteomiyokutanöz bir flep bırakın. Flep; cilt pedalının altındaki uyluk kaslarını, alt femur ve diz eklemini, üst tibia ve dolayısıyla bozulmamış vaskülarize kemik iliğini içerir.Benzersiz immünolojik özellikleri nedeniyle, alıcının femoral damarları hazır olana kadar donör greftini vasküler pedikülü üzerinden perfüze tutun. Donör insizyonu başlatıldıktan hemen sonra, alıcı domuzu bir ventilatöre bağlayın ve donör domuzda gösterildiği gibi izofluran anestezisine başlayın. Salin iletimi için bir kateter yerleştirin ve preemptif buprenorfin ile profilaktik antibiyotikler uygulayın.Hayvanı, dorsal lateral yüzeyin iyi şekilde açığa çıktığı sırtüstü pozisyona getirin ve anestezi düzeyini kontrol edin. Ardından, femoral damarları açığa çıkarmak için bir kasık insizyonu yapın ve bunları inguinal ligament seviyesinin distal ve proksimal yönünde üç ila dört santimetre boyunca izole edin. Daha sonra, greft yerleşimi için kasıktan dorsal lateral abdominal duvara kadar subkutan bir cep oluşturun.Şimdi donör damarları lige edin ve greft dokusunu yıkamak için histidin, triptofan ketoglutarat veya HTK solüsyonu kullanın. Eğer bu, donörden yapılan son alımsa, greft yerleşimini gerçekleştirmek için hayvanı hayvan protokolüne uygun olarak derhal ötanize edin. Damarlar üzerinde herhangi bir gerginlik oluşmadan vasküler bir bağlama cihazı ile anastomoz yapılmasına olanak sağlayacak şekilde, femoral kesik ucun uygun yöne baktığı ters bir pozisyona getirin.Mümkünse, bir venöz anastomoz hazırlayın. Cihaz, iskemi süresini önemli ölçüde azaltacaktır. Ardından, vasküler açıklık onaylandıktan sonra, sekiz sıfır sütürler ve konvansiyonel bir sütür tekniği kullanarak arteriyel anastomozu gerçekleştirin.İmmün monitörizasyon için greft kaslarını alıcının abdominal duvar kaslarına dikerek grefti sabitlemek amacıyla üç adet OPDS sütürü kullanın. Dorsolateral taraftaki cilt pedini dışarı çıkarın. Ardından, derin tabakaları 3-0 Vicryl sütürlerle dikin ve dokuyu alıcı cildine 4-0 monofilaman, absorbe olabilir kesikli cilt sütürleri kullanarak dikin.Son olarak, kasık bölgesindeki deri, 3-0 Vicryl deri altı sütürleri kullanılarak katmanlar halinde kapatılır ve ardından 4-0 monofilaman emilebilir kesikli deri sütürleri uygulanır. Postoperatif analjezi için, hayvan uyandıktan ve kendi başına rahatça nefes almaya başladıktan sonra üzerine saatte 50 µg fentanyl yaması uygulanır.Hayvanı ağılına geri götürün ve dilediği kadar yem yemesine ve su içmesine izin verin. İlk 24 saat boyunca her dört saatte bir, sonrasında ise günde iki kez hayvanı ağrı veya stres belirtileri açısından gözlemleyin. Modifiye edilmiş tekniğimiz kullanılarak 19 MHC tanımlı domuz heterotrof arka ekstremite transplantasyonu gerçekleştirilmiştir.Bu transplantasyonlar, VCA'da immün toleransı indüklemek için terapötik stratejiler geliştirme amacıyla gerçekleştirilmiştir. Bu model, uzun süreli reddedişle seyreden VCA için yeni immün tolerans terapötik stratejilerinin geliştirilmesinde başarıyla kullanılmıştır; geleneksel immünosüpresyonun kesilmesi üzerine, reddedişten ari sağkalım kontrol gruplarında hızlanmış greft reddi gözlemlenmiştir. Yeterlilik kazanıldığında, bu prosedür doğru şekilde uygulandığı takdirde her bir donör ekstremite için bir ila iki saat, her bir alıcı prosedürü için ise iki ila üç saatte tamamlanabilir. Bu prosedür uygulanırken, donörün karşı taraf ekstremitesinin, gelişiminden sonra alıcının abdominal duvar cebine, sağ ekstremitenin sol kasığa ve tersinin sağ kasığa nakledilecek şekilde transplant edildiğinin hatırlanması önemlidir.Bu teknik, rekonstrüktif transplantasyon alanındaki araştırmacıların, yaşam boyu sürecek immünosupresyon gereksinimini minimize edebilecek ve böylece bu yenilikçi modalitenin risk-yarar dengesini iyileştirebilecek yeni immünomodülatör protokolleri keşfetmelerinin önünü açmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, sağlam vaskülarize kemik iliği içeren heterotopik arka ekstremite transplantasyonunun teknik yönleri hakkında kapsamlı bir bilgiye sahip olmalısınız. Ekstremite transplantasyonunun bu güvenilir ve tekrarlanabilir modeli, kronik çoklu ilaçlı immünosupresyon ihtiyacını minimize eden ve potansiyel olarak ortadan kaldıran yeni immünomodülatör protokollerin geliştirilmesine zemin hazırlayacaktır.

a-modified-heterotopic-swine-hind-limb-transplant-model-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kombine katı organ ve vaskülarize kompozit allotransplantasyonu incelemek için, servikal dikişsiz manşet tekniği kullanarak farelerde yeni bir heterotopik en blok göğüs duvarı, timus ve kalp nakli modelini açıklıyoruz.

Farelerde A Novel Mikrocerrahi Heterotopik Modeli, En Bloku Göğüs Duvarı, Thymus ve Kalp Nakli

Süper mikrovasküler anastomoz olmayan bir dikiş manşet tekniği uygulayarak fare ortotopik arka uzuv nakli için bu yeni model, vaskülarize kompozit doku yamasında (VCA) ile ilgili in vivo mekanik immünolojik araştırmalar için güçlü bir araç sağlar.

Fare Ortotopik Hind Ekstremite nakli

Şu anda bozukluklarına bileşik allotransplantation her türlü uzun-vadeli-immünosupresyon, hayat kritik olmayan endikasyonları desteklemek zor bağlıdır. Biz kemik VCA çalışma ve kemik canlılığı uzun süreli bağışıklık modülasyonu, gerek kalmadan korumak için cerrahi angiogenez kullanımını göstermek için kullanılan yeni bir domuz tibial VCA modeli mevcut.

Domuz Tibial Allotransplantation cerrahi angiogenez: bileşik Allotransplantation Model yeni bir büyük hayvan kemik skarların

Vascularized kompozit allogreft, nakil alıcılarına yaşam değiştiren avantajlar sunar, ancak greft reddi ve vaskas patasının biyolojik nedenleri kötü anlaşılmalıdır. Burada sunulan kemirgen cerrahi modeli reproducible, klinik olarak ilgili transplantasyon modeli sunar ve araştırmacılar reddedilme olaylarını ve olası terapötik stratejileri kendi oluşumunu önlemek için değerlendirmelerine izin verir.

Translasyonel vaskülarize kompozit allotransplantasyon araştırmaları için Rat 'ta değiştirilmiş heterotopik Hindekstremite Osteomokutanöz Flap modeli

Bu protokol, immünoloji ve fonksiyonel iyileşme nin eşzamanlı çalışmasına yönelik sağlam, tekrarlanabilir vasküler kompozit allotransplant (VCA) modelini sunmaktadır. El dikilmiş vasküler anastomozlar ve nöral coaptation ile sağ orta uyluk arka ekstremite ortopik nakli titiz tekniği yatırım zaman fonksiyonel kurtarma çalışma yeteneği verir.

Sonraki Adım Taking: Bir Nöral Coaptation Ortotopic Hind Limb Transplant Modeli Sıçan Fonksiyonel Kurtarma Maksimize etmek

Bu makale sıçanlarda kısmi heterototopik osteomiyokutanöz flap transplantasyon protokolünü ve orta vadeli takipte potansiyel sonuçlarını sürmektedir.

Sıçanlarda Kısmi Heterotopik Hindlimb Transplantasyon Modeli

Bu protokol domuz fasyo-kutanöz flep modelini ve vaskülarize kompozit doku araştırmalarında potansiyel kullanımını tanımlamaktadır.

Vaskülarize Kompozit Allogreftler Biyomühendislik Çalışmaları için Güvenilir Bir Domuz Fasyo-Kutanöz Flap Modeli

Heterotopik arka uzuvdan boyuna vaskülerize kompozit allotransplantasyonlu tekrarlanabilir bir fare modeli sunuyoruz. Bu süpermikrocerrahi protokol, 0,3-0,5 mm damar anastomozlarını içerir ve naylon filament yönlendirmesi ile venöz kelepçeleme ile birleştirilir. Vaskülerize kompozit allotransplantasyonda tolerans, iskemi-reperfüzyon hasarı ve immünolojik mekanizmalar üzerine translasyonel çalışmalar için güvenilir bir platform sağlar.

Farede Heterotopik Arka Uzuvdan Boyuna Nakil: Vaskülerize Kompozit Allotransplantasyonun Süpermikrocerrahi Modeli

Farelerde kalplerin heterotopik nakli için mikrocerrahi prosedür için, donör toplama ve alıcı damar anastomozu için basitleştirilmiş yöntemler de dahil olmak üzere bir teknik gösterilmiştir.

Heterotopik Fare Kalp NAKLİ için Modifiye Yöntem

El yazması fare heterotopik kalp nakli gerçekleştirmek için gereken adımları açıklar.

Mürin Heterotopik Kalp Nakli Tekniği

Öğrenin, domuzlarda modifiye heterotopik arka ekstremite nakli modeliyle vaskülarize kompozit allotransplantasyon için immunomodülatör protokolleri nasıl test edilir. Bu yöntem, vaskülarize kemik iliğinin immunolojik özelliklerini incelemeye olanak tanır.

Translational Vaskülarize Kompozit allotransplantasyon (VCA) Araştırma için Modifiye heterotopik Domuz Hind Ekstremite nakli Modeli (Video) | JoVE Journal

Translational Vaskülarize Kompozit allotransplantasyon (VCA) Araştırma için Modifiye heterotopik Domuz Hind Ekstremite nakli Modeli

Daha fazla video keşfet