Translational Vaskülarize Kompozit allotransplantasyon (VCA) Araştırma için Modifiye heterotopik Domuz Hind Ekstremite nakli Modeli

Aşağıdaki deneyin genel amacı, klinik olarak anlamlı immünomodülatör protokollerin immünolojik sonuçlarını incelemek için sağlam bir vaskülarize kemik iliği içeren güvenilir ve tekrarlanabilir bir translasyonel büyük arka ekstremite nakli büyük hayvan modeli oluşturmaktır. Bu, vaskülarize kemik iliği ile birlikte vaskülarize kompozit allo transplantasyonu veya VCA'nın cilt bileşeninin benzersiz immünolojik özelliklerini incelemek için önce bir osteo miyokutanöz flep toplanarak elde edilir. Daha sonra, allogreft deri altı karın duvarı cebine nakledilir, bu da alıcının hareketini engellemeden teknik olarak uygulanabilir bir model haline getirir.

Daha sonra deri bileşeni, hayvanın ayakta durma pozisyonunda doğrudan görsel muayenesi ile grefti izlemek için dorsal lateral karın duvarına dışlanır. Sonuçlar, bunun hücre bazlı tedaviler ve biyolojik ajanlar kullanan klinik olarak ilgili immünomodülatör protokolleri test etmek için güvenilir ve tekrarlanabilir bir model olduğunu göstermektedir. Bu tekniğin, VCA'nın köpek ve insan olmayan primat modelleri gibi mevcut modellere göre en büyük avantajı, en düşük zoonotik enfeksiyon riski ve SLA tanımlı donör ve alıcı suşlarının varlığı ile daha uygun maliyetli olmasıdır.

Bu yöntem, vaskülarize kemik iliğinin benzersiz immün ayrıcalıklı özelliğini çevreleyen rekonstrüktif transplantasyon alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir ve immünosupresyonunu en aza indiren klinik olarak anlamlı bir immünomodülatör protokolün geliştirilmesinin yolunu açacaktır. İlk olarak, bir ekstremite allogreftinin çeşitli bileşenlerinin immünojenisitesini test ettiğimiz ve neredeyse yirmi yıl önce bölünmüş tolerans fenomenini gösterdiğimiz bu nakil modeli fikrini geliştirdik. Allogreft uzuvunun toplanmasından önce, donör domuz sedasyona tabi tutulur ve prosedür boyunca izof, flor ve oksijen vermek için bir ventilatöre bağlanır.

Ameliyat bölgesini tıraş ettikten, yıkadıktan ve dezenfekte ettikten sonra, donör hayvanı ameliyat masasına sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve steril bir örtü ile örtün. Daha sonra, intermedial cilde perforatörleri tanımlamak için yakın kızılötesi lazer anjiyografi kullanın. Daha sonra periferik vasküler erişim yoluyla tuzlu su içinde indosiyanin yeşili enjekte edin.

Yaklaşık 10 saniye sonra, 30 saniye ila iki dakika arasında yakın kızılötesi kayıt yapın. Daha sonra, tanımlanan perforatörlere dayanarak, daha sonra bağışıklık izleme için kullanılacak bir cilt küreği için bir cilt alanını işaretleyin. Palpebral ve ayak parmağı çimdikleme refleksleri ile hayvanın anestezi derinliğini kontrol ettikten sonra, işaretlerle süreklilik içinde kasık derisi kesisi yapmak için bir neşter kullanın Bir deri küreği için, deri alanını korurken cildi ve deri altı dokusunu inceleyin. Raket.

Flep hasadı sırasında kasılmayı önlemek için cildin kenarlarını alttaki kaslara dikin. Daha sonra femoral damarları tanımlayın ve bunları proksimal olarak inguinal ligament seviyesine kadar izole edin. Dalları distal olarak cilt seviyesine kadar bağlayın Pistonlu bir testere ile dört santimetrelik optimum bir uzunluk elde etmek için kürek çekin, ayak bileği ekleminin hemen üzerinde bir osteotomi yapın.

Daha sonra proksimal uyluktaki kasları bölmek için elektrokoter kullanın. Donörün uyluk kemiğini orta şaft seviyesinde bölün ve vasküler bir deri küreği üzerinde osteo miyokutanöz bir flep bırakın. Flep, uyluk kaslarının altında yatan deri küreğini, alt uyluk kemiğini ve diz eklemini, üst tibiayı ve dolayısıyla sağlam bir vaskülarize kemik iliğini içerir.

Eşsiz immünolojik özellikleri ile donör grefti, alıcı femoral damarlar hazır olana kadar vasküler pedikülü üzerinde perfüze edilmiş halde tutun. Donör insizyonu başlatıldıktan hemen sonra, alıcı domuzu bir ventilatöre asın ve donör domuzla gösterildiği gibi flor anestezisine başlayın. Salin uygulaması için bir kateter yerleştirin ve önleyici buprenorfin ve profilaktik antibiyotikler uygulayın.

Hayvanı, dorsal yan yüzeyin iyi bir şekilde maruz kaldığı sırtüstü pozisyona getirin ve anestezi seviyesini kontrol edin. Daha sonra, femoral damarları ortaya çıkarmak için bir kasık kesisi yapın ve bunları kasık ligamenti seviyesine distal ve proksimal olarak üç ila dört santimetre izole edin. Daha sonra greft girişi için kasıktan dorsal lateral karın duvarına kadar deri altı bir cep oluşturun.

Şimdi donör damarları bağlayın ve greft dokusunu yıkamak için histidin, triptofan ketoglutarat veya HTK solüsyonu kullanın. Bu, donörden alınan son hasat ise, greft yerleştirmeyi gerçekleştirmek için hayvanı hayvan protokolüne göre hemen ötenazi yapın. Bir vasküler birleştirme cihazı kullanarak damarlar üzerinde herhangi bir gerilim olmadan anastomoza izin vermek için femur kesik ucu kıvrık bir şekilde bakacak şekilde ters çevrilmiş bir şekilde konumlandırın.

Varsa, bir venöz anastomoz hazırlayın. Cihaz, iskemi süresini önemli ölçüde azaltacaktır. Daha sonra sekiz oh sütür ve geleneksel bir sütür tekniği kullanarak, vasküler açıklık doğrulandıktan sonra arteriyel anastomoz yapın.

Bağışıklık izleme için greft kaslarını alıcının karın duvarı kaslarına dikerek grefti yerine sabitlemek için üç OPDS sütürü kullanın. Dorsolateral taraftaki deri küreğini dıştan çıkarın. Daha sonra üç oh Vicryl sütür kullanarak derin tabakaları dikin ve dokuyu dört oh monofilament, emilebilir kesintili cilt sütürü kullanarak alıcı cilde dikin.

Son olarak, kasık derisini üç oh Vicryl subkutan sütür kullanarak katmanlar halinde kapatın, ardından dört oh monofilament emilebilir kesintili cilt sütürü uygulayın. Postoperatif analjezi için. Hayvana saatte 50 mikrogramlık bir fentanil yaması uygulayın, uyandığında ve kendi başına rahatça nefes aldığında.

Hayvanı ağılına geri koyun ve libidoda yemek yemesine ve su içmesine izin verin. Hayvanı ilk 24 saat boyunca her dört saatte bir ve daha sonra günde iki kez ağrı veya sıkıntı belirtileri açısından gözlemleyin. 19 MHC tanımlı domuz heterotrofik arka ekstremite nakli modifiye tekniğimiz kullanılarak gerçekleştirildi.

Bu nakiller, VCA'da immün toleransı indüklemek için terapötik stratejiler geliştirmek amacıyla gerçekleştirildi. Bu model, uzun süreli reddi olan VCA'da immün tolerans için yeni terapötik stratejilerin geliştirilmesinde başarıyla kullanılmıştır, serbest sağkalım kontrol grupları, konvansiyonel immünosupresyonun kesilmesi üzerine hızlandırılmış greft reddi göstermiştir Bir kez ustalaştıktan sonra, bu prosedür her donör uzuv için bir ila iki saat içinde ve uygun şekilde gerçekleştirilirse her alıcı prosedürü için iki ila üç saat içinde yapılabilir. Bu prosedürü denerken, donörün kontralateral uzvunun, sağ uzuv sol kasığa nakledilecek şekilde alıcının karın duvarı cebine nakledildiğini ve bunun tersinin de gelişimini izlediğini hatırlamak önemlidir.

Bu teknik, rekonstrüktif transplantasyon alanındaki araştırmacıların, yaşam boyu immünosupresyon gereksinimini en aza indirebilecek ve dolayısıyla bu yenilikçi modalitenin risk-fayda dengesini destekleyebilecek yeni immüno-modülatör protokolleri keşfetmelerinin yolunu açtı. Bu videoyu izledikten sonra, sağlam bir vaskülarize kemik iliği içeren heterotopik arka uzuv naklinin teknik yönlerini iyi anlamış olmalısınız. Bu güvenilir ve tekrarlanabilir ekstremite nakli modeli, kronik çoklu ilaç immünosupresyonuna olan ihtiyacı en aza indiren ve potansiyel olarak ortadan kaldıran yeni immünomodülatör protokollerin geliştirilmesinin yolunu açacaktır.