Name: Uzun vadeli potansiyelize bir çok Kararlı ve tekrarlanabilir Kayıt için geliştirilmiş Hazırlık ve Hipokampal Fare Dilimleri korunması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-06-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: Öğrenin fare hipokampal kesilerinde 8 saatten uzun süren kararlı uzun süreli potansiyelizasyon kaydı için güvenilir bir protokol. Bu yöntem sinaptik plastisite mekanizmalarını in vitro ortamda yüksek tekrarlanabilirlikle araştırmayı mümkün kılar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Teknik yardım için Bernard Foucart teşekkür ederim. Bu çalışma Bilimsel Araştırma Belçika Fonu (FRS-FNRS) tarafından ve Tıbbi Araştırma Kraliçe Elisabeth Fonu tarafından desteklenmiştir. Agnès Villers Bilimsel Araştırma için Belçika Fonu Araştırma üyesidir.

Tüm hayvan prosedürleri araştırma hayvanların bakım ve kullanımı için Sağlık düzenlemeler Ulusal Sağlık Enstitüleri uygun olarak ve yerel etik kurul onayı ile yapılmıştır. 1. Yapay Cerebro-spinal Sıvı hazırlanması Aynı medya, incelemek kesme ve dinlenme süresi ve elektrofizyolojik sırasında dilimleri (1 ml / dak) serpmek için kullanılır. Bu ortam, 124 mM NaCI, 4.4 mM KCI, 26 mM NaHCO 3, 1 mM NaH 2 PO 4, 2.5 mM CaCl2, 1.3 mM MgSO 4 ve 10 mM D-glukoz oluşmaktadır. <ol><li> (1 M) ile çözelti içinde zaten MgSO 4 hariç ACSF 2 L farklı bileşenler tartılır. Toz MgSO 4 derece higroskopik + için bir standart solüsyon kullanılarak Mg 2 tam konsantrasyonu emin olmasını sağlar. Ca 2 +: Mg 2 + oranı büyük ölçüde LTP indüksiyon ve bakım etkiler14 ve böylece oranları her zaman saygı gösterilmelidir. </li><li> Bir bardak CaCl 2 hariç tüm bileşenleri koymak dereceli silindir ve distile H 2 O ile 2 L getirmek </li><li> Şiddetle karıştırın. Her çözülür, tank (% 95 O2,% 5 CO2) bağlanmış bir akvaryum fıskiyeden ve borunun içinden karbojen ekleyin. Birkaç dakika bekleyin ve pH bikarbonat tampon etkisi ile 7.4 &#39;de sabit kalsiyum klorür ekleyin. </li><li> Bir soğuk dikdörtgen cam tabak içinde 600 ml tutmak ve ° C çanak çevresinde buz ile 4 için soğumasını. Bu ortam, hipokampus diseksiyon için kullanılacaktır. </li><li> Kalan 1.400 ml filtre ve bir Erlenmeyer şişesi bulundurun. </li></ol> 2. Elektrofizyolojik Rig ve Beyin Dilim Kayıt Odası hazırlanması Perfüzyon devresi 2 peristaltik pompa, bir rezerv tankı taze sıvı pompalama bir ve t diğer pompalama kullanılan sıvı yapılmıştıro bir bölmeye odası kayıt. Taze sıvı yeniden oksijenli ve ağırlık (Şekil 1A) tarafından arayüzü kayıt odasına ulaşmadan önce ısıtılır bir ev yapımı perfüzyon sistemi eklenir. Arayüzü kayıt odasına FST (Güzel Bilim Araçları, Vancouver, Kanada, Şekil 1B) tarafından tasarlanmıştır. Doku dilimleri çıkarılabilir iyi halka bağlı ve sürekli iyi iğne emme yüksekliğini ayarlayarak arayüzü koşullar altında korunabilir dokuma net filtre yerleştirilir. Sonuna ve (0.5 mm) yanal delikli bloke bir ev yapımı plastik tüp odasında istikrarı artırmak için emme iğne sabitlenir. Kayıt kafası da kayıt kafasının (su damlacığı oluşumu azaltmak için) olarak sapma bağlantı noktaları üzerinden nemli hava geçirerek nemli ortam sağlamak yardımcı olan bir gaz dağılım taş içeren bir su banyosu üzerinde monte edilir. Küvet ve orta sıcaklıkta sürekli DC akım inci seviyesini değiştirmek sureti ile kontrol edilirkaba bir silikon kauçuk-gömülü su banyosunda ısıtıcı. Su banyosu ve kayıt kuyularda termistör oda sıcaklığında bu sitelerde kurmak ve tam izlenecek sağlar. Odasının ısıtma sistemi, tüm teçhizat sıcaklığını kontrol küresel bir ısıtma sistemi ile tamamlanmıştır. Edinburgh Üniversitesi&#39;nde (araştırmacılar tarafından geliştirilen yazılım <a href="http://www.etcsystem.com" target="_blank">www.etcsystem.com</a> ) oksijenli havanın sıcaklığı, beyin dilim, elektrotlar ve uzun vadeli kayıtları (Şekil 1C) için istikrarlı bir ortam sağlayarak kalan teçhizat izler ve eşitler . Fare hipokampal dilimler için kullanılan sıcaklık 28 ° C &#39;dir <ol><li> 20 dakika arasında, en az damıtılmış H2O ile tüm perfüzyon devre durulayın ve ısıtma sistemleri başlar. </li><li> Devredeki karbojen köpüren başlatın. Carbogen f ile ev yapımı perfüze tüpler geldiilter mumlar ve kayıt odasının altındaki su banyosu içinde soğutulmuştur. Su banyosu içinde akış hızı, bir akış ölçer tarafından kontrol edilir. Akış hızı çok yavaş ise, doku hipoksik haline gelebilir. Debisi çok yüksek ise tersine, gaz yeterince ısıtılmış ve doku kurutma neden nemli olmayabilir. Yüksek gaz akış oranı da ozmotik şok yol açan aşağıdaki su banyosundan doku üzerinde püskürtme su şansını artırabilir. Bu sapma portların çıkışında naylon örgü bit (100 mikron) eklenerek önlenebilir. </li><li> Devre boşaltın ve filtre ACSF ile doldurun. </li><li> Tutma odasında dilim destekleyecek halka koyun. 500 ila 750 mikron arasında değişen örgü delikleri olan bir dokuma ağ filtre iki parçalı epoksi yapıştırıcı reçine ile gerilmiş ve halka takılır. Dokuma net filtre% 87 polyamid ve% 13 elastan (külot 15 den) yapılmıştır. Tutkal rin yüzeyinde kabartmalar oluşumunu önlemek için dikkatli bir şekilde uygulanmalıdırg. </li><li> Devre tüm hava kabarcıkları dikkatlice çıkarın. </li><li> Emme iğne vida ile kayıt odasında ACSF seviyesini ayarlayın. Peristaltik pompa hızı giriş pompa boyunca 1 ml / dak ve 5 ml / dak çıkış pompası için ayarlanır. </li></ol> Perfüzyon sistemi katı bir titreşime dayanıklı masa üzerine yerleştirilir ve bir Faraday kafesi ile çevrilidir. 3. Diseksiyon Alanı hazırlanması Cerrahi aletler: Bir # 11 bıçak, küçük standart diseksiyon makas, yaylı makas, kavisli bir forseps, iki Heidemann spatulae ve bir kaşıkla bir neşter. Yardımcı madde: bir giyotin, bir selüloz, bir tıraş bıçağı ile bir Mcllwain doku kesici, filtre kağıdı, bir plastik emzik olan bir cam Pasteur pipeti, 2 plastik pastör geniş bir ağız, bir Petri kabı, bir metal silindir ile bir pipetler 7 mm çaplı (Şekil 2A). <ol><li&gt; soğuk ACSF (Adım 1 hazırlanan) ile dolu diseksiyon çanak olarak, filtre kağıdı sarılmış bir boyama çanak bir soğuk cam kapak, bırakın. Dikkatli bir akvaryum bubbler (Şekil 2A) ile hava kabarcıkları ve oksijen ACSF çıkarın. </li><li> Kullanım sırasına göre aletleri yatıyordu. Doku kesici plaka ve distile su ve eter (Şekil 2B) ile temizlenir, yeni bir tıraş bıçağı filtre kağıdı üç tabaka ekleyin. Bu kağıt dokunduğunda tıraş bıçağı yatay konumda olmalıdır. Bıçak gücü maksimal değerin üçte biri maksimum değeri ve hızının yarısı ayarlanır. </li><li> Daha sonra zamanımız yok, çünkü her şey (aletleri, sıcaklık ...) hazır olup olmadığını dikkatle kontrol edin. </li><li> Soğuk ACSF dolu bir Pasteur pipeti ile diseksiyon sprey birine sormak. </li><li> Dekapitasyon önce Nembutal IP (100 mg / kg) ile fare anestezisi. Halotan anestezisi de kullanılabilir. Bu yöntemler ve hem de obta karşılaştırıldığındaaynı sonuçları ined. Dekapitasyon anestezi altında gereken ancak servikal dislokasyon de kullanılabilir. Ancak servikal dislokasyon hayvan acı önlemek için çok iyi bir uygulama ihtiyacı var. </li><li> Soğuk ACSF sürekli duş altında kısa sürede selüloz üzerinde parçalara ayır. </li></ol> 4. Beyin Kaldırma <ol><li> Namlu üzerinde bir elin işaret parmağı ve başparmak ile hala kafa tutarken, giyotin kesme kenarında başlayan ve frontal kemik rostrally çalışan başın üst ortasında boyunca diseksiyon makas ile bir kesi yapmak . </li><li> Tam kafatası tabakaları ortaya çıkarmak ve başın kaudal kenarındaki kas çıkarmak için başın her iki tarafındaki deri kas kesti. </li><li> Diseksiyon makas ile, her iki tarafta temporal kas kesmek temporal plaka boyunca, daha sonra enine, ortada ön plakalar kesti. Daha sonra, iki pl arasında, oksipital kemik küçük bir kesim yapmakates. </li><li> Her bir tarafı için, oksipital plakaların kuyruk dibinde kesilir. </li><li> Yaylı makas ile sagital sütür boyunca kesin. </li><li> Forseps ile, birbirinden onları yayarak kafatası yarısı çıkarın. </li><li> Neşter ile, sadece koku ampul sonra enine kesilmiş ve beyincik sonra soğuk ACSF ile diseksiyon çanak içine ayıklanan beyin dalma hemen önce. </li></ol> 5. Hipokampal Diseksiyon <ol><li> Beyin diseksiyon çanak immerged sonra, orta takılı bir neşter ile birbirinden iki hemisfer sever. </li><li> Hipokampus diseksiyonu bir binoküler cerrahi mikroskop (X25, Şekil 2A) ile görsel kontrol altında spatulae ile yapılır. Beynin bir yarısı üzerinde, dikkatli bir şekilde lateral ventrikül görmek için yapılar yayıldı. Beyin sapı ve diencephalon çıkarın. Bu bir tarafta frontal korteks üzerinde spatulae uygulayarak ve ilgili diensefalon yapılırdiğer tarafta. Spatulae ile hipokampus dokunmayın ve doku kesit sırasında germek değil dikkat edin. </li><li> Forniks yavaşça ventrikül bir spatula ekleyerek korteks (uzak rulo), en hipokampus dışarı itmek sever. </li><li> Hipokampus ayıklanır, aşırı korteks dokusu ve geri kalan kan damarları çıkarın. </li></ol> 6. Dilimleri kesimi <ol><li> Geniş bir ağız plastik Pasteur pipet ile, onun alvear yüzey üst (dışbükey tarafı) ile bir kaşık hipokampus aktarın. </li><li> Bir standart plastik Pasteur pipeti ile aşırı sıvı çıkarın. </li><li> Dikey neredeyse helikopter filtre kağıdı (Şekil 2B) dokunmadan kaşık İpucu ve hızlı bir şekilde filtre kağıdı dokunarak, kaşık hipokampus düşüyorlar sonra kaşık geri hareket ettirin. </li><li> Hipokampus yönlendirmek ve (hipokampal yönünü Şekil 2C gördüğünüz helikopteri ile 400 mikron enine dilimtıraş bıçağı göre irin). Mümkün olduğunca çabuk hareket. </li><li> Dilimlenmiş hipokampus ile filtre kağıdı çıkarın ve dilim biraz yaymak için metal silindir etrafında sarın. Daha sonra, ücretsiz standart plastik Pasteur pipeti ve soğuk ACSF ile dolu bir Petri kabındaki bunları toplamak kullanarak ACSF spreyler ile dilimleri. </li></ol> 7. Arayüz Dilimleri Kuluçka <ol><li> Bir standart plastik Pasteur pipeti ile dilim seçin ve hızlı bir şekilde kayıt odasına koyun. Dilimler 28 de arayüzü, doğrudan kayıt odasında diseksiyonu travma kurtarmak ° C </li><li> Dilim büyük olasılıkla lavabo olacaktır. Dilim seviyeye ulaşmak için sıvı seviyesi indirin ve sonra yüzer yapmak için yükseltmek. </li><li> Seviyesinin düşürülmesi sırasında doğru pozisyonda kesit getirin. Dilimler CA1 bölgesinde elektrot yerleştirme (2 uyarıcı ve bir kayıt elektrotları) kolaylaştırmak için her zaman aynı şekilde konumlandırılmıştır. </li><li> Durdurmaksıvı arayüzü bulunmaktadır. Dilim etrafında bir ortam &quot;menisküs&quot; medya yeterli düzeyde göstergesidir. Net filtre ortamı ile doymuş ama tamamen sular altında değil olmalıdır. </li><li> Delikli kapağı üzerine yerleştirilen filtre kağıtları ile kaplı odası tutun. </li><li> 28, en az 1.5 saat için dilim dinlenmesine izin ° C </li></ol> 8. Synaptic Yanıtları kaydedilmesi <ol><li> Elektrot Kayıt: ACSF dolu zaman cam kılcal MQ 2-5 bir ucu direnci elde etmek için çekilir. Filtre kağıdı küçük bir parça, elektrot ucu etrafında yerleştirilir ve kemik mumu yoğunlaşma azaltmak için ucunda uygulanmaktadır. Uyarıcı elektrotlar: 12.5 mikron çaplı platin-iridyum bipolar küme elektrotlar FHC (ABD) satın alınır. Doğru bakım ile, her elektrot en az 30 kez (Şekil 1B) kullanılabilir. </li><li> CA1 bölgenin stratum radiatum elektrotlar yerleştirin, tüm elektrotları kaplıkadar (Şekil 3A). Elektrotlar Narishige mikromanipülatörler ile dilim yüzeyinin altında 75 ile 150 mikron indirilir. İki uyarıcı elektrot Schaffer teminat iki ayrı demetleri uyarmak için yerleştirilir. Elektrotlar dilim üzerine indirilir zaman, filtre kağıtları, dikkatli bir şekilde kapatılması için odasına etrafına yerleştirilir. </li><li> Iki fazlı uyarım (yarım dalga 0.08 milisaniye darbe süresi) SIU V tecrit birimleri bağlı bir Grass uyarıcısı sabit voltaj gerçekleştirilir. Maksimum cevap 12 V. Alan EPSPS bir TEFE ISO-80 amplifikatör ile 1000 kez yükseltilir ve 10 Hz ve 10 kHz süzülür en fazla 2 V uyaran yoğunluğunu artırarak kontrol edilir. Daha sonra sinyal bir Ulusal Enstrüman A / D dönüştürücü ile bir PC&#39;ye gönderilir. Uyarım, veri toplama ve analiz WinLTP programı (kullanılarak gerçekleştirilir <a href="http://www.winltp.com">www.winltp.com</a> ). Alan EPSPS bir giriş-çıkış elde edilen maksimum genlik% 40 kaydedilireğri koydu. Her dilim için, fEPSP yamaçlarında LTP indüksiyon önceki 30 dakika boyunca ortalama eğim karşı normalize edilmiştir. </li><li> LTP ikinci yolu bir kontrol olarak sunarken, bir yol üzerinde testi güçte stimülasyon tek bir tren (100 Hz) uygulayarak tetiklenir. </li></ol> 9. Kurulum temizliği <ol><li> En az 10 dakika boyunca, hidrojen peroksit (H2O 2)% 3&#39;lük bir çözeltisi ile tüm devre durulayın, sonra süzün. Devre dikkatle herhangi bir deney başlamadan önce distile su ile durulanır olacak. Diğer laboratuvarlar temizlenmesi için sadece saf su kullanmak ancak sadece su kullanılarak biz boru sistemindeki koyu kalıntı çökelmesi fark olarak H 2&#39;nin kullanımı O 2 kesinlikle gerekli değildir. </li><li> Kayıt odasına altında su banyosunda su değiştirin. </li><li> 5 dakika boyunca alkol banyo uyarıcı elektrotlar ipuçları. </li></ol>

<ol><li>Bliss, T. V., Lomo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-lasting+potentiation+of+synaptic+transmission+in+the+dentate+area+of+the+anaesthetized+rabbit+following+stimulation+of+the+perforant+path%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Long-lasting potentiation of synaptic transmission in the dentate area of the anaesthetized rabbit following stimulation of the perforant path.</a> J. Physiol. 232 (2), 331-356 (1973).</li>
<li>Douglas, R. M., Goddard, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+potentiation+of+the+perforant+path-granule+cell+synapse+in+the+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Long-term potentiation of the perforant path-granule cell synapse in the rat hippocampus.</a> Brain Res. 86, 205-215 (1975).</li>
<li>Squire, L., Kandel, E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSquire%2C+L+%22Memory%3A+From+mind+to+molecules%22">Memory: From mind to molecules</a>. , WH Freeman & Company. New York, New York, USA. (1999).</li>
<li>Nguyen, P. V., Abel, T., Kandel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Requirement+of+a+critical+period+of+transcription+for+induction+of+a+late+phase+of+LTP%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Requirement of a critical period of transcription for induction of a late phase of LTP.</a> Science. 265 (5175), 1104-1107 (1994).</li>
<li>Frey, U., Morris, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+tagging+and+long-term+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Synaptic tagging and long-term potentiation.</a> Nature. 385 (6616), 533-536 (1038).</li>
<li>Bortolotto, Z. A., Collingridge, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+protein+kinase+C+in+a+form+of+metaplasticity+that+regulates+the+induction+of+long-term+potentiation+at+CA1+synapses+of+the+adult+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A role for protein kinase C in a form of metaplasticity that regulates the induction of long-term potentiation at CA1 synapses of the adult rat hippocampus.</a> Eur. J. Neurosci. 12 (11), 4055-4062 (2000).</li>
<li>Migues, P. V., Hardt, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKMzeta+maintains+memories+by+regulating+GluR2-dependent+AMPA+receptor+trafficking%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">PKMzeta maintains memories by regulating GluR2-dependent AMPA receptor trafficking.</a> Nat. Neurosci. 13 (5), 630-634 (2010).</li>
<li>Ehlers, M. D., Heine, M., Groc, L., Lee, M. -C., Choquet, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusional+trapping+of+GluR1+AMPA+receptors+by+input-specific+synaptic+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Diffusional trapping of GluR1 AMPA receptors by input-specific synaptic activity.</a> Neuron. 54 (3), 447-460 (2007).</li>
<li>Vickers, C. A., Dickson, K. S., Wyllie, D. J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+maintenance+of+late-phase+long-term+potentiation+in+isolated+dendrites+of+rat+hippocampal+CA1+pyramidal+neurones%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Induction and maintenance of late-phase long-term potentiation in isolated dendrites of rat hippocampal CA1 pyramidal neurones.</a> J. Physiol. 568 (3), 803-813 (2005).</li>
<li>Fonseca, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity-dependent+actin+dynamics+are+required+for+the+maintenance+of+long-term+plasticity+and+for+synaptic+capture%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Activity-dependent actin dynamics are required for the maintenance of long-term plasticity and for synaptic capture.</a> Eur. J. Neurosci. 35 (2), 195-206 (2012).</li>
<li>Redondo, R. L., Okuno, H., Spooner, P. A., Frenguelli, B. G., Bito, H., Morris, R. G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+tagging+and+capture%3A+differential+role+of+distinct+calcium%2Fcalmodulin+kinases+in+protein+synthesis-dependent+long-term+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Synaptic tagging and capture: differential role of distinct calcium/calmodulin kinases in protein synthesis-dependent long-term potentiation.</a> J. Neurosci. 30 (14), 4981-4989 (2010).</li>
<li>Sajikumar, S., Navakkode, S., Frey, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+synthesis-dependent+long-term+functional+plasticity%3A+methods+and+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Protein synthesis-dependent long-term functional plasticity: methods and techniques.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 15 (5), 607-613 (2005).</li>
<li>Connor, S. A., Wang, Y. T., Nguyen, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+beta-adrenergic+receptors+facilitates+heterosynaptic+translation-dependent+long-term+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Activation of beta-adrenergic receptors facilitates heterosynaptic translation-dependent long-term potentiation.</a> J. Physiol. 589 (17), 4321-4340 (2011).</li>
<li>Villers, A., Godaux, E., Ris, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-lasting+LTP+requires+neither+repeated+trains+for+its+induction+nor+protein+synthesis+for+its+development%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Long-lasting LTP requires neither repeated trains for its induction nor protein synthesis for its development.</a> PLoS One. 7 (7), e40823(2012).</li>
<li>Capron, B., Sindic, C., Godaux, E., Ris, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+characteristics+of+LTP+induced+in+hippocampal+slices+are+dependent+on+slice-recovery+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Learn.+Mem%22%5BJournal%5D)">The characteristics of LTP induced in hippocampal slices are dependent on slice-recovery conditions.</a> Learn. Mem. 13 (3), 271-277 (2006).</li>
<li>Villers, A., Godaux, E., Ris, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late+phase+of+L-LTP+elicited+in+isolated+CA1+dendrites+cannot+be+transferred+by+synaptic+capture%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Late phase of L-LTP elicited in isolated CA1 dendrites cannot be transferred by synaptic capture.</a> Neuroreport. 21, 210-215 (2010).</li>
<li>Nguyen, P. V., Kandel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+theta-burst+stimulation+induces+a+transcription-dependent+late+phase+of+LTP+requiring+cAMP+in+area+CA1+of+the+mouse+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Learn.+Mem%22%5BJournal%5D)">Brief theta-burst stimulation induces a transcription-dependent late phase of LTP requiring cAMP in area CA1 of the mouse hippocampus.</a> Learn. Mem. 4 (2), 230-243 (1997).</li>
<li>Dewachter, I., Ris, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+synaptic+plasticity+and+Tau+phosphorylation+by+wild-type+and+mutant+presenilin1%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Aging%22%5BJournal%5D)">Modulation of synaptic plasticity and Tau phosphorylation by wild-type and mutant presenilin1.</a> Neurobiol. Aging. 29 (5), 639-652 (2008).</li>
<li>Dewachter, I., Filipkowski, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deregulation+of+NMDA-receptor+function+and+down-stream+signaling+in+APP%5BV717I%5D+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Aging%22%5BJournal%5D)">Deregulation of NMDA-receptor function and down-stream signaling in APP[V717I] transgenic mice.</a> Neurobiol. Aging. 30 (2), 241-256 (2009).</li>
<li>Mathis, D. M., Furman, J. L., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+Acute+Hippocampal+Slices+from+Rats+and+Transgenic+Mice+for+the+Study+of+Synaptic+Alterations+during+Aging+and+Amyloid+Pathology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology.</a> J. Vis. Exp. (49), e2330(2011).</li>
<li>Kirov, S. A., Sorra, K. E., Harris, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slices+have+more+synapses+than+perfusion-fixed+hippocampus+from+both+young+and+mature+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Slices have more synapses than perfusion-fixed hippocampus from both young and mature rats.</a> J. Neurosci. 19 (8), 2876-2886 (1999).</li>
<li>Bourne, J. N., Kirov, S. A., Sorra, K. E., Harris, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Warmer+preparation+of+hippocampal+slices+prevents+synapse+proliferation+that+might+obscure+LTP-related+structural+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Warmer preparation of hippocampal slices prevents synapse proliferation that might obscure LTP-related structural plasticity.</a> Neuropharmacology. 52, 55-59 (2007).</li>
<li>Alger, B. E., Dhanjal, S. S., Dingledine, R., Garthwaite, J., Henderson, G., King, G. L., et al. Appendix: Brain slice methods. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAlger%2C+BE+%22Brain+Slices%22">Brain Slices</a>. Dingledine, R. , Plenum. New York. 381-437 (1984).</li>
<li>Watson, P. L., Weiner, J. L., Carlen, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+variations+in+hippocampal+slice+preparation+protocol+on+the+electrophysiological+stability%2C+epileptogenicity+and+graded+hypoxia+responses+of+CA1+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of variations in hippocampal slice preparation protocol on the electrophysiological stability, epileptogenicity and graded hypoxia responses of CA1 neurons.</a> Brain Res. 775, 134-143 (1997).</li>
<li>Frey, U., Krug, M., Reymann, K. G., Matthies, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anisomycin%2C+an+inhibitor+of+protein+synthesis%2C+blocks+late+phases+of+LTP+phenomena+in+the+hippocampal+CA1+region+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Anisomycin, an inhibitor of protein synthesis, blocks late phases of LTP phenomena in the hippocampal CA1 region in vitro.</a> Brain Res. 452 (1-2), 57-65 (1988).</li>
<li>Kandel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+biology+of+memory+storage%3A+a+dialogue+between+genes+and+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The molecular biology of memory storage: a dialogue between genes and synapses.</a> Science. 294 (5544), 1030-1038 (2001).</li>
<li>Fonseca, R., Nägerl, U. V., Bonhoeffer, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+activity+determines+the+protein+synthesis+dependence+of+long-term+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuronal activity determines the protein synthesis dependence of long-term potentiation.</a> Nat. Neurosci. 9 (4), 478-480 (2006).</li>
<li>Rudy, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+there+a+baby+in+the+bathwater%3F+Maybe%3A+some+methodological+issues+for+the+de+novo+protein+synthesis+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Learn.+Mem%22%5BJournal%5D)">Is there a baby in the bathwater? Maybe: some methodological issues for the de novo protein synthesis hypothesis.</a> Neurobiol. Learn. Mem. 89 (3), 219-224 (2008).</li>
<li>Sharma, A. V., Nargang, F. E., Dickson, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurosilence%3A+Profound+Suppression+of+Neural+Activity+following+Intracerebral+Administration+of+the+Protein+Synthesis+Inhibitor+Anisomycin%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neurosilence: Profound Suppression of Neural Activity following Intracerebral Administration of the Protein Synthesis Inhibitor Anisomycin.</a> J. Neurosci. 32 (7), 2377-2387 (2012).</li>
<li>Volianskis, A., Jensen, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+and+sustained+types+of+long-term+potentiation+in+the+CA1+area+of+the+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transient and sustained types of long-term potentiation in the CA1 area of the rat hippocampus.</a> J. Physiol. 550 (2), 459-492 (2003).</li>
<li>Ris, L., Villers, A., Godaux, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+capture-mediated+long-lasting+long-term+potentiation+is+strongly+dependent+on+mRNA+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Synaptic capture-mediated long-lasting long-term potentiation is strongly dependent on mRNA translation.</a> Neuroreport. 20 (17), 1572-1576 (2009).</li>
<li>Abbas, A. -K., Dozmorov, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+LTP+without+triggered+protein+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Persistent LTP without triggered protein synthesis.</a> Neurosci. Res. 63 (1), 59-65 (2009).</li>
<li>Ho, O. H., Delgado, J. Y., O'Dell, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorylation+of+proteins+involved+in+activity-dependent+forms+of+synaptic+plasticity+is+altered+in+hippocampal+slices+maintained+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Phosphorylation of proteins involved in activity-dependent forms of synaptic plasticity is altered in hippocampal slices maintained in vitro.</a> J. Neurochem. 91, 1344-1357 (2004).</li>
<li>Whittingham, T. S., Lust, W. D., Christakis, D. A., Passonneau, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+stability+of+hippocampal+slice+preparations+during+prolonged+incubation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Metabolic stability of hippocampal slice preparations during prolonged incubation.</a> J. Neurochem. 43, 689-696 (1984).</li>
<li>Dunlop, D. S., van Elden, W., Lajtha, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+conditions+for+protein+synthesis+in+incubated+slices+of+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Optimal conditions for protein synthesis in incubated slices of rat brain.</a> Brain Res. 99, 303-318 (1975).</li>
<li>Taubenfeld, S. M., Stevens, K. A., Pollonini, G., Ruggiero, J., Alberini, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profound+molecular+changes+following+hippocampal+slice+preparation%3A+loss+of+AMPA+receptor+subunits+and+uncoupled+mRNA%2Fprotein+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Profound molecular changes following hippocampal slice preparation: loss of AMPA receptor subunits and uncoupled mRNA/protein expression.</a> J. Neurochem. 81 (6), 1348-1360 (2002).</li>
<li>Gruart, A., Munoz, M. D., Delgado-Garcia, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+the+CA3-CA1+synapse+in+the+acquisition+of+associative+learning+in+behaving+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Involvement of the CA3-CA1 synapse in the acquisition of associative learning in behaving mice.</a> J. Neurosci. 26 (4), 1077-1087 (2006).</li>
<li>Whitlock, J. R., Heynen, A. J., Shuler, M. G., Bear, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Learning+induces+long-term+potentiation+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Learning induces long-term potentiation in the hippocampus.</a> Science. 313, 1093-1097 (2006).</li>
<li>Grant, S. G. N., Silva, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+learning%5BTitle%5D)+AND+%22TINS%22%5BJournal%5D)">Targeting learning.</a> TINS. 17 (2), 71-75 (1994).</li>
<li>Izquierdo, I., Medina, J. H., Vianna, M. R. M., Izquierdo, L. A., Barros, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separate+mechanisms+for+short-+and+long-term+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Separate mechanisms for short- and long-term memory.</a> Behav. Brain Res. 103, 1-11 (1999).</li>
<li>Morice, E., Andreae, L. C., Cooke, S. F., Vanes, L., Fisher, E. M. C., Tybulewicz, V. L. J., Bliss, T. V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preservation+of+long-term+memory+and+synaptic+plasticity+despite+short-term+impairments+in+the+Tc1+mouse+model+of+Down+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Preservation of long-term memory and synaptic plasticity despite short-term impairments in the Tc1 mouse model of Down syndrome.</a> Learn Mem. 15 (7), 492-500 (2008).</li>
<li>Dunlop, D. S., van Elden, W., Plucinska, I., Lajtha, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+Slice+Protein+Degradation+and+Development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Brain Slice Protein Degradation and Development.</a> J. Neurochem. 36, 258-265 (1981).</li>
<li>Izquierdo, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+potentiation+and+the+mechanisms+of+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Dev.+Res%22%5BJournal%5D)">Long-term potentiation and the mechanisms of memory.</a> Drug Dev. Res. 30, 1-17 (1993).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Biz laboratuvarda geliştirilen ve LTP kayıtları 11,17 büyük bir uzmanlığa sahip diğer laboratuvarlar tarafından kullanılan yöntemlerin kombinasyonu kaynaklanan bir protokol geliştirdik. Bu protokol, yetişkin fare hipokampus adapte edilir ve her yaşta ve arka plan genotip hayvanlarda kullanılabilir. Ayrıca, Alzheimer hastalığı gibi nörodejeneratif hastalıkların 18,19 gelişmekte olan transgenik farenin LTP analizine izin verir. Sıçan hipokampal dilim için bu protokol kull...

Günümüzde, karmaşık anıları saklanır ve nöronal devre düzeyinde hatırlattı nasıl sınırlı anlayış vardır. Ancak, bellek depolama birleştirici bir hipotez mevcut ve genel olarak kabul edilir: hafızası merkezi sinir sistemindeki nöronlar arasındaki sinaptik bağlantıların gücü değişiklikleri olarak depolanır. Kendi başına, sinaptik plastisite araştırma büyük ölçüde iki atılım keşifler yararlanmıştır. (1) olarak sağlam anestezi tavşan kullanarak yeni ufuklar açan bir deney, Bliss ve Lomo 1,, kısa bir yüksek frekanslı (1 sn, 100 Hz) hipokampus olan delici yoluna stimülasyon teslim uzun süreli (birkaç neden olduğu bulundu saat) ilgili sinaptik bağlantıları artış. Bu büyüleyici fenomen 1.975 2 Douglas ve Goddard tarafından &quot;Uzun Vadeli potansiyelize&quot; veya LTP denirdi. (2) Daha sonra, benzer bir olay (0.4 mm) beyin dilimleri içinde devreye girebilir bulunmuştur yapay in vitro canlı tutulur </em&gt;. En yaygın olarak incelenmiştir LTP sözde CA1 bölgesinde piramidal nöronlarda uyarılmış çıkan alan uyarıcı sinaptik potansiyel kayıt sırasında aksonlar (sözde Schaffer kollateral) bir paket için bir veya birkaç tetani sunarak, in vitro tespit edildi. LTP indüksiyon mekanizmaları büyük ölçüde ortaya konmuştur. AMPA alıcılarının fosforilasyonuyla (verimlilik artar) ve post-sinaptik zar 3 ilave AMPA alıcılarının bir birleşme: Temel olarak, NMDA reseptörleri ile Ca2 + akışı, iki sonuçları olan enzimleri aktive. Deneysel olarak çok daha zor 30-60 dakika boyunca daha uzun saatler boyunca sağlıklı bir dilim sağlamaktır, özellikle, çünkü aksine, LTP bakım fazı mekanizmaları tam olarak bilinmemektedir. Birçok çalışma, LTP mekanizmaları ve ilginç teorileri anlayışı ithaf edilmiş yıllar 4-11 üzerinde ayrıntılı edilmiştir. Ama until şimdi, sinaptik gücü istikrarlı bir artış altında yatan kesin moleküler mekanizmaları ortaya konamamıştır. Bu hazırlanması için farklı teknikler kullanarak farklı laboratuvarlarda önceki sonuçları yeniden zorluk ve hipokampal dilim bakım kısmen olabilir. Onların metodoloji yazıda, Sajikumar ve ark. 12 sıçan hipokampal dilimleri ve istikrarlı LTP kayıt hazırlanması için deneysel koşullar önemini vurguladı. Bu videoda fare hipokampal dilim çok istikrarlı LTP kayıt edebilmek için yıllar boyunca laboratuarımızda geliştirilen tüm optimizasyon adımları sunuyoruz. Bu optimizasyon farenin 13 ve 11 sıçan LTP mekanizmaları incelemek diğer laboratuarlar tarafından geliştirilmiştir ve başarılı bir şekilde kullanılan protokoller yapılmıştır. Bu deneyimli araştırmacılar neden ve başarı oranı yüksek olan yetişkin farelerde çok uzun ömürlü LTP kaydetmenize olanak verir. Pbağlı LTP hysiological olarak dikkatli bir şekilde kontrol ve 14 gösterilmiştir. Bu metodoloji yazıda, diseksiyon işlemi derin dilimleri heyecanlanma değiştirebilirsiniz ise sıcaklık veya oksijen gibi deneysel koşullardan herhangi bir değişiklik, LTP bakım üzerinde derin bir etkiye sahip olduğunu göstermektedir. Ayrıca tüm bu parametrelerin hassas kontrol acemi öğrenciler için birkaç aylık bir eğitim gerektirdiğini vurgulamak gerekir.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reaktif/Malzeme</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma - Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma - Aldrich</td><td>S8875</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma - Aldrich</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>D-glikoz</td><td>Sigma - Aldrich</td><td>G7528</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4 </td><td>Sigma - Aldrich</td><td>S9638</td><td></td></tr><tr><td>MgSO<alt>4</alt> 1M</td><td>Sigma - Aldrich</td><td>63126</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma - Aldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>Carbogen</td><td>Air Liquide (Belçika)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kılcal damarlar</td><td>WPI, Inc. (İngiltere)</td><td>TW150-4</td><td></td></tr><tr><td>Uyarıcı Elektrotlar</td><td>FHC (ABD)</td><td>CE2B30</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi aletler</td><td>FST (Almanya)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filtre kağıdı 84 g/m2</td><td>Sartorius</td><td>FT-3-105-110</td><td></td></tr><tr><td>Mesh</td><td>Lycra</td><td>15 den</td><td></td></tr><tr><td>Tutkal</td><td>UHU</td><td>plus endfest300</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Instrument</td></tr><tr><td>Amplifier</td><td>WPI, Inc. (İngiltere)</td><td>ISO-80</td><td></td></tr><tr><td>Arayüz kayıt odası</td><td>FST (Almanya)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Peristaltik pompalar</td><td>Gilson (ABD)</td><td>Minipuls 3</td><td></td></tr><tr><td>Sıcaklık kontrolörü</td><td>Edinburgh Üniversitesi</td><td><a href="http://www.etcsystem.com" target="_blank">www.etcsystem.com</a></td><td></td></tr><tr><td>Doku Doğrayıcı</td><td>Mcllwain</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stimülatörler</td><td>Çim (ABD)</td><td>S88X + SIU-V</td><td></td></tr><tr><td>Program analizi</td><td>WinLTP</td><td><a href="http://www.winltp.com" target="_blank">www.winltp.com</a></td><td></td></tr><tr><td>Mikromanipülatörler</td><td>Narishige</td><td>MM-3 ve MMO-220A</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi mikroskop</td><td>Leica Microsystem</td><td></td><td></td></tr><tr><td>A/D dönüştürücü</td><td>Ulusal Enstrümanlar</td><td>NIPCI-6229 M serisi</td><td></td></tr></tbody></table>

uzun vadeli potansiyelize bir çok kararlı ve tekrarlanabilir kayıt için geliştirilmiş hazırlık ve hipokampal fare dilimleri korunması

Improved Preparation and Preservation of Hippocampal Mouse Slices for a Very Stable and Reproducible Recording of Long-term Potentiation

Uzun vadeli potensiyalizasyon (LTP) sinaptik gücü bir artış ile karakterize sinaptik plastisite türüdür ve bellek kodlama dahil olmak inanıyordu. LTP yoğun çalışılmıştır akut hipokampal dilim CA1 bölgesinde ortaya çıkardı. Ancak bu olayın bakım aşamasında altında yatan moleküler mekanizmalar hala tam olarak anlaşılamamıştır. Bu farklı laboratuarlar tarafından kullanılan çeşitli deneysel koşullar, kısmen bağlı olabilir. Gerçekten de, LTP bakım aşamasında oksijen, sıcaklık ve nem gibi dış parametrelere sıkı bir şekilde bağlıdır. Ayrıca diseksiyonu sonra dilimleme uçak ve dilim canlılığı yönelim gibi iç parametreleri bağlıdır. Tüm bu parametrelerin optimizasyonu çok tekrarlanabilir ve çok istikrarlı uzun vadeli potensiyasyonun indüksiyon sağlar. Bu metodoloji daha da istikrarlı bir artış yer alan moleküler mekanizmaları keşfetmek için imkan sunuyorhipokampal dilim sinaptik gücü. Ayrıca nörofizyolojik olayların in vitro soruşturma deneysel koşullarının önemini vurgulamaktadır.

Bu metodoloji, erişkin farenin C57Bl/6J (JANVIER SAS, Fransa) 14 akut hipokampal dilimler indüklenir uzun süreli uzun süreli potansiyasyon özelliklerini analiz etmek için kullanılmıştır. Şaşırtıcı bir şekilde, deneysel koşullarının iyileştirilmesi LTP bakarak yeni bir yol yol açmıştır. Biz sinaptik gücü uzun süreli artış yeni protein sentezi gerektirmeyen gösterdi. Burada, LTP indüksiyon dilim canlılığı ve heyecan bağlı olduğunu göstermektedir. hipokampus diseksiyonu çok yavaş ya ...

Bu makale hazırlamak ve korumak için tam bir metodoloji sunar<em&gt; In vitro</emYetişkin farelerin&gt; akut hipokampal dilim. Bu protokol% 95 başarı oranı ile fazla 8 saat boyunca çok sağlam uzun ömürlü uzun vadeli potansiyasyonu (LTP) ve kayıt sağlar.

Uzun vadeli potansiyelize bir çok Kararlı ve tekrarlanabilir Kayıt için geliştirilmiş Hazırlık ve Hipokampal Fare Dilimleri korunması

Long-term potentiation (LTP) is a type of synaptic plasticity characterized by an increase in synaptic strength and believed to be involved in memory ...

Bu prosedürün genel amacı, akut hipokampal dilimlerde oldukça stabil ve tekrarlanabilir uzun süreli potansiyalizasyon kaydı yapabilmektir. Bu işlem, öncelikle fare beyninin çıkarılması ve soğuk A CSF içerisinde mikroskop altında hipokampusun diseke edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım ise bir doku doğrayıcı (tissue chopper) ile transvers hipokampal dilimlerin kesilmesidir.Ardından, kesit, oksijenlendirilmiş yapay serebrospinal sıvı ile perfüze edilecek olan ara yüz kayıt odasına yerleştirilir. Son adım, elektrotların yerleştirilmesi ve hipokampusun CA1 bölgesindeki sinaptik aktivitenin kaydedilmesidir. Nihayetinde, oldukça stabil bir uzun süreli potansiyasyonun indüksiyonunu göstermek için yüksek frekanslı stimülasyon protokolü kullanılır.Bu yöntem, sinaptik plastisitenin altında yatan mekanizmaya dair içgörü sağlayabilir. Ayrıca nörodejeneratif hastalıkların veya sinir sisteminin hayvan modelleri gibi diğer sistemlere ya da immün hastalıklara da uygulanabilir. Genel olarak, bu yöntemde yeni olan kişiler, tüm manipülasyonların yüksek beceri ve yoğun pratik gerektirmesi nedeniyle zorluk yaşayacaklardır.Bu prosedüre, perfüzyon devresini en az 20 dakika boyunca distile su ile durulayarak başlayın. Ardından ısıtma sistemlerini açın. Devrede karbogen kabarcıklanmasını başlatın.Karbojen, hava difüzörleri aracılığıyla kayıt odasının altındaki su banyosuna iletilir. Ardından, su banyosundaki akış hızı bir debimetre ile kontrol edilir. Daha sonra devre boşaltılır ve kabarcıkları gidermek için filtrelenmiş A CSF ile doldurulur. Son olarak, kesiti tutma odasında destekleyecek olan halka yerleştirilir.Devredeki tüm hava kabarcıklarını dikkatlice giderin. Ardından, kayıt odasındaki A CSF seviyesini aspirasyon iğnesinin vidası ile ayarlayın; giriş pompasının hızı 1 mL/dakika olarak, çıkış pompasının hızı ise 5 mL/dakika olarak ayarlanır. Diseksiyon öncesinde tüm cerrahi aletleri hazırlayın.Sakrifiye edilen bir farenin beynini çıkarmak için; başını işaret parmağınız ve başparmağınızla tutun ve giyotin kenarından başlayıp frontal kemiğe doğru uzanan, başın üst orta kısmı boyunca diseksiyon makasıyla bir insizyon yapın. Ardından, kafatası plakalarını tamamen açığa çıkarmak için başın her iki yanındaki kutanöz kasları kesin.Ardından başın kondil tarafındaki kasları çıkarın. Sonrasında, her iki taraftaki temporalis kasını temporalis plakası boyunca kesin. Daha sonra frontal plakaları ortadan enine kesin.Şimdi iki plak arasında, oksipital kemik üzerinde küçük bir kesi yapın. Oksipital plakların her iki yanındaki kondil tabanından kesin. Ardından yaylı makasla sagittal sütür boyunca kesin.Son olarak, penset yardımıyla iki yarıyı birbirinden uzaklaştırarak kafatasını çıkarın. Şimdi bistüri ile tam serebellum öncesinden ve olfaktor bulb sonrasıdan enlemesine kesin, ardından çıkarılan beyni soğuk A CSF içeren diseksiyon kabına aktarın. Beyin diseksiyon kabına yerleştirildikten sonra, binoküler cerrahi mikroskop altında orta kısma yerleştirilen bir bistüri ile iki hemisferi birbirinden ayırın ve lateral ventrikülü açığa çıkarmak için bir hemisferin yapısını dikkatlice yayın.Bir spatulayı frontal kortekse, diğer spatulayı ise sefalona yerleştirerek beyin sapını ve sefalonu çıkarın. Doku kesimi sırasında spatulayla hipokampusa dokunmamaya ve onu germemeye dikkat edin. Ardından, forniksi kesin.Ardından, bir spatulayı ventriküle yerleştirerek hipokampusu korteksten nazikçe itin. Hipokampus çıkarıldığında, fazla kortikal dokuyu ve kalan kan damarlarını geniş ağızlı plastik bir pastör pipetiyle temizleyin. Hipokampusu, alvi yüzeyi yukarı bakacak şekilde bir kaşık yardımıyla chopper platformuna aktarın.Kaşıktaki fazla sıvıyı standart bir plastik pastör pipeti ile alın. Ardından, kaşığı dikey olarak kaldırın ve kıyıcı üzerindeki filtre kağıdına neredeyse değecek şekilde tutun. Filtre kağıdına hızla dokunarak hipokampüsün üzerine düşmesini sağlayın.Ardından kaşığı geri çekin. Sonrasında, hipokampusu yönlendirin ve dilimleyin. Doğrayıcı ile 400 mikron kalınlığında transvers kesitler alın.İşlemi mümkün olduğunca hızlı bir şekilde gerçekleştirin. Ardından, hipokampal dilimleri içeren filtre kâğıdını çıkarın ve dilimleri biraz yaymak için metalik silindirin etrafına sarın. Daha sonra, standart bir plastik pastoral pipet kullanarak A CSF püskürtmeleriyle dilimleri serbest bırakın ve soğukla dolu bir Petri kabına toplayın.A CSF. Seçilen kesiti, standart bir plastik past pipet yardımıyla kayıt haznesine aktarın. Kesitin, 28 °C'deki kayıt arayüz haznesinde diseksiyon travmasından sonra toparlanmasına izin verin.Dilim, A CSF seviyesinin altına çökerse, dilimin yüzmesini sağlamak için A CSF seviyesini tekrar yükseltin. Ardından, dilimi CA1 bölgesinde elektrotların yerleştirilmesini kolaylaştıracak konuma getirin. A CSF seviyesi arayüze ulaştığında indirme işlemini durdurun.Kesit etrafındaki besiyerinin menisküsü, yeterli düzeyde A CSF olduğunu gösterir. Ağ, besiyeri ile doyurulmalı ancak tamamen suya batırılmamalıdır. Ardından, delikli kapak üzerindeki filtre kağıtları ile hazneyi kapalı tutun.Kayda başlamadan önce kesitin 28 °C'de en az bir saat 30 dakika dinlenmesini sağlayın. Burada, aynı nöronal popülasyona giden S bir ve S iki şeklinde iki bağımsız sinaptik girdiyi gösteren bir taslak yer almaktadır. LTP indüklemek için S bir yolu kullanılırken, S iki yolu kontrol olarak kullanılmıştır.Bunlar, kırmızı izlerle belirtildiği üzere LTP indüksiyonundan hemen önce ve mavi izlerle belirtildiği üzere LDP indüksiyonundan bir saat sonra kaydedilen örnek fEPSP izleridir. Burada tamamen sağlıklı bir kesitten alınan fEPSP'ler, burada ise kesitlerin tamamen sağlıklı olmadığı ve yüksek düzeyde uyarılabilirlik gösterdiği bir kesitten alınan fEPSP'ler yer almaktadır. Polisinaptik yanıtlar gözlemlenmekte ve fEPSP eğim potansiyasyonu azalmaktadır.Burada, laboratuvarımızda 2005, 2010 ve 2011 yıllarında kaydedilen, tek bir yüksek frekanslı stimülasyon treni ile indüklenen LTP sonrası F-E-P-S-P eğiminin zaman seyirlerinin bir karşılaştırması yer almaktadır. Dolu dairelerle belirtilen ilk deneyler 2005 yılında kaydedilmiştir. Dolu karelerle belirtilen sonraki kayıtlar, iyileştirilmiş bir diseksiyon prosedüründen faydalanmıştır.Mevcut sonuçlar, açık dairelerle belirtilen elektrot standardizasyonunun yanı sıra, arayüz oksijenlenmesinin ve sıcaklık kontrolünün optimizasyonundan kaynaklanmaktadır. Burada, mavi eğriyle belirtildiği üzere, kayıt odasının altındaki su banyosundaki oksijen akış hızının dakikada 0,15 litreden 0,25 litreye çıkarılmasının, sıcaklığı 28 ile 29 degrees Celsius arasına yükselterek F-E-P-S-P eğiminde %20'lik bir azalmaya yol açtığını gösteriyoruz. Belirtildiği üzere, yeşil eğri F-E-P-S-P eğiminde %50'den fazla bir artışa neden olmaktadır.Bu prosedürü uygularken, her adımın kritik olduğunu ve protokoldeki hataların farklı sonuçlara yol açabileceğini unutmamak önemlidir. Bu videoyu izledikten sonra, akut hipokampal dilimlerde kayıt yaparak oldukça stabil uzun süreli potansiyasyonun nasıl elde edileceği konusunda iyi bir anlayış kazanmış olacaksınız.

improved-preparation-preservation-hippocampal-mouse-slices-for-very

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu makale, sıçan ve transgenik farelerin hipokampal dilimler sinaptik değişiklikler, beynin yaşlanma ve Alzheimer hastalığı gibi nörodejeneratif hastalıklar, yaşa bağlı ile ilgili çalışma için hazırlamak için prosedürler sıralanıyor.

Yaşlanma ve Amiloid Patoloji sırasında sinaptik değişiklikler Çalışması Sıçanlar ve Transgenik Farelerde akut Hipokampal Dilimleri hazırlanması

Bu video makalesinde, kemirgenlerden alınan akut hipokampal dilimler kullanılarak CA1 piramidal nöronlarında sinaptik etiketleme, yakalama ve çapraz etiketleme gibi uzun vadeli plastisiteyi ve ilişkisel süreçlerini incelemek için deneysel prosedürler açıklanmaktadır.

Kemirgenler gelen akut Hipokampal Dilimleri kullanarak Synaptic Etiketleme / yakalama ve Çapraz yakalama İncelenmesi

Bu iletişim kuralı bir en iyi duruma getirilmiş Nuygulanmasını gösteren-metil-D-glucamine (NMDG) koruyucu kurtarma yöntemi beyin dilim hazırlık. Bir tek medya formülasyon güvenilir bir şekilde sağlıklı beyin dilimleri her yaştan ve çeşitli deneysel uygulamalar için hayvanlardan elde etmek için kullanılır.

En iyi duruma getirilmiş bir Nkullanarak akut beyin dilimleri hazırlanması-metil-D-glucamine koruyucu kurtarma yöntemi

Bu iletişim kuralı oksijen seviyesini geri dönüşümlü arabellek küçük bir hacim ve etkinlik bağımlı sinaptik plastisite batık akut Hipokampal dilimler halinde kayıt metodolojik açıdan istikrar açıklar.

Sinaptik plastisite akut Hipokampal dilimleri bir küçük hacimli geri dönüşüm-, perfüzyon- ve batma-tipi oda sistemi içinde tutulan kayıt

Biz postitudinal hipokampal beyin dilimleri ve uzunlamasına konumlandırılmış kayıt ve stimülasyon elektrotlar in vivo hücre dışı postinaptik potansiyelleri uyandırmak ve göstermek için kullanılan kayıt ve stimülasyon elektrotlar uzunlamasına interlamellar CA1 boyunca uzun vadeli sinaptik plastisite.

Elektrofizyolojik Alan Kaydı ile Interlamellar Hipokampus CA1'de Uzun Süreli Sinaptik Plastisitenin Araştırılması

Sunulan protokol, potansiyel antiepileptik maddeler için bir preklinik değerlendirme aracı olarak hayati beyin dilimleri kullanmak nihai hedefi ile rezeke insan hipokampal doku taşıma ve hazırlanması açıklar.

Elektrofizyolojik Kayıtlar için Akut İnsan Hipokampal Dilimlerinin Hazırlanması

Bu doku hipoksik hasarı azaltmak için buz gibi NMDG-aCSF ile transkardiyal perfüzyon ve dilim kesme yararlanır yetişkin ve yaşlanma fare hipokampi akut dilim hazırlanması için bir protokoldür. Elde edilen dilimler saatlerce sağlıklı kalır ve uzun süreli yama kıskaçları ve alan kayıtları için uygundur.

Yetişkin ve Yaşlanan Farelerden Hipokampal Dilimlerde Hipoksinin En Aza Indirilmesi

Bu protokol, spontan keskin dalga dalgalanma aktivitesi sergileyen farelerden yatay hipokampal-entorhinal korteks (HEC) dilimlerinin hazırlanmasını açıklar. Dilimler basitleştirilmiş bir arayüz tutma odasında inkübe edilir ve kayıtlar, doku oksijenlenmesini ve ağ düzeyinde aktivitenin kendiliğinden ortaya çıkmasını teşvik etmek için hızlı akan yapay beyin omurilik sıvısı ile su altında koşullar altında gerçekleştirilir.

Spontan Hipokampal Ağ Aktivitesini Araştırmak için Akut Fare Beyin Dilimlemeyi

Bu makale, farelerde yatay hipokampal beyin dilimleri elde etmek için sistematik bir protokolü tanımlamayı amaçlamaktadır. Bu metodolojinin amacı, dentat girus ile ilgili nörolojik süreçleri değerlendirmek için perforant yol ve yosunlu lif yolu gibi hipokampal lif yollarının bütünlüğünü korumaktır.

Fare Beyninin Yatay Hipokampal Dilimleri

Farelerin dorsal-ara hipokampusundan akut dilimler hazırlamak için bir protokol sunuyoruz. Bu transversal preparatı, kayıtların kalitesi ve kaydedilen nöronların morfolojik özelliklerinin korunması açısından koronal dilimleme ile karşılaştırıyoruz.

Yetişkin Farelerin Dentat Girusunda Tüm Hücre Kaydı ve Nöronal Rekonstrüksiyon için Dorsal Hipokampustan Akut Dilimlerin Hazırlanması

Öğrenin fare hipokampal kesilerinde 8 saatten uzun süren kararlı uzun süreli potansiyelizasyon kaydı için güvenilir bir protokol. Bu yöntem sinaptik plastisite mekanizmalarını in vitro ortamda yüksek tekrarlanabilirlikle araştırmayı mümkün kılar.

Uzun vadeli potansiyelize bir çok Kararlı ve tekrarlanabilir Kayıt için geliştirilmiş Hazırlık ve Hipokampal Fare Dilimleri korunması (Video) | JoVE Journal

Uzun vadeli potansiyelize bir çok Kararlı ve tekrarlanabilir Kayıt için geliştirilmiş Hazırlık ve Hipokampal Fare Dilimleri korunması

Daha fazla video keşfet