In Cross Sahne Yöntemleri Setaris viridis'in Yeni Bir Model Sistemi

Bu prosedürün genel amacı, çimler için yeni bir model sistem olan cter verus için çaprazlamaların nasıl yapılacağını göstermektir. Bu, önce zirveyi seçerek, kırparak ve etiketleyerek gerçekleştirilir. İkinci adım, kesilmiş salkımı 48 santigrat derecelik bir su banyosuna daldırarak iğdiş etmektir.

Daha sonra, kesilmiş zirve, polen döken bir zirve tarafından tozlaşma için bir dişi olarak kullanılır. Son adım, çapraz tozlaşmadan iki hafta sonra tohumların hasat edilmesidir. Sonuç olarak, varsayılan hibrit tohumların Gus boyaması, tekniğin etkinliğini göstermek için kullanılır.

Bu tekniğin fiziksel iğdiş etme gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, daha az invaziv olması ve laboratuvarda kurulmasının nispeten kolay olmasıdır. Bu yöntem, çaprazlama yapmayı kolaylaştırarak cter verus'un genetik bir model olarak benimsenmesini hızlandırmaya yardımcı olacaktır. Başlamak için, sulama için bir hücreyi çıkarın ve ardından bir tepsiyi metro Mix 360 ile dörde dokuz hücreli doldurun.

Daha sonra hücreleri hafifçe buğulayın ve hücre başına bir tohum olacak şekilde toprağın yüzeyine tohum ekin. Daha sonra tohumları bir toprak tabakası ile örtün, 0,5 santimetre kalınlığında toprağın yüzeyini nemlendirmek için buğulayın ve ardından alttan düz sular. Tohum ekiminden sonra hücreleri günde bir ila iki kez alttan sulamaya devam edin, fazla su içmemeye dikkat edin.

Büyüme odası koşullarını gündüz 31 santigrat dereceye ve gece 22 santigrat dereceye ayarlayın ve 15:8 - 30:9 saatleri arasında 00 santigrat derece preda tedavisi yapın. Ayrıca 12 saatlik açık karanlık bir program koruyun ve bağıl nemi %50'ye ayarlayınBu koşullar altında. Satter verus a 10.1, tohum ekiminden 21 ila 22 gün sonra çiçek açacaktır. İdeal olarak, emaskülasyon öğleden sonra veya akşam yapılır.

Çiçek açmış bir ila beş çiçeği olan her bitkide birincil beş köşeli yıldızı seçin. Daha sonra beş köşeli parantez ucunu kesin ve ince forseps kullanarak proksimal orta ve taban bölümlerinin alt kısmındaki tüm çiçekleri çıkarın. Çiçek açmış çiçeklerin yalnızca 10'da biri ila beşte biri varsa.

Daha fazla budama için distalin alt kısmını, proksimal ortanın orta ve üst kısmını tutmak için, ucu kesin ve çiçekleri salkımın tabanından kesin. Bir salkımda çiçek açmış çiçeklerin dörtte biri ila yarısı varsa, daha fazla budama için proksimal orta bölümü tutun ve distal orta bölümü kesin. Beş köşeli taş kesildikten sonra, kılları hafifçe kesmek için cerrahi makas kullanın.

Çiçekleri olası ısı hasarlarından korumak için tozlaşacak bölgedeki kılları tutmaya özen gösterin. Her spikelet için en üstteki olgun çiçeği koruyun. En üstteki çiçek, tozlaşma sırasında daha yüksek bir antez olasılığına sahip olacaktır.

Daha sonra çiçek açmış tüm çiçekleri ve olgunlaşmamış çiçekleri çıkarın, her zirvede eşit olarak dağılmış yaklaşık 20 ila 30 çiçek bırakın. Ardından, her çiçeğin bir tarafını kırmızı kalıcı bir kalemle işaretleyin. Ve zirvedeki çiçek sayısını kaydedin, aşağıdaki bilgilerle, emaskülasyon tarihini, süreyi ve emaskülasyonun gerçekleştirildiği sıcaklığı ile zirveyi işaretleyin.

Salkım kesildikten sonra, ana zirvenin gelişimine daha fazla kaynağın yeniden tahsis edilmesini sağlamak için her bitkinin tüm yekelerini çıkarın. Hadım edilmeden bir saat önce, ısıl işlem için bir su banyosunu 48 santigrat dereceye ayarlayın. Önceden ısıtıldıktan sonra, kesilmiş beş köşeli yıldızları hafifçe bükün ve her seferinde üç ila dört dakika ılık suya batırın.

Beş köşeli bağlantının gövdesini kırmamaya dikkat edin. Beş köşeli köşeli parıltının altına inen bayrak yaprağı ılık su ile temas etmemelidir. Bu, yaprak dokusuna ısı hasarını önlemek içindir.

İstenilen süre boyunca emaskülasyon yapıldıktan sonra, salkımları su banyosundan çıkarın ve salkımdaki suyu yavaşça sallayın. Ardından, iğdiş edilmiş salkımı özelleştirilmiş bir mikro delikli ekmek torbası ile tamamen kapatın ve bir büküm bağı ile sabitleyin. Mikro delikli ekmek poşetleri, salkımın boyutuna göre özelleştirilebilir.

Son olarak, bitkileri ertesi güne kadar tekrar büyüme odasına koyun. İkinci ve üçüncü gün sabah saat 9:00'da, hadım edilmiş kadın ve iğdiş edilmemiş erkek ebeveynleri büyüme odasından laboratuvara taşıyın, haçlama yapın, gözlemleyin ve başka bir kırmızı ekleyin. çiçek açmış veya çiçek açmakta olan çiçeklere.

Kırmızı kalıcı bir işaretleyici kullanarak, salkım başına toplam çiçek açan çiçek sayısını kaydedin. Ardından, hangi haçlamaların yapıldığını takip etmek için tozlaşma tarihini ve erkek ebeveynin adını etikete kaydedin. Laboratuvar koşullarımızda erkek ebeveynlerde antitezin en yüksek zamanını gözlemleyin, erkek ebeveynin beş köşeli çiçekleri saat 10:10 civarında senkron açılmaya başlar Açıldıktan sonra, anterin tam olarak uygulanması ve polen salınımı 20 dakika sonra gerçekleşecektir.

Sarımsı olduğunda hemen tozlaşmaya başlayın. Erkek ebeveynin çiçeklerinde beyaz anterler görülebilir. Tozlaşmalar, ikinci ve üçüncü günlerde, salkım için salkım veya tozlaşmayı stigasyon için anter kullanılarak gerçekleştirilir.

Erkek, tozlaşmayı kolaylaştırmak için salkımı iğdiş edilmiş salkım ile birlikte hafifçe ovalarken bir müstakil salkım kullanarak ve kontaminasyonu önlemek için erkek salkımını atın, her iğdiş edilmiş zirve iki ila üç beş köşe tarafından tozlaşana kadar tozlaşma işlemini tekrarlayın. En etkili yöntem forseps kullanılarak stigma tozlaşmasıdır. Sarımsı beyaz anterlerle çiçek açan bir çiçek seçin veya anterleri toplayın ve çiçeğin dişi ebeveyni üzerindeki damgasına fiziksel olarak dokunun.

Farklı erkek ebeveynlerin tozlaşmaları arasındaki iğdiş edilmiş salkım üzerindeki bir çiçeği tozlaştırmak için erkek ebeveynden bir çiçek kullanın. Forsepsleri %95 etanole batırın, ardından polenin farklı haçlar arasında taşınması nedeniyle kontaminasyonu önlemek için Kim mendilleriyle silin. Tozlaşma gerçekleştirildikten sonra, dişi ebeveynin salkımını özelleştirilmiş bir mikro delikli ekmek torbası ile örtün ve bir büküm bağı kullanarak tabana sabitleyin.

Tozlaşmadan tohum hasadına kadar, tozlaşma gününden 14 ila 16 gün sonra tohumları hasat edin ve etiketi tohumlarla aynı zarfa koyun. Her iki tarafında kırmızı lekeler bulunan tohumlar, kontrollü genetik çaprazlamadan kaynaklanan tohumları temsil eder. Yeni geliştirilen çiçeklerden elde edilen tohumları temsil ettikleri için kırmızı işaretli tohumları atın.

Kırmızı işaretli emaskülasyon tohumlarından sonra, sadece bir tarafta muhtemelen kendi kendine tozlaşmadan kaynaklanan tohumları temsil edecektir. Son olarak, tohumları iki gün boyunca 30 santigrat derecede kurutun. Kurutulmuş tohumları laboratuvarda veya ideal olarak bir tohum odasında saklayın.

Daha fazla analiz için hazır olduğunda, gerekirse physes'i çıkarın. Bu videoda açıklanan yöntemler, emaskülasyon sürecini optimize etmek için farklı sıcaklıklar ve tedavi süreleri kullanan çok sayıda denemenin sonuçlarıydı. Bu işlemin başarısı, elde edilen hibrit tohum sayısı ile ölçülmüştür.

Erkek ebeveynin bir muhabir taşıdığı test geçitlerinden birinden altı tohum. Beta glukuronidaz için gen kodlaması burada gösterilmiştir. Raportör geni, tohumun lekelendiğinde maviye dönmesine neden olur ve hibrit tohumların sayısının sayılmasını kolaylaştırır Bir kez ustalaştıktan sonra, prosedür uygun şekilde gerçekleştirilirse günde 15 kadar beş köşeli taş çaprazlanabilir.

Bu videoyu izledikten sonra, Aria verus'ta haçların nasıl yapıldığını iyi anlamış olmalısınız.