Korunan Anatomik Örgütü ile bozulmamış Fare Burun Doku hazırlamak için etkili bir Manuel kemik sıyırma Yöntemi

Merhaba, ben UMBC'deki Dr. Wung Lynn'in laboratuvarından David Dunton. Bu videoda, anatomik organizasyonu korunmuş fare burun dokusunu hazırlamak için etkili bir tekniği gösteriyoruz. Bu teknik; solunumsal ve koku alma ile epitelyal ve subepitelyal dokular dahil olmak üzere, burun dokusunun neredeyse tamamını içeren tek bir örnek elde etmeyi sağlar.

Ana koku epitelinin uçları gibi en hassas dokuları bile koruyan, nazal dokuyu çevreleyen çeşitli yüz kemiklerinin adım adım uzaklaştırılmasını gösteriyoruz. Yöntemimiz, sert kimyasal işlemlerden kaçınması ve kemik uzaklaştırmanın 20 ila 30 dakika içinde tamamlanabilmesi nedeniyle dekalsifikasyon yöntemlerine göre önemli avantajlara sahiptir. Bu tekniğin diğer avantajları ise farenin yaşıyla sınırlı olmaması ve fikse edilmiş veya taze dokular kullanılarak uygulanabilmesidir.

Bu avantajlar, tekniğimizi morfolojik, immünohistokimyasal ve fizyolojik çalışmalar için ideal hale getirmektedir. Burada, kafatası ve burun kemiklerinin dorsal görünümünün şematik bir diyagramını gösteriyoruz. Bu videoda, burun kemiklerinin diseksiyonuna odaklanacağız.

Bu, kafatası kemiklerinin ve burnun ventral yönünün şematik bir diyagramıdır. Üstte diseke edilmemiş bir kafatası ve burun, altta ise diseke edilmiş bir burun ile dorsal görünüm sunulmuştur. Şu an ana olfaktör epitelin sonlanma bölgeleri gösterilmektedir.

Burada, dorsal açıdan başlayarak burun kemiklerini gösteriyoruz. Burası zigomatik plağın dorsal kısmıdır, ardından zigomatik ark gelir. Burası nazal kemiktir ve ardından kribriform plakanın konumu gösterilmektedir.

Gruenberg ganglionu, çok anterior konumdadır. Lateral bakış açısından, etmoid kemiğin olfaktor epitel turbinata karşılık gelen kısmını, Grunberg ganglionunu, maksillayı ve ön kesici dişleri gösteriyoruz. Ventral bakış açısına geçtiğimizde ise azı dişlerini, ön kesici dişleri, palatin kemiği ve vulner kemiğini gösterdik.

Burnun ventral yönüne bakarak vulner kemiğinin çıkarılmasına başlayın. Vulner kemiğini çıkarmak için, forseps kullanarak kemiği uzunluğu boyunca kırın ve ardından RO nazal organın hasar görmesini önlemek için kemik parçalarını alttaki dokudan uzaklaştırarak kaldırın. Bu işlem için, ön kesici dişlerin ventral kısmını kırmak amacıyla pensler kullanın.

Sıkıştırma hareketi kullanarak ön kesici dişleri ulmer kemiğinin bulunduğu yöne doğru kırın. Ön kesici dişler kırıldıktan sonra, dokuya bağlı kalan kemik parçalarını penset kullanarak çıkarın. Maksillayı gevşetmek için ventral kısımdan başlayın ve maksillayı zigomatik arkların hemen ventralinden kırın.

Burnun dorsal kısmını yukarı kaldırın ve maksillayı zigomatik arkın hemen önünden kırın. Burun kemiğinin sağ tarafını çıkarmak için maksillayı gevşetmek amacıyla, burun kemiğinin sağ tarafındaki frontal kemik kalıntılarını temizleyin. Bu işlem için Rongeur kullanacaksınız.

İnce kribriform plakaya zarar vermemek için Ron penslerini kullanırken dikkatli olunmalıdır; çünkü kribriform plakanın hasar görmesi burnun ikiye ayrılmasına neden olabilir. Kırık kemiği yukarı kaldırarak çıkarın. Ardından, zigomatik plakanın dorsal kısmını alttaki dokudan uzaklaştıracak şekilde kaldırın.

Nazal kemiği orta hattı boyunca ayırın. Bir pens veya silgi kullanarak, bu kemiği pensle kavrayın ve yukarı doğru kaldırırken kemiği nazikçe iki yana hareket ettirin. Kemik çıkarılırken alttaki dokunun zarar görmesi kolay olduğu için bu işlem özenle yapılmalıdır. Kemik çıkarıldıktan sonra, bu sabit görüntüde gösterildiği gibi, alttaki dokuyu ayrı bir şekilde görebilirsiniz.

Kemiği çıkarmak için pens veya makas kullanarak kesin. Şimdi ön maksillayı çıkarın. Eğer bu noktada henüz çıkarılmamışsa, ön maksilla zaten gevşemiş durumdadır, bu nedenle dokuyla kalan tüm bağlantıları kopararak çıkarın.

Üst dorsal bakış açısıyla, nazal kemiğin hemen sol tarafında yer alan frontal kemiği çıkarın. Frontal kemiği kırmak için Ron pensi kullanın. Frontal kemiğin bu parçasını çıkarmak için kaba pens veya forseps kullanabilirsiniz.

Bu aşamada maksillayı da gevşetebilirsiniz, ancak bu gerekli değildir. Nazal kemiğin sol tarafını çıkarmak için forseps kullanarak nazal kemiği etrafındaki birçok kemikten nazikçe ayırın. Ardından bu kemiği forsepsle kavrayın ve nazal kemiği alttaki dokudan ayırmak için yukarı kaldırırken kemiği genel olarak yanlara doğru hareket ettirin.

Alttaki doku kemikten ayrıldıkça, kemiğe bağlı olan dokuyu görmek için bazen lateral bir bakış açısı kullanabilirsiniz. Kemiğe bağlı olan dokuyu nazikçe ayırmak için pens kullanın ve ardından kemiği makas veya pens yardımıyla çıkarın. Nazal kemik çıkarıldıktan sonra, aynı tekniği kullanarak burnun sol tarafındaki anterior maksillayı, burnun sağ tarafındaki anterior maksillayı çıkardığınız gibi çıkarın.

Bir sonraki adım, burnun sol tarafındaki zigomatik plakayı çıkarmaktır. Zigomatik plaka ve altındaki doku arasında hala bazı bağlantılar olabilir; böyle bir durumda, zigomatik plakanın dorsal kısmını nazikçe sıkıştırmak ve gevşetmek için küt uçlu pensler kullanabilirsiniz. Burnun ventral kısmına bakın.

Azı dişlerini ve palatin kemiğini tanımlamak için ya azı dişleri ya da palatin kemiği çıkarılabilir. Öncelikle, bu burun lateral görünümüdür ve bu görünüm burnun sağ tarafındaki azı dişlerinin çıkarılmasını göstermektedir. Maxillanın sağ tarafı çıkarılmış olan urs kullanılarak palatin kemiği çıkarılır.

Ardından, kalan maksillayı ve molar dişleri kırın ve palatin kemik veya maksilladaki tüm büyük kemik parçalarını temizleyin. Etmoid kemiğin epitel dokuya doğru uzanan kalan parçalarını kırarak çıkarın. İnce penseti kemiğin altına yerleştirin ve kemiği alttaki dokudan ayırmak için yukarı doğru kaldırın.

Alternatif olarak, kemiği kırmak için burada gösterildiği gibi Rogers kullanın ve ardından kemiği alttaki dokudan ayırmak için ince pens kullanın. İnsan olfactory epithelium turbinate'i böyle görünür. Moid kemiği çıkarıldıktan sonra, bu kemik çıkarılacaktır.

Ardından, burun kemiğinin kaudal ve medial kısmındaki bu kemik, pensler kullanılarak çıkarılır. Kribriform plağa zarar vermemek için bu adım sırasında dikkatli olun. Kemik kırıldıktan sonra, kemiği çıkarmak için pens kullanın.

Sırada burnun görünümü yer almaktadır. Bu kemik çıkarıldıktan sonra kontrol edilecek son bölge, V nazal organ çevresidir. Çünkü bu diseksiyonda şu an çıkardığım, V nazal organın çift tüplerini birbirinden ayıran bir kemik bulunmaktadır.

Bu, tekniğimiz kullanılarak diseke edilmiş bir burnun dorsal bakış açısıdır. Ardından, burnun çeşitli kısımlarını göstermek için burnu döndürdük. Bu dorsal görünümdür; bunu burnun sol tarafının lateral görünümü ve ventral görünüm takip etmektedir.

Şimdi, tekniğimizi kullanarak tamamen diseke edilmiş bir burnun özelliklerini, burnun dorsal kısmından başlayarak detaylı bir şekilde gösteriyoruz. Gösterdiğimiz ilk kısım, ana refrakter epitelin konkalarıdır. Nazal kemiklerin altında kalan dokuda hava kabarcıkları bulunmaktadır ve bu hava kabarcıkları, örnek yan açıdan vakumlanarak temizlenir.

İnsanın koku epitelini içeren bütün haldeki konkayı gösteriyoruz. Konkayların içerisinde hava kabarcıklarının bulunduğuna dikkat edin. Bez dokusu konkanın ön kısmındadır ve solunum epiteli bu lateral bakış açısından görülebilmektedir.

Ventral bakış açısından, hassas nazal organ görülmektedir. Bu görüntü, bir örnekte beyin olfaktör bulblarının ve burnun birlikte çıkarıldığı diseksiyon tekniğimizin bir genişletmesini göstermektedir. Dokuyu kesit alma işlemine hazırlamak için önce plastik bir kalıp alın ve içini optimum kesme sıcaklığı ortamı (OCT) ile doldurun.

İlgili dokuyu doldurulmuş kalıba yerleştirin ve kalıbı plastik bir petri kabı üzerindeki silikon gres halkasının içine yerleştirin; vakum için sızdırmazlık sağlamak amacıyla silikon gres halkasının üzerine bir erlenmayer yerleştirilecektir. Laboratuvarımızda akan su ile oluşturulan bir vakum sistemi kullanılmaktadır. Akış yoluyla vakum oluşturulduğunda, su kabarcıkları dokudan dışarı çekilir.

Su kapatılıp tüpler serbest bırakılarak vakum durdurulur. Ardından plastik kalıp çıkarılır. Burada, dokuyu dondurmadan önce istenen yönelime getiriyorum.

Laboratuvarımızda dokuları dondurmak için kuru buz kullanıyoruz. Bunlar, diseksiyon tekniğimizle bir burnun kesitlenmesi ve nötr kırmızı ile boyanması sonucu elde edilen temsilci sonuçlardır. Bu kesit; konkalardaki efektör epitelyumu, bez dokusunu ve solunum epitelyumunu gösteren yatay bir kesittir.

İkinci kesit, ana koku epitelinin konka yapılarındaki kıvrımlı katlanma modelini gösteren koronal bir kesittir. Bu videoda, burnun manuel olarak kemiklerinden arındırılması ve morfolojik, immünohistokimyasal veya fizyolojik çalışmalar için ideal bir örnek elde edilmesi için kullanılan bir tekniği gösteriyoruz.