Name: Bağışıklık yetersizliği olan farelere subkutan olarak ve intrahepatik insan hepatoselüler karsinoma ksenograftlarının Üretimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-25T18:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 35 s
Description: Keşfedin, immün yetmezlikli farelerde insan hepatoselüler karsinoma ksenograftlarını subkutan ve intrahepatik olarak üretme yöntemlerini. Bu teknik, tümör biyolojisi ve tedavi yanıtlarını incelemek için değerli bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Sağlık Araştırma Faz 1 Klinisyen-Bilim İnsanı Ödülü (AG) bir Kanadalı Enstitüleri ve Kanser Araştırma Derneği (AG) Bir İşletim Grant tarafından desteklenmiştir. Yazarlar, bu projenin onun desteği için Dr John Dick minnettarız.

Protokolünün şematik bir genel görünüşü Şekil 1&#39;de gösterilmiştir. 1.. İnsan HCC Numune işleme Yazılı hasta onayı ile ve kurumsal araştırma etik kurulunun onayı ile primer insan HCC örnekleri elde. Bu protokoller, insan refahı için tüm kurumsal, ulusal ve uluslararası kurallar ile uyumlu Üniversitesi Sağlık Ağı Araştırma Etik Kurulu onayı ile bizim kurumda yapılmıştır. Bir zamanlar uygun numuneler klinik amaçlar için alınmış cerrahi prosedürü izleyerek kısa sürede taze HCC örnekleri toplayın. İdeal olarak bu hastadan alınan doku çıkarıldıktan sonra 30 dakika içinde yer almalıdır. Şekil 2&#39;de gösterildiği gibi, tümör merkezi bölümü nekrotik olabileceğinden, tümörün çevresinden elde edilen en az 1 cm 3 bir örnek, en uygunudur.Önce, radyasyon, kemoterapi ya da ablasyon gibi rezeksiyon herhangi bir tedavi almamış Tümörler tümör hücreleri, uygun olduğu şansını en üst düzeye çıkarmak için tercih edilmektedir. Biyolojik tehlikeli madde için standart kişisel koruyucu protokoller doğrultusunda temel insan dokuları işlemek. Aseptik teknikler kullanılarak bir sınıf II biyogüvenlik kabini içinde tümör dokuları ve hücre hazırlıkları tüm laboratuvar işlemlerini gerçekleştirmek. <ol><li> 4 ° C de 10-25 ml serum içermeyen Dulbecco Modified Eagle Medium / Ham &#39;s F12 içinde taze HCC örnek yerleştirin ve hemen işleme ve farelere yabancı-doku naklinde doku parçaları ve / veya hücrelerin hazırlanması için, laboratuvara buz üzerinde aktarın. </li><li> Steril forseps kullanılarak, 100 mm x 20 mm Petri kabı veya başka bir uygun steril bir çalışma sathında tümör numunesi yerleştirin. Bir No.10 cerrahi neşter bıçak kullanılarak yaklaşık olarak 2-3 mm 3 parça halinde tümör örnek bölün. Bu noktada, snap-donma ya da formalin-sabitleme s düşününgerektiği gibi ome tümör diğer deneyler için parçaları ya da analiz eder. </li><li> Tümör parçalarının Xenografting için, fragmanlar batık kalmasına izin vermek için yeterince Matrigel ihtiva eden bir ya da daha mikrosantrifüj tüpleri içine HCC parçalarının bir yerleştirin. Bu tüpler buz üzerinde tutun. </li><li> Bir tümör hücresi süspansiyonunun hazırlanması için, geri kalan HCC dokuya mümkün olduğunca kıyma ve kıyılmış doku hacmine bağlı olarak, 50 ml konik bir tüp içinde DMEM-F12, 5-10 ml ile karıştırmak için cerrahi bıçak neşter kullanmak. </li><li> Ml 200 birim / nihai konsantrasyonlarda kollajenaz tip IV ve dispaz II ekleyin ve 0.8 ünite / ml. 25 ml&#39;lik bir pipet kullanarak iyi yukarı ve aşağı karışımı pipetle. </li><li> Tüpü Seal ve tümör dokusunun yumuşaklık bağlı olarak, 30-60 dakika boyunca bir% 5 karbon dioksit kuluçka makinesi içinde 37 ° C &#39;de aşama 1.6&#39; dan karışımın inkübe edin. Enzimatik sindirim ilerlemeyi değerlendirmek kadar ve bir kaç kez, her 10 dk aşağı karışımı pipetle. </li><li> Di sonragestion 100 mikron hücre süzgecinden tümör çözüm geçmek tamamlandı. Yavaşça geçmesine tümör hücrelerinin sayısını sağlamak için bir 25 ml bir pipet kullanılarak hücre süzgecinden kalan doku püre. Bir 15 ml konik bir tüp içinde gergin hücre süspansiyonu toplayın. </li><li> 4 ° C&#39;de 5 dakika boyunca 1200 rpm&#39;de tümör hücre süspansiyonu santrifüj </li><li> Yavaşça süpernatant süzün. Pelet boyutuna bağlı olarak, buz gibi soğuk 1 x kırmızı kan hücresi (RBC) ml tampon lizis ve hafifçe yukarı aşağı pipet ve pelet tekrar süspansiyon 2-5 arası ekleyin. 5 dakika boyunca buz üzerinde tutun. </li><li> RBC liziz tamponu yıkamak için, 4 ° C&#39;de 5 dakika boyunca 1000 rpm&#39;de 15 ml santrifüj bir toplam hacme DMEM-F12 ekleyin. </li><li> Yavaşça süpernatant süzün ve DMEM-F12, RBC-serbest tümör hücresi pelletini. </li><li> El ile veya otomatik bir hücre sayacı ile tripan mavi eksklüzyonu kullanılarak canlı hücreler sayılır. </li><li> İstenen numbe ihtiva eden santrifüj tümörü hücre tümbölenleriyukarıda tarif edildiği gibi enjeksiyon için hücrelerin r, elde edilen hücre buz soğukluğunda Matrigel 30 ul pelet, buz üzerinde mağaza yeniden süspanse edin. </li></ol> İsteğe bağlı: Aşama 1.11 sonra, rutin olarak kütle tümör hücresi süspansiyonu, insan CD45 + hücrelerinin (lökositler) tüketmek ve / veya akış sitometrisi veya immünomanyetik boncuklar kullanılarak tümör hücrelerinin alt kümelerini arındırmak. Bu tekniklerin ayrıntılı protokolleri de, ilgili antikorlar, taneler, ve akış sitometre üreticileri tarafından tarif edilmiştir. Not: Bu protokol, aynı zamanda, yukarıda tarif edilen aşama 1.1 &#39;de, primer insan HCC doku için ksenograft doku ikame seri nakli gerçekleştirmek amacıyla farelerden toplanan insan tümör ksenograftlarının işlemek için kullanılabilir. Bu durumda, aşama 1.11 sonra rutin fare histo-uyumluluk antijen H2k karşı bir antikor kullanılarak, hücre süspansiyonundan, murin hücreleri infiltre tüketir. 2.Xenografting Kurumsal hayvan bakımı komitesi tarafından onaylanan protokoller uyarınca tüm hayvan işlemleri yürütmek. Burada açıklanan prosedürler ilgili tüm düzenleyici ve kurumsal kurumları, yönetmelik ve yönergelere uygun ve uyumlu Üniversitesi Sağlık Ağı Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylanmış bir Hayvan Kullanımı Protokolü kapsamında tamamlanmıştır. Küçük hayvanlar için inhalasyon volatil anestezik ajanların teslimi için donatım hayvan tesis ve araştırma enstitüsü, standart operasyon prosedürlerine göre değerlendirilmelidir. Bir sınıf II biyogüvenlik kabini içinde aseptik teknik ve steril aletler kullanarak tüm cerrahi işlemleri yürütmek. Obez olmayan diyabetik şiddetli kombine immün yetmezliği kullanmaktadır (NOD / SCID) veya 6-8 haftada iki cinsiyetten farelerin NOD / SCID / IL-2 reseptör gama zinciri boş (NTG) suşları (The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) 9,10. Bunlarfarenin bağışıklık yetersizliği olan hayvanlara uygun patojensiz şartlar sağlayabilen bir tesis içinde yer alır ve muhafaza edilmelidir. 1 L / oksijen dak% 5 (v / v) inhale Isoflurane temin odası içinde bir cerrahi için fareler hazırlayın. Kornea ve ayak refleks kaybı hayvan (lar) var kadar anestezi koruyun. Derialtı Xenografting için, hayvan (lar) sırtı üzerinde bir veya daha fazla küçük alanları tıraş ve% 70 etanol ile cildi temizlemek. Intrahepatik Xenografting için aşağı inguinal bölgeye aksillanın gelen hayvan (lar) ventral göğüs ve karın tıraş ve% 70 etanol ile cildi temizlemek. Tümör Fragments 2.1 deri altından implantasyonu <ol><li> Bir ağız parçası ile, teneffüs İzofluran anestezi (% 2 (v / v), 1 L / dak O 2) muhafaza eğilimli anestezi uygulanmış fare yerleştirin. Travmatik yaralanma hayvanın gözleri korumak için Tear-Jel uygulayın. </li><li> Betadine ile dorsal traş alan (lar) sterilizeCerrahi fırçalama,% 70 etanol, ardından ve son olarak povidon-iyot çözeltisi ile yıkanır. </li><li> Steril keskin bir makas kullanarak 5 mm deri kesi olun. </li><li> Yavaşça deri altı alanı içine kapalı bir kör makas yerleştirin ve bir tümör fragmanı içine alacak kadar geniş bir cep geliştirmek için hafifçe yayılır. </li><li> Steril ince pensler kullanılarak bir deri altı cep haline aşama 1.3 &#39;de hazırlanan tümör fragmanını yerleştirin. </li><li> Sütürler veya klips kullanarak cilt kesisi kapatın. </li><li> Aşağıda açıklandığı gibi fare postoperatif bakım sağlayın. </li></ol> Tümör hücrelerinin 2,2 Deri altına enjeksiyon <ol><li> Adımları 2.1.1 ve 2.1.2 &#39;de tarif edildiği gibi hayvan hazırlayın. </li><li> Iğne, bir 29 G 1/2 ile bir ensülin şırıngaya aşamasında hazırlanan 1.13 Matrigel tümör hücrelerinin süspansiyon yerleştirin. </li><li> Deri altı boşluk içine yerleştirin ve iğne şırınganın içeriğini boşaltmak. Uzakta derialtı düzlemi boyunca iğne birkaç milimetre fr ilerlemekom cilt delme yer iğnenin geri çekilmesi üzerine ponksiyon dışında tümör hücre süspansiyonu sızmasını önler. </li><li> Aşağıda açıklandığı gibi fare postoperatif bakım sağlayın. </li></ol> Tümör Fragments 2.3 Intrahepatik İmplantasyonu <ol><li> 1 ml şırınga iğne bir 27 G 1/2 kullanarak, intraoperatif sıvı kayıpları telafi etmek için anestezi hayvanın boyun sırtında steril normal tuz çözeltisi subkutan 350 ul yönetmek. Analjezi için, 1 ml şırınga üzerinde 27 G 1/2-in iğne kullanılarak, deri altına hayvanın kanadında steril serum fizyolojik içeren buprenorfin (0.1 mg / kg) 350 ul yönetmek. </li><li> Bakıma teneffüs Isoflurane anestezi (% 2 (v / v), 1 L / dak O 2) sunmak için ağız içine yerleştirilen, burun ve ağız ile önceden ısıtılmış bir ped üzerindeki fare sırtüstü yerleştirin. </li><li> Bacaklarda uzatmak ve pozlama ve optimize etmek için çalışma yüzeyine bant ile sabitleyinventral karın ve göğüs. </li><li> Görselleştirme optimize etmek için bir büyüteç lamba altında prosedürü uygulayın. </li><li> Ve son olarak povidon-iyot çözeltisi ile% 70 etanol ile takip Betadinede cerrahi fırçalama ile ventral karın ve göğüs üzerinde traş cildi sterilize edin. </li><li> Steril keskin bir makas kullanarak, çapraz bir ikili subcostal cilt kesi yapmak ve tüm karaciğer yeterli maruz izin periton boşluğuna girmek için kas tabakaları bölün. </li><li> Kılıç şeklinde işlem yukarıda deride bir dikiş yerleştirin ve karaciğer ve çevresindeki yapıların iyi poz olanak sağlamak amacıyla bant ile ağızlık sabitleyin. </li><li> Bunu dengelemek için karaciğere iki pamuk uçlu aplikatörler bitişik ve posterior kullanın. </li><li> Steril bir bisturi 10&#39;den bıçağı kullanılarak karaciğer yüzeyinde uzunluğu ve derinlemesine bir kesik 3 mm olun. </li><li> Hemen Surgicel ve Hemostaz sağlamak için kesi hafif bir basınç uygulamak; 60-90 sn sonra kaldırmakve tam hemostaz elde edilmiştir sadece devam. </li><li> Steril ince forseps veya 18 G iğne ile karaciğer kesi içine bir tümör fragmanı adım 1.3 yerleştirin. </li><li> Tümör fragmanının yer değiştirmesini önlemek ve devamı hemostaz sağlamak için karaciğer kesi üzerinde Surgicel küçük bir parça uygulanır. </li><li> Dikişlerle veya klipler ile kesi kapatın. </li><li> Aşağıda açıklandığı gibi postoperatif bakım sağlayın </li></ol> Karaciğer içine direkt enjeksiyon yoluyla Tümör Hücreleri 2.4 Intrahepatik İmplantasyonu <ol><li> Yukarıda 2.3.7 adımları 2.3.1 &#39;de tarif edildiği gibi fare hazırlayın. </li><li> Iğne, bir 29 G 1/2 kullanarak, bir ensülin şırıngaya tümör hücre süspansiyonu (adım 1.13 hazırlandı) yerleştirin. </li><li> Karaciğer bir pamuk uçlu aplikatör kullanılarak stabilize ile, karaciğer içine insülin şırınga iğne takın ve Öneri bir subkapsüler düzlem boyunca ponksiyon ötesinde birkaç milimetre ilerlemek. </li><li> Yavaşça şırınga ve t içeriğini boşaltmaktavuk karaciğer iğne kaldırmak. </li><li> Yeri ponksiyon üzerinde Surgicel ve tümör hücre süspansiyonu sızmasını önlemek için ve tam Hemostaz sağlamak için bir pamuk uçlu bir aplikatör ile hafif basınç uygulayın. </li><li> Dikişlerle veya klipler ile kesi kapatın ve aşağıda açıklandığı gibi ameliyat sonrası bakım sağlamak. </li></ol> Dalak içine enjeksiyon yoluyla Tümör Hücreleri 2.5 Intrahepatik Xenografting <ol><li> Yukarıdaki adımlar 2.3.5 2.3.1 &#39;de tarif edildiği gibi fare hazırlayın. </li><li> Steril keskin bir makas kullanarak, bir 1 cm periton boşluğuna girmek için subkostal kesi bıraktı olun. </li><li> Dalak açığa amacıyla cranially ve hayvanın sağ tarafına mide yansıtmak için bir pamuk uçlu bir aplikatör kullanın. </li><li> Steril ince atravmatik forseps ile çevredeki yağ dokuları ele alarak, kesi içine dalak sağlamak ve bunu dengelemek için dalak arkasında bir pamuk uçlu bir aplikatör yerleştirin. </li><li> 5-0 ipek sütür, yer kullanarakalt kutup üzerinde dalak etrafında gevşek ön bağlı düğüm. </li><li> Iğne, bir 29 G 1/2 kullanarak, bir ensülin şırıngaya tümör hücre süspansiyonu (adım 1.13 hazırlandı) yerleştirin. </li><li> Dalak alt direğe insülin şırınga iğnesi yerleştirin ve gevşek ön bağlı düğüm seviyesine yanından ileri. </li><li> Yavaşça, şırınga içeriğini boşaltmak dalak iğne kaldırmak ve tümör enjekte edilen hücre süspansiyonu, herhangi bir sızıntıyı önlemek için düğüm sıkın. </li><li> Periton boşluğu içine dalak değiştirin. </li><li> Dikişlerle veya klipler ile kesi kapatın ve aşağıda açıklandığı gibi ameliyat sonrası bakım sağlamak. </li></ol> İnsan Tümör Doku Intrahepatik Aşı kolaylaştırılması için 2.6 Kısmi Hepatektomi <ol><li> 2.3.7 adımlar 2.3.1 &#39;de tarif edildiği gibi fare hazırlayın. </li><li> Steril keskin bir makas ile, karaciğer medyan lob bağlı falciform ligament bölün. </li><li> Pamuk uçlu bir aplikatör kullanarak, seferbersol lob etrafında 5-0 ipek sütür karaciğer ve pozisyon gevşek bir ön bağlı düğüm sol lob. Sol lob bilio-vasküler pedikül doğru mümkün olduğunca yakın gevşek düğüm ilerlemek ve düğüm sıkın. </li><li> Düğüm ve sonraki kanama kaymasını önlemek için küçük bir güdük bırakarak, steril makas kullanılarak dikilen sol lob distalinden tüketim. </li><li> Benzer bir teknik kullanılarak, bağlanır ve safra kesesi kaçınarak, karaciğer medyan lob çoğunluğu rezeke. </li><li> Kullanım Surgicel ve tam Hemostaz sağlamak için karaciğer parankimi kesik yüzeyleri boyunca pamuk uçlu bir aplikatör ile hafif basınç. </li><li> , Bir tümör fragmanı ya da tümör hücrelerinin intrahepatik Xenografting için, yukarıda tarif edildiği gibi 2.4.5 adımlar 2.3.11 ya da 2.4.2 için 2.3.8 devam edin. </li><li> Dalak enjeksiyon yoluyla tümör hücrelerinin intrahepatik Xenografting için fuarlarında, yavaşça cranially ve hayvanın sağ tarafına mide yansıtmak için pamuk uçlu aplikatörler kullanmakdalak ng. Yukarıda tarif edildiği gibi 2.5.9 adımlar 2.5.4 devam edin. </li><li> Dikişlerle veya klipler ile kesi kapatın ve aşağıda açıklandığı gibi ameliyat sonrası bakım sağlamak. </li></ol> 2.7 Ameliyat Sonrası Bakım <ol><li> Inhalasyon anestezi ağızlık fareyi çıkarın. </li><li> Anestezi kurtarıldı ve tam harekete kadar yaklaşık 20 dakika boyunca bir ısı lambası altında bir kafeste fare yerleştirin. </li><li> Ilk 2-3 ameliyat sonrası gün boyunca buprenorfin dozunun her 8-12 saat tekrarlayın. </li></ol>

<ol><li>El-Serag, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Hepatocellular carcinoma.</a> N. Engl. J. Med. 365, 1118-1127 (2011).</li>
<li>Li, Y., Tang, Z. Y., Hou, J. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocellular+carcinoma%3A+insight+from+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Hepatocellular carcinoma: insight from animal models.</a> Nat. Rev. Gastroenterol Hepatol. 9, 32-43 (2012).</li>
<li>Tateishi, R., Omata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocellular+carcinoma+in+2011%3A+Genomics+in+hepatocellular+carcinoma--a+big+step+forward%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Hepatocellular carcinoma in 2011: Genomics in hepatocellular carcinoma--a big step forward.</a> Nat. Rev. Gastroenterol Hepatol. 9, 69-70 (2012).</li>
<li>Hoshida, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+classification+and+novel+targets+in+hepatocellular+carcinoma%3A+recent+advancements%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Liver+Dis%22%5BJournal%5D)">Molecular classification and novel targets in hepatocellular carcinoma: recent advancements.</a> Semin. Liver Dis. 30, 35-51 (2010).</li>
<li>Ji, J., Wang, X. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+implications+of+cancer+stem+cell+biology+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Clinical implications of cancer stem cell biology in hepatocellular carcinoma.</a> Semin. Oncol. 39, 461-472 (2012).</li>
<li>Villanueva, A., Hernandez-Gea, V., Llovet, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medical+therapies+for+hepatocellular+carcinoma%3A+a+critical+view+of+the+evidence%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Medical therapies for hepatocellular carcinoma: a critical view of the evidence.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. , (2012).</li>
<li>Jin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+human+tumour+tissue+xenografts+in+immunodeficient+mice%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Transl.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived human tumour tissue xenografts in immunodeficient mice: a systematic review.</a> Clin. Transl. Oncol. 12, 473-480 (2010).</li>
<li>Sausville, E. A., Burger, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contributions+of+human+tumor+xenografts+to+anticancer+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Contributions of human tumor xenografts to anticancer drug development.</a> Cancer Res. 66, 3351-3354 (2006).</li>
<li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+defects+in+innate+and+adaptive+immunologic+function+in+NOD%2FLtSz-scid+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Multiple defects in innate and adaptive immunologic function in NOD/LtSz-scid mice.</a> J. Immunol. 154, 180-191 (1995).</li>
<li>Ohbo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+hematopoiesis+in+mice+with+a+truncated+mutant+of+the+interleukin-2+receptor+gamma+chain%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Modulation of hematopoiesis in mice with a truncated mutant of the interleukin-2 receptor gamma chain.</a> Blood. 87, 956-967 (1996).</li>
<li>Fiebig, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+in+vivo+imaging+of+the+murine+liver%3A+a+micro-computed+tomography-based+anatomical+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional in vivo imaging of the murine liver: a micro-computed tomography-based anatomical study.</a> PLoS One. 7, e31179(2012).</li>
<li>Masters, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+cancer+cell+lines%3A+fact+and+fantasy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Human cancer cell lines: fact and fantasy.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 1, 233-236 (2000).</li>
<li>Yamashita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EpCAM-positive+hepatocellular+carcinoma+cells+are+tumor-initiating+cells+with+stem%2Fprogenitor+cell+features%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">EpCAM-positive hepatocellular carcinoma cells are tumor-initiating cells with stem/progenitor cell features.</a> Gastroenterology. 136, 1012-1024 (2009).</li>
<li>Ma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-130b+Promotes+CD133%28%2B%29+liver+tumor-initiating+cell+growth+and+self-renewal+via+tumor+protein+53-induced+nuclear+protein+1%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">miR-130b Promotes CD133(+) liver tumor-initiating cell growth and self-renewal via tumor protein 53-induced nuclear protein 1.</a> Cell Stem Cell. 7, 694-707 (2011).</li>
<li>Yang, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significance+of+CD90%2B+cancer+stem+cells+in+human+liver+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Significance of CD90+ cancer stem cells in human liver cancer.</a> Cancer Cell. 13, 153-166 (2008).</li>
<li>Park, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neoangiogenesis+and+sinusoidal+%22capillarization%22+in+dysplastic+nodules+of+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Surg.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Neoangiogenesis and sinusoidal "capillarization" in dysplastic nodules of the liver.</a> Am. J. Surg. Pathol. 22, 656-662 (1998).</li>
<li>Sigurdson, E. R., Ridge, J. A., Kemeny, N., Daly, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+and+liver+drug+uptake+following+hepatic+artery+and+portal+vein+infusion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Tumor and liver drug uptake following hepatic artery and portal vein infusion.</a> J. Clin. Oncol. 5, 1836-1840 (1987).</li>
<li>Mitchell, C., Willenbring, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reproducible+and+well-tolerated+method+for+2%2F3+partial+hepatectomy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">A reproducible and well-tolerated method for 2/3 partial hepatectomy in mice.</a> Nat. Protoc. 3, 1167-1170 (2008).</li>
<li>Michalopoulos, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration+after+partial+hepatectomy%3A+critical+analysis+of+mechanistic+dilemmas%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration after partial hepatectomy: critical analysis of mechanistic dilemmas.</a> Am. J. Pathol. 176, 2-13 (2010).</li>
<li>Zhang, D. Y., Friedman, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis-dependent+mechanisms+of+hepatocarcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Fibrosis-dependent mechanisms of hepatocarcinogenesis.</a> Hepatology. 56, 769-775 (1002).</li>
<li>Chen, K., Ahmed, S., Adeyi, O., Dick, J. E., Ghanekar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+solid+tumor+xenografts+in+immunodeficient+mice+are+vulnerable+to+lymphomagenesis+associated+with+Epstein-Barr+virus%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Human solid tumor xenografts in immunodeficient mice are vulnerable to lymphomagenesis associated with Epstein-Barr virus.</a> PLoS One. 7, e39294(2012).</li>
</ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Bu deneysel sorular ve deneyleri geniş bir yelpazede uygulanabilir bağışıklık yetersizliği olan farelerde deri altından ve intrahepatik insan HCC ksenograftları kurmak için çeşitli teknikler tarif edilmiştir. Deri altı ksenograftlar yaygın HCC biyoloji çeşitli yönlerini incelemek için kullanılmış olsa da, intrahepatik xenografts nadiren literatürde tarif edilmiştir. Ayrıca, ksenograftlarının kullanımını anlatan çalışmaların çoğunluğu iyi kurulan hücre hatları bu yarattı. Insan tümör biyolojisi 12 modelleme ka...

Hepatosellüler karsinom (HCC), dünya çapında en sık görülen beşinci kanser ve Kuzey Amerika&#39;da kanser ölümlerinin en hızlı artan nedenidir. HCC için en yaygın bir risk faktörü, en sık kronik viral hepatit, alkol kullanımı, oto-bağışıklık hastalığı ya da kalıtsal metabolik bozukluklar 1 meydana gelen, karaciğer sirozu olan. Dünya nüfusu üzerinde HCC dayattığı ağır hastalık yükünün rağmen, HCC patofizyolojisi nispeten zayıf gibi kolorektal, meme veya prostat kanseri gibi diğer sık ​​görülen kanserlerle karşılaştırıldığında anlaşılmaktadır. Örneğin, tümörogenez sürüş spesifik moleküler ve hücresel olayları açıkça 2 tanımlanmalıdır kalır. Çoğu diğer katı epitel kanserleri gibi, genomik yaklaşımlar HCC 3 ile ilişkili aberasyonlarında heterojenliğini ortaya koymuştur. Bazı çalışmalar, hücre çoğalması, sur katılan sinyal yollarının çeşitli düzensiz aktivitesi ortaya koymuşturyaşamasının çok, farklılaşma ve anjiyogenez 4. Buna ek olarak, HCC patobiyolojisinde kanser kök hücrelerinin rolü 5 açıklık gerekmektedir. HCC patofizyolojisi sınırlı bir anlayış ile, HCC için etkili tedavilerin edevatı da nispeten sınırlı kalmıştır. Nüks yaygın olmasına rağmen karaciğere sınırlı tümörlerin erken evre hastalarda, tümör ablasyonu veya cerrahi rezeksiyon kullanılarak küratif tedavi için adaydırlar. Daha ilerlemiş hastalık, kemoterapi ve radyasyon olan hastalar için etkinliği sınırlı olan ve palyatif amaçla 6 ile hastalık kontrolü için öncelikle kullanılır. Insan HCC vivo deneysel modellerinde, yüksek kaliteli, böylece yeni terapötik yaklaşımlar değerlendirme için hem de insan HCC patofizyolojisi çok gerekli temel araştırma için değerli bir platform sağlar. Hücre çizgileri ya da yüksek tanımlı fare modellerinin kullanımı, PRI ksenograftlarının ile karşılaştırıldığındaonlar da 7,8 içinde ve farklı hastalar arasında mevcut heterojenliğini çekerken yüksek sadakat ile insan hastalığına recapitulating yetenekli beri immünyetmezligi farelerde mary insan tümörleri bu tür çalışmalar için değerli bir araç olarak ortaya çıkmıştır. Bu amaçla, bağışıklık yetersizliği olan farelerde insan HCC ksenograftları kurmak için çeşitli yöntemler geliştirdik. HCC ksenograftlarını ilgili yayınlanmış çalışmaların çoğunluğu bu amaçla köklü insan HCC hücre hatlarının kullanımını tarif ederken, biz hemen hastaların cerrahi sonrası elde edilen primer HCC örneklerden ksenograftlarını oluşturmak için bizim tahliller optimize odaklanmıştır. Farklı Xenografting teknikler farklı araştırma uygulamaları için gerekli olabilir. Örneğin, tümör fragmanlarından üretilen deri altı ksenograftlar, hızlı bir şekilde oluşturulur kolay bir şekilde kontrol edilir, ve uygun olan yeni terapötik maddelerin lokal uygulama için daha uygun olabilirtümör yanıtının izlenmesi. &lt;ntrahepatik Ksenogratflardır HCC biyoloji hepatik mikroçevresinin rolüne ilişkin çalışmalar için daha uygun olabilir. Tümör hücre süspansiyonu elde Ksenograftlar, tümör başlatıcı bir hücre alt tanımlanması ve karakterizasyonu için ya da önceden ksenonakli tümör hücrelerinin in vitro manipülasyon gerektiren uygulamalar için gerekli bulunmaktadır. Dolayısıyla gelişmiş ve primer insan HCC örneklerden elde edilen hücre süspansiyonları ya da tümör fragmanlarından deri altından ya da intrahepatik ksenograftları kurmak için aşağıdaki protokolleri onaylamıştır.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco&#8217; s Modu. Kartal Orta/Jambon&#8217; s F12 50/50 Karışım x1 (DMEM-F12) </td><td>WISENT Bioproducts</td><td>319-075-CL</td><td></td></tr><tr><td> Kollajenaz TypeIV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td> Dispase II </td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>7923</td><td></td></tr><tr><td> Matrigel</td><td>Matrisi Becton-Dickinson Biosciences</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td> %10 Tamponlu Formalin çözeltisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>%0,9 Tuzlu Çözelti (NaCl), steril</td><td>Ev Markası</td><td>1011-L8001</td><td></td></tr><tr><td>Betadine cerrahi önlük</td><td>Purdue Pharma</td><td>NPN 00158313</td><td></td></tr><tr><td> Buprenorfin (Temegesic) NR 0.3 mg/ml</td><td>Reckitt Benckiser</td><td></td><td></td></tr><tr><td> Isofluran USP, %99.9, inhalasyon anestezik</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td>M60302</td><td></td></tr><tr><td>Gözyaşı Jeli </td><td>Novartis İlaç Dondurulmuş</td><td></td><td></td></tr><tr><td> bölüm bileşiği </td><td>VWR</td><td>95057-838</td><td></td></tr><tr><td> Kriyokalıp, Doku -Tek </td><td>Sakura Finetek</td><td>4566</td><td></td></tr><tr><td> Hassas Kayma İğnesi 18G 1 & # 189; </td><td>Becton-Dickinson Biosciences</td><td>305196</td><td></td></tr><tr><td> Hassas Kayma İğnesi 27G & # 189; </td><td>Becton-Dickinson Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td> İnsülin şırıngası, 3/10 cc U-100, 29G&#189; </td><td>Becton-Dickinson Biosciences</td><td>309301</td><td></td></tr><tr><td> Cerrahi bıçak No.10</td><td>Tüy Güvenlik Tıraş Bıçağı Co.</td><td>08-916-5A</td><td></td></tr><tr><td> #5-0 Yumuşak ipek cerrahi sütür, 3/8" konik uçlu iğne </td><td>Syneture</td><td>VS-880</td><td></td></tr><tr><td> Transpore cerrahi bant</td><td>3M Sağlık hizmeti</td><td>1577-1</td><td></td></tr><tr><td> Pamuk aplikatörü </td><td>Medpro</td><td>018-425</td><td></td></tr><tr><td> Cerrahi, oksitlenmiş rejenere selüloz</td><td>Ethicon</td><td>1951</td><td></td></tr><tr><td> Hücre süzgeci 100 &#956; m naylon</td><td>Becton-Dickinson Biosciences</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td> Mobil tabanlı büyütme aydınlatması</td><td>Benson medical Industries Inc.</td><td>Model: RLM-CLT-120V</td><td></td></tr><tr><td>Petridish steril 100x20 mm </td><td>Sarstedt</td><td>821474</td><td></td></tr><tr><td> Doku forsefi, 1x2 diş, 4-1/2"</td><td>Almedic</td><td>A10-302</td><td></td></tr><tr><td> Adson pansuman forsep 4-3/4"</td><td>Almedic</td><td>A10-220</td><td></td></tr><tr><td> Göz pansuman forsefi, tırtıklı, düz, 4" </td><td>Almedic</td><td>A19-560</td><td></td></tr><tr><td> Hartman Hemostatik Forseps, kavisli, 3-1/2" </td><td>Almedic</td><td>A12-142</td><td></td></tr><tr><td> İris makas, kavisli, 4-1/4"</td><td>Almedic</td><td>A8-690</td><td></td></tr><tr><td> İris makas, düz, 4-1/2" </td><td>Almedic</td><td>A8-684</td><td></td></tr><tr><td> Olsen-Hegan iğne sürücüsü, 5-1/2" </td><td>Almedic</td><td>A17-228</td><td></td></tr></tbody></table>

bağışıklık yetersizliği olan farelere subkutan olarak ve intrahepatik insan hepatoselüler karsinoma ksenograftlarının Üretimi

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

In vivo insan hastalığı recapitulate hepatosellüler karsinom (HCC) deneysel modeller hastalığın patofizyolojisi araştırma ve yeni tedavilerin klinik öncesi değerlendirilmesi için değerli bir platform sağlamak. Bu araştırma çeşitli uygulamalar yararlanılabilir bağışıklık yetersizliği olan farelerde, deri altından ya da ortotopik insan HCC ksenograftları üretmek için çeşitli yöntemler sunulmuştur. Bir başlangıç ​​noktası olarak cerrahi rezeksiyon yapılan hastalarda birincil tümör dokusunun kullanımı ile ilgili bir odak ile, yabancı-doku naklinde hücre süspansiyonları veya tümör fragmanlarının hazırlanmasını tarif etmektedir. Fare dalak hücreleri içine enjeksiyonu ile ya da dolaylı olarak ii) intrahepatically, ya da tümör hücreleri ya da fragmanlarının doğrudan implantasyon ile karaciğer içine, ya da, biz bu dokuları i) subkütan ksenograft için özel teknikler tarif eder. Ayrıca, bir strateji olarak Xenografting zamanda doğal fare karaciğer rezeksiyonu kısmi kullanımını tarifprimer insan tümör hücrelerinin, intrahepatik bütünleşmesini kolaylaştırabilir alıcı fare aktif karaciğer rejenerasyonu için bir durum ortaya çıkarmaktadırlar. Bu tekniklerin beklenen sonuçlar gösterilmektedir. Açıklanan protokolleri genellikle daha az sağlam literatürde yaygın olarak kullanılan ve sık sık atıf köklü insan HCC hücre hatları daha gerçekleştirmek birincil insan HCC örnekleri ve ksenograftlarını kullanılarak valide edilmiştir. Hücre hatları ile karşılaştırıldığında, biz xenotransplantasyon modellerinde birincil HCC engraftman nispeten düşük şans katkıda bulunmak ve ksenogreft büyüme kinetiği etkileyebilecek teknik konularda yorum yapabilir faktörleri tartışmak. Ayrıca, elde edilen xenografts doğru ana HCC dokuları benzer sağlamak için uygulanması gereken yöntemler önerir.

Şekil 3, bir subkutan insan HCC ksenograft ve tümörün histopatolojik mukabil bir görünüm tipik görünümünü göstermektedir. Deri altı ksenograftlarının gelişimi ve büyümesi kolayca alıcı farelerin günlük olarak muayene ile izlenebilir. Bir tümörün Xenografting ve kalkınma arasındaki zaman aralığı (doku tipi (hücre süspansiyonu vs tümör fragmanı), doku kaynağı (birincil hasta örneği, pasaj ksenogreft veya hücre hattı) ve implante doku miktarına bağlı olarak büyük ölçüde değişebilir hücre sayısı ya da tümör...

Immünyetmezligi farelerde insan tümör ksenogratflardır kanser biyolojisi okumak için değerli araçlardır. Insan hepatoselüler karsinoma hücreleri ya da tümör fragmanlarından deri altı ve intrahepatik ksenograftları oluşturmak için özel protokolleri açıklanmıştır. Alıcı farede hepatektomiden tarafından uyarılan karaciğer rejenerasyon intrahepatik naklini kolaylaştırmak için bir strateji olarak sunulmuştur.

Bağışıklık yetersizliği olan farelere subkutan olarak ve intrahepatik insan hepatoselüler karsinoma ksenograftlarının Üretimi

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Bu prosedürün genel amacı, immün yetmezliği olan farelerde deri altı veya intrahepatik insan hepatoselüler karsinom veya HCC xenograftları oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle deri altı xenograftlar için taze bir insan HCC örneğinden implantasyon amacıyla tümör fragmanlarının veya tek hücre süspansiyonunun hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. Bir sonraki adım ise, intrahepatik xenograftlar için tümör hücrelerinin enjekte edilmesi veya tümör fragmanlarının deri altı dorsal cebe implant edilmesidir.Bir sonraki adım, tümör hücrelerini dala veya karaciğere enjekte etmek ya da son adımda tümör fragmanlarını doğrudan karaciğere implante etmektir. Hayvanlar, tümörler gelişene kadar birkaç hafta boyunca gözlemlenir. Nihayetinde, insan HCC Ksenogreftleri, tümör oluşumu mekanizmaları ve yeni tedavilere verilen yanıtlar da dahil olmak üzere tümör biyolojisinin birçok yönünü incelemek için kullanılabilir.Bu tekniğin, yalnızca hücre hatlarının veya subkütan ksenogreftlerin kullanılması gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, bu teknikle birlikte birincil insan karaciğer kanseri örneklerinin ve hastadan türetilen intrahepatik ksenogreftlerin, insan hepatosellüler karsinomunun daha gerçekçi bir bi

generation-subcutaneous-intrahepatic-human-hepatocellular-carcinoma

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, insanlaştırılmış bir ksenogreft fare modeli oluşturmak için bir test gösterilmektedir. Bağışıklığı baskılanmış bir fareye, bağışıklık hücresinin tükenmesine neden olmak için siklofosfamid enjekte edilir. Bir hidrojel içinde insan periferik kan mononükleer hücreleri (PBMC'ler) ile karıştırılan hasta kaynaklı tümör hücreleri, deri altından fareye enjekte edilir ve sızan T hücreleri ile bir tümör oluşturur.

İnsan PBMC ile Aşılanmış İnsanlaştırılmış Ksenogreft Fare Modeli Oluşturma Tekniği

Kanserin metastaz kansere bağlı ölümlerin önemli bir nedenidir. Biz solid organ tümörlerinin metastaz mekanizmaları çalışmak için bir "hasta" gibi ortotopik singenik fare modeli sistemi kurulması için hayatta kalma cerrahi yönteminin derinlemesine bir açıklama sağlar.

Bir &quot;Hasta gibi&quot; Ortotopik singenik Fare Modeli Hepatoselüler karsinomu metastazı

Burada, olgunlaşmamış ve genişletilebilir insan hepatik kök hücrelerinin transplantasyonunu takiben Alb-toksin reseptörü aracılı hücre nakavt (TRECK)/SCID farelerinde üretilen yeni bir insanlaştırılmış fare karaciğeri modeli sunuyoruz.

İnsan Karaciğer Kök Hücreler kullanma Insanlaşmış Fare Karaciğer Üretimi

Kısmi hepatectomy (PHx) ve hücre transplantasyonu dalak ile NOD gerçekleştirmek için bir protokol anlatmıştık. SCID (BAŞINI SALLAMAK. CB17-Prkdcscid/J) fareler. Bu protokol için ortaya çıkarmak ve hücre intrasplenic nakli için başka bir kesi ardından karaciğer sol lob çıkarabileceğim için bir kesi yapılır.

Hepatositlerin intrasplenic nakli düğümde kısmi Hepatectomy sonra. SCID fareler

Burada, ailesel hiperkolesterolemi insan indüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı tetkikine kullanarak bir insan karaciğer chimeric fare modeli oluşturmak için bir protokol mevcut. Bu yeni tedaviler hiperkolesterolemi için test etmek için değerli bir modeldir.

İndüklenmiş Pluripotent kök hücre kaynaklı tetkikine kullanarak ailesel hiperkolesterolemi insan karaciğer Chimeric fare modeli

Bu protokol, hem insan bağışıklık sistemi hem de karaciğer hücreleri ile insanlaşmış fareler kurmak için güvenilir bir yöntem sağlar. İnsan hepatositlerinin intrasplenik enjeksiyonu ve CD34+ hematopoetik kök hücrelerin insplektik enjeksiyonu ile elde edilen çift immünoeksik fareler insan immün yetmezlik virüsü-1 enfeksiyonuna yatkındır ve gözlendiği gibi karaciğer hasarına recapitulate HIV bulaşmış hastalar.

HIV ile ilişkili Karaciğer Patogenezi için Çift İnsanize TK-NOG Fare Modelinin Oluşturulması

Burada, hepatosellüler kanserin (HCC) tipik bağışıklık özelliklerini özetlemek için karaciğer kanserinin klinik olarak ilgili bir murine modelinin gelişimini açıklıyoruz.

Hepatik İnflamasyon ve Fibrozis Ortamında Ortaya Çıkan Hepatosellüler Kanserin Onkojenik Hepatositkaynaklı Ortotopik Fare Modeli

Ortotopik insan karaciğeri metastatik uveal melanom ksenogreft fare modelleri, hasta kaynaklı tümör öbek ve kültürlü insan uveal melanom hücre hatları ile iğne enjeksiyon teknikleri ile cerrahi ortotopik implantasyon teknikleri kullanılarak oluşturulmuştur.

İmmünficient Farelerde Karaciğer Ortotopik İnsan Uveal Melanom Xenograft Platformu Üretimi

Burada, hepatik arter ligasyonu olan ve olmayan ortopik hepatosellüler karsinom ksenogreftleri oluşturmak ve [18 F]Floromisonidazol ([18 F]FMISO) ve [18 F]Florodeoksiglukoz ([18F]FDG) kullanılarak tümör hipoksisinin non-invaziv pozitron emisyon tomografisi (PET) görüntülemesini gerçekleştirmek için bir protokol sunuyoruz.

Hepatosellüler Karsinomun Ortotopik Fare Modelinde Non-İnvaziv PET/MR Görüntüleme

Hasta tümörlerinden üretilen organoidler ortotopik olarak fare karaciğerine enjekte edilir. Tümör olmayan karaciğer dokusunun rezeksiyonu, tümörün bulunduğu karaciğer dokusunda rejeneratif bir ortama yol açar.

Karaciğer Rejenerasyonunun Tümör Büyümesi Üzerindeki Etkisini Araştırmak İçin Hepatosellüler Kanser Hastasından Elde Edilen Bir Organoid Ksenogreft Modeli

Keşfedin, immün yetmezlikli farelerde insan hepatoselüler karsinoma ksenograftlarını subkutan ve intrahepatik olarak üretme yöntemlerini. Bu teknik, tümör biyolojisi ve tedavi yanıtlarını incelemek için değerli bir model sunar.

Bağışıklık yetersizliği olan farelere subkutan olarak ve intrahepatik insan hepatoselüler karsinoma ksenograftlarının Üretimi

Daha fazla video keşfet