Name: Sperm Rekabet Yeteneği in değerlendirilmesi farklılıklar Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 34 s
Description: Öğrenin Drosophila melanogaster erkeklerinde çift eşleşme deneyleriyle sperm rekabet yeteneği farklılıklarını nasıl değerlendireceğinizi. Göz rengi belirteçleriyle babalık analizi yaparak genetik faktörlerin üreme başarısı üzerindeki etkisini keşfedin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar finansman için (MCB-1.157.876) NSF teşekkür ederim. Biz de onların yorumlar için Alberto Civetta, John roote ve iki anonim hakem teşekkür ederim.

Küçük ölçekli deneyler tüm prosedürü aşina olmak için yapılmalıdır. 1. Virgin Kadın ve naif Erkekler Toplama B) Oregon-R bireyler naif referans erkek toplamak amacıyla, c a) w 1.118 kişi bakire kadın toplamak için: belirtilen deney en basit sürümü yetişkinlerin aşağıdaki kombinasyonu içeren ilk haç dört tip, oluşur ) P {sw} homozigot erkek ve bakire kadın naif deneysel erkek (Tip I) toplamak için Sdic en vahşi tip organizasyon taşıyan bir kontrol hattı ve d) P {sw} homozigot erkek ve Sdic-sw-silme -taşıyan Sdic-sw eksikliği (Tip II) taşıyan saf deneysel erkek toplamak için bakire kadın. <ol><li> 8-10 kadın, 5 erkek her içeren birden fazla şişe ayarlayın. Kadın yatıyordu izin veryumurta ve her 3-5 günde yeni şişelere yetişkin aktarın. Şişe yerine şişeleri gerekirse kullanın ve her zaman taze gıda kullanın. Gerekli şişeleri sayısı üzerinde çalışma yapılan deneysel erkek tiplerinin sayısı ve farklılıklar (Tablo 1) tespit etmek için gerekli olduğu tahmin edilen bireylerin sayısına bağlıdır. Flakon başına 10&#39;dan fazla kadın döl doğurganlık değişim neden olabilir larva büyüme sırasında aşırı kalabalık neden olabilir. 25 ° C&#39;de saklayın şişeleri sıcaklık kontrollü bir odaya C. </li><li> Ilk haçlar kurduktan sonra gün 11 inci ve 12 inci bakire kadın ve naif erkek toplamaya başlar. Bekleme süresi sıcaklığına bağlı olarak değişir; düşük sıcaklıklarda sonucu uzun gelişimsel zamanda bireylerin toplama geciktirmek. Eclosion üzere zaman etkileyen bir başka faktör orta türüdür. Bu mısır unu-maya orta 29 gibi besleyici gıda, yetişkin düzgün gelişimi sağlarçiftleşme kolaylaştırır üreme sistemi,. Unmated toplayın her 4-6 saat uçar. Toplarken, şişenin içine CO2 getirerek sinekler uyutmak, sinekler dokunun ve seks stereomikroskop altında (Şekil 2). Seks ve uygun fenotip ve etiket şişeleri tarafından farklı şişeleri içine istenen sinekler yerleştirin. </li></ol> Not 1. Koleksiyon rutin atarak önceki gece ortaya çıkan yetişkinler tarafından sabah başlar. Gün boyunca bir veya iki kez bakire kadın ve naif erkek toplayın. Tipik olarak, D. melanogaster erkek 25 ° C 30 eclosion sonra cinsel olgun 8 saat olmak. Sinekler 12:12 saat aydınlık / karanlık döngüsü altında kalırlarsa, eclosion iki tepe bekleniyor: ilk 1-2 saat boyunca ışık söner önce ışığı ve 2 saat boyunca açıldıktan sonra. Eclosion pupa kararır sonra 24 saat içinde ortaya çıkar. Not 2. En fazla 10 kadın should aşırı kalabalık önlemek için aynı şişenin içine koymak. Bunlardan en az biri bakire olmadığı için bu aynı zamanda atılır olması durumunda kadın kaybını sınırlar. Not 3. Kısa bir süre içinde bakire kadın ve naif erkek uygun sayıda toplamak için, aşağıdaki önlemleri kabul edilebilir. Deneysel erkeklerin iki tür (Tablo 1) ile ilgili deneyler 1118 w 15-20 şişeleri ayarlayın. Hafifçe medya yüzeyine serpin ve yumurtlama kolaylaştırmak için birkaç tane kuru aktif maya pelet ekleyin. Gün üst üste anne en az 4 kez aktarın. Anne başka bir flakon (Şekil 3) aktarılır sonra her şişe içinde pupa devresi için uygun olan yüzey artırmak için, 4. veya 5. gün boyunca çok katlanmış kağıt (7 x 5 cm) takın. Ilk haçlar ortaya yetişkin sayısına yeterli değilse, bir kaç gün daha bekleyin ve bireysel olmak toplamakflakonlarından als farklı tarihlerde kurdu. Iş yükünü dışarı bile birkaç gün üst üste üzerinde deneyler yürütmek planlıyoruz. 2. Çift çiftleşme Deneyler Şekil 4 14 yapılan çift çiftleşme deneylerinde yer alan ana adımları gösterir. <ol><li> 1. Gün sabahı, ilk çiftleşme kurmak. Oregon-R erkeklerin suç tayininde arkadaşı için ilk olarak. <ol><li> Aspiratör kullanarak, 10 4-5-günlük-eski beyaz gözlü w 1.118 bakire kadın ve 10 kırmızı gözlü Oregon-R naif erkek her içeren flakon kurmak. İki üç şişeleri 5 gün boyunca günlük olarak ayarlanır. Ayarlanması için flakon sayısı mevcut bireylerin sayısına bağlı olarak değişebilir. Sinekler 2 saat dostum izin verin. </li><li> Oregon-R erkek atın ve bir aspiratör (Şekil 5) kullanarak yeni bir şişenin içine her kadın yerleştirin. Seks kimlik birkaç görsel inceleme ile elde edilebilirmorfolojik farklılıklar (Şekil 2). Uygun her flakon Etiket ve 2 gün (bundan sonra &quot;v1&quot;) için flakon kadın bırakın. </li></ol></li><li> 3. Gün, ikinci çiftleşme kurmak. Kurmak erkek ve çapraz Seçim deneysel erkek türlerinin herhangi yönelik herhangi bir potansiyel sapma en aza indirmek amacıyla rastgele yapılmalıdır. <ol><li> Işığı söner iki saat önce, bir aspiratör ile yeni bir şişenin içine tekrar kadın aktarın. Uygun yeni şişe etiket (bundan sonra &quot;v2&quot;). </li><li> V2 içine aynı genotip üç 5-6-günlük eski deneysel erkek tanıtmak. </li><li> Her kadın için 2.2.1 ve 2.2.2 tekrarlayın. </li><li> 4. Gün, sağ ışık iki saat önce aspiratör kullanarak (yani 2.2.1 sonra en fazla 12 saat), atın erkek açıktır. </li></ol></li><li> Gün 6, yeni bir şişenin içine tekrar her kadın aktarın. Uygun (bundan sonra &quot;v3&quot;) yeni şişeleri etiketleyin. </li><li> Gün 10, w 1.118 atmak </&gt; kadın destek. </li><li> V2 ve v3 yavrularıyla inceleyin. Kadın v2 kadın ilk başlatan ovipositing sonra Günü 17 örneğin v2 (veya v3), içine sonra ilk inceleme 13-15 gün sonra yapılır. Ikinci muayene 17 gün sonra tam olarak gerçekleştirilir. Bu süre aynı flakon ikinci bir nesil garanti güvenli bir üst temporal sınır teşkil etmektedir. Döl sayma sağlaması ve iki denetimler aşırı kalabalık önlemek. <ol><li> Gün 17, v1 incelemek ve mevcut kırmızı gözlü döl olmadığından emin olmak, buna göre şişe işareti değilse. Hiçbir döl referans ya da deneysel erkek görülmedi ile bu çiftleşme gösterir iken beyaz gözlü döl varlığı kadın ilk çiftleşme sırasında bakire olmadığını gösterir. </li><li> Gün 17, v2 ilk muayene gerçekleştirin. Anestezisi CO 2 ile v2 döl ortaya çıkan ve göz rengi ve cinsiyete göre sıralayabilirsiniz. Ilk ve sn babası Kayıt döl numaralarıond erkek. Şekil 6, her bir birleşme düzeninin döl beklenen fenotipleri gösterir. Bu özel deneyde 14, sadece kadın döl açıkça referans ya da deneysel erkek tarafından çocuğu ve bu nedenle sadece kızları gelen bilgiler P 2 hesaplamak için kullanılabilir olarak atanabilir. Diğer işaretleri ile erkek yavru babalık açıkça atanabilir ise, her iki cinsten döl sayıları aşağı hesaplamalarda kullanılabilir. Döl atın ama ikinci muayene için v2 tutun. </li><li> Gün 20, v2 yeni ortaya çıkan döl ile 2.5.2 olarak devam ve sonra şişe atın. </li><li> Gün 20, ilk kez v3 ortaya döl kontrol ve adım 2.5.2 izleyin. </li><li> Gün 23, v3 yeni ortaya çıkan döl ile 2.5.3 olarak devam edin. </li></ol></li></ol> Not 1: Birden fazla çiftleşme olabileceğini P puanları üzerindeki potansiyel şişirme etkisi (2.2.2 ve 2.2.3) nedeniyle, çiftleşme, belirli bir zaman çerçevesi ile sınırlı olabilir. Zaman çerçevesi kadın kullanılan erkek genotipi ile ilişkili remating frekansına bağlıdır. Birden fazla çiftleşme olasılığı özel gece 11 sırasında azalır. Not 2: Bu ergin sinek sayısı düşüktür maya potansiyel büyümesi ile sorunlara neden olabilir, çünkü canlı maya pelet eklemeyin. 3. Veri Analizi <ol><li> Kaydedilen döl sayıları uygun bir istatistik paket (SAS Institute örneğin, JMP) veya ücretsiz web tabanlı araçlar (örneğin kolay görsel denetim ve verimli analizi için uygun düzenlenmelidir <a href="http://www.vassarstats.net/" target="_blank">http://vassarstats.net/</a> ). </li><li> Sperm rekabet yeteneği. V2 ve v3 gelen sayıları ekleyin. Hiç ya da çok sınırlı döl (örneğin &lt;10) yol açmıştır erkek sineklerin, işlem sırasında ölen ya da sadece başarılı insemina vardıiki erkek biri tarafından ted olmayan bilgilendirici olarak kabul edilir ve herhangi bir alt istatistiksel analiz (2.5.1 ve Tablo 2) dışındadır. Her bilgilendirici kadın için P 2 puan hesaplayın. </li><li> Karşılaştırıldığında deneysel erkekler arasında P 2 değerlerinde istatistiksel olarak anlamlı fark olup olmadığını test edin. Bu parametrik (örneğin Tukey HSD) veya P 2 değerleri dağılımının çarpıklık ve varyans ve ortalama arasındaki bağımlılık gibi çeşitli faktörlere bağlı olarak non-parametrik (örneğin Çelik-Dwass) testleri kullanılarak yapılabilir. Açısal dönüşüm genellikle parametrik testi 31 kullanım öncesinde örneğin P 2 oranlarda uygulanır. </li><li> Çiftleşme kur farkları (isteğe bağlı). Her deneysel erkek tipi için, iki kat evlendirilen kadın ve sadece ilk erkek (suçun tayininde referans erkek ve d deneysel erkek ile evlendirilen olanların sayısını hesaplamakefense tahlili). Bir iki kuyruklu Fisher testi (mevcut kullanarak <a href="http://www.langsrud.com/fisher.htm" target="_blank">http://www.langsrud.com/fisher.htm</a> ), deneysel erkeklerin iki tür arasında istatistiksel olarak anlamlı farklılık olup olmadığını belirlemek. </li><li> Cinsiyet oranı (isteğe bağlı). Her deneysel erkek için, beklenen 1:1 oranında her kadın sapma gelen döl olsun cinsiyet oranı belirlemek için ki-kare testi kullanın. </li></ol>

<ol><li>Darwin, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDarwin%2C+C+%22The+descent+of+man+and+selection+in+relation+to+sex%22">The descent of man and selection in relation to sex</a>. , John Murray. (1871).</li>
<li>Parker, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+competition+and+its+evolutionary+consequences+in+the+insects%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Sperm competition and its evolutionary consequences in the insects.</a> Biol. Rev. 45, 525-567 (1970).</li>
<li>Birkhead, T. R., Møller, A. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBirkhead%2C+TR+%22Sperm+competition+and+sexual+selection%22">Sperm competition and sexual selection</a>. , Academic Press. (1998).</li>
<li>Jones, B., Clark, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bayesian+sperm+competition+estimates%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Bayesian sperm competition estimates.</a> Genetics. 163, 1193-1199 (2003).</li>
<li>Griffiths, R. C., McKechnie, S. W., McKenzie, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+mating+and+sperm+displacement+in+natural+populations+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Theor.+Appl.+Genet%22%5BJournal%5D)">Multiple mating and sperm displacement in natural populations of Drosophila melanogaster.</a> Theor. Appl. Genet. 62, 89-96 (1982).</li>
<li>Jonsson, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+transfer%2C+storage%2C+displacement%2C+and+utilization+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Sperm transfer, storage, displacement, and utilization in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 47, 1719-1736 (1962).</li>
<li>Boorman, E., Parker, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+%28ejaculate%29+competition+in+Drosophila+melanogaster%2C+and+the+reproductive+value+of+females+to+males+in+relation+to+female+age+and+mating+status%5BTitle%5D)+AND+%22Ecol.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Sperm (ejaculate) competition in Drosophila melanogaster, and the reproductive value of females to males in relation to female age and mating status.</a> Ecol. Entomol. 1, 145-155 (1976).</li>
<li>Gromko, M. H., Gilbert, D. G., Richmond, R. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGromko%2C+MH+%22Sperm+Competition+and+the+Evolution+of+Animal+Mating+Systems%22">Sperm Competition and the Evolution of Animal Mating Systems</a>. Smith, R. L. , Academic Press. 372-427 (1984).</li>
<li>Clark, A. G., Aguade, M., Prout, T., Harshman, L. G., Langley, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variation+in+sperm+displacement+and+its+association+with+accessory+gland+protein+loci+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Variation in sperm displacement and its association with accessory gland protein loci in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 139, 189-201 (1995).</li>
<li>Clark, A. G., Begun, D. J., Prout, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+x+male+interactions+in+Drosophila+sperm+competition%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Female x male interactions in Drosophila sperm competition.</a> Science. 283, 217-220 (1999).</li>
<li>Civetta, A., Clark, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosomal+effects+on+male+and+female+components+of+sperm+precedence+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genet.+Res%22%5BJournal%5D)">Chromosomal effects on male and female components of sperm precedence in Drosophila.</a> Genet. Res. 75, 143-151 (2000).</li>
<li>Greenspan, L., Clark, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associations+between+variation+in+X+chromosome+male+reproductive+genes+and+sperm+competitive+ability+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Associations between variation in X chromosome male reproductive genes and sperm competitive ability in Drosophila melanogaster.</a> Int. J. Evol. Biol. 2011, 214280(2011).</li>
<li>Chapman, T., Neubaum, D. M., Wolfner, M. F., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+male+accessory+gland+protein+Acp36DE+in+sperm+competition+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of male accessory gland protein Acp36DE in sperm competition in Drosophila melanogaster.</a> Proc. Biol. Sci. 267, 1097-1105 (2000).</li>
<li>Yeh, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+evidence+that+a+recently+evolved+Drosophila+sperm-specific+gene+boosts+sperm+competition%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Functional evidence that a recently evolved Drosophila sperm-specific gene boosts sperm competition.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 2043-2048 (2012).</li>
<li>Pitnick, S., Markow, T. A., Spicer, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+multiple+kinds+of+female+sperm-storage+organs+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Evolution of multiple kinds of female sperm-storage organs in Drosophila.</a> Evolution. 53, 1804-1822 (1999).</li>
<li>Pitnick, S., Miller, G. T., Schneider, K., Markow, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ejaculate-female+coevolution+in+Drosophila+mojavensis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Ejaculate-female coevolution in Drosophila mojavensis.</a> Proc. Biol. Sci. 270, 1507-1512 (2003).</li>
<li>Nonidez, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+internal+phenomenon+of+reproduction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Bull%22%5BJournal%5D)">The internal phenomenon of reproduction in Drosophila.</a> Biol. Bull. 39, 207-230 (1920).</li>
<li>Miller, G. T., Pitnick, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm-female+coevolution+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Sperm-female coevolution in Drosophila.</a> Science. 298, 1230-1233 (2002).</li>
<li>Manier, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolving+mechanisms+of+competitive+fertilization+success+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Resolving mechanisms of competitive fertilization success in Drosophila melanogaster.</a> Science. 328, 354-357 (2010).</li>
<li>Simmons, L., Siva-Jothy, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSimmons%2C+L+%22Sperm+competition+and+sexual+selection%22">Sperm competition and sexual selection</a>. Birkhead, T. R., Møller, A. P. , Academic Press. 826(1998).</li>
<li>Singh, S. R., Singh, B. N., Hoenigsberg, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+remating%2C+sperm+competition+and+sexual+selection+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics+and+Molecular+Research%22%5BJournal%5D)">Female remating, sperm competition and sexual selection in Drosophila.</a> Genetics and Molecular Research. 1, 178-215 (2002).</li>
<li>Markow, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+investigation+of+the+mating+system+of+Drosophila+hydei%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">A comparative investigation of the mating system of Drosophila hydei.</a> Animal Behaviour. 33, 775-781 (1985).</li>
<li>Barbadilla, A., Quezada-Díaz, J. E., Ruiz, A., Santos, M., Fontdevila, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolutionary+history+of+Drosophila+buzzatii.+XVII.+Double+mating+and+sperm+predominance%5BTitle%5D)+AND+%22Genet.+Sel.+Evol%22%5BJournal%5D)">The evolutionary history of Drosophila buzzatii. XVII. Double mating and sperm predominance.</a> Genet. Sel. Evol. 23, 133-140 (1991).</li>
<li>Civetta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+visualization+of+sperm+competition+and+sperm+storage+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Direct visualization of sperm competition and sperm storage in Drosophila.</a> Curr. Biol. 9, 841-844 (1999).</li>
<li>Turner, M. E., Anderson, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+predominance+among+Drosophila+pseudoobscura+karyotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Sperm predominance among Drosophila pseudoobscura karyotypes.</a> Evolution. 38, 983-995 (1984).</li>
<li>Harshman, L. G., Clark, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inference+of+sperm+competition+from+broods+of+field-caught+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Inference of sperm competition from broods of field-caught Drosophila.</a> Evolution. , 1334-1341 (1998).</li>
<li>Imhof, M., Harr, B., Brem, G., Schlotterer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+mating+in+wild+Drosophila+melanogaster+revisited+by+microsatellite+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Multiple mating in wild Drosophila melanogaster revisited by microsatellite analysis.</a> Mol. Ecol. 7, 915-917 (1998).</li>
<li>Price, C. S., Dyer, K. A., Coyne, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+competition+between+Drosophila+males+involves+both+displacement+and+incapacitation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Sperm competition between Drosophila males involves both displacement and incapacitation.</a> Nature. 400, 449-452 (1999).</li>
<li>Ashburner, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAshburner%2C+M+%22Drosophila%3A+A+Laboratory+Manual%22">Drosophila: A Laboratory Manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (1989).</li>
<li>Greenspan, R. J. Fly Pushing: The Theory and Practice of Drosophila Genetics. , CSHL. (1997).</li>
<li>Sokal, R. R., Rohlf, F. J. Biometry : the principles and practice of statistics in biological research. , 3d, Freeman, W.H. (1994).</li>
<li>Clark, A. G., Begun, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+genotypes+affect+sperm+displacement+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Female genotypes affect sperm displacement in Drosophila.</a> Genetics. 149, 1487-1493 (1998).</li>
<li>Clark, A. G., Dermitzakis, E. T., Civetta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nontransitivity+of+sperm+precedence+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Nontransitivity of sperm precedence in Drosophila.</a> Evolution. 54, 1030-1035 (2000).</li>
<li>Wigby, S., Chapman, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+competition%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Sperm competition.</a> Curr. Biol. 14, 100-102 (2004).</li>
<li>Pizzari, T., Parker, G. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPizzari%2C+T+%22Sperm+biology%3A+an+evolutionary+perspective%22">Sperm biology: an evolutionary perspective</a>. Birkhead, T. R., Hosken, D. J., Pitnick, S. , Academic Press. 674(2008).</li>
<li>Ram, K. R., Wolfner, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seminar+influences%3A+Drosophila+Acps+and+the+molecular+interplay+between+males+and+females+during+reproduction%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Comp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Seminar influences: Drosophila Acps and the molecular interplay between males and females during reproduction.</a> Integr. Comp. Biol. 47, 427-445 (2007).</li>
<li>Civetta, A., Rosing, K. R., Fisher, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+sperm+competition+and+sperm+competition+avoidance+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Differences in sperm competition and sperm competition avoidance in Drosophila melanogaster.</a> Animal Behaviour. 75, 1739-1746 (2008).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Biz genetik olarak farklı göreli katkısı farklılıkları değerlendirmek için deneysel tasarım nitelendirdiler D. kontrollü çift çiftleşme deneyler 7,8 olarak döl için melanogaster erkek. Bu sperm rekabet yeteneği etkilemek için ve benzer bir prosedür savunma testi (Şekil 1) için de geçerlidir rağmen suçun testi içinde gösterildiği olmuştur hipotezi bir genetik faktör bağlamında yapılmıştır. Bu deneysel tasarım gibi kadın genotip 32&#39;nin etkisi olarak babalık başa...

Geoff Parker böcekler ve evrimsel etkileri 2 sperm rekabet yaygınlığı kaydetti yana, Drosophila ve diğer türlerde çalışmalar büyük bir artış çok farklı düzeylerde bu olay biraz ışık tutmak için çalıştık. Ilgi alanları bazı örnekler doğal nüfus 9,10, genetik mimarisi ve genetik faktörler 11-14 altta yatan önemi ve cinsiyetler 15,16 arasında birlikte evrim sürüş rolünü kendi varyasyon ve diğer detaylar olmuştur. D. melanogaster kadın, özel sperm depolama organların sınırlı kapasitesi, sperm kesesi ve seminal priz 6,17 bir çift, farklı erkeklerden sperm rekabete katkıda bulunmaktadır. Yaklaşık 1.500 sperm söz konusu organların 18,19 konaklayabilir kadın ama sadece ~ 500 için çiftleşme sırasında aktarılır. Laboratuar, kontrollü çift çiftleşme deneysel olarakBir referans erkek ve ilgilenilen bir veya daha fazla erkek içeren ments yaygın sperm rekabet yeteneği 7,8 değerlendirmek için kullanılmıştır. Sperm rekabet yeteneği toplam soyu üzerinde çift çiftleşme deneylerde deneysel erkek tarafından çocuğu döl oranı olarak tahmin, yani bu deneysel ve referans erkeklerde hem de. Edilir Sperm rekabet yeteneği, iki bileşen ayrı bir deneyde değerlendirilen her biri oluşur. Hücum deneyde, birinci erkek gelen sperm yerinden için deneysel erkek sperm yeteneği, referans erkek yani değerlendirilir. Tersine, savunma deneyde, Deney erkek sperm yeteneği yerinden karşı veya referans erkek sperm dölleme oranı azaltmak için değerlendirilir. Tahlil, savunma ya da suç türüne bağlı olarak, sperm rekabet yeteneği puanları P 1 ve P 2, sırasıyla ile tahmin edilmektedir. P1 ve P 2 0 ile 1 arasında değerler sadece alabilir. Ara değerler genellikle doğrudan sperm rekabet içeren fizyolojik bir senaryo göstermektedir sperm karıştırma, dolaylı kanıt olarak yorumlanır. Aynı mantığı ardından, uç değerler güçlü diferansiyel sperm rekabet yeteneği delil olarak yorumlanabilir. İlk çalışmalar göstermiştir ki D P 2 melanogaster 7 uzatır iki çiftleşme arasında geçen süre olarak artan 0.8 bitti. Bu aynı deney tasarımı diğer Drosophila türlerinde kullanılmıştır, P 2 sperm rekabet yeteneği 20 değerlendirmek için çalışmalarda yaygın olarak kullanılan istatistik olmaktan. Çoğu tür için, test edilen suşların p 2 değerleri 0.6 21 daha yüksektir. Bununla birlikte, farklı erkeklerin sperm arasındaki doğrudan rekabet ilgisiz birçok mekanizma aynı puanları (Tartışma) verebilir. Dbirinci ya da ikinci erkek tarafından çocuğu istinguishing soyu kolayca tanımlanabilir markerlerin kullanımı ile mümkündür. Erken çalışmalarda, erkeklerin birinin öldürücü dozlarda ışınlanmış edildi, örneğin, X-ışınları gibi ışınlanmış sperm tarafından döllenmiş hemen hemen tüm ova 7 yumurtadan için başarısız olduğunu. Daha sonra, göz pigmentasyon veya kanat şeklini değiştiren mutasyonlar en yaygın olarak kullanılan belirteçler olmuştur. Eski örnekleri mutasyonlar BW (kahverengi) 9, CN (zencefil) 22 ve W (beyaz) 23 fenotipleri ikinci tip mutasyon Cy (Kıvrımlı) 24 tekabül ederken, bu mutasyonların bazıları birleştirilmiştir Aynı kişi, örneğin cn bw. Daha az ölçüde, allozimler 25 ve bilinen kalıtım desenleri ile Mikrosatellitlerin 26,27 da kullanılmıştır. Farklılıkları test etmek için deney tasarımıSperm rekabet yeteneği, Clark ve ark, esasen burada aşağıda açıklandığı. 9. Bu deneylerden elde edilen sonuçlar sadece inceleme altında deneysel erkek tiplerinin ayırıcı babalık hakkında bilgi vermek. Ayrıca spor 14,28 ve sperm görselleştirme teknikleri 24 sonrası döllenme farklılıkları hesaba katmak Tahliller P 1 farklılıklar (veya P 2) puanları sperm yeterlilik farklılıklar olarak yorumlanabilir sağlar. Şekil 1 suç ve savunma deneyleri hem de mantığı özetliyor. Sürecin lojistik göstermek için, bir suç deney D. gerçekleştirilen melanogaster 14 ayrıntılı olarak açıklanacaktır. Bu özel suç test sperm rekabet yeteneği multigen aile Sperm özel dynein ara zinciri (Sdic) ölçülebilir bir etkisi test etmek için kullanılmıştır. Tüm üyeBu multigen ailenin s X kromozomu üzerinde tandem bulunur. Nakavt erkek Sdic küme silerek oluşturulmuştur. Silinen bölümü de temel gen kısa kanat (sw) dahil ve çalışmanın amacı Sdic bir alaka değerlendirmek olduğu için, Sdic-sw silme taşıyan erkek (P {sw} olarak sembolize sw bir transgenik kopyasını tarafından kurtarıldı , ayrıca kromozom 2 bir mini-beyaz muhabiri gen) yapılan hangi. Göz rengi babalık tanımlanması için görünür bir marker olarak kullanılmıştır. Tüm referans sinekler erkek olarak kullanılmıştır suşu Oregon-R, o dışında beyaz bir mutant arka edildi.

<table><tbody><tr><td>Amber lateks boru</td><td>VWR</td><td>62996-473</td><td>1/4 inç ID, 1/6 inç Duvar</td></tr><tr><td>1 ml dereceli XL filtre uçları</td><td>USA Scientific</td><td>1126-7810</td><td>Herhangi bir 1 ml pipet ucu kullanılabilir, ancak yarı saydam ve uzun uçlar sinek alıcısı olarak daha iyidir. Filtre uçları kullanılıyorsa, uç ucu kesildikten sonra bir iğne kullanarak filtreyi dışarı çıkarın ve atın</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Sigma</td><td>P-7793</td><td></td></tr><tr><td>Örgü Kumaş</td><td></td><td></td><td>İnce ve pürüzsüz</td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Leica</td><td>S6D</td><td></td></tr><tr><td>CO2 Tank</td><td>Hava Gazı</td><td>CD-50</td><td>CO2 mevcut değilse alternatif olarak FlyNap (Carolina Biological Supply Company) kullanın</td></tr><tr><td>FlyStuff Ayak Valfi, komple sistem</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-121C</td><td>FlyNap kullanılıyorsa gerekli değildir</td></tr><tr><td>Plastik şişeler</td><td>Genesee Scientific</td><td>32-109</td><td>Şişeleri tutmak için yeniden kullanılabilen karton tepsilerle birlikte gelin</td></tr><tr><td>Pamuk topları</td><td>Fisher Scientific</td><td>AS-212</td><td></td></tr><tr><td>Aktif kuru maya</td><td>Kızıl Yıldız</td><td></td><td>Genel bakkalda bulunur</td></tr><tr><td>Sharpie işaretleyicileri</td><td></td><td></td><td>Farklı genotipleri işaretlemek için farklı renkler kullanılabilir</td></tr></tbody></table>

sperm rekabet yeteneği in değerlendirilmesi farklılıklar<em&gt; drosophila</em

Assessing Differences in Sperm Competitive Ability in Drosophila

Ova Gübreleme conspecific erkekler arasında rekabet cinsel seleksiyon mekanizmalarıyla biri değil, en üst düzeye hayatta kalma ve canlılığı 1 daha başarılı çiftleşme olay sayısı maksimize çalışan yani seçimidir. Sperm rekabeti kendi sperm zaman ve mekan içinde tesadüfi olduğu aynı kadın 2, çiftleşme sonrası erkek arasındaki rekabet temsil eder. Bu olgu, bitki ve hayvan 3 birden fazla tür bildirilmiştir. Örneğin, vahşi yakalanmış D. melanogaster kadın genellikle 2-3 erkek 4 sperm içerir. Sperm farklı erkek 2,5 gelen sperm doğrudan rekabet unsuru doğurabilecek sınırlı depolama kapasitesi ile özel organlarda depolanır. Farklı ilgi erkek (deneysel erkek türleri) sperm rekabet yeteneği karşılaştıran kontrollü çift çiftleşme deneysel ile yapılmıştırlaboratuvar 6,7 olarak ts. Kısaca, tek bir kadın arka arkaya iki farklı erkek, bir deneysel erkek ve bir çapraz çiftleşme referans erkek maruz kalmaktadır. Aynı çiftleşme düzeni daha sonra bu nedenle ortak bir referans yoluyla sperm rekabet yeteneği dolaylı karşılaştırma kolaylaştıran diğer deneysel erkek türleri ile takip edilmektedir. Deney ve referans erkekler tarafından babası bireylerin kısmını basit bir matematiksel ifadeler 7,8 kullanarak sperm rekabet yeteneği tahmin sağlar işaretleri kullanılarak tanımlanır. Buna ek olarak, sperm rekabet yeteneği deneysel erkek farklı yeterlilik özelliklerini yansıtıcı olduğu varsayılır arkadaşı (sırasıyla suç ve savunma testi,) 9, ikinci ya da ilk olmasına bağlı olarak iki farklı senaryolarda tahmin edilebilir. Burada, kabul görmüş t altında yatan farklı genetik faktörlerin rolü sorgulamak için yardımcı olan bir yaklaşım tarifD. sperm rekabet yeteneği o fenomen melanogaster.

Tablo 2 iki suç deney bazı belirgin özellikleri (Tahliller 1 ve 2) özetlemektedir hangi D. ve (sırasıyla, Tip I ve II) bir fonksiyonel Sdic yığılım melanogaster deneysel erkeklerde 14 karşılaştırılmıştır. Dikkate bazı çoğaltır karşılaşılan farklı olaylar aldıktan sonra, kadınların 58-83% bilgilendirici ve bu nedenle döl babalık sayıları P 2 hesaplamak için kullanılabilir olduğu tespit edildi. Parametrik olmayan test sonuçları, sağlam kümesi ile erkek (Tip...

Arasında Diferansiyel sperm rekabet yeteneği<em&gt; Drosophila</emFarklı genotipleri ile&gt; erkek çift çiftleşme deneyler ile tespit edilebilir. Bu deneylerin her biri ilgi ve bir referans erkek erkek biri içerir. Döl içinde kolaylıkla tespit işaretleri her erkek tarafından babası bireylerin fraksiyonu çıkarım sağlar.

Sperm Rekabet Yeteneği in değerlendirilmesi farklılıklar<em&gt; Drosophila</em

Competition among conspecific males for fertilizing the ova is one of the mechanisms of sexual selection, i.e. selection that operates on maximizing the ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, farklı genotiplere sahip drosophila, melanogaster erkekleri arasındaki sperm rekabet yeteneği farklarını test etmektir. Bu işlem, iki farklı erkekle çiftleşmiş bir dişiden doğan yavruların babalığını belirleyen görünür genetik belirteçlerin takibiyle gerçekleştirilir; deneydeki dişilerin öncelikle bir referans erkekle, ardından bir deney erkeğiyle çiftleşmesine izin verilir. Deney erkeği tarafından babalık yapılan yavruların oranı, yavruların göz renklerinin incelenmesiyle belirlenir.Sonuçlar, deneysel erkek spermlerinin rekabet yeteneğini, referans erkek spermlerine göre sergiledikleri göreceli performans üzerinden dolaylı olarak karşılaştırır. Bu yöntemler, bir genetik faktörün SPR rekabet yeteneği üzerindeki etkisini değerlendirmek gibi biyolojideki genetik ve evrim alanlarındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir; bu prosedür laboratuvarımızdaki S ve lisans öğrencilerine gösterilecektir. Aşağıdaki protokol, muhtemelen sperm motilitesinde rol oynayan bir proteini kodlayan sic adlı genetik faktörün analizini örneklendirmektedir.Her bir tüp için 15 ila 20 tüp hazırlayarak başlayın. Besiyerinin üzerine birkaç adet kurutulmuş aktif maya p

assessing-differences-in-sperm-competitive-ability-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Drosophila melanogaster bir yüzyıl 1 aşkın süredir birçok önemli biyolojik işlemlerin moleküler ve hücresel temelini anlamak için kullanılan bir genetik ve davranışsal uysal modeli sistemidir. Drosophila iyi sinek davranışının genetik temeli içgörü kazanmak için istismar edilmiştir.

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Bu video makalede, Drosophila melanogaster uçmak yetişkin meyve koku bağımlı gıda arama davranışı üzerine açlık veya tokluk etkisini ölçmek için otomatik bir deneyi açıklar.

Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi Drosophila

Izole edilmesi ve faz kontrast ve floresan mikroskobu ile görüntüleme için Drosophila testis örnekleri (canlı ve sabit) hazırlanması için yöntemler burada tarif edilmiştir.

Spermatogenez sitolojik analizi: Canlı ve Sabit Hazırlıklar<em&gt; Drosophila</em&gt; Testisler

Bu protokol, Drosophila veya diğer böcekleri tek tek tanımlamanın basit, uygun maliyetli bir yolunu açıklar. Üç Drosophila türünde çiftleşme başarısını araştıran gösteri verileri, bu yöntemin CO2 anestezisinin kullanımıyla karşılaştırılabilir veya daha iyi olduğunu göstermektedir.

Davranış Tahliller için Boyama Böcekler: anestezi ve Çiftleşme Davranışı<em&gt; Drosophila</em

Meyve sırasında davranış kalıpları dinamikleri mücadele, gözlenen ve ilişkili öğrenme ve bellek deneysel koşullar etkilenmiştir, kavgalar sinek. Burada sunulan protokol tamamen deneyler sırasında sinekler işlenmesini ortadan kaldıran yeni bir yordam açıklanır. Bu mücadele dinamikleri geliştirir ve güçlü "kaybeden" etkilerinin oluşumunu verir.

Saldırganlık incelenmesi için Handling ortadan kaldırır Yeni Bir Yaklaşım ve &quot;Loser&quot; Etkisi içinde<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Bu protokol, Drosophila melanogaster'in yumurtlama tercihlerini tek hayvan çözünürlüğünde test etmek için yüksek verimli bir testi tanımlar.  Bu tahlil, basit bir karar verme sürecini kontrol eden genleri ve devre bileşenlerini tanımlamak için basit, verimli ve ölçeklenebilir bir platform sağlar.

Yüksek Verimli Testi Bireyin Yumurta Yumurtlayan Tercihler incelemek için<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Bu makale melanogaste motivasyon incelemek için r Drosophila erkek çiftleşme sürücüsünü kullanan bir davranış deneyi anlatır. Bu yöntemi kullanarak, araştırmacılar bu motivasyonu altında yatan genetik moleküler ve hücresel mekanizmaları ortaya çıkarmak için ileri sinek neurogenetic teknikler kullanabilirler.

Ölçme ve Male Değiştirme Çiftleşme Sürücü<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster meyve sinekinde çiftleşme davranışını etkileyen çevresel ve genetik ipuçlarını analiz etmeye yönelik bir analiz yapacağız.

Çevresel İpuçlarının Eklem Davranışı Üzerine Etkisini Test Etmek İçin Bir Yöntem<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Bu protokol, kur şartlama denilen bir Drosophila öğrenme ve bellek deneyi tanımlar. Bu klasik tahlil, resepsiyona açık olmayan prematüre bir kadının cinsel reddetmesinden sonra erkek kovuşturma davranışının azaltılmasına dayanmaktadır. Davranışsal esnekliğin bu doğal biçimi, öğrenmeyi, kısa vadeli belleği ve uzun süreli belleği test etmek için kullanılabilir.

Öğrenme ve Bellek Tedrisi Olan Drosophila Kurbanlığı İklimlendirme

Sperm, bir ooksit döllemek için ovidukt üzerinden başarılı bir şekilde gezinmelidir. Burada, C. elegans hermafrodit uterusun içinde sperm göçünü ölçmek için bir tahlil açıklanmaktadır. Bu tahlil çiftleşme sonra rahim içinde sperm dağılımı nicel veri sağlayabilir, yanı sıra hız, yönlü hız, ve ters frekans.

Ölçme sperm rehberlik ve motilite içinde Caenorhabditis elegans hermafrodit üreme yolu

Burada, erkek Aedes aegypti'nin çiftleşme rekabet gücünün bir işaretleyici olarak floresan boyası kullanılarak incelenmesi için bir protokol sunuyoruz. Dişi sivrisinekler çiftleşme için hem işaretli hem de işaretlenmemiş erkeklere maruz kalır. Çiftleşme sonrası spermathecae'leri çiftleşme partnerlerini belirlemek için floresan mikroskop altında incelenir.

Erkek Aedes aegypti Sivrisineklerinde Çiftleşme Rekabet Gücünü Incelemek için Floresan Boyası Rhodamine B'yi Kullanmak

Öğrenin Drosophila melanogaster erkeklerinde çift eşleşme deneyleriyle sperm rekabet yeteneği farklılıklarını nasıl değerlendireceğinizi. Göz rengi belirteçleriyle babalık analizi yaparak genetik faktörlerin üreme başarısı üzerindeki etkisini keşfedin.

Sperm Rekabet Yeteneği in değerlendirilmesi farklılıklar

Daha fazla video keşfet