Sperm Rekabet Yeteneği in değerlendirilmesi farklılıklar Drosophila

Aşağıdaki deneyin genel amacı, farklı genotiplere sahip drosophila, melanogaster erkekleri arasında sperm rekabet yeteneğindeki farklılıkları test etmektir. Bu, iki farklı erkekle çiftleşen bir dişiden, tahlildeki genotiplerden döllerin babalığını tanımlayan görünür genetik belirteçlerin izlenmesiyle elde edilir, dişilerin önce bir referans erkekle çiftleşmesine izin verilir ve daha sonra deneysel bir erkekle çiftleşmesine izin verilir. Deney erkeği tarafından beslenen yavruların oranı, döllerin göz renginin incelenmesiyle çıkarılır.

Sonuçlar, deneysel erkek sperminin rekabet kabiliyetini, referans erkek spermine olan göreceli performanslarına göre dolaylı olarak karşılaştırır. Bu yöntemler, biyoloji alanlarındaki genetik ve evrimdeki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir, örneğin genetik bir faktörün SPR rekabet yeteneği üzerindeki etkisinin değerlendirilmesi gibi, bu prosedürün laboratuvarımızdan S ve lisans öğrencileri olacağını göstermektedir. Aşağıdaki protokol, muhtemelen sperm motilitesinde yer alan bir proteini kodlayan sic adı verilen bir genetik faktörün analizini göstermektedir.

Her şişeye 15 ila 20 şişe ayarlayarak başlayın. Ortama birkaç kurutulmuş aktif maya peleti serpin. Ove pozisyonunu kolaylaştırmak için.

Her zaman mısır unu mayası ortamı gibi taze besleyici ortamlar kullanın. Sonra her şişeye sekiz ila 10 dişi ekleyin, ancak daha fazla değil ve beş erkek ekleyin. Cinsiyet tanımlaması, birkaç morfolojik farklılığın görsel olarak incelenmesiyle elde edilebilir.

Şişeleri 25 santigrat derecede saklayın ve yetişkinleri en az üç ila beş günde bir yeni şişelere aktarın. En iyi sonuç için yetişkinleri her gün transfer edin. Dölleri hasat etmek için yumurta içeren şişeleri saklayın.

Gerekli flakon sayısı, çalışmadaki deneysel erkek tiplerinin sayısına ve istatistiksel güç için gereken tahmini birey sayısına bağlı olacaktır. Ebeveynler bir şişeden transfer edildikten dört veya beş gün sonra, ortama çok katlanmış bir kağıt yerleştirerek şişedeki pupa için mevcut yüzeyi artırın. Görünür olduklarında koyulaşmış pupa için şişeleri inceleyin.

Bu sinekler, haçın ilk kurulmasından 11 ila 12 gün sonra, 24 saat içinde ortaya çıkacaktır. Bu şişelerden bakire dişileri ve saf erkekleri hasat etmeye başlayın. Sabah ilk iş, bir gecede ortaya çıkan sinekleri atın.

Daha sonra dört ila altı saatlik aralıklarla gün boyunca bir veya iki kez, şişelerden sinekleri toplayın, şişeye karbondioksit vererek sinekleri uyuşturun. Sonra sinekleri yere vurun ve stereo mikroskop altında seks yapın. İstenilen sinekleri cinsiyet ve fenotipe göre farklı şişelere yerleştirin ve şişeleri uygun şekilde etiketleyin.

Şişeleri potansiyel olarak 10'dan fazla yüklemeyin. Bakire dişiler, tıkanma zamanlarını sizin yararınıza düzenlemek için sinekler üzerinde 12 ila 12 açık karanlık bir döngü ayarlar. Oklüzyonun zirve zamanları, öznel şafaktan bir ila iki saat sonra ve ışıklar kapatılmadan iki saat önce meydana gelir.

Bu deneyin iki versiyonu var. Bunlara suç tahlili ve savunma tahlili denir. Bu bölüm, ilk günün sabahında suç testinin nasıl yapılacağını, bir aspiratör kullanarak ilk çiftleşmenin nasıl kurulacağını açıklar.

Bir aspiratör, aspire edilmiş sinekleri uçta tutan bir barikat ile bir pipet ucuna bağlı bir boru parçasından oluşur. Ucun deliği genişletilir. Sinekler için on, dört veya beş günlük bakire dişi içeren şişeler hazırlayın.

10 saf referans erkekle, art arda beş gün boyunca günde iki ila üç şişe kurdu. Her flakon için, sineklerin iki saat çiftleşmesine izin verin, daha sonra referans erkekleri atın ve her dişi bir aspiratör kullanarak yeni bir flakona aktarın, her flakon V bir olarak etiketleyin ve dişiyi iki gün boyunca flakonda bırakın. Üçüncü gün, her dişi için diğer genotipin saf erkeklerine ikinci çiftleşmeyi ayarlayın.

Subjektif akşam karanlığından iki saat önce, dişiyi aynı genotipe sahip üç, beş veya altı günlük deneysel erkeklerle yeni bir şişeye aktarmak için bir aspiratör kullanın. Şişeleri erkek genotiple etiketleyin ve yeni şişeyi V iki olarak etiketleyin. Ertesi sabah dördüncü gün.

Sineklerden iki saat önce subjektif, şafak aspiratörü kullanarak erkekleri atın. Altıncı günde, her dişi V üç etiketli başka bir yeni şişeye aktarın. 10. günde, dişileri 17. günde atın.

V bir şişeyi dölden itibaren inceleyin. Dişinin referans postasıyla çiftleştirildiğinde bakire olup olmadığını ve referans postayla çiftleşip çiftleşmediğini belirleyin. Aynı gün, sinekleri karbonla yere sererek V iki şişeden dölleri inceleyin.

Onları göz rengine ve cinsiyete göre sıralayın. Daha sonra birinci ve ikinci erkeklerin babası olan döl sayısını kaydedin. Bu deneyde, yalnızca dişi döller, referans veya deney erkekleri tarafından belirtildiği gibi açık bir şekilde atanabilir.

Diğer deneylerde, erkek yavruların babalığını belirlemek için farklı genetik belirteçler de kullanılabilir. İncelenen dölleri atın, ancak V iki şişeyi bir saniye tutun. 20. gündeki muayene, V iki şişeden döllerin babalığını ikinci kez kaydedin ve V üç şişeden çıkan döllerin ilk incelemesini yapın.

Daha sonra üç gün sonra 23. günde, ortaya çıkan dölleri V 3'te inceleyin. Yine, kaydedilen döl sayımları, her dişi için istatistiksel bir paket ve V iki ve V üç sayımları ile kolay görsel inceleme ve verimli analiz için uygun şekilde düzenlenmelidir. Referans erkek ve deney erkeği tarafından belirtilen toplam döl sayısını hesaplamak için, deney erkeğinin hem deney hem de referans erkeklerden gelen döllere oranı olarak her dişi için P iki puanını hesaplayın.

Bazı dişiler analizden çıkarılmalıdır. Birincisi, döl olmayan veya çok sınırlı döl olanlar, işlem sırasında ölen ikinci dişiler ve sadece iki erkekten biri tarafından başarılı bir şekilde tohumlanan üçüncü dişiler. P iki değerindeki istatistiksel farklılıkları arayın.

Deneysel erkek türleri arasında, P iki değer dağılımının çarpıklığına ve varyans ile ortalama oran arasındaki bağımlılığa dayalı parametrik veya parametrik olmayan testler kullanın. Veriler genellikle normal olarak dağıtılmaz. Açısal dönüşüm olarak da bilinen yay işareti dönüşümü, bir öğrencinin T-testinden veya bir NOVA testinden önce orijinal P iki değerine uygulanabilir veya basitçe drosophila melanogaster ile WIL Coxin iki hücum deneyi gibi parametrik olmayan testleri kullanabilir.

Deneysel erkekler, fonksiyonel bir ESIC kümesi olmadan biri ile ve diğeri olmadan gerçekleştirildi. Toplamda, kadınların %58 ila %83'ü bilgilendiriciydi. Fonksiyonel bir ESIC kümesi olmayan erkekler, sağlam ESIC kümesine sahip erkeklere kıyasla anlamlı derecede düşük P iki skoru gösterdi.

Bu, SIC kümesinin spermin rekabet yeteneğini artırdığını gösterir. Bu videoyu izledikten sonra, çift çiftleşme deneylerinin nasıl yapıldığını iyi anlamış olmalısınız, böylece mutant ve kontrol erkekleri arasındaki sperm rekabet yeteneğindeki farklılıkları tespit edebilirsiniz.