Name: Prostat Karsinogenezde ve İyi Huylu Prostat Büyümesi ve Değerlendirilmesi için böbrek Kapsül Xenografting ve Derialtı Pelet İmplantasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-28T14:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 38 s
Description: Öğrenin, böbrek kapsülü ksenogrefti ve derialtı hormon pelleti implantasyonu ile prostat karsinogenezini ve iyi huylu büyümeyi değerlendirme yöntemini. Bu teknik sürekli hormon uygulaması ve ksenogreft büyümesi analizi için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar geçmiş ve şimdiki Ricke laboratuarında tüm üyelerine teşekkür etmek istiyorum. Biz protokolü ile ilgili faydalı yorumları için, Calvin Patten, Jr, DVM ve Brigitte Raabe, DVM teşekkür ederim. R01DK093690, R01CA123199, RC2ESO18764: Biz bu çalışmalar için mali destek için ettirmeniz, NCI ve NIEHS kabul etmek istiyorum. TMN NIH T32 GM07356 tarafından finanse Rochester Üniversitesi Tıp Bilim Adamı Yetiştirme Programı bir stajyer, Ruth L. Kirschstein Ulusal Araştırma Hizmet Ödülü F30DK093173 altında NIH de bu projeyi destekliyor. CDV Wisconsin-Madison Üniversitesi&#39;nde T32ES007015 tarafından desteklenen T32CA157322 ve ABT tarafından desteklenmektedir. Içeriği sadece yazarların sorumluluğundadır ve mutlaka Genel Tıp Bilimleri veya NIH Ulusal Enstitüsü resmi görüşlerini temsil etmemektedir.

1.. Sıkıştırılmış Hormon / Drug Pellet hazırlanması <ol><li> Bir laboratuvar önlüğü, eldiven, maske, koruyucu gözlük ve bone Bu prosedür, bir kimyasal güvenlik kabini yapılmalıdır. Çapraz kontaminasyonu önlemek için, topak yapma makineleri önce iyice% 70 etanol ile ve pelletin her tür imalattan sonra temizlenir önemlidir. </li><li> Analitik ölçek kullanarak ve kağıt ağırlığı hormon / ilaç tozu istenilen miktarını ölçmek. Yaklaşık% 5 fazla presleme işlemi sırasında malzeme kaybı karşılamak için tavsiye edilir. </li><li> Bazı hormonları / ilaçların üretimi pelet önce karıştırılır, bir bağlayıcı madde veya dolgu maddesi gerektirir. Örneğin, 17β-estradiol, 2.5 mg pelet üretimi için, bir 25 mg pelet sonuçlanan kolesterol 22.5 mg, hormon ile birleştirir. </li><li> Dikkatle pres altında kalıp seti, yerine aktarmak ve pelet sıkıştırmak için sıkıca kolu aşağıya doğru bastırın. Olan sabit yüzey bakımı tutarlı basınç kullanınhacim oranı. </li><li> Sonraki kalıp yuvasını ters ve pelet serbest bırakmak için tekrar aşağıya kolu itin. </li><li> Bütünlüğü için pelet kontrol edin ve son kütle istenen aralıkta olup olmadığını belirlemek. Kabul edilebilir bir aralık (örneğin, 25 mg pelet için kabul edilebilir bir aralık 23,8-26,3 mg), nihai kütlesinde bir ±% 5 farktır. </li><li> Peletler ameliyat öncesi yapılan ve (koşulları ve depolama süresi pelet üretiminde kullanılan hormon ya da ilaç stabilitesi bağlı olarak) saklanabilir. Hormon granül üretim pelet alternatif olarak satın alınabilir. Pelet Satınalma onlar formüle ve bileşik olacağından olmayan ilaç sınıf ilaçların kullanımını önler. </li></ol> 2. Hücre Rekombinant ksenogratflarının hazırlanması <ol><li> Hasat ve kültürü birincil fare ürogenital mesenkimi (UGM) sayımı için toplanan edilmeden önce en az 4 hafta boyunca stromal hücreler. </li><li> Kültür olağan zahmet prostat epitelial hücre hatları ölümsüzleştirilmişiyon ve sayımı için toplamak. Bu örnek için, süspansiyon içinde greft başına 250,000 UGM stromal hücreleri ile greft başına 100,000 BPH-1 epitel hücreleri karıştırılarak yeniden birleştirici hücre greft hazırlar. </li><li> Pelet hücreler bir araya ve 50 ul 25 ul bir hacim içinde greft arzu edilen sayıda, her biri için yeterli nötralize tip 1 fare kuyruk kolajeni yeniden askıya. </li><li> 15 dakika boyunca 37 ° C &#39;de yeniden birleştirici greft ayarlama ve daha sonra aşılama öncesi kadar 48 saat boyunca 37 ° C&#39;de depolama için büyüme ortamı ile kaplayın. </li></ol> 3. Doku ksenogratflarının hazırlanması <ol><li> Doku alımı ve cerrahi işlem sırasında kan yoluyla bulaşan patojenlere için evrensel önlemleri koruyun. Kurumsal inceleme kurulu onayı ve bilgilendirilmiş rıza takiben, cerrahi rezeksiyon taze prostat dokusu elde. BPH büyüme incelemeler için dokular, prostat veya basit prosedürlerin prostatektomi, transüretral rezeksiyon hasat edilebilir. SKHA veya benign prost birincil ksenogratflardıryedik doku radikal prostatektomi örneklerinde elde edilebilir. </li><li> Mağaza izotonik tamponlu hücre medya veya buz üzerinde normal serum fizyolojik doku hasat. Doku ve depolama koşullarına bağlı olarak, numuneler önce, doku grefti hazırlanmasına kadar 24 saat süre ile depolanabilir. Yaygın uygulama formalin içinde sabitlenmiş ve rutin histoloji için işlenen bir bölümünde, üç adet numune halinde bölmek için, tek parça moleküler analiz için dondurulmuş ve bir parçası ayrıca doku ksenograftlarda (boyut olarak 1-3 mm) ayrıldı geçmeli. </li></ol> 4. Ateş hazırlanması Cam Pipet Cilalı <ol><li> Giyen göz koruması, laboratuvar mont ve ısıya dayanıklı eldiven, yaklaşık Bunsen beki alevi başlatmak için bir 60 ° açı içine yer cam Pasteur pipet. </li><li> Sıcak noktalar önlemek amacıyla pipet için bir sabit, hafif bir hareket tutun. </li><li> Amaç bir yuvarlak ile bir hafif kavisli uç olmanın ince ucu ve yangın lehçe çizmek, ucu kapalı. </li></ol&gt; 5. Araçların Hazırlanması ve Cerrahi Suite <ol><li> Bütün aletleri otoklavlayın. Ameliyat öncesinde, steril alanı korumak için özen, tüm araçları kontrol edin. </li><li> Emici pedler, diseksiyon kapsamı, anestezi burun konisi, cerrahi aletler ve çalışma alanı yönelmiş ısıtma lambası ile steril cerrahi alanı kurmak. Farelerde, ön ısıtılması boncuk sterilizatör arasında aletleri sterilize. </li><li> Montaj ve test anestezi cihazı; gaz skavenjeri tartın. </li><li> Tüm balmumu eşit eriyene kadar,% 70-80 güçte (eritilir ve erimemiş balmumu birleştirmek amacıyla balmumu ped yoğurma 1 dakika aralıklarla,) kadar 5 dakika boyunca mikrodalga fırın, ısı yastıkları balmumu kullanılması. Dokunarak, ped boş kemirgen kurtarma kafesinin altında çok sıcak ve yer değil emin olun. </li><li> Cerrahi maske, bone, eldiven ve önlük gibi kemirgen cerrahi işlemler, Don kişisel koruyucu ekipman. </li></ol> 6. Cerrahi Prosedür: Böbrek Kapsül Xenografting<ol><li> Araştırma hayvanları içeren tüm işlemler kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitelerinin onayı ile yapılmalıdır. Önce anestezi indüksiyon, sağlık ve refahını sağlamak için fareyi gözlemlemek. </li><li> % 3-5 izofluran anestezi için odasına fare yerleştirin. Hayvan hareket durdu ve solunum hızı düştüğünde, yüzüstü pozisyonda burun konisi transfer, ve% 1-3 anestezi korumak. </li><li> Gerekirse, fare geri tıraş için makasları kullanın. Atimik çıplak (nu / nu) fareler kullanılarak, bu gerekli değildir. </li><li> Anestezi yeterliliğini değerlendirmek için uzatılmış arka ayak dokumasında firma basınç uygulayın. Fare basınca yanıt verirse, daha fazla zaman etkili olması için anestezi gereklidir. Eğer gerekli ise, uygun bir anestezi elde etmek için hafifçe anestezi akışını ayarlamak. </li><li> Fare anestezi yeterli olduğunda, cerrahi, ardından bir iyot karışımı (Betadine) çözeltisi ile cerrahi sitesi dezenfekte% 70 alkol. </li><li> Don steril eldiven ve önlük, cerrahi bölgeye steril örtüler geçerlidir. Dişli forseps bir çift ile geri cilt kaldırın ve makas kullanılarak kaba bir 2-3 cm dorsal orta hat kesi yapmak. </li><li> Künt makas veya bir sonda kullanarak, (bilateral aşılama için kesiğin her iki tarafında tek taraflı ya da aşılama için, bir tarafta) gövde duvarının arasındaki temel dermis ayırın. </li><li> Lateral pozisyon içine fare konumlandırmak ve kas duvarından böbrek profilini görüntüleyerek böbreğin yerini belirlemek. Karın üzerine başparmak ve işaret parmağı ile elle basınç uygulayarak iç organları görselleştirmek yardımcı olabilir. </li><li> Ince iris makası kullanarak ve omurga vücut duvarı paralel bir 1 cm kesi yapmak, büyük damarları ve sinirleri spinal önlemek için dikkat çekici. Yavaşça başlangıç ​​kesi yerleştirmeden sonra makas geniş açarak (böbreğin uzun eksenine göre biraz daha uzun) 1.5-2.0 sm Bu kesi Widen. </li><li> Işaret parmağı ve başparmak ile böbrek her iki tarafında kas duvarın dışında hafif bir basınç uygulayarak böbrek Exteriorize. Tuck cilt vücut duvarı üzerinde kalacak olan, batın böbrek altında kenarları. Böbrek dışarıya alınır birlikte, steril tuzlu su uygulanarak renal kapsülün hidrasyon korumak. </li><li> Ince 5. forseps kullanarak hafifçe böbrek parankimi gelen böbrek kapsülü kaldırın ve ince neşter ile, kapsülde 2 -4 mm kesi yapmak. Kesiğin boyutunun greft boyutuna göre belirlenir, ancak kapsülün bütünlüğünü korumak için en aza düşürülmesi gerekmektedir. </li><li> Böbrek yüzeyine teğet olan kapsül altında bir yuvarlak kapalı uç ile ince ve yangın parlatılmış çizilmiş, bir cam Pasteur pipet işleyin. Yavaşça böbrek parankimi zarar vermemeye büyük özen kullanarak, greft için küçük bir kapsül cebi açın. </li><li> Böbrek Kapsülün kesik kenar aşı i ince forseps ile kaldırılmış, veateş cilalı cam pipet ile kapsül altında cep içine sokulur ve s. Birçok greft böbrek kapsülü altına yerleştirilir ve eşit olarak böbrek yüzeyinde aralıklı olabilir. </li><li> Aşılama sırasında, kapsül susuz olur ise, steril tuzlu su uygulanarak nemli olmalıdır. </li><li> Aşılama işlemi tamamlandığında, yavaşça vücut boşluğuna böbrek yerine kas duvar kesiğin tarafı kaldırın. Greftler kapsülü altında dışarı kayma olmadığını gözlemleyin. </li><li> Bir tek sütür (4-0, FS-2 vikril sütür) ile kas duvarı kapatın. Cerrahi işlem fareyi yeniden konumlandırarak kontralateral böbrek üzerinde tekrar edilebilir. </li><li> Aşılama tamamlandığında, fare (Protokol adım 7) aynı cerrahi işlem sırasında cilt altı pelet implantasyonu tabi olabilir. </li><li> Dişli forseps kullanarak, cilt kesi kenarları aynı hizaya ve insizyon kapatmak için 2-3 cerrahi yara klipleri geçerlidir. Analjezi yönetmek (kullandığımız 5-10 mg / kg carprofderi altı enjeksiyonu) ile en ve geri kafes yanal yatar konumda fare. Bir lamba ya da ısıtma pedi gelen ısı ile vücut ısısının bakım sağlamak. Az 15 dakika içinde gerçekleşmesi gereken fare, tam iyileşme için gözlemleyin. </li><li> Fareler kanama ve / veya diğer komplikasyonlar, ameliyat sonrası ağrı belirtileri sonraki 24 saat gözlem altında tutulmalıdır. Düzenli enfeksiyon belirtileri için cerrahi kesi inceleyin. </li><li> 7-14 gün ameliyat sonrası cerrahi yara klip temizleme cihazı ile yara klipleri çıkarın. </li></ol> 7. Cerrahi Prosedür: Subkutan Pelet İmplantasyonu <ol><li> Tekrar cerrahi prosedür xenografting böbrek kapsül 6,1-6,5 adımlar. </li><li> Cilt forseps bir çift ile geri cilt kaldırın ve makas kullanılarak kaba bir 1-2 cm dorsal orta hat kesi yapmak. </li><li> Künt makas veya bir sonda kullanılarak, bir kafatası yönünde gövde duvarından temel dermis ayırın. </li><li> Cilt forseps kullanarak,nazikçe cilt kesisi kranial yönü kaldırın ve düz, dişli forseps ile yavaşça hormon pelet tutan, pelet yerleştirin ve künt prob ile oluşturulan cepte, boyun ense de bırakın. </li><li> Tekrar cerrahi prosedür xenografting böbrek kapsülünden 6,18-6,20 adımlar. Derialtı pelet implantasyonu gerçekleştirirken yalnızca, cerrahi insizyon kapatmak için 1 cerrahi yara klibi kullanabilirsiniz. </li></ol>

<ol><li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Cancer+Facts+Figures%22">Cancer Facts Figures</a>. 4, American Cancer Society. (2010).</li>
<li>McVary, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BPH%3A+epidemiology+and+comorbidities%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Manag.+Care%22%5BJournal%5D)">BPH: epidemiology and comorbidities.</a> Am. J. Manag. Care. 12, S122-S128 (2006).</li>
<li>Nicholson, T. M., Ricke, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgens+and+estrogens+in+benign+prostatic+hyperplasia%3A+past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Androgens and estrogens in benign prostatic hyperplasia: past, present and future.</a> Differentiation. 82, 184-199 (2011).</li>
<li>Ricke, W. A., Wang, Y., Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroid+hormones+and+carcinogenesis+of+the+prostate%3A+the+role+of+estrogens%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Steroid hormones and carcinogenesis of the prostate: the role of estrogens.</a> Differentiation. 75, 871-882 (2007).</li>
<li>Ricke, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroid+hormones+stimulate+human+prostate+cancer+progression+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Steroid hormones stimulate human prostate cancer progression and metastasis.</a> Int. J. Cancer. 118, 2123-2131 (2006).</li>
<li>Belanger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+serum+concentrations+of+conjugated+and+unconjugated+steroids+in+40-+to+80-year-old+men%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Changes in serum concentrations of conjugated and unconjugated steroids in 40- to 80-year-old men.</a> J. Clin. Endocrinol. 79, 1086-1090 (1994).</li>
<li>Nicholson, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testosterone+and+17beta-estradiol+induce+glandular+prostatic+growth%2C+bladder+outlet+obstruction%2C+and+voiding+dysfunction+in+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Testosterone and 17beta-estradiol induce glandular prostatic growth, bladder outlet obstruction, and voiding dysfunction in male mice.</a> Endocrinology. 153, 5556-5565 (2012).</li>
<li>Ström, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovariectomy+and+17%CE%B2-estradiol+Replacement+in+Rats+and+Mice%3A+A+Visual+Demonstration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Ovariectomy and 17β-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration.</a> J. Vis. Exp. (64), e4013(2012).</li>
<li>Szot, G. L., Koudria, P., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+Pancreatic+Islets+Into+the+Kidney+Capsule+of+Diabetic+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice.</a> J. Vis. Exp. (9), e404(2007).</li>
<li>Aamdal, S., Fodstad, O., Nesland, J. M., Pihl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+human+tumour+xenografts+transplanted+under+the+renal+capsule+of+immunocompetent+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brit.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Characteristics of human tumour xenografts transplanted under the renal capsule of immunocompetent mice.</a> Brit. J. Cancer. 51, 347-356 (1985).</li>
<li>Cunha, G. R., Lung, B., Reese, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glandular+epithelial+induction+by+embryonic+mesenchyme+in+adult+bladder+epithelium+of+BALB%2Fc+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+urology%22%5BJournal%5D)">Glandular epithelial induction by embryonic mesenchyme in adult bladder epithelium of BALB/c mice.</a> Investigative urology. 17, 302-304 (1980).</li>
<li>Norman, J. T., Cunha, G. R., Sugimura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+induction+of+new+ductal+growth+in+adult+prostatic+epithelium+in+response+to+an+embryonic+prostatic+inductor%5BTitle%5D)+AND+%22The+Prostate%22%5BJournal%5D)">The induction of new ductal growth in adult prostatic epithelium in response to an embryonic prostatic inductor.</a> The Prostate. 8, 209-220 (1986).</li>
<li>Hayward, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+adult+human+prostatic+epithelium+and+rat+urogenital+sinus+mesenchyme+in+a+tissue+recombination+model%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Interactions between adult human prostatic epithelium and rat urogenital sinus mesenchyme in a tissue recombination model.</a> Differentiation. 63, 131-140 (1998).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+human+prostatic+epithelial+model+of+hormonal+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A human prostatic epithelial model of hormonal carcinogenesis.</a> Cancer Res. 61, 6064-6072 (2001).</li>
<li>Ricke, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgen+hormone+action+in+prostatic+carcinogenesis%3A+stromal+androgen+receptors+mediate+prostate+cancer+progression%2C+malignant+transformation+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Androgen hormone action in prostatic carcinogenesis: stromal androgen receptors mediate prostate cancer progression, malignant transformation and metastasis.</a> Carcinogenesis. 33, 1391-1398 (2012).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+efficient+xenograft+models+for+benign+and+malignant+human+prostate+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22The+Prostate%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of efficient xenograft models for benign and malignant human prostate tissue.</a> The Prostate. 64, 149-159 (2005).</li>
<li>Goto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proximal+prostatic+stem+cells+are+programmed+to+regenerate+a+proximal-distal+ductal+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Proximal prostatic stem cells are programmed to regenerate a proximal-distal ductal axis.</a> Stem Cells. 24, 1859-1868 (2006).</li>
<li>Xin, L., Ide, H., Kim, Y., Dubey, P., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+regeneration+of+murine+prostate+from+dissociated+cell+populations+of+postnatal+epithelia+and+urogenital+sinus+mesenchyme%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">In vivo regeneration of murine prostate from dissociated cell populations of postnatal epithelia and urogenital sinus mesenchyme.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 11896-11903 (2003).</li>
<li>Priolo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+genomic+characterization+of+mouse+xenografts+of+human+primary+prostate+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Establishment and genomic characterization of mouse xenografts of human primary prostate tumors.</a> Am. J. Pathol. 176, 1901-1913 (2010).</li>
<li>Pritchett-Corning, K. R., Mulder, G. B., Luo, Y., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+Rodent+Surgery+for+the+New+Surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), e2586(2011).</li>
</ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Bu kağıt ve belirtilen protokol, burada sıkıştırılmış hormonu ve / veya ilaç topaklarının imalatı ve farelerin deri altına topak implantasyonu için cerrahi prosedür tarif eder. Ele alınması araştırma sorusuna bağlı olarak, bu tekniğin tek başına, ya da yaygın olarak prostat araştırma 17-19 kullanılan teknikleri prostat hücre rekombinant greft veya prostat doku xenogreftler, renal kapsül Xenografting ile birlikte yapılabilir. Birlikte ele alındığında, bu teknikler hormonal karsinogenezini ve insan ve fare pros...

Prostat kanseri (SKHA) ve benign prostat hiperplazisi (BPH) önemli sağlık yük vardır. SKHA erkeklerde ikinci en sık görülen solid organ kanseri ve ölüme 1 ilgili kanser önde gelen nedenidir. BPH de yaşlı erkekler arasında son derece yaygın olduğunu ve BPH klinik bulgusu, alt üriner sistem semptomları (AÜSS), erkeklerin 2% 50-90 etkileyeceği tahmin edilmektedir. Androjenler ve östrojenler, SKHA ve BPH önemli olduğu bilinmektedir da karsinojenezi &#39;nin büyüme ve altında yatan hormonal mekanizmaların anlaşılması 3,4 eksik kalır. Basit ve genetik uysal hayvan modelleri prostat araştırma bu önceliklere hitap edecek çalışmaları desteklemek. Bu tür SKHA ve BPH, immunocomp içine tek başına ya da renal kapsülün Xenografting ile kombinasyon halinde deri altı, yavaş salma hormon peletlerin kullanılması, (başka bir bir türden hücreler, dokular ya da organların transferi) gibi hormon cevap veren hastalıklardaromised fare host, büyüme ve karsinogenez hormonal düzenlenmesini incelemek için basit ve tekrarlanabilir bir yöntem sağlar. Deri altına hormon topak implantasyonu kanser ve prostat 5 huylu büyüme hormonal düzenlenmesini incelemek için, basit ve yeniden üretilebilir bir tekniktir. 25 mg testosteron (T) ve 2.5 mg 17β-estradiol (E2) ile yetişkin erkek farelerin deri altına implantasyonu, yaşlanan erkeklerde 5,6 dinamik hormonal ortam yeniden, bir serum E2 artışı ve T kademeli azalmaya neden olur. Buna ek olarak, bu model BPH-AÜSS 5,7 klinik özellikleri birçok tartışıldı. Hormon tatbikat için alternatif yöntemler oral / gavaj uygulanmasını veya intraperitoneal enjeksiyon, kemirgen için sıkıntıya neden zaman içinde ilacın aynı miktarda sunma konusunda daha az tutarlıdır ve vardır daha fazlasını içerir, emek-yoğun bir defalık bir cerrahi implantasyon daha. Saat boyunca diğer deri altından modlarıormone ve / veya ilaç verme silastik kapsüller 8 bulunmaktadır. Daha da Silastic kapsüllerin kullanımı ile deneyime sahip olsa da, sıkıştırılmış granül kullanımı ve yeniden üretilebilirlik kolaylığı için tercih edilmektedir. Ayrıca, sıkıştırılmış hormon pelet bırakma oranları daha yaşlanan erkeklerde 5,7 gözlenen dinamik cinsiyet steroid hormon oranları taklit. Genetik olarak bağışıklık sistemi farelerin geliştirilmesi için, yabancı-doku naklinde tekniklerini içeren çeşitli in vivo model sistemleri, normal ve hastalıklı dokuların, çok çeşitli çalışma için geliştirilmiştir. Xenografting birkaç temel kategorisi vardır. Doku ksenogratflardır normal yapısı, habis tümör, ya da iyi huylu büyüme olabilir sağlam doku küçük bir parça oluşmaktadır. Szot ve diğ. (2007) son zamanlarda pankreas adacık 9 renal kapsül Xenografting aydınlatılmış var. Aamdal ve diğ. (1985) im 27 insan kanser hücre çizgilerinin böbrek yabancı-doku naklinde kapsül tarifmunocompromised fare 10 ev sahipliği yapıyor. Greftler, aynı zamanda (ya da kanserli olmayan tümörijenik), tek bir ölümsüz hücre hattı meydana gelmiş olabilir ya da mezenşimin (hücre yeniden birleştirici aşı) izole edilmiş hücreler ile bir araya ölümsüzleştirilmiş hücre dizisinden oluşabilir. Biz SKHA ve BPH gelişiminde stroma ve epitel rollerini araştırmak için, hücre yeniden bileşenler yabancı-doku naklinde lehine. Cunha ve ark. (1980) erişkin kemirgen mesane epiteli erkek fareler ana böbrek kapsülü altında embriyonik ürogenital sinüs mezenşimin (UGM) ve ksenogreflenmiş ile kombine edildiğinde, doku prostat asinüsü 11 benzeyen yapıları içine geliştirir olduğunu bildirmek için ilk oldu. Norman et al. (1986), doku yeniden bileşenler birleştirildiğinde yetişkin fare prostatik duktal epitelyum ve UGM, duktal büyüme ve morfolojilerinden 12 dallanma geçmesi gösterdi. Hayward ve ark. (1988), insan prostat epitelyum fetal m endüktif tepki gösterdiBenzer bir şekilde, 13 esenchyme. Birleştirerek prostat karsinogenez bir hormonal modeli, ölümsüzleştirilmiş insan prostat epitelyal hücre hattı BPH-1 UGM, birinci Wang et al., 14 (2001) tarafından rapor edilmiştir ve laboratuvarda 15 yaygın olarak kullanılmaktadır. Benign prostat epitel insanlarda 5 ileri SKHA modelleme, metastatik hastalığa dönüşür çünkü bu model SKHA ilerlemesini anlamak için uygundur. Özel bileşenler, genetik olarak manipüle edilebilir, çünkü yeniden birleştirici hücre aşılama stromal-epitelial etkileşimleri değerlendirmek için bir yöntem olarak özellikle yararlıdır. Xenografting için uygun diğer siteler intradermal, deri altı ve ortotopik yeri 16 bulunmaktadır. Ilgi konusu doku ve hastalık sürecine bağlı olarak, bu gibi uygun bir alternatif yaklaşımlar olabilir. Prostat hormonal zin ve iyi huylu büyüme düzenleme araştırmada, böbrek kapsülü seçinnedeniyle yüksek greft xenografting için site hızı, bol kan akımı, ve bir kapalı sitede 16 içine aşılanmasının daha fazla sayıda implant yeteneğini alır. Ayrıca, prostat atrofi ile sonuçlanan ana fare hormonal manipülasyon prostat ortotopik aşılama 16 kullanımını sınırlar. Bu protokol, sıkıştırılmış hormon / ilaç topak üretimi ve cerrahi implantasyon, hem de insan prostat hücre ve doku greft renal kapsül Xenografting teknikler yer almaktadır. Hep birlikte, bu teknikler, genetik olarak modifiye edilmiş bir fare SKHA ve / veya kontrol suşları daha BPH başlatılmasından daha duyarlı olup olmadığını belirlemek için hassas bir tahlil sağlar. Xenografting in vivo histolojik ve habis moleküler özellikleri geliştirmek için deneysel hücrelerin potansiyel değerlendirme, hem de iyi huylu ve kötü huylu hastalıkların geniş bir yelpazede için yeni tedavi stratejileri için bir tahlili için güçlü bir tekniktir.

<table><tbody><tr><td>Pelet presi</td><td>PARR Industries</td><td>2815</td><td>3mm Zımba & Kalıp seti</td></tr><tr><td>Analitik Denge</td><td>Ohaus</td><td>1918302</td><td>Voyager veya diğer</td></tr><tr><td>Bunsen brülörü</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-962Q</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td>Leica</td><td>L2</td><td></td></tr><tr><td>Deltaphase Pad Kit (yeniden ısıtılabilir balmumu)</td><td>Braintree Scientific</td><td>39DP</td><td>Elektrikli ısıtma yastığına alternatif</td></tr><tr><td>Sıcak Boncuk sterilizatörü</td><td></td> FST18000-45 <td></td><td></td></tr><tr><td>İzofluran Buharlaştırıcı</td><td>Supera Anestezi Innov</td><td>VAP3000</td><td></td></tr><tr><td>İndüksiyon Odası</td><td>Supera Anestezi Innov</td><td>RES644</td><td></td></tr><tr><td>F/AIR Teneke Kutu</td><td>Supera Anestezi Innov</td><td>80120</td><td></td></tr><tr><td>4 portlu Manifold</td><td>Supera Anestezi Innov</td><td>RES536</td><td></td></tr><tr><td>Yeniden Solunum Devreleri</td><td>Supera Anestezi Innov</td><td>CIR529</td><td></td></tr><tr><td>Giriş/Çıkış Ek Parçaları</td><td>Supera Anestezi Innov</td><td>VAP203/4</td><td></td></tr><tr><td>Basınç Reg/Gauge</td><td>Supera Anestezi Innov</td><td>OXY508</td><td></td></tr><tr><td>Oksijen Akış Ölçer</td><td>Supera Anestezi Innov</td><td>OXY660</td><td></td></tr><tr><td>21mm Şeffaf Boru</td><td>Supera Anestezi Innov</td><td>301-150</td><td></td></tr><tr><td>Küçük Fareler Burun Konisi</td><td>Supera Anestezi Innov</td><td>ACC526</td><td></td></tr><tr><td>Steril cerrahi önlük</td><td>Midwest Vet Supply</td><td>350.79866.2</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi maske</td><td>Midwest Vet Supply</td><td>350.50111.2</td><td>2 katlı w/ ear straps</td></tr><tr><td>Steril gazlı bez</td><td>Midwest Vet Supply</td><td>001.14100.2</td><td>2 x 2 inç</td></tr><tr><td>Steril Eldiven</td><td>Kimberly Clark</td><td>55092</td><td></td></tr><tr><td>Bouffant</td><td>Midwest Veteriner Kaynağı</td><td>001.27100.2</td><td></td></tr><tr><td>Pamuk Ucu Aplikatörü</td><td>Midwest Veteriner Kaynağı</td><td>001.06220.2</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi Ovma Yıkama</td><td>Midwest Veteriner Kaynağı</td><td>733.80010.3</td><td></td></tr><tr><td>Steril Alanlar (Fenestrated)</td><td>General Econopak, Inc</td><td>88VCSTF</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">REAGENTS</td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C-3292</td><td></td></tr><tr><td>Testosteron Proprionate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T-1875</td><td></td></tr><tr><td>17&#946;-estradiol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E-2758</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Midwest Veteriner Kaynağı</td><td>193.33161.3</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Midwest Veteriner Kaynağı</td><td>193.70200.3</td><td>Enjekte Edilebilir (Rimadyl)</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Webster Veteriner</td><td>07-836-3379</td><td></td></tr><tr><td>Steril tuzlu</td><td>Midwest Veteriner Tedarik</td><td>193.74504.3</td><td>NaCl %0.9, Enjekte Edilebilir</td></tr><tr><td colspan="4"><güçlü>CERRAHI ALETLER</güçlü></td></tr><tr><td>Düz Keskin/Künt Makas</td><td>İnce Bilimsel Aletler (FST)</td><td>14054-13</td><td></td></tr><tr><td>Graefe forseps (Tırtıklı, Dişli, Kavisli)</td><td>F.S.T.</td><td>11055-10</td><td></td></tr><tr><td>İnce İris makası</td><td>F.S.T.</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Neşter</td><td>F.S.T.</td><td>10071-12</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 forseps</td><td>FST</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Cam Pastör pipetleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>S67050</td><td>5" uzunluk</td></tr><tr><td>Graefe forseps (Tırtıklı, Kavisli)</td><td>FST</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Graefe forseps (Tırtıklı, Düz)</td><td>FST</td><td>11050-10</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl Sütür</td><td>Midwest Veteriner Kaynağı</td><td>295-92100.2</td><td>4-0, FS-2, Makas</td></tr><tr><td>hareketli Emilebilir İğne Tutucu FST</td><td></td><td></td><td></td>12002012</tr><tr><td>Yara Klipsleri</td><td>Braintree Scientific</td><td>ACS CS</td><td>7 mm veya 9 mm klips kullanabilir</td></tr><tr><td>Refleks Yara Makası</td><td>FST</td><td>12031-09</td><td>Yara klipsi boyutuna karşılık</td></tr><tr><td>gelir Klips Sökücü</td><td>FST</td> olur<td>12033-00</td><td>Üniversal</td></tr><tr><td>Sterilizasyon Kabı</td><td>F.S.T.</td><td>20810-01</td><td>Herhangi bir otoklavlanabilir kap,</td></tr><tr><td>iğneli Şırınga BD</td><td></td><td>148292C</td><td>1cc, 25Gx1</td></tr><tr><td>Kulak Etiketi Aplikatörü</td><td>Ulusal Bant Etiketi Co.</td><td>1005s1</td><td>Kulak çentiğine alternatif</td></tr><tr><td>Küçük Hayvan Kulak Etiketleri</td><td>National Band Tag Co.</td><td>1005-1</td><td></td></tr></tbody></table> Serisi

prostat karsinogenezde ve İyi huylu prostat büyümesi ve değerlendirilmesi için böbrek kapsül xenografting ve derialtı pelet İmplantasyonu

Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia

Iki yaygın prostat hastalıkları, prostat kanseri (SKHA) ve benign prostat hiperplazisi (BPH) için yeni tedaviler, hormonal düzenlemeyi değerlendiren deneyler sıkı sıkıya bağlıdır. Seks steroid hormonlar (özellikle androjenler ve östrojenler) SKHA ve BPH önemli olan, biz sıkıştırılmış hormon granül kullanarak deneyler ile farelerde prostat büyümesi ve karsinojenezi uyaran kendi rollerini prob. Hormon ve / veya ilaç topakları kolaylıkla topak pres ile imal edilmiştir ve cerrahi olarak erkek fare konağın deri altı doku içine implante edilir. Ayrıca bağışıklık sistemi farelerinin böbrek kapsülü altında prostat hücre yeniden bileşenler Xenografting ile deri altından hormon topak implantasyonu birleştirerek hormonal kanser değerlendirilmesi için bir protokol açıklar. Ayrıca, deri altına topak implantasyonu hormon, BPH dokusunun renal kapsül Xenografting ile kombinasyon halinde, daha iyi huylu prost hormonal düzenleme anlaşılması için yararlıdırbüyüme yedik ve seks steroid hormon yolları hedef yeni tedavilerin test etmek.

<html> Test edilecek olan hipotez bağlı olarak, doku ya da hücre yeniden bileşenler böbrek yabancı-doku naklinde kapsül tek başına, ya da deri altı hormon topak implantasyonu ile kombinasyon halinde gerçekleştirilebilir. Deri altından hormon topak implantasyonu ile böbrek yabancı-doku naklinde kapsül deney birleştiren hayali bir deneyinin şematik Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. Toz haline getirilmiş ve / veya kristal maddelerin çeşitli topak pres ile sıkıştırılmış pelet üretiminde kullanılabilir. <strong...

Bu farelere, sıkıştırılmış hormon peletlerin üretimi, hem de deri altından cerrahi implantasyon açıklar. Bu strateji, hormonal karsinojenezi ve iyi huylu prostat büyümesi düzenleme değerlendirmek için atimik çıplak farelerin böbrek kapsülünün altına hücre ve doku senograflarının büyümesi ile kombine edilebilir.

Prostat Karsinogenezde ve İyi Huylu Prostat Büyümesi ve Değerlendirilmesi için böbrek Kapsül Xenografting ve Derialtı Pelet İmplantasyonu

New therapies for two common prostate diseases,  prostate cancer (PrCa) and benign prostatic hyperplasia (BPH), depend  critically on experiments ...

Bu videoda gösterilen teknikler; karsinojenezin ve prostatın benign büyümesinin hormonal düzenlemesinin değerlendirildiği deneylerde faydalıdır. Öncelikle, sürekli uygulama yapılmasına olanak tanıyacak hormon peletlerini hazırlamak için appellate presler kullanılır. Ardından, böbrek eksteriorize edildikten sonra yuvarlak uçlu cam pipetler hazırlanır.Pipet ucu, greft yerleştirme işlemine yardımcı olmak için kullanılır. Sıkıştırılmış hormon peletleri daha sonra deri altına implante edilir. Sonuç olarak, hormon tedavisinin benign doku xenogreftlerinin büyümesi üzerindeki etkilerini gösteren veriler elde edilir.Bu videoda sunulan tekniklerin uygulanması kolay ve tekrarlanabilirdir. Bu yöntem, hormonların iyi huylu hücrelerin kötü huylu hale dönüşümündeki rolü ve prostatın iyi huylu büyümesinin hormonlar tarafından nasıl düzenlendiği gibi alandaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin etkileri, benign prostat hiperplazisi ve prostat kanseri için potansiyel yeni tedavilere ve önleme stratejilerine kadar uzanmaktadır.Genel olarak, bu tekniğe yeni başlayan kişiler renal kapsülün teknik yönlerinde zorluk yaşayabilirler. Çapraz kontaminasyonu önlemek için pellet hazır

renal-capsule-xenografting-subcutaneous-pellet-implantation-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, prostat kanseri hücrelerinin bir fare modeline intra-prostat enjeksiyonu uygulama prosedürünü gösteriyoruz. Ortotopik murin modelleri, non-invaziv ve klinik olarak ilgili bir ortamda hastalığın kökenini ve tedavi tedavilerine yanıtı incelemek için kullanılabilir.

Kanser Hücrelerinin İntraprostat Enjeksiyonu: Ortotopik Prostat Kanseri Fare Modeli Oluşturmak için Kanser Hücreleri Verme Tekniği

Bu videoda, insan kaynaklı prostat kanseri doku greftlerinin bağışıklığı baskılanmış bir alıcı farenin böbrek kapsülüne implantasyonunu gösteriyoruz. Bu teknik, tümör ilerlemesini değerlendirmek ve yeni terapötik stratejiler geliştirmek için kullanılabilir.

Renal Kapsül Tümörü Ksenogreftleme: Prostat Karsinogenezini Değerlendirmek için Deneysel Hayvan Modeli Oluşturma Tekniği

Fare prostat kanseri modelinde tümör stroma içinde pıhtılaşmış plazma proteinlerine özel bir MRT-kontrast maddesi hedefleyen küçük peptid ile MR kanser moleküler görüntüleme göstermek için.

Küçük Moleküler CLT1 Peptide Hedefli Kontrast Agent ile Prostat Kanseri MR Moleküler Görüntüleme

Insan prostat kanser ortotopik bir model akciğer tümör hücreleri ve farklı metastaz oluşumu dolaşan tümör boyutu ölçümü sağlar. Hücreler birincil organı kaçmak gerekir gibi, kan dolaşımına girerek, ve bir ikincil site içine implant, bu modeli etkin insanlarda senaryo tartışıldı.

İnsan Prostat Kanser metastaz Ortotopik fare modeli

Birincil invaziv kadavradan mesane kanseri zenograftlarını aşılamak için kurulan teknik laparotomi ve mesane seferberlik gerektirir. Bu prosedür, fareler üzerinde önemli morbidite uğratan teknik açıdan zor ve zaman alıcıdır. Bu nedenle perkütan yaklaşım ultrason rehberlik kullanarak, yüksek hassasiyet geliştirdi.

Kemirgen Ortotopik Mesane ksenogratflarının Minimal İnvaziv kurulması

Bu makale, dolaşımdaki tümör hücrelerinden (CTC'ler) prostat kanseri hastasından türetilen ksenogreftler (PDX'ler) oluşturmak için kullanılan bir yöntemi detaylandırmaktadır. CTC'lerden PDX modellerinin oluşturulması, prostat kanserini incelemek için alternatif bir deneysel model sağlar; En sık teşhis edilen tümör ve erkeklerde kanserden sık görülen bir ölüm nedenidir.

Prostat Kanseri Hasta Üretimi Tümör Hücreleri Sirkülasyon gelen Xenograftlarında Modeller Türetilmiş

Prostat kanseri, Amerika Birleşik Devletleri'nde kansere bağlı ölümlerin en sık ikinci nedenidir. Ortotopik bir kanser modeli, prostat kanserinin biyolojisini anlamak ve terapötik rejimlerin etkinliğini değerlendirmek için yararlı bir yaklaşım sağlar. Bu protokol, ortotopik bir prostat kanseri fare modeli oluşturmak için gerekli ayrıntılı adımları açıklar.

İnsan Prostat Kanseri klinik öncesi Ortotopik murin modeli

Bu iletişim kuralı, prostat kanseri hücreleri, sonraki kastrasyon içi Prostatik enjeksiyon göstermek için hedeftir. Orthotopic önceden klinik androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri hastalığı klinik tümör microenvironment ve immün bir ana bilgisayar bağlamında incelemek için kritik modellerdir.

Kollarındaki ve floresan Orthotopic Syngeneic fare modeli androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri

Burada, biyolojik ilgili sitelerdeki kanser için güvenilir preklinik modelleri oluşturmak için bir protokol ultrason destekli enjeksiyon Nöroblastom (NB) ve Ewing sarkomu (ES) hücre yararlanmak için (hücre satırları ve hasta kaynaklı tümör hücreleri kurulu) mevcut araştırma.

Ultrason kullanımı doku Yönetmen: hücresel implantasyon biyolojik ilgili metastatik tümör Xenografts kurulması için güdümlü

Burada, kemik metastazı lezyonları olan bir fare modeli oluşturmak için insan prostat kanseri hücrelerinin intrakardiyak enjeksiyonu için bir protokol sunuyoruz.

Kemik Metastazı Ksenograft Fare Modeli Oluşturmak için İnsan Prostat Kanseri Hücrelerinin İntrakardiyak Enjeksiyonu

Öğrenin, böbrek kapsülü ksenogrefti ve derialtı hormon pelleti implantasyonu ile prostat karsinogenezini ve iyi huylu büyümeyi değerlendirme yöntemini. Bu teknik sürekli hormon uygulaması ve ksenogreft büyümesi analizi için kullanılır.

Prostat Karsinogenezde ve İyi Huylu Prostat Büyümesi ve Değerlendirilmesi için böbrek Kapsül Xenografting ve Derialtı Pelet İmplantasyonu (Video) | JoVE Journal

Prostat Karsinogenezde ve İyi Huylu Prostat Büyümesi ve Değerlendirilmesi için böbrek Kapsül Xenografting ve Derialtı Pelet İmplantasyonu

Daha fazla video keşfet