Name: İnsan Lipoaspirates den Yağ-türetilen Kök Hücre Manuel İzolasyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-26T20:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Öğrenin lipoaspirat örneklerinden manuel enzimatik sindirimle yağ-kökenli kök hücre izolasyonunu. Bu yöntem, SVF elde edilmesi ve ASC kültürü için hücre verimini artırarak rejeneratif tıp araştırmalarına katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar kabul etmek istiyoruz ve dahil açıklanan protokolü ve TSK kendi izolasyon gelişmesine katkıda bu ek araştırma personelini teşekkür: Dr H. Peter Lorenz, MD, Dr Hiroshi Muzuno, MD, Dr Jerry Huang, MD Dr Adam Katz, MD, Dr William Futrell, MD, Dr Rong Zhang, DDS, PhD, Dr Larissa Rodriguez, MD, Dr Zeni Alfonso, Doktora, ve Dr John Fraser, PhD. Sunulan sonuçlar NIAMS ve NIDCR Enstitüleri dahil olmak üzere Ulusal Sağlık Enstitüleri, araştırma hibe, kısmen finanse edilmiştir.

<ol><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-lineage+cells+from+human+adipose+tissue%3A+implications+for+cell-based+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Multi-lineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies.</a> Tissue Engineering. 7 (2), 211-226 (2001).</li>
<li>Rodbell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+isolated+fat+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Metabolism of isolated fat cells.</a> J. Biol. Chem. 239, 375-380 (1964).</li>
<li>Poznanski, W. J., Waheed, I., Human Van, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((fat+cell+precursors.+Morphologic+and+metabolic+differentiation+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">fat cell precursors. Morphologic and metabolic differentiation in culture.</a> Lab Invest. 29 (5), 570-576 (1973).</li>
<li>Zuk, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+Stem+Cells+in+Tissue+Regeneration%3A+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22ISRN+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived Stem Cells in Tissue Regeneration: A Review.</a> ISRN Stem Cells. , in press (2012).</li>
<li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Mol. Biol. Cell. 13, 4279-4295 (2002).</li>
<li>Mitchell, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunophenotype+of+human+adipose-derived+cells%3A+temporal+changes+in+stromal-associated+and+stem+cell-associated+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Immunophenotype of human adipose-derived cells: temporal changes in stromal-associated and stem cell-associated markers.</a> Stem Cells. 24 (2), 376-385 (2006).</li>
<li>Oedayrajsingh-Varma, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypical+and+functional+characterization+of+freshly+isolated+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Phenotypical and functional characterization of freshly isolated adipose tissue-derived stem cells.</a> Stem Cells Dev. 16 (1), 91-104 (2007).</li>
<li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+freshly+isolated+and+cultured+cells+derived+from+the+fatty+and+fluid+portions+of+liposuction+aspirates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of freshly isolated and cultured cells derived from the fatty and fluid portions of liposuction aspirates.</a> J Cell Physiol. 208 (1), 64-76 (2006).</li>
<li>Zannettino, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotential+human+adipose-derived+stromal+stem+cells+exhibit+a+perivascular+phenotype+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Multipotential human adipose-derived stromal stem cells exhibit a perivascular phenotype in vitro and in vivo.</a> J Cell Physiol. 214 (2), 413-421 (2008).</li>
<li>Chung, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD90+%28Thy-1%29+Positive+Selection+Enhances+Osteogenic+Capacity+of+Human+Adipose-Derived+Stromal+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">CD90 (Thy-1) Positive Selection Enhances Osteogenic Capacity of Human Adipose-Derived Stromal Cells.</a> Tissue Eng Part A. , (2012).</li>
<li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipogenic+potential+of+adipose+stem+cell+subpopulations%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Adipogenic potential of adipose stem cell subpopulations.</a> Plast Reconstr Surg. 128 (3), 663-672 (2011).</li>
<li>Rada, T., Reis, R. L., Gomes, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+stem+cells+subpopulations+isolated+from+human+adipose+tissue+exhibit+different+chondrogenic+and+osteogenic+differentiation+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev%22%5BJournal%5D)">Distinct stem cells subpopulations isolated from human adipose tissue exhibit different chondrogenic and osteogenic differentiation potential.</a> Stem Cell Rev. 7 (1), 64-76 (2011).</li>
<li>Heydarkhan-Hagvall, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Adipose+Stem+Cells%3A+A+Potential+Cell+Source+for+Cardiovascular+Tissue+Engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Cells+Tissues+Organs%22%5BJournal%5D)">Human Adipose Stem Cells: A Potential Cell Source for Cardiovascular Tissue Engineering.</a> Cells Tissues Organs. 187 (4), 263-274 (2008).</li>
<li>Jack, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Processed+lipoaspirate+cells+for+tissue+engineering+of+the+lower+urinary+tract%3A+implications+for+the+treatment+of+stress+urinary+incontinence+and+bladder+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Processed lipoaspirate cells for tissue engineering of the lower urinary tract: implications for the treatment of stress urinary incontinence and bladder reconstruction.</a> J Urol. 174 (5), 2041-2045 (2005).</li>
<li>Banas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+hepatic+fate+specification+of+adipose-derived+stem+cells+and+their+therapeutic+potential+for+liver+failure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Rapid hepatic fate specification of adipose-derived stem cells and their therapeutic potential for liver failure.</a> J Gastroenterol Hepatol. 24 (1), 70-77 (2009).</li>
<li>Schreml, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harvesting+human+adipose+tissue-derived+adult+stem+cells%3A+resection+versus+liposuction%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Harvesting human adipose tissue-derived adult stem cells: resection versus liposuction.</a> Cytotherapy. 11 (7), 947-957 (2009).</li>
<li>Oedayrajsingh-Varma, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+mesenchymal+stem+cell+yield+and+growth+characteristics+are+affected+by+the+tissue-harvesting+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived mesenchymal stem cell yield and growth characteristics are affected by the tissue-harvesting procedure.</a> Cytotherapy. 8 (2), 166-177 (2006).</li>
<li>Ahmad, J., Eaves, F. F., Rohrich, R. J. 3rd, Kenkel, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+American+Society+for+Aesthetic+Plastic+Surgery+%28ASAPS%29+survey%3A+current+trends+in+liposuction%5BTitle%5D)+AND+%22Aesthet+Surg+J%22%5BJournal%5D)">The American Society for Aesthetic Plastic Surgery (ASAPS) survey: current trends in liposuction.</a> Aesthet Surg J. 31 (2), 214-224 (2011).</li>
<li>Tierney, E. P., Kouba, D. J., Hanke, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+of+tumescent+and+laser-assisted+liposuction%3A+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22J+Drugs+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Safety of tumescent and laser-assisted liposuction: review of the literature.</a> J Drugs Dermatol. 10 (12), 1363-1369 (2012).</li>
<li>Mojallal, A., Auxenfans, C., Lequeux, C., Braye, F., Damour, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+negative+pressure+when+harvesting+adipose+tissue+on+cell+yield+of+the+stromal-vascular+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Mater+Eng%22%5BJournal%5D)">Influence of negative pressure when harvesting adipose tissue on cell yield of the stromal-vascular fraction.</a> Biomed Mater Eng. 18 (4-5), 193-197 (2008).</li>
<li>Matsumoto, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influences+of+preservation+at+various+temperatures+on+liposuction+aspirates%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Influences of preservation at various temperatures on liposuction aspirates.</a> Plast Reconstr Surg. 120 (6), 1510-1517 (2007).</li>
<li>Francis, M. P., Sachs, P. C., Elmore, L. W., Holt, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolating+adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+from+lipoaspirate+blood+and+saline+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Organogenesis%22%5BJournal%5D)">Isolating adipose-derived mesenchymal stem cells from lipoaspirate blood and saline fraction.</a> Organogenesis. 6 (1), 11-14 (2010).</li>
<li>Boquest, A. C., Shahdadfar, A., Brinchmann, J. E., Collas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+stromal+stem+cells+from+human+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of stromal stem cells from human adipose tissue.</a> Methods Mol Biol. 325, 35-46 (2006).</li>
<li>Bunnell, B. A., Flaat, M., Gagliardi, C., Patel, B., Ripoll, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+stem+cells%3A+isolation%2C+expansion+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived stem cells: isolation, expansion and differentiation.</a> Methods. 45 (2), 115-120 (2008).</li>
<li>Dubois, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+human+adipose-derived+stem+cells+from+biopsies+and+liposuction+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of human adipose-derived stem cells from biopsies and liposuction specimens.</a> Methods Mol Biol. 449, 69-79 (2008).</li>
<li>Mosna, F., Sensebe, L., Krampera, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+bone+marrow+and+adipose+tissue+mesenchymal+stem+cells%3A+a+user%27s+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Human bone marrow and adipose tissue mesenchymal stem cells: a user's guide.</a> Stem Cells Dev. 19 (10), 1449-1470 (2010).</li>
<li>Zachar, V., Rasmussen, J. G., Fink, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+growth+of+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and growth of adipose tissue-derived stem cells.</a> Methods Mol Biol. 698, 37-49 (2011).</li>
<li>Williams, S. K., McKenney, S., Jarrell, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagenase+lot+selection+and+purification+for+adipose+tissue+digestion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Collagenase lot selection and purification for adipose tissue digestion.</a> Cell Transplant. 4 (3), 281-289 (1995).</li>
<li>Wang, H., Van Blitterswijk, C. A., Bertrand-De Haas, M., Schuurman, A. H., Lamme, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+enzymatic+isolation+of+fibroblasts+for+the+creation+of+autologous+skin+substitutes%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol+Anim%22%5BJournal%5D)">Improved enzymatic isolation of fibroblasts for the creation of autologous skin substitutes.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 40 (8-9), 268-277 (2004).</li>
<li>Pilgaard, L., Lund, P., Rasmussen, J. G., Fink, T., Zachar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+highly+defined+proteases+for+the+isolation+of+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of highly defined proteases for the isolation of adipose tissue-derived stem cells.</a> Regen Med. 3 (5), 705-715 (2008).</li>
<li>Kurita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influences+of+centrifugation+on+cells+and+tissues+in+liposuction+aspirates%3A+optimized+centrifugation+for+lipotransfer+and+cell+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Influences of centrifugation on cells and tissues in liposuction aspirates: optimized centrifugation for lipotransfer and cell isolation.</a> Plast Reconstr Surg. 121 (3), 1033-1041 (2008).</li>
<li>Poloni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dedifferentiated+adipocytes+show+similar+properties+to+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human dedifferentiated adipocytes show similar properties to bone marrow-derived mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 30 (5), 965-974 (2012).</li>
<li>D'Andrea, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+production+of+human+adipose+tissue+from+stem+cells%3A+a+new+tool+for+regenerative+medicine+and+tissue+banking%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Large-scale production of human adipose tissue from stem cells: a new tool for regenerative medicine and tissue banking.</a> Tissue Eng Part C Methods. 14 (3), 233-242 (2008).</li>
<li>Tallone, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+human+adipose+tissue+contains+several+types+of+multipotent+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Adult human adipose tissue contains several types of multipotent cells.</a> J Cardiovasc Transl Res. 4 (2), 200-210 (2011).</li>
<li>De Francesco, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD34%2FCD90+ASCs+are+capable+of+growing+as+sphere+clusters%2C+producing+high+levels+of+VEGF+and+forming+capillaries%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Human CD34/CD90 ASCs are capable of growing as sphere clusters, producing high levels of VEGF and forming capillaries.</a> PLoS One. 4 (8), e6537(2009).</li>
<li>Haasters, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+immunocytochemical+characteristics+indicate+the+yield+of+early+progenitors+and+represent+a+quality+control+for+human+mesenchymal+stem+cell+culturing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">Morphological and immunocytochemical characteristics indicate the yield of early progenitors and represent a quality control for human mesenchymal stem cell culturing.</a> J Anat. 214 (5), 759-767 (2009).</li>
</ol>

Bu yazının yazarları California Üniversitesi Regents ve Cytori Tedavi için lisanslı ait bir patent üzerinde eş-mucitler vardır.

TSK izolasyonu için yağ dokusu çeşitli biçimlerde gelebilir: şırınga çıkarma veya emme destekli lipoplasty (yani liposuction) ya aracılığıyla elde edilen küçük parçalar rezeksiyon veya lipoplasty yoluyla elde edilen doku katı parçalarından. Çelişkili çalışmalar 16, 17 sunulmuştur daha SVF hücreleri (ve dolayısıyla TSK) rezeke veya aspire yağ örneklerinden elde edilebilir belirsizdir. Bu yağ dokusu ya da bir şekilde sürece operatör kendi izolasyon tekniği yeterli olduğu SVF hücreleri ve TSK izolasyonu...

2001 yılında, adipoz dokusundan multipotent kök hücrelerin farazi bir nüfus dergisinde Tissue Engineering 1 &#39;de tarif edilmiştir. Bu hücreler kozmetik cerrahi yoluyla elde edilen işlenmiş lipoaspirate dokudan kendi türetme nedeniyle adı İşlenmiş Lipoaspirate ya da PLA hücreleri verildi. Bu makalede açıklanan izolasyon yöntemi yağ dokusu 2 stromal damar fraksiyon (SVF) izolasyonu için mevcut enzimatik stratejiler dayanıyordu. SVF, bir doku kültürü alt-tabaka 2, 3 uymak için henüz kırmızı kan hücreleri, fibroblastlar, endotelial hücreler, yumuşak kas hücreleri, perisitler ve ön adipositlerin minimal işleme nüfus olarak tanımlanmıştır. Zaman içinde bu SVF ekimi, bu kirletici hücre popülasyonlarının çok ortadan kaldırmak ve bir yapışkan, fibroblastik nüfus neden önerilmiştir. Bu fibroblastlar ön-varlık olarak son 40 yıldır literatürde tespit edilmiştiradipositleri. Ancak, araştırma grubu, bu hücrelerin mezodermal multipotency sahipti ve PLA hücreleri gibi yapışık SVF nüfusu adını gösterdi. Çok sayıda diğer araştırma grupları tarafından daha sonraki çalışmalar (yorum 4 görmek için) Endodermal ve ektodermal potansiyellerini hem düşündüren, bu potansiyeli ekledik. O zamandan beri, bu hücreler için çok sayıda ek şartlar literatürde ortaya çıktı. Uzlaşma çeşit sağlamak amacıyla, vadeli Yağ türetilmiş Kök Hücreler veya TSK 2. yıllık IFATS toplantısında kabul edildi. Bu nedenle, bu terim ASC bu makalede kullanılacaktır. Bu makalede açıklanan protokol standart laboratuar ekipmanı gerektirir ve bu fosfo-tamponlu tuz çözeltisi, standart doku kültür ortamı reaktifler ve kolajenaz gibi basit bir reaktif kullanan bir nispeten basit bir işlemdir. Bu yağ dokusu hacim ve daha sonra c başlangıç ​​miktarına bağlı olarak TSK çok sayıda üretebilirulture zaman. Ancak, yağ dokusu gibi bir büyük miktarda işlem bu protokolü kullanarak bir dereceye kadar azaltılabilir bazı fiziksel sorunlar ortaya çıkabilir. Ayrıca, bu protokol bu şekilde onaylı bir doku kültürü imkan kullanımını gerektiren, steril doku kültürü tesisleri ve onaylanmış biyo-güvenlik davlumbaz gerektirir. Bunlar iyi üretim uygulamaları klinik kullanım için izolasyonu ve genleşme için tasarlanmış (GMP) onaylı tesisleri izole sürece Bu gereksinim, klinik uygulamalarda ASC nüfusun yarar azaltabilir. Alternatif olarak, işletme tiyatro, kapalı bir sistem içinde TSK ayırabilirsiniz otomatik sistemler bu tuş sorunu önleyeceğini ve sonraki in vitro genişlemesi için herhangi bir ihtiyaç olmaksızın TSK hemen kullanımı için izin verir. Bugüne kadar, insan dokusundan hücrelerinin izole edilmesi için ticari olarak temin edilen altı otomatik sistemleri vardır. Bu sistemler sayesinde izole etmek için yapabilirderhal hasadından sonra adipoz doku büyük miktarda gelen TSK önemli sayıda. Bunlar TSK her zamankinden çalışma odasını terk etmek zorunda hasta olmadan rejeneratif çeşitli amaçlar için hastaya geri olabilir. TSK manuel izole açıklayan bu protokol ek olarak, Celution Sistemi kullanılarak TSK otomatik izolasyonu için protokol, eşlik eden bir makalede verilmiştir.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reagent</td></tr><tr><td>DMEM (Dulbecco&#8217; Eagle'ın Modifikasyonu&#8217; s Medium)</td><td>4,5 g/ml glikoz, L-glutamin, sodyum piruvat içeren</td> <td>Mediatech Cellgro</td><td>10-013-CV</td></tr><tr><td>Penisilin/Streptomisin</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>30-002-CI</td><td>10.000 IU/ml penisilin/10.000 &#956; g/ml streptomisin</td></tr><tr><td>Amfoterisin B</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>30-003-CF</td><td>250 & # 956; g/ml amfoterisin B</td></tr><tr><td>10X PBS (Fosfo tamponlu Salin)</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>25-053-CI</td><td>kalsiyumsuz, magnezyumsuz</td></tr><tr><td>Tripsin/EDTA</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>20-031-CV</td><td>%0,25 tripsin/2,21mM EDTA</td></tr><tr><td>Kollajenaz tip IA (Clostridium histolyticum'dan)</td><td>Sigma</td><td>C2674</td><td>ham preparat; < 125 kollajen sindirim ünitesi/mg katı</td></tr><tr><td>FBS (Fetal Sığır Serumu) ısıyla inaktive</td> edilmiş <td>Gemini Bioproducts</td><td>100106</td><td>USDA kaynağı, ısıyla inaktive edilmiş </td></tr><tr><td>10 ml serolojik pipetler</td><td>Genesee Scientific</td><td>12-104</td><td></td></tr><tr><td>25 ml serolojik pipetler</td><td>Genesee Scientific</td><td>12-106</td><td></td></tr><tr><td>50 ml polipropilen santrifüj tüpleri</td><td>Genesee Scientific</td><td>21-106</td><td></td></tr><tr><td>100 mm doku kültürü kapları</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-202</td><td></td></tr><tr><td>150 mm doku kültürü kapları</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-203</td><td></td></tr><tr><td>500 ml Stericup Filtre Üniteleri</td><td>Milipore</td><td>SCGPU05RE</td><td>PES membranı, 0.22 & # 956; m gözenekli</td></tr><tr><td>Hücre süzgeçleri</td><td>FisherBrand</td><td>22-363-549</td><td>100 & # 956; m naylon örgü</td></tr><tr><td>deksametazon - suda çözünür</td><td>Sigma</td><td>D-2915</td><td></td></tr><tr><td>L-askorbik asit 2 fosfat</td><td>Sigma</td><td>A-8960</td><td></td></tr> <tr><td>& # 946; -gliserofosfat disodyum tuzu </td><td>Sigma</td><td>G-9422</td>, <td>gliserofosfat</td></tr><tr><td>insülin</td> olarak da bilinir <td>Sigma</td><td>I-6634</td><td>sığır pankreas</td></tr><tr><td>indometazin</td><td></td><td>Sigma I-7378'den</td> <td>yapılmıştır</td></tr><tr><td>apo-transferrin</td><td>Sigma</td><td>T-4382</td><td></td></tr><tr><td>TGF&#946; 1</td><td>Ar-Ge D Systems</td><td>240-B-002</td><td>rekombinant insan</td></tr><tr><td>Yağı Kırmızı O</td><td>Sigma</td><td>O-0625</td><td></td></tr><tr><td>Alcian Blue</td><td>Sigma</td><td>A-5268</td><td></td></tr><tr><td>Gümüş nitrat</td><td>Sigma</td><td>S-0319</td><td></td></tr><tr><td>Hidroklorik asit</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Fisher Scientific</td><td>30525-89-4</td><td>%16 stok</td></tr> <tr>olarak tedarik edilir<td colspan="4">[başlık]</td></tr><tr><td colspan="4">Ekipman Gerekli </td></tr><tr><td>Sınıf II A/B Biyogüvenlik başlığı</td><td>Thermo Scientific</td><td></td>, <td>davlumbazın aspirasyon için vakum hatlarına sahip olmasını sağlar</td></tr><tr><td>Tezgah üstü santrifüj</td><td>Hermle Labnet</td><td>Z383</td><td>50 ml'lik tüpler için açılır rotor gereklidir, 1200xg</td></tr><tr><td>kapasiteli Su banyosu </td><td>Fisher Scientific Isotemp</td><td>S52602Q</td><td>5-10L kapasiteli, 37C kapasiteli</td></tr><tr><td>Otomatik Pipet Yardımcıları</td><td>Drummond Pipet Yardımı XL</td><td>4-000-105</td><td></td></tr><tr><td>CO2 İnkübatör</td><td>Thermo Scientific</td><td>Forma 310</td><td>doğrudan ısı veya su ceketli</td></tr></tbody></table>

İnsan lipoaspirates den yağ-türetilen kök hücre manuel İzolasyon

Manual Isolation of Adipose-derived Stem Cells from Human Lipoaspirates

2001 yılında, Kaliforniya Üniversitesi, Los Angeles, araştırmacılar başlangıçta İşlenmiş Lipoaspirate Hücreleri veya PLA hücreleri adı liposuctioned adipoz dokudan erişkin kök hücrelerinin yeni bir nüfus izolasyonunu nitelendirdi. O zamandan beri, bu kök hücreler Yağ elde edilen kök hücreler ya da TSK olarak yeniden adlandırılmış ve kök hücre araştırma ve rejeneratif tıp alanında en popüler yetişkin kök hücreler nüfus biri olmaya gitti. Binlerce makale artık kemik rejenerasyonu, periferik sinir onarımı ve kardiyovasküler mühendisliği de dahil olmak üzere, rejeneratif hayvan modellerinde çeşitli TSK kullanımını tarif eder. Yeni makaleler klinikte TSK için kullandığı sayısız tarif başladı. Bu makalede gösterilen protokol elle ve enzimatik kozmetik işlemler elde lipoaspirates büyük miktarda gelen TSK izole etmek için temel prosedür özetliyor. Bu protokol kolayca ölçekli veya accommod aşağı olabilirlipoaspirate hacmini yedi ve abdominoplasties ve benzer prosedürler ile elde edilen yağ dokusundan TSK ve izole etmek için uyarlanabilir.

Protokol taslak üzerinde geniş hacimli lipoaspirate numuneden bir SVF izolasyonu için bir el enzimatik yöntem açıklanır. Bu SVF içinde, ASC de dahil olmak üzere pek çok hücre popülasyonları vardır. Çeşitli çalışmalar standart doku kültürü koşulları altında bu svf kültürleme ASC türü esas oluşacak muhtemel bir yapışık fibroblast nüfus için seçecektir öneriyorum. Bu uygun olarak, kültürlü SVF peletler önemli bulaşıcı hücreler, tür, yani RBCs, yumuşak kas hücreleri ve endotel soy 1 hücrelerinin esasen haline gel...

2001 yılında, UCLA araştırmacılar erişkin kök hücrelerin bir nüfus izolasyon, adipoz dokudan, Yağ elde edilen kök hücreler veya TSK adlandırılan nitelendirdi. Bu makale kolajenazı kullanarak manuel, enzimatik sindirim protokolü kullanılarak lipoaspirates gelen TSK izolasyonunu özetliyor.

İnsan Lipoaspirates den Yağ-türetilen Kök Hücre Manuel İzolasyon

In 2001, researchers at the University of  California, Los Angeles, described the isolation of a new population of adult  stem cells from liposuctioned ...

Bu prosedürün genel amacı, lipo aspirat şeklinde elde edilen yağdan adipoz kaynaklı kök hücreleri izole etmektir. Bu işlem, öncelikle cerrahi solüsyonun uzaklaştırılması ve aspiratın kontamine kırmızı kan hücrelerinden yıkanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım ise yıkanmış lipo aspiratın kollajenaz ile enzimatik sindirimi yoluyla kök hücrelerin serbest bırakılmasıdır.Ardından, stromal vasküler fraksiyon veya SVF formundaki salınmış hücreler santrifüjasyon ile toplanır. Son adım, süpernatantın uzaklaştırılması ve adherent ASC'lerin seçimi ve kültürü için SVF hücrelerinin ekilmesidir. Nihayetinde, bu kültürlenmiş ASC'lerin in vitro ortamda kemik, yağ ve kıkırdağa indüksiyonu gerçekleştirilir.Hücrelerin multipotansiyelitesini doğrulamanın yanı sıra, kültür içinde bu hücrelerin varlığını teyit etmek için soy hatları kullanılabilir. Genellikle, bu yöntemde yeni olan kişiler, hücre hasadı öncesindeki yüksek hacimli lipo aspiratlarla çalışma lojistiği nedeniyle zorluk yaşayabilirler. Steril kollajenaz Tip 1 çözeltisi ve steril kontrol medyumu hazırlayın.Lipoaspiratı bir aspirasyon kabında toplayın. Lipoaspiratı dikkatlice steril bir litrelik cam behere aktarın. Lipoaspirat tabakaları yer

manual-isolation-adipose-derived-stem-cells-from-human

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokol izolasyonu açıklar adipoz-türetilmiş lipoaspirate ve iskelet rejenerasyon değerlendirmek için 4 mm kritik ölçüdeki kalvaryal defekt oluşturmadan stromal hücreler.

Lipoaspirate itibaren hasat Yağ kaynaklı stromal hücreler kullanarak Kritik ölçekli Kalvaryum Defekt Model tamiri

Bu videoda, murin periaortik ark yağ dokusundan floresan etiketli nöral krestten türetilmiş adipoz türevli kök hücrelerin (ADSC'ler) izole edilmesi ve kültürlenmesi için bir teknik gösterilmektedir. İzolasyonu takiben, NCADSC'ler tespit edilir, floresanla aktive edilen hücre sıralaması kullanılarak sıralanır ve daha sonra hücre proliferasyonunu teşvik ederek bir plaka üzerinde kültürlenir.

Murin Periaortik Yağ Dokusundan Yağ Kaynaklı Kök Hücrelerin İzole Edilmesi

Burada, stromal vasküler kesir emülsifikasyon ve birden çok centrifugations kapsayan mekanik işlemler bir dizi Yağ dokusundan elde etmek için bir iletişim kuralı mevcut.

Lipoaspirates mekanik mikronize rejeneratif Terapisi için

Bu protokol, ekstrektif bir yöntem kullanılarak abdominoplasti ve lipoaspirate örneklerinden mezenkimal kök hücrelerin izole imal etmek için enzimsiz bir yöntem sağlar. Sert enzimlerin veya santrifüj adımlarının olmaması, in vitro çalışmalarda kullanılabilecek veya kliniğe geri transfer edilebilen klinik olarak ilgili kök hücreleri sağlar.

İnsan Yağtüretilmiş Mezenkimal Kök HücrelerinIn İzolasyon ve Genişlemesi için Enzimsiz Bir Yöntem

Burada, kapalı bir sistem cihazı kullanarak insan yağ dokusu enzimsiz mikro-parçalanma sıyoruz. Bu yeni yöntem, in vivo transplantasyon, in vitro kültür ve daha fazla hücre izolasyonu ve karakterizasyonu için uygun yağ dokusunun milimetre altı kümelerinin elde edilmesine olanak sağlar.

Hücre Fenotimi ve Sekretom Karakterizasyonu için İnsan Yağ Dokusu Mikro-parçalanma

Bu protokol, adipojenik ve fibro-inflamatuar stromal hücre alt popülasyonlarını murin karın içi beyaz yağ dokusu (WAT) depolarından floresanla aktive edilen hücre sınıflandırması veya immünmanyetik boncuk ayırma yoluyla izole etmek için teknik yaklaşımı açıklar.

Murin İntraabdominal Yağ Depolarından Adipojenik ve Fibroinflamatuar Stromal Hücre Alt Popülasyonlarının İzolasyonu

Mevcut protokol, literatüre kıyasla zaman kazanımı ile muazzam bir hücresel verim ile sonuçlanan ADSC izolasyonu için geliştirilmiş bir metodolojiyi açıklamaktadır. Bu çalışma aynı zamanda uzun süreli kriyoprezervasyondan sonra nispeten çok sayıda canlı hücre elde etmek için basit bir yöntem sunmaktadır.

Uzun Süreli Kriyoprezervasyonda Yağ Dokusundan Mezenkimal Kök Hücre Elde Etme Tekniği ve Stromal Vasküler Fraksiyon Karakterizasyonu

Hücre tedavisi hazırlığı/manipülasyon aşamalarında kullanılmaya başlanan ksenojenik (kimyasal veya hayvansal türevli) ürünler, konakçı hastalarda immün reaktivite ve patojenik bulaşma riskinin artmasıyla ilişkilidir. Burada, insan adipoz türevi kök hücrelerin izolasyonu ve in vitro genişlemesi için tam bir ksenojenik içermeyen yöntem açıklanmaktadır.

İnsan Tedavisi için Yenilikçi Bir Ksenojenik İçermeyen Yöntemle İnsan Adipoz Türevi Kök Hücrelerin İzolasyonu ve Kültürü

Bu protokol, Sprague Dawley sıçanlarından yağ dokusu kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin (MSC'ler) izole edilmesi ve tanımlanması için bir metodoloji açıklamaktadır.

Sprague Dawley Sıçanlarının Yağ Dokusundan Elde Edilen Mezenkimal Kök Hücrelerin İzolasyonu ve Tanımlanması

Bu protokol, preadipositleri elde etmek ve in vitro adiposit diferansiyasyonunu sağlamak için stromal vasküler fraksiyonun (SVF) murin yağ dokusundan yarı otomatik izolasyonunu tanımlar. Kollajenaz sindirimi için bir doku ayrıştırıcısı kullanmak deneysel varyasyonu azaltır ve tekrarlanabilirliği arttırır.

Bir Doku Dissosiyatör Kullanarak Stromal Vasküler Fraksiyonun Murin Beyaz Yağ Dokusundan Yarı Otomatik İzolasyonu

Burada, &gt;90% işlem süresi azalması, yüksek hücre canlılığı ve geniş uyumlulukla karakterize edilen yağ kaynaklı kök hücreleri ve adipositleri verimli şekilde izole etmek için standart bir yöntem sunuyoruz.

Domuz yağ dokusundan yağ kök hücrelerinin ve adipositlerin etkili izolasyonu

Öğrenin lipoaspirat örneklerinden manuel enzimatik sindirimle yağ-kökenli kök hücre izolasyonunu. Bu yöntem, SVF elde edilmesi ve ASC kültürü için hücre verimini artırarak rejeneratif tıp araştırmalarına katkı sağlar.

İnsan Lipoaspirates den Yağ-türetilen Kök Hücre Manuel İzolasyon

Daha fazla video keşfet