Name: İzolasyon, Arıtma ve İşlevsel Araştırmalar ve Kabul edilmiş Transfer deneyler için Fare Kemik İliği Nötrofiller Etiketlenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-07-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 28 s
Description: Öğrenin fare kemik iliği nötrofillerinin izolasyon ve etiketleme yöntemini. Yoğunluk gradyanı santrifüjasyonu ve CellTracker boyaları kullanılarak fonksiyonel çalışmalar ve kabul edilmiş transfer deneyleri için güvenilir hücre elde edilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Alerji ve Bulaşıcı Hastalıklar Ulusal Enstitüsü (NIAID), Ulusal Sağlık Enstitüsü (NIH), ABD İntramural Araştırma Bölümü tarafından desteklenmiştir. Tüm fareler Alerji ve Bulaşıcı Hastalıklar Ulusal Enstitüsü (NIAID) de Laboratuar Hayvan Bakımı-akredite hayvan tesisin Akreditasyon için Amerikan Derneği muhafaza ve Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Kılavuzu belirtilen usullere uygun olarak muhafaza edildi NIAID ve Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmış bir protokol himayesinde.

1. Fare Kemik İliği Hücreleri İzolasyon <ol><li> Kurumun hayvan bakım komitesi tarafından onaylanan protokolünü kullanarak fareler Euthanize ve% 70 etanol ile hayvan yüzey sprey. </li><li> Orta karın deri bir kesi yapmak ve alt ekstremite kaplayan deri ve fare distal kısmından cilt kaldırmak. </li><li> Makas kullanarak alt ekstremite kasları kesilmiş ve femur başı kırılma kaçınarak dikkatle, kalça eklemi gelen asetabulum yerinden. </li><li> Bir neşter ve makas kullanılarak femur ve tibia gelen kalan kasları çıkarın ve kemik uçları kırmak değil diz egzersiz bakım de tibia gelen femur ayırın. % 10 FBS ve% 1 penisilin / streptomisin ile desteklenmiş buz gibi soğuk RPMI 1640 1X içeren bir Petri kabındaki kemikleri yerleştirin. </li><li> Bir doku kültürü kaputu altında aşağıdaki adımlara devam edin. Neutrophi önlemek için sıkı steril teknikleri korumak için ekstra önlem alınl aktivasyonu. </li><li> Kemik yüzeyinden etanol durulayın buz soğukluğunda steril PBS içinde üç yıkamadan sonra (Petri içinde) ve ardından% 70 etanol (bir Petri kabı içinde) ile her bir kemik durulayın. </li><li> Temiz bir steril Petri kabı içinde, kemiklerin epifizleri kesti ve onları bir kenara saklayın. </li><li> Bir 25-gauge iğne ve RPMI,% 10 FBS ve 2 mM EDTA eklenmiş ile dolu bir 12 cc şırınga kullanarak ve bir 100 mikron ile donatılmış, 50 ml&#39;lik vida üst Falcon tüpüne kemik şaftlann her iki ucunda ikinci kemik iliği hücrelerinin bir hizada filtre. Etkili bir biçimde hücreleri çıkarmak amacıyla, 25-gauge iğne kullanılarak kemik iç yüzeyi raspa. </li></ol> NOT: kemik haşlama hücreleri yeterince kazınmış olduğunu gösterir. NOT: femur / tibia çifti temizlemek için medya yaklaşık 10 ml kullanın. Orta EDTA ekleyerek hücrelerin kümeleşmeyi önlemek için gereklidir. <ol start="9"><li> Kemik epifizleri CutBir neşter ve bir 2.5 ml Eppendorf Combitip Artı Biopur pipet arka uç kullanarak 100 mikron filtre aracılığıyla şut küçük 0.5-1 mm 3 adet. </li><li> 4 ° C, 7 dakika boyunca 1400 rpm&#39;de santrifüj </li><li> Yaklaşık olarak 20 saniye boyunca% 0.2 NaCl, 20 ml hücre pelletini tekrar süspanse ederek, kırmızı kan hücrelerinin lize% 1.6 NaCl, 20 ml ilave edilir. (Kritik: kemik iliği hücre ölümü önlemek için hipotonik lizis 20-30 sn aşmayın ikinci nötrofil aktive potansiyeline sahiptir, çünkü parçalama için hipotonik NaCl kullanımı ACK parçalama tampon üzerinde tavsiye edilir.). </li><li> 4 at 1.400 rpm 7 dakika santrifüj ° C hücreleri toplamak için. </li><li> % 10 FBS ve 2 mM EDTA ile takviye edilmiş RPMI 1640 hücreleri 1X yıkayın ve adım 1.12 olarak santrifüj. </li><li> Bu yöntemi kullanarak, kemik iliği hücrelerinin verimi yaklaşık 60-80.000.000 enfekte 8-12 haftalık C57BL / 6 fare başına verilir. </li></ol> 2. Nötrofiller ayrılmasıyoğunluk dereceli santrifüj yoluyla <ol><li> Kemik iliği hücreleri saymak ve buz soğukluğunda steril 1 ml PBS içinde yeniden süspanse. </li><li> 15 ml konik bir tüp içinde Histopaque 1119, 3 ml (yoğunluğu, 1.119 g / ml) eklenir. </li><li> Histopaque 1119, 3 ml üzerinde Histopaque 1077 kaplama 3 ml (yoğunluk 1.077 g / ml). </li></ol> NOT: Histopaque 1.119 ve Histopaque 1.077 18-26 ısındı olmalıdır ° C kullanmadan önce. Kritik Adım: hemen önceden degrade iki kat ve optimal nötrofil saflık ve kurtarma arasındaki difüzyon ile sonuçlanır hazırlama gibi kullanmadan önce geçişlerini hazırlayın. Kritik Adım: Kaplama santrifüj sırasında hücre ayırma engel olan iki yoğunlukları, karıştırma önlemek için yavaş yavaş yapılması 1119 ihtiyaçları üzerinde Histopaque 1.077. <ol start="4"><li> Histopaque 1077 üstüne kemik iliği hücre süspansiyonu Yerleşimi. </li></ol> Kritik Adım: Overlhücreler ve Histopaque 1077 arasındaki ara rahatsız etmemek amacıyla yavaşça yapılması gereken Histopaque 1077 ihtiyaçları üzerinde kemik iliği hücre süspansiyonu Aying. Not: 1 ml PBS enfekte olmamış bir fare kemik iliği hücreleri Resuspending,&gt;% 90 saflıkta nötrofil verir. Bununla birlikte, pek çok kemik iliği örneklerinden havuzu nötrofil saflık uzlaşma, örneğin, 3 ml PBS ~% 80 ile&gt;% 90 saflıkta nötrofil azaltır 300 x 10 6 hücre yeniden süspansiyon haline getirilmesi. Bu nedenle, araştırmacılar kendi özel deneyler için ideal bir hücre sayısı / hacim koşulları tanımlamak için Pilot deneyler yapmalıdır <ol start="5"><li> 25 2.000 rpm&#39;de 30 dakika ° frensiz C için santrifüj. </li></ol> NOT: Oda sıcaklığında gradyan santrifüj nötrofil etkin bir şekilde ayrılması için önemli ve gereklidir. <ol start="6"><li> Histopaque 1119 arayüzü nötrofil toplayın ve 1.077 katmanları Histopaque. </li&gt; <li> RPMI ile iki kere yıkayın toplanan nötrofillerden 1X 1640% 10 FBS ve 4, 7 dakika boyunca 1400 rpm&#39;de% 1 penisilin / streptomisin ve santrifüj ° C ile desteklenmiş </li><li> Nötrofil saymak ve canlılığı belirler. </li></ol> Not: Nötrofiller, tipik olarak&gt; FACS analizi ile belirlendiği gibi% 95 uygulanabilir ve&gt;% 90 saf. Bulaşmamış 8-12 haftalık C57BL / 6 fare kemik iliğinden nötrofillerin tipik verim (yani 2 femur ve tibia kemikleri 2) ~ 6-12.000.000 hücredir. Nötrofil enfekte hayvanların kemik iliğinden hasat edilir, bu numara büyük ölçüde daha büyüktür. Candida ile enfekte farelerde hücre hasat 6 kullanıldı zaman Bu nedenle, ~, 30-40 milyon nötrofil / fare ele geçmiştir. 3. CellTracker Boyalar kullanarak Nötrofiller etiketlenmesi <ol><li> 5. nötrofil süspanse x 10 6 hücre / mL PBS içinde 37 ° C&#39;de önceden ılıtılır </li><li> Son bir concent bir CellTracker boya ekle5 mcM oranı. </li></ol> Not: CellTracker Yeşil (CMFDA (5-Chloromethylfluorescein diasetat) ve CellTracker Turuncu (CMTMR (5 - (and-6)-4-klorometil benzoil amino tetramethylrhodamine) için farklı yabani tip ve gen-eksikliği nötrofillerin etiketlemek için bu protokolü kullanılmıştır fareler. NOT: Deney gününe kadar -80 10 CellTracker Green mM ve CellTracker Portakal, kısım, ve mağaza bir stok solüsyonu ° C hazırlayın. <ol start="3"><li> Karanlıkta çalkalanan bir su banyosu içerisinde 37 ° C &#39;de 10 dakika boyunca, karşılık gelen CellTracker boya 5 uM nötrofil inkübe edin. </li><li> % 10 FBS ve% 1 penisilin / streptomisin ile takviye edilmiş buz gibi soğuk RPMI 1640 hücreleri 1X ile iki kere yıkayın. </li></ol> NOT: hücrelerin Verimli yıkama CellTracker boya ile etiketleme adım çıkışlar için diferansiyel-etiketli nötrofil nüfus karıştırmadan önce boya çapraz bulaşmayı önlemek için gereklidir sonratream rekabetçi repopulation çalışmaları. 4. Fare ve Akım Sitometri kullanarak Aktarılan Nötrofiller Analizinde nötrofillerin Kabul edilmiş Transfer <ol><li> 25 x 10 6 hücre / ml ile 5 x 10 6 nötrofil fare başına aktarılır, böylece, yanal kuyruk damarı içine süspansiyonu 200 ul enjekte edilir bir konsantrasyonda buz gibi soğuk PBS içinde süspanse nötrofil. Rekabetçi repopulation nötrofil çalışmaları için, bir 1:1 oranında yabani tip ve gen-eksikliği nötrofil karıştırmak ve yukarıdaki gibi fare başına 5 x 10 6 nötrofiller toplam enjekte edilir. </li></ol> NOT: En az en fazla 10 x 10 6 nötrofil adoptively hayvanlara açık hemen toksisite olmadan fare başına devredilebilir. <ol start="2"><li> Evlatlık transferi (örneğin 1, 2, 3 veya 4 saat sonrası transferi) ardından farklı zamanlarda, fare ve hasat kan euthanize ve / veya ilgi kemik iliği ve / veya diğer hedef organ (lar). </li><li> Si hazırlayınyayınlanan protokolleri 6,15 kullanarak adoptively transfer etiketli nötrofil nicel ve nitel analiz için bu dokulardan ngle hücre süspansiyonları. </li><li> Ölü / canlı canlılığı boyama ve Fc abluka, CD45 (klon 30-F11) ile etiket hücreleri, Ly6G (klon 1A8) ve CD11b&#39;nin (klon M1/70) ve kapı canlı CD45 + Ly6G + CD11b + nötrofiller üzerinde. Ardından Bu kapının Nötrofiller FITC (+ CellTracker Yeşil ile etiketlenmiş) veya PE + (Hücre Takibi Portakal ile etiketlenmiş varsa) olan alıcı fare yerli nötrofiller gibi adoptif transfer etiketli nötrofiller bulunmaktadır. </li></ol> NOT: Nötrofiller en az 4 saat sonrası transferi için Candida ile enfekte farelerde kan, kemik iliği ve böbrek izlenen olabilir. Not: PBS içinde% 2 paraformaldehit ile sabitleme olumsuz CellTracker Gr ile etiketlenmiş, nötrofillerin ortalama floresan yoğunluğu etkilemezEn az 48 saat süre ile ya da een CellTracker Turuncu.

<ol><li>Lehrer, R. I., Ganz, T., Selsted, M. E., Babior, B. M., Curnutte, J. T. Neutrophils and host defense. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLehrer%2C+RI+%22Ann.+Intern.+Med%22">Ann. Intern. Med</a>. 109 (2), 127-142 (1988).</li>
<li>Rot, A., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokines+in+innate+and+adaptive+host+defense%3A+basic+chemokinese+grammar+for+immune+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Chemokines in innate and adaptive host defense: basic chemokinese grammar for immune cells.</a> Annu. Rev. Immunol. 22, 891-928 (2004).</li>
<li>Amulic, B., Cazalet, C., Hayes, G. L., Metzler, K. D., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+function%3A+from+mechanisms+to+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophil function: from mechanisms to disease.</a> Annu. Rev. Immunol. 30, 459-489 (2012).</li>
<li>Blomgran, R., Ernst, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+neutrophils+facilitate+activation+of+naive+antigen-specific+CD4%2B+T+cells+during+Mycobacterium+tuberculosis+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lung neutrophils facilitate activation of naive antigen-specific CD4+ T cells during Mycobacterium tuberculosis infection.</a> J. Immunol. 186 (12), 7110-7119 (2011).</li>
<li>Narasaraju, T., Yang, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excessive+neutrophils+and+neutrophil+extracellular+traps+contribute+to+acute+lung+injury+of+influenza+pneumonitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Excessive neutrophils and neutrophil extracellular traps contribute to acute lung injury of influenza pneumonitis.</a> Am. J. Pathol. 179 (1), 199-210 (2011).</li>
<li>Lionakis, M. S., Fischer, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokine+receptor+Ccr1+drives+neutrophil-mediated+kidney+immunopathology+and+mortality+in+invasive+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Chemokine receptor Ccr1 drives neutrophil-mediated kidney immunopathology and mortality in invasive candidiasis.</a> PLoS Pathog. 8 (8), (2012).</li>
<li>Cascão, R., Rosário, H. S., Souto-Carneiro, M. M., Fonseca, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils+in+rheumatoid+arthritis%3A+More+than+simple+final+effectors%5BTitle%5D)+AND+%22Autoimmun.+Rev%22%5BJournal%5D)">Neutrophils in rheumatoid arthritis: More than simple final effectors.</a> Autoimmun. Rev. 9 (8), 531-535 (2010).</li>
<li>Denny, M. F., Yalavarthi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+distinct+subset+of+proinflammatory+neutrophils+isolated+from+patients+with+systemic+lupus+erythematosus+induces+vascular+damage+and+synthesizes+type+I+IFNs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A distinct subset of proinflammatory neutrophils isolated from patients with systemic lupus erythematosus induces vascular damage and synthesizes type I IFNs.</a> J. Immunol. 184 (6), 3284-3297 (2010).</li>
<li>Kim, N. D., Chou, R. C., Seung, E., Tager, A. M., Luster, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+unique+requirement+for+the+leukotriene+B4+receptor+BLT1+for+neutrophil+recruitment+in+inflammatory+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">A unique requirement for the leukotriene B4 receptor BLT1 for neutrophil recruitment in inflammatory arthritis.</a> J. Exp. Med. 203 (4), 829-835 (2006).</li>
<li>Cotter, M. J., Norman, K. E., Hellewell, P. G., Ridger, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+isolation+of+neutrophils+from+murine+blood+using+negative+immunomagnetic+separation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">A novel method for isolation of neutrophils from murine blood using negative immunomagnetic separation.</a> Am. J. Pathol. 159 (2), 473-481 (2001).</li>
<li>Hasenberg, M., Köhler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+immunomagnetic+negative+enrichment+of+neutrophil+granulocytes+from+murine+bone+marrow+for+functional+studies+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Rapid immunomagnetic negative enrichment of neutrophil granulocytes from murine bone marrow for functional studies in vitro and in vivo.</a> PLoS One. 6 (2), e17314(2011).</li>
<li>Gao, J. L., Lee, E. J., Murphy, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+antibacterial+host+defense+in+mice+lacking+the+N-formylpeptide+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Impaired antibacterial host defense in mice lacking the N-formylpeptide receptor.</a> J. Exp. Med. 189 (4), 657-662 (1999).</li>
<li>Pruijt, J. F., Verzaal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils+are+indispensable+for+hematopoietic+stem+cell+mobilization+induced+by+interleukin-8+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Neutrophils are indispensable for hematopoietic stem cell mobilization induced by interleukin-8 in mice.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (9), 6228-6233 (2002).</li>
<li>Eash, K. J., Greenbaum, A. M., Gopalan, P. K., Link, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CXCR2+and+CXCR4+antagonistically+regulate+neutrophil+trafficking+from+murine+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">CXCR2 and CXCR4 antagonistically regulate neutrophil trafficking from murine bone marrow.</a> J. Clin. Invest. 120 (7), 2423-2431 (2010).</li>
<li>Lionakis, M. S., Lim, J. K., Lee, C. C., Murphy, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ-specific+innate+immune+responses+in+a+mouse+model+of+invasive+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Innate.+Immun%22%5BJournal%5D)">Organ-specific innate immune responses in a mouse model of invasive candidiasis.</a> J. Innate. Immun. 3 (2), 180-199 (2011).</li>
<li>Boxio, R., Bossenmeyer-Pourié, C., Steinckwich, N., Dournon, C., Nüsse, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+bone+marrow+contains+large+numbers+of+functionally+competent+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Leukoc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse bone marrow contains large numbers of functionally competent neutrophils.</a> J. Leukoc. Biol. 75 (4), 604-611 (2004).</li>
<li>Kim, N. D., Chou, R. C., Seung, E., Tager, A. M., Luster, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+unique+requirement+for+the+leukotriene+B4+receptor+BLT1+for+neutrophil+recruitment+in+inflammatory+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">A unique requirement for the leukotriene B4 receptor BLT1 for neutrophil recruitment in inflammatory arthritis.</a> J. Exp. Med. 203 (4), 829-835 (2006).</li>
<li>Gunzer, M., Weishaupt, C., Planelles, L., Grabbe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-step+negative+enrichment+of+CD4%2B+and+CD8%2B+T+cells+from+murine+spleen+via+nylon+wool+adherence+and+an+optimized+antibody+cocktail%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Two-step negative enrichment of CD4+ and CD8+ T cells from murine spleen via nylon wool adherence and an optimized antibody cocktail.</a> J. Immunol. Methods. 258 (1-2), 55-63 (2001).</li>
<li>Tosello Boari, J., Amezcua Vesely, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-17RA+signaling+reduces+inflammation+and+mortality+during+Trypanosoma+cruzi+infection+by+recruiting+suppressive+IL-10-producing+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">IL-17RA signaling reduces inflammation and mortality during Trypanosoma cruzi infection by recruiting suppressive IL-10-producing neutrophils.</a> PLoS Pathog. 8 (4), e1002658(2012).</li>
<li>Hattori, H., Subramanian, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-molecule+screen+identifies+reactive+oxygen+species+as+key+regulators+of+neutrophil+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Small-molecule screen identifies reactive oxygen species as key regulators of neutrophil chemotaxis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107 (8), 3546-3351 (2010).</li>
<li>Wan, W., Lionakis, M. S., Liu, Q., Roffê, E., Murphy, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+Deletion+of+Chemokine+Receptor+Ccr7+Exacerbates+Atherogenesis+in+ApoE-deficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Genetic Deletion of Chemokine Receptor Ccr7 Exacerbates Atherogenesis in ApoE-deficient Mice.</a> Cardiovasc. Res. 97 (3), 580-588 (2013).</li>
<li>Ueda, Y., Kondo, M., Kelsoe, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+the+reciprocal+production+of+granulocytes+and+lymphocytes+in+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Inflammation and the reciprocal production of granulocytes and lymphocytes in bone marrow.</a> J. Exp. Med. 201 (11), 1771-1780 (2005).</li>
<li>Berkow, R. L., Dodson, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+and+functional+evaluation+of+mature+neutrophils+from+human+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Purification and functional evaluation of mature neutrophils from human bone marrow.</a> Blood. 68 (4), 853-860 (1986).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederim.

Bu olgu, bir yoğunluk gradyan santrifüj yaklaşım kullanılarak yüksek saflıkta ve canlılığı olan farelerin kemik iliğinden nötrofil sayıda izolasyonu için güvenilir, basit, hızlı ve ekonomik bir protokol mevcut. Bu protokol doğru gerçekleştirildiğinde, ~ 6-12 x 10 6 nötrofil enfekte olmamış bir fareden elde edilebilir ve en çok ~ olarak 30-40 x 10 6 nötrofil enfeksiyonu 6 sonra bir fareden izole edilebilir. Izole nötrofil% 80-95 saf ve&gt;% 95 yaşayabilir. Kem...

Nötrofiller, insanlarda en bol lökositlerdir. Onlar mikroorganizmaların işgalci karşı ilk savunma hattı olarak doğuştan gelen bağışıklık sistemi ve hareket temel hücresel bileşenidir. Nötrofil sayısı ve / veya fonksiyonunu etkileyen kazanılmış nötropeni ve primer immün yetmezlikler olan hastalar konak savunma 1 bu hücrelerin önemini vurgulayarak hayatı tehdit eden invazif bakteriyel ve mantar enfeksiyonları, geliştirmek. Iltihaplı doku 2 içine kan dolaşımından işe nötrofil yeteneğine sahip bir kemotaktik degrade oluşturmak chemoattractants salgılanmasına yol açan bir yönetilen doğal immün yanıt, en indüksiyon kendi soydaş desen tanıma reseptörleri sonuçları enfeksiyon yerinde patojenlerin işgalci bağışıklık tanınması . Nötrofiller enfeksiyon sitesine girmek sonra, aktif hale, hangi sitokin ve kemokin üretimi, patojen alımı yol açar ve oksidatif ve non-oksidatif beni ile öldürüyorchanisms 3. Doğuştan gelen bağışıklık onların iyi bilinen rolü yanı sıra, nötrofil yakın zamanda etkili adaptif immün yanıtları 4 başlatanlar gibi önemli rol oynar gösterilmiştir. 5-7 bulaşıcı ve öz bağışıklık hastalıklarının çeşitli &#39;de gösterildiği gibi, diğer yandan, ayrı bağışıklık kendi koruyucu rolleri, nötrofiller, aynı zamanda, aşırı birikimi ve / veya inflamasyon bölgelerinde aktivasyonuna bağlı doku hasarı ve İmmünopatoloji aracılık edebilir. Montaj etkili doğal immün yanıtları ve çeşitli enfeksiyon hastalıkları ve inflamatuar durumlar, güvenilir deneysel protokollerin bu hücrelerin ve eksikliği taşıma ile teknik zorluklar içinde pleiotropik efektör fonksiyonları nötrofil vazgeçilmez bir rol rağmen geçmiş yıllarda nötrofil, araştırma engellemiştir. Bu nedenle, nötrofillerin izolasyonu için tekrarlanabilir analizlerin kullanımı ve nötrofil aracılı immunolo için daha fazla araştırma kolaylaştırmalıdırjik fonksiyonları, ex vivo ve in vivo. Bugüne kadar, çeşitli yöntemler, örneğin insan kanı, yoğunluk gradyanlı santrifüjlemeye ve fare kan veya kemik iliği 8,9, fare kan veya kemik iliği 10,11 nötrofillerin pozitif veya negatif zenginleştirme immünomanyetik olarak nötrofillerin izolasyonu için anlatıldığı ve hasat edilmiştir tiyoglikolat veya diğer enflamatuar ajanların 12 intraperitoneal enjeksiyonu takiben farelerin periton boşluğundan nötrofillerin. Nötrofiller insan kanından kolayca çok sayıda izole edilebilir, ancak bu yöntem, işlevsel çalışmalar ve adoptif transfer deneyleri 13 için yeterli nötrofil izole edilmesini önleyen fare kan sınırlı bir hacme bağlı olarak farelerde suboptimaldir. Verimi tiyoglikolat-ortaya çıkardı, ancak ek olarak, periton boşluğundan kan hücrelerinin fare ile karşılaştırıldığında daha büyüktür, inflamatuar peritoneal lavaj nötrofillerin saflık arasında değişir% 60-90, ve izole edilen nötrofillerin aktive edilmiş bir fenotip sergiler. Bu yüzden, hücreler, fare peritoneal boşluğuna kararlı durum 12 az sayıda nötrofil olduğu gibi bu yöntem sadece, aktif fonksiyonel çalışmalar yapmak için kullanılmaz, ancak uyarılmamış nötrofil edilebilir kullanılarak toplandı. Bunun yerine, kemik iliği ve daha sonra, fagositoz, öldürme ve degranülasyonu veya alıcı farelere adoptif transfer gibi akım aşağı fonksiyonel çalışmalar için kullanılabilir ya da uyarılmamış ve aktifleştirilmiş nötrofillerin 11,14, çok sayıda hasat edilmesi için uygun bir haznedir. Bu yazıda, yüksek verim sağlayan basit ve hızlı (~ 2 saat) protokolü, tarif (~ 6-12 × 10 6 nötrofil / bulaşmamış fare veya 30-40 × 10 6 nötrofil / enfekte fare) saf (80 -95%) kemik iliğinden&gt;% 95 canlılığı ile nötrofil. Bu yöntem, yoğunluk gradyanlı hücre ayrı olarak ticari olarak temin edilebilen Histopaque kullanırFicoll ve sodyum diatrizoate oluşan oranı ortam, farelerin kemik iliğinden nötrofil ayırmak için. Bu yöntem, kan ya da periton boşluğu ile karşılaştırıldığında fare başına nötrofil önemli ölçüde daha fazla sayıda verir, bu kararlı durum ya da enfeksiyon sonrası her iki farenin nötrofillerin toplamak için kullanılan ve süreksiz kullanan yoğunluk gradyan santrifüj yönteme göre tabakası daha kolay olabilir % 55 /% 65 / PBS içinde 75% 9 Percoll oluşan Percoll gradient. Buna ek olarak, zaman ve saf nötrofil toplamak için gerekli kaynakları önemli ölçüde Floresan-Aktif Hücre Ayırma kullanarak nötrofil izolasyon göre azalmıştır. Ayrıca, bu yöntem, bir immünomanyetik zenginleştirme aşamasında anlamına gelmez, çünkü daha düşük maliyetli olan ve bu nedenle nötrofil aktivasyonunun olasılığını azaltarak, manyetik kolonu ve antikorlar hücrelerinin maruz kalma önler. Izole neutroph fonksiyonel çalışmalar performans ek olarakils ex vivo ve alıcı farelere hücrelerinin adoptif transfer, bu protokol, aynı zamanda farklı CellTracker boyalar kullanılarak izole nötrofil etiketlenmesi için bir yöntem açıklanır. Çeşitli genetik kökenden farelerden alınan nötrofil Diferansiyel etiketleme kandan nötrofil ticareti belirli genlerin doğrudan rol mekanik fikir sağlayabilir akım sitometri kullanarak alıcı farelerin dokularında transfer nötrofil izlemek için rekabetçi repopulation çalışmalarda adapte edilebilir hedef iltihaplı organları 6 içine.

<table><tbody><tr><td>&nbsp;</td><td></td><td></td><td><güçlü >Reaktifler< / güçlü ></td></tr><tr><td>RPMI 1640 1X, L-glutamin ve 25 mM HEPES</td><td>ile Cellgro</td><td>10-041-CV&</td><td>nbsp;</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (Isı ile Aktive Edilmiş)</td><td>GemCell</td><td>100500</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin (10.000 ünite penisilin / 10.000 mg / ml strep)</td> <td>GIBCO</td><td>15140</td><td></td></tr><tr><td>0.5 M EDTA</td><td>Kalite Biyolojik A.Ş</td>. <td>351-027-101</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>%0,2 ve %1,6 sodyum klorür</td><td>JT Baker</td><td>3624</td><td>Damıtılmış su ve steril filtrelenmiş kullanılarak hazırlanan sodyum klorür çözeltileri</td></tr><tr><td>Steril filtreli Histopaque 1077</td><td>Sigma</td><td>10771</td><td>Histopaque 1077'nin 18-26 dereceye getirilmesi gerekir; C kullanmadan önce</td></tr><tr><td>Steril filtreli Histopaque 1119</td><td>Sigma</td><td>11191</td><td>Histopaque 1119'un 18-26 dereceye getirilmesi gerekir; C kullanmadan önce</td></tr><tr><td>Kalsiyum ve Magnezyum içermeyen Fosfat Tamponlu Salin (PBS)</td><td>Cellgro</td><td>210-40-CV&</td><td>nbsp;</td></tr><tr><td>Etil Alkol (200 kanıt)</td><td>Warner Graham Company</td><td>64-17-5</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>CellTracker Green (CMFDA, 5-Klorometilfloresein Diasetat)</td> <td>Invitrogen</td><td>C-7025</td><td>DMSO'da 10 mM'lik stok çözeltileri yapın, alikot ve -80 °C'de saklayın; C</td></tr><tr><td>CellTracker Turuncu (CMTMR, 5- (ve 6)-4-Klorometil Benzoil Amino Tetrametilrodamin)</td><td>Invitrogen</td><td>C-2927</td><td>DMSO, alikotta 10 mM'lik stok çözeltileri yapın ve -80 °C'de saklayın; C</td></tr><tr><td>Anti-fare CD45 (Klon 30-F11)</td> <td>eBioscience</td><td>170451-82</td> <td>(nbsp;</td></tr><tr><td>Anti-fare Ly6G (Klon 1A8)</td><td>BD Pharmingen</td><td>551461</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Anti-fare Ly6G (Klon 1A8)</td><td>BD Pharmingen</td><td>560599</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Anti-fare CD11b (Klon M1 / 70)</td> <td>eBioscience</td><td>47-0112-82&</td><td>nbsp;</td></tr><tr><td>Anti-fare CD16 / CD32 (Fare BD Fc Bloğu)</td> <td>BD Pharmingen</td><td>553141</td><td>1:100 seyreltmede kullanın</td></tr><tr><td>CANLI/ÖLÜ Sabitlenebilir Mavi Ölü Hücre Leke Kiti</td><td>Moleküler Problar</td><td>L-23105</td><td>1:1000 seyreltmede kullanın</td></tr><tr><td>Dimetil Sülfoksit (DMSO)</td> <td>Sigma</td><td>67-68-5</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Paraformaldehit Çözeltisi, PBS</td><td>USB Corporation</td><td>19943'te</td> %4<td>&nbsp;</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td></td><td></td><td><güçlü>Tablo 1. Evlat edinerek transfer edilen nötrofillerin izolasyonu, etiketlenmesi ve izlenmesi için reaktifler.</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td></td><td></td><td><güçlü > Malzemeler< / güçlü ></td></tr> <tr><td>C57BL / 6 fare</td><td>Taconic</td><td></td> <td>& nbsp;</td></tr><tr><td>15 ml santrifüj tüpleri</td><td>Corning</td><td>430053</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>50 ml santrifüj tüpleri</td><td>BD Falcon</td><td>352070</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>25 ml serolojik pipetler</td><td>Celltreat</td><td>229225B</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>10 ml serolojik pipetler</td><td>Celltreat</td><td>229210B</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>5 ml serolojik pipetler</td><td>Celltreat</td><td>229205B</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Pastör pipetleri (3 ml)</td><td>BD Falcon</td><td>357575</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>12 ml şırınga</td><td>Kendall monoject</td><td>512878</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>25 G x 5/8 inç İğneler (hassas kayma iğneleri)</td><td>BD</td><td>305122</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>100 mm hücre süzgeçleri</td><td>BD Falcon</td><td>352360</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Bakterisidal Petri kapları</td><td>BD Falcon</td><td>351029</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Combitips Plus Biopur</td><td>Eppendorf</td><td>2249608-5</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Fare diseksiyon aletleri (Makas, forseps, neşter)</td><td>Biyomedikal Araştırma Aletleri</td><td>10-2300, 10-2165, 25-1200, 26-1000</td><td>Kullanımdan önce sterilize edilen aletler</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td></td><td></td><td>< güçlü > Ekipman< / güçlü ></td></tr> <tr><td>doku kültürü başlığı</td><td>The Baker Company</td><td>SG403</td> <td>ve nbsp;</td></tr><tr><td>Soğutmalı santrifüj</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>75004521</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>37 & derece; C çalkalama su banyosu</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>3166721</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td></td><td></td><td><güçlü>Tablo 2. Bu protokolde kullanılan Malzeme ve Ekipmanların listesi.</td></tr></tbody></table>

İzolasyon, arıtma ve İşlevsel araştırmalar ve kabul edilmiş transfer deneyler için fare kemik İliği nötrofiller etiketlenmesi

Isolation, Purification and Labeling of Mouse Bone Marrow Neutrophils for Functional Studies and Adoptive Transfer Experiments

Nötrofiller doğuştan gelen bağışıklık sisteminin önemli efektör hücrelerdir. Bunlar hızla akut inflamasyon bölgelerinde işe ve inflamatuar ortamı bağlı olarak koruyucu veya patojenik etkiler gösterebilir vardır. Bununla birlikte, farklı bulaşıcı hastalıklar ve inflamatuar koşullarda nötrofil &#39;efektör ve immunopathogenic etkileri aracılık moleküler faktörlerin bağışıklık, ayrıntılı bir anlayış nötrofil vazgeçilmez bir rol rağmen hala kısmen, kısa yarı ömrü, bunların kullanımı ile zorluklar, eksik hücreleri ve alt fonksiyonel çalışmalar ve evlat edinen transferi deneyler için nötrofil yeterli sayıda elde etmek için güvenilir deneysel protokollerin eksikliği. Bu nedenle, basit, hızlı, ekonomik ve güvenilir bir yöntem gibi fagositoz, öldürme, sitokin üretimi, degranülasyonunun ve ticareti gibi işlevleri değerlendirmek için fare nötrofil yeterli sayıda hasat için son derece arzu edilir. Bu amaçla,yüksek saflıkta ve canlılığı olan farelerin kemik iliğinden nötrofil sayıda izole etmek için, herhangi bir laboratuvar olarak adapte edilebilir, tekrarlanabilir yoğunluk gradyan santrifüj tabanlı bir protokol, mevcut. Ayrıca, daha sonra adoptively akım sitometri kullanarak en az 4 saat sonrası transferi için alıcı farelere transfer ve çeşitli dokularda izlenebilir izole nötrofil, etiketlemek için CellTracker boyalar kullanan basit bir protokol mevcut. Bu yaklaşımı kullanarak, farklı CellTracker boyalarla yabani tip ve gen-eksik fareler nötrofil diferansiyel etiketleme başarılı bir şekilde in vivo olarak hedef dokulara kan nötrofilleri ticareti özel genlerin doğrudan rolünün değerlendirilmesi için rekabet repopulation çalışmaların gerçekleştirilmesi için kullanılabilecektir .

Bu protokol, farelerden elde edilen kemik iliği hücreleri ve ticari olarak temin edilebilen hücre ayırma ortamı Histopaque kullanılarak yoğunluk dereceli santrifüj yoluyla, bu hücrelerin, nötrofillerin sonraki ayırma hasat için optimize edilmiştir. Nötrofiller, bu yöntemi kullanan alt fonksiyonel çalışmalar, ex vivo çeşitli ve alıcı farelerde adoptif transfer deneyleri için de kullanılabilir izole edilmiştir. Bulaşmamış 8-12 haftalık C57BL / 6 fare başına femur ve tibia hem de kemik...

Bir yoğunluk dereceli santrifüj yoluyla ve CellTracker boyalar kullanılarak nötrofil etiketlemesi için fare kemik iliğinden nötrofillerin izolasyonu ve saflaştırılması için bir protokol açıklamaktadır. Bu aşağı fonksiyonel çalışmalar ya da evlatlık transferi ve izleme deneyler için nötrofil çok sayıda elde etmek için basit, hızlı, tekrarlanabilir ve ekonomik yöntem temsil eder.

İzolasyon, Arıtma ve İşlevsel Araştırmalar ve Kabul edilmiş Transfer deneyler için Fare Kemik İliği Nötrofiller Etiketlenmesi

Neutrophils are critical effector cells of the innate immune system. They are rapidly recruited at sites of acute inflammation and exert protective or ...

Bu prosedürün genel amacı, sonraki fonksiyonel çalışmalar ve adoptif transfer deneyleri için fare kemik iliğinden nötrofilleri izole etmek ve işaretlemektir. Bu işlem, öncelikle fare femur ve tibia kemiklerinden kemik iliği hücrelerinin toplanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda, eritrositler sırasıyla %0,2 ve %1,6 sodyum klorür çözeltilerinde ardışık olarak süspanse edilerek ozmotik olarak lizlenir.Ardından, nötrofiller yoğunluk gradyanı santrifüjasyonu ile izole edilir. Son adımda, nötrofiller hücre takip boyalarıyla işaretlenir. Nihayetinde, çeşitli fare dokularına göç eden adoptif transfer edilmiş nötrofillerin sayısını belirlemek için akış sitometrisi kullanılabilir.Fare nötrofilleriyle kemik iliğinden izolasyonun kan veya peritona göre temel avantajı, hem kararlı durumdayken hem de enfeksiyon sonrasında, sonraki fonksiyonel çalışmalar ve adoptif transfer deneyleri için yeterli miktarda yüksek hücre sayısının kemik iliğinden elde edilebilmesidir. Fare nötrofilleri izolasyonu için gradyan santrifüj tekniği kullanmanın, immünomanyetik seçime veya floresanla aktive edilmiş hücre ayıklamaya göre avantajı; hızlı ve ekonomik olması ve nötrofil aktivasyonunu tetikleyebilecek antik

isolation-purification-labeling-mouse-bone-marrow-neutrophils-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Kemik iliği nakli Kemik iliği kaynaklı hücrelerin genotipi değiştirmek için bir yol sağlar. Ilgilenilen genin kemik iliğinden elde edilen hücreler ve olmayan kemik iliğinden elde edilen hücreler, hem de ifade etmek gerekirse, kemik iliği transplantasyonu olmayan kemik iliği kaynaklı hücre genotip değiştirmeden, farklı bir genotip için kemik iliği kaynaklı hücre değiştirebilir.

Kemik İliği Transplantasyonu tarafından Fare Kolit immün ve non-immün Hücreler Gen Ekspresyonu İşlevsel Rolleri Farklılaşan

Burada, translasyonel uygulamalar için heterojen kemik iliğinden büyük miktarlarda murin monositleri üreten bir protokol sunuyoruz. Diğerleriyle karşılaştırıldığında, bu yeni yöntem, kurban edilen hayvan sayısını azaltmaya yardımcı olur ve yüksek gradyanlı manyetik hücre ayırma (MACS) gibi pahalı yöntemlerden kaçınarak maliyetleri düşürür.

İzolasyon ve Kemirgen Kemik İliği intravenöz enjeksiyon Türetilmiş Monositler

Bu yazıda, in vitro ve enjeksiyondan sonra farelerde akut lösemide C1498 hücre kültürlerinin karakterize etmek için kullanılabilen bir teknik prosedürü sağlar. Fenotipik ve fonksiyonel analizler flow sitometri, immünofloresan mikroskopi, histokimya ve Mayıs-Grünwald Giemsa boyama kullanılarak gerçekleştirilir.

Fare C1498 Cep Hattı ve İlişkili Lösemi Fare Modeli Karakterizasyonu için Detaylı Protokolü

Yeni iletişim kuralları burada yalıtmak ve insan türetilmiş microparticles karakterize açıklanmıştır ve fare nötrofiller. Bu protokoller ultrasantrifüj, Akış Sitometresi ve microparticle içeriği analiz etmek için immunoblotting teknikleri kullanmak ve çeşitli hücre tiplerinin hücresel işlevde türetilen microparticles rolü çalışma için kullanılabilir.

Yalıtım ve nötrofil kaynaklı Microparticles karakterizasyonu için fonksiyonel çalışmalar

Biz nasıl tanımlanmasını ve yalıtılmasını miyeloid ataları fare kemik iliği bir manyetik kombinasyonu ve floresan (MAC'ler ve FACS) sıralama kullanarak üzerinden 6 alt kümelerini göstermek. Bu iletişim kuralı vitro kültürü deneyleri (methylcellulose ya da sıvı kültürleri), in vivo evlat edinen transfer deneyler ve RNA/protein analizleri için kullanılabilir.

Kimlik ve yalıtım Oligopotent ve Lineage için kabul edilen miyeloid ataları fare kemik iliği dan

Burada, bir protokol saf CD4 T hücre (T hücre) etkinleştirme, yayılması ve GM-CSF kemik iliği (BM) tarafından indüklenen Th1 farklılaşma vivo içinde belirlenmesi için mevcut-dendritik hücreler (DC) türetilmiş. Ayrıca, bu iletişim kuralını BM ve T-hücre izolasyon, DC üretimi ve DC ve T hücreli evlat edinen transfer açıklar.

Vivo fare modeli ölçü saf CD4 T Hücre aktivasyonu, yayılması ve kemik iliği türevi dendritik hücreler tarafından indüklenen Th1 farklılaşma

Bu yöntem, MEP ve MKp'nin fare femurları, kaval kemiği ve pelvik kemiklerden akış sitometrisi ile saflaştırılmasını açıklar.

Fare Megakaryosit Progenitors İzolasyonu

Bu araştırma, sıçan kemik iliğinden bol miktarda nötrofil hücre dışı tuzakları (NET'ler) izole etmek için iki tekniği özetlemektedir. Bir yöntem, ticari bir nötrofil izolasyon kitini yoğunluk gradyanlı santrifüjleme ile birleştirirken, diğeri yalnızca yoğunluk gradyanlı santrifüjlemeyi kullanır. Her iki yaklaşım da periferik kan nötrofillerinden daha iyi fonksiyonel NET'ler verir.

Karşılaştırılabilir Kapasiteye Sahip Sıçan Kemik İliği Nötrofillerini İzole Etmek için Benzersiz Yaklaşım

Bu protokol, 7-9 günlük yenidoğan fare kemik iliği hücrelerini izole etmek ve granülosit koloni uyarıcı faktör (M-CSF) kaynağı olarak L929 hücrelerinin bir süpernatantını kullanarak farklılaşmış makrofajlar oluşturmak için enzimatik olmayan ve basit bir yöntemi tanımlar. Kemik iliği kaynaklı makrofajlar, yüzey antijenleri F4/80, CD206, CD11b ve fonksiyonel yeterlilik açısından daha fazla analiz edildi.

Yenidoğan Fare Kemik İliği İzolasyonu ve Kemik İliği Kaynaklı Makrofajların Hazırlanması

Bu el yazması, optimal nötrofil canlılığını ve yüksek kütüphane kalitesini garanti etmeyi amaçlayan, murin kemik iliğinden nötrofillerden oluşan bir ATAC-seq kütüphanesi hazırlamak için bir protokolün ana hatlarını çizmektedir. BMC hazırlama, immünomanyetik sıralama ve kütüphane yapımı hakkında adım adım talimatlar sunarak, özellikle nötrofilleri incelemeye yeni başlayanlar için değerli bir rehber görevi görür.

Murin Kemik İliği Kaynaklı Nötrofillerin ATAC-Seq Kütüphanesi Hazırlanması

Öğrenin fare kemik iliği nötrofillerinin izolasyon ve etiketleme yöntemini. Yoğunluk gradyanı santrifüjasyonu ve CellTracker boyaları kullanılarak fonksiyonel çalışmalar ve kabul edilmiş transfer deneyleri için güvenilir hücre elde edilir.

İzolasyon, Arıtma ve İşlevsel Araştırmalar ve Kabul edilmiş Transfer deneyler için Fare Kemik İliği Nötrofiller Etiketlenmesi

Daha fazla video keşfet