Periferik Sinir Hasarı Sonrası Fonksiyonel Kurtarma Değerlendirmesinde Koku Ensheathing Hücre Nakli

Bu prosedürün genel amacı, bir laringeal sinir yaralanması modelinde koku ve kılıf hücrelerinin kullanımına dayalı bir hücresel transplantasyon modeli sunmaktır. Bu, önce nüks eden laringeal sinirin kesimi ve anastomozunun yapılması ile gerçekleştirilir. Ardından, koku mukozasından veya koku ampulünden elde edilen koku ve kılıf hücreleri transplante edilir.

Ameliyattan iki ila üç ay sonra, hayvanlar laringoskopi ve elektromiyografik olarak değerlendirilir. Son olarak, nüks eden laringeal sinir histolojik çalışmalar için izole edilir. Sonuç olarak, koku ve kılıf hücrelerinin nüks eden laringeal sinirin aksonal yeniden büyümesini ve vokal kordların fonksiyonel iyileşmesini laringoskopi, elektromiyografik ve histolojik ölçümlerle gösterdiği sonuçlar elde edilebilir.

Bu yöntem, periferik sinir yaralanması alanında, aksonal büyümenin ölçülmesi ve iyileşmenin fonksiyonelliğinin ölçülmesiyle ilgili kilit soruları yanıtlayabilir. Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan kişiler, nüks eden lal sinirlerin anastomozunun mikrocerrahi beceri gerektirmesi nedeniyle zorlanacaklardır. Yazılı protokolde belirtilen şekilde, GFP etiketli primer koku ampul veya OM kültürlerini üretikten sonra, tüm aletleri otoklavlayarak ameliyata hazırlayın.

Rat intraperitoneal olarak ketamine ve klorpromazin enjeksiyonu ile anestezi altına alındı, sedasyon seviyesini ayak parmağı ile sıkıştırarak doğrulayın, cerrahi bölgeyi tıraş edin ve ratı dorsal dekübitus pozisyonunda yerleştirin, cildi alkol ve Betadine çözeltisi ile dönüşümlü olarak yıkayarak dezenfekte edin. Daha sonra steril bir cerrahi ortamı birleştirin ve ameliyat boyunca steril prosedürleri sürdürün.

Bir scalpel kullanarak medial servikal cildin iki santimetrelik bir kesiği yapın. Ardından medial beyaz çizgiyi takip ederek, infra hiyoid kasların infra hiyoid kaslar arasına bir ortostatik retraktör kullanarak dikey bir kesi yapın. Larinksi ve ardından nüks eden laringeal siniri veya RLN'yi ortaya çıkarın.

Ardından cerrahi mikroskobu altında, mikroskop kesilerini kullanarak siniri yedinci trakeal halka düzeyinde tam olarak kesin, bir nokta 11 T dikiş ile. Transplantasyondan hemen önce, larinksi de innerve etmek için anastomoz gerçekleştirin. OB ve OM hücrelerini kaplardan çıkarmak için %0,05 tripsin EDTA kullanın.

Ardından sindirimi durdurmak için, hücreleri 432 G'de beş dakika santrifüjlendirdikten sonra beş mililitre ılık ortam ekleyin. Hücreleri saymak ve bu modeldeki hücre konsantrasyonunu 30 mikrolitre D-M-E-M-F 12'de 1,2 ila altı kez 10 altı hücre arasında ayarlamaq için hemo sitometre kullanın. Bir ila iki oranında hücreleri büyüme faktörü, azaltılmış matrigel ile karıştırın ve transplantasyondan hemen önce buz üzerinde bekletin.

Tübi buzdan çıkarın ve karışımı ısıtmak için tutun. Bir pipet kullanarak hücre matrigelli çözeltiyi anastomoz bölgesine bırakın ve yaralanmış sinir üzerinde kendiliğinden birleşmesine izin verin. Kasları ve deriyi dört sıfır dikişle kapatın.

Ratı bireysel bir kafese yerleştirin ve 24 saat boyunca ısı lambasının altında tutun. Ameliyattan yaklaşık iki ay sonra ve anestezi uygulandıktan sonra önümüzdeki beş gün boyunca analjezik verin. Bu videoda daha önce açıklandığı gibi, sedasyonu doğrulamak için ayak parmağı ile sıkıştırma kullanarak ratı dorsal dekübitus pozisyonuna yerleştirin.

Ratı dorsal dekübitus pozisyonuna yerleştirin ve 30 derecelik bir video laringoskopu yerleştirin. Larinksin en iyi görünümünü sağlamak için ayarlanmış ve her kayıtta aynı görünümü yeniden üretecek şekilde ayarlanmıştır. Posterior komisür, OID'nin vokal apofizine giren sağ vokal kord ve OID'nin vokal hipotezizine giren sol vokal kord gibi anatomik dönüm noktalarını belirleyin.

Vokal kord hareketlerini, maksimal kaçırma ve maksimal kaçırma arasındaki farkı ölçerek vokal kordların maksimal ve maksimal kaçırma hareketi arasındaki mutlak açısal hareketi kaydederek kaydedin. Dinamik skoru hareket genliğini ölçerek ve fonksiyonel skoru, elektromiyografik inceleme yapmak için sinkinezi ve paradoksal hareketleri ölçerek belirleyin.

Ratın larinksini ve trakeasını ortaya çıkararak, nüks eden sinir anastomozunun gösterildiği şekilde, ratın hamstring kasına bir elektrot yerleştirin. Kriko-tiroid kıkırdağını açın. Ardından mikroskop kesiçlerini kullanarak, kriko-tiroid kıkırdağını açarak arka kriko-tiroid veya PCA kasını ortaya çıkarın.

Hayvan kendiliğinden ventilasyonda olduğu için, bir monopolar iğne elektrotu kas içine sokun. PCA kasının elektriksel kas aktivitesini kaydetmek için bir alım sistemi kullanın. Kas aktivitesini, solunumla senkronizasyon ve zenginlik açısından, aşağıdaki ölçekte sıfırdan üçe kadar nitel bir puan vererek analiz edin.

Sıfır, solunuma bağlı artış olmayan denenmemiş bir izleme ile eşittir. Bir, solunuma bağlı artış olan bir ritmik izleme ile eşittir, ancak zayıf bir izleme iki, daha zengin aktiviteye sahip ritmik bir izleme ile eşittir ve üç, çok zengin, maksimal kasıt