Name: Arasında Cephalic Kompleksi Genetik İndüksiyon ve Benign ve İnvaziv vizüalizasyonun için Protokol Drosophila melanogaster (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-11T15:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Öğrenin Drosophila melanogaster'da iyi huylu ve invaziv tümörleri genetik olarak indüklemeyi ve larval baş kompleks diseksiyonu ile görselleştirmeyi. Bu yöntem onkolojide tümör davranışlarını incelemeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Benim Araştırma laboratuvarında Biyoloji başlangıç ​​fonları WKU Bölümü, WKU Araştırma Vakfı RCAP-I # 11-8032 hibe tarafından desteklenen Ulusal Sağlık Enstitüleri Genel Tıp Bilimleri Ulusal Enstitüsü&#39;nden bir ana hibe ile finanse edilen bir KBRIN-ALAN hibe Sağlık ödül sayısı 5P20GM103436-13 altında. Ben ayrıca, laboratuvar ilk Xu laboratuvarda bu tekniği kurulan bu tekniği ve Dr Raymond Pagliarini tanıtıldı Dr Tian Xu içinde kabul etmek istiyorum.

1.. Benign Non-invaziv Tümörlerinde indüksiyon <ol><li> Iyi huylu tümörlerin uyarılması için Tablo 2&#39;de listelenen stokları kullanın. </li><li> Aşağıdaki genotip &quot;tester&quot; hisse senedi için bir starter kültür hazırlayın:; Küvet-Gal80, FRT40A, y, ey-FLP1, w Act5C&gt; y +&gt; Gal4, UAS-GFP </li><li> Aşağıdaki genotip &quot;test&quot; hisse senedi için bir starter kültür hazırlayın: w FRT40A, UAS-Ras V12 / cyo </li><li> &quot;Test&quot; stok &quot;tester&quot; stoktan on kadın ve on erkek bakireler toplayın. </li><li> Sinek gıda ile bir şişede iki yerleştirerek &quot;tester&quot; ve &quot;test&quot; stoktan erkek ve dişileri çapraz. </li><li> 25 ° C inkübatör haç yerleştirin ve erkek ve dişiler çiftleşmek ve 24-48 saat boyunca yumurtalarını bırakmak için izin verir. </li><li> Yeterli yumurta birikimi ve birinci değişim safhasındaki larva kültürü kurumasının olmadığından emin varlığı için şişeleri edin. <ol><li> Otoklavlanmış bir kaç damla(kültür kuruma ise) nemli tutmak için kültüre damıtılmış su. </li><li> Kültür izlemek ve gerektiğinde adımı 1.7.1 tekrar devam. </li></ol></li><li> Bölüm 3&#39;te belirtildiği gibi, flöresanlı bir stereomikroskop altında üçüncü instar larvaları dolaşan dikkate alınmalıdır. </li></ol> 2. İnvaziv Tümörlerinde indüksiyon <ol><li> Istilacı tümör indüksiyonu için, Tablo 2&#39;de listelenen stokları kullanın. </li><li> Aşağıdaki genotip yukarıdaki adım 1.2 &#39;den starter kültür kullanın:, y ey-FLP1, w, Küvet-Gal80, FRT40A; Act5C&gt; y +&gt; Gal4, UAS-GFP </li><li> LGL 4, FRT40A, UAS-Ras V12 / cyo, w: Aşağıdaki genotip &quot;test&quot; hisse senedi için bir starter kültür hazırlayın </li><li> &quot;Test&quot; stok &quot;tester&quot; stoktan on kadın ve on erkek bakireler toplayın. </li><li> Sinek f ile bir şişede iki yerleştirerek &quot;tester&quot; ve &quot;test&quot; stoktan erkek ve kadın çaprazood. </li><li> 25 ° C inkübatör haç yerleştirin ve erkek ve dişiler çiftleşmek ve 24-48 saat boyunca yumurtalarını bırakmak için izin verir. </li><li> Yeterli yumurta birikimi ve birinci değişim safhasındaki larva kültürü kurumasının olmadığından emin varlığı için şişeleri edin. <ol><li> (Kültür kuruma ise) nemli tutmak için kültüre otoklavlanmış damıtılmış su içinde birkaç damla ekleyin. </li><li> Gerektiği gibi kuruluk ve tekrar adım 2.7.1 için kültür izlemeye devam edin. </li></ol></li><li> Bölüm 3&#39;te belirtildiği gibi, flöresanlı bir stereomikroskop altında üçüncü instar larvaları dikkate alınmalıdır. </li></ol> 3. Benign ve İnvaziv Tümörler Gözlem <ol><li> Iyi huylu tümör izolasyon ve görselleştirme için üçüncü larva evresindeki kullanın. <ol><li> Damıtılmış su içinde, bir boya fırçası ıslatın ve bu boya fırçası kullanılarak kültür şişe duvarında bir kaç üçüncü instar larvaları kazıyın. </li><li> 1X PBS ile bir depresyon slayt larva yerleştirin ve daha sonra ıslak bir boya fırçası hurdaları kullanaraklarva epidermis herhangi bir gıda maddesini kapalı e. </li><li> Bir Petri plaka içindeki larvaları larva yerleştirin ve hareketsiz hale getirmek için 30 dakika boyunca -20 ° C dondurucuda bırakın. <ol><li> FLYNAP kullanarak larva hareketsiz hale getirmek için alternatif bir yöntemdir. </li><li> 3.1.3.2 gelen flakon FLYNAP batırılmış bir FLYNAP değnek yerleştirin ve larvaları ile flakon let takılı şişeyi takıp sonra 30 ila 40 dakika boyunca durmak. </li></ol></li><li> , Hafif halokarbonlu bir damla yağ ekleyebilirsiniz bir cam kapak ile kapak ve Yeşil Floresan Protein (GFP) görselleştirmek için yeteneği ile bir floresan stereomikroskop altında gözlemlemek, bir cam slayt üzerinde hareketsiz larva yerleştirin. </li><li> Iyi huylu tümör taşıyan larvalar sefalik karmaşık mevcut ön bölgede yeşil floresan olacaktır. </li></ol></li><li> Invaziv tümörlerin gözlem için yukarıdaki 2. adımda belirlenen kültürünün günü (indüksiyon sonrası) 10 larva seçin. Istilacı tümör taşıyan larva uzatılmış l çünkü gün 10 larva seçilir:genellikle ARVAL sahne ve pupariate başarısız. </li><li> Yerine üçüncü dönem larva kullanımı gün 10 larva hariç 3.1.4 adımlar 3.1.1 izleyin. <ol><li> Gün 10 invaziv tümör taşıyan larvalar sefalik karmaşık mevcut ön bölgede yeşil floresan olacaktır. </li></ol></li><li> Floresan mikroskop dijital bir kamera ile donatılmış ise, o zaman floresanlama benign ve invaziv tümör taşıyan larva fotoğraf çekmek. </li></ol> 4. Benign ve İnvaziv Tümörlerin Cephalic Kompleksi ve ayrıntılı Gözlem Diseksiyon Larva saydam epidermis zor tümörlerin işgali ölçüde gözlemlemek için yapar. Böylece işgali ölçüde daha iyi larva dışarı sefalik kompleksi diseksiyon tarafından görüntülenmiştir. Aşağıdaki adımlar sefalik kompleksi incelemek için kullanılabilir olmalıdır. <ol><li> Islak bir boya fırçası kullanarak f Üçüncü dönem (iyi huylu tümörler için) larvaları ve günü (invaziv tümörlerde) 10 larva seçinilgili kültür şişeleri rom. </li><li> Soğuk 1X PBS içeren bir diseksiyon çanak bir kuyuda larva yerleştirin. Larva epidermis herhangi bir yiyecek artıklarını kazımak için boya fırça kullanın. <ol><li> Soğuk 1X PBS içeren diseksiyon çanak taze bir kuyuya temiz larva transferi. </li><li> Floresan tespit etme yeteneğine sahip bir stereomikroskop kullanılarak GFP floresans olmadığını kontrol edin. Non-GFP taşıyan larvaları atın. </li></ol></li><li> Diseksiyon çanak taze bir kuyuya soğuk 1X PBS 1.0 ml ekleyin ve forseps bir çift kullanarak huylu veya invaziv tümörleri (diseksiyon protokol tümörlerin bu iki tür için aynı kalır) ya taşıyan bir larva transferi. </li><li> Ön ucundan 2/3rds yaklaşık bir çift forseps kullanarak larva basılı tutun. <ol><li> Forseps diğer çifti kullanmak ve akıllıca larva posterior 1/3rd ayırmak ve atın. </li><li> Larva ön 2/3rds gidelim. Larva içindeki basınç içeriğini serbest olaraklarva vücut boşluğundan dışarı sızmak olacaktır. </li><li> Gut, vücut yağ ve vücut boşluğundan dışarı oozed olan larva diğer iç içeriğini kaldırmak için forseps bir çift kullanın. </li><li> Larva ağız kancasını tutun ve larva epidermis içine itmek için forseps bir çift kullanın ve tamamen larva ters forseps diğer çifti kullanılarak. </li><li> Nazikçe ve dikkatli vücut yağ, tükürük bezleri, gut, kanat disk kompleksi ve herhangi trakeal tüpleri kaldırmak için forseps kullanın. Cephalic kompleksi ters larva ağız kanca takılı görünür olmalıdır. Beyin hemisfer ve ventral sinir kablosu (VNC) hala VNC çıkan sinirler aracılığıyla larva epidermis bağlı olacaktır. </li><li> Nazikçe sefalik sinirler ve larva epidermis arasındaki bağlantıları kırmak için forseps bir çift kullanın. </li><li> VNC ve larva epidermis arasında sinir bağlantıları kırık ve aşırı vücut yağ ve diğer doku kaldırılır gibi, sefalik işbirliğimplex açıkça görülebilir olacak ve sadece ağız kancalar larva epidermis eklenecektir. </li><li> Karmaşık antikor boyama gibi downstream uygulamalar için veya daha sonra görselleştirme için sabit gerekiyorsa cephalic karmaşık larva epidermis bağlı bırakılabilir. </li><li> Başka bir alt uygulama bundan sonra, yapılan olması halinde, sefalik karmaşık larva epidermisten ayrılır, ve daha fazla analiz için gözlem ve montaj ortamı dayalı bir gliserol bir damla yerleştirilebilir. Montaj ortamı olarak Vectashield kullanın. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Bale, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+signaling+and+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Genomics+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Hedgehog signaling and human disease.</a> Annu Rev Genomics Hum Genet. 3, 47-65 (2002).</li>
<li>Bier, E., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+an+emerging+model+for+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Drosophila, an emerging model for cardiac disease.</a> Gene. 342, 1-11 (2004).</li>
<li>Coombs, G. S., Covey, T. M., Virshup, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+signaling+in+development%2C+disease+and+translational+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Wnt signaling in development, disease and translational medicine.</a> Curr Drug Targets. 9, 513-531 (2008).</li>
<li>Gistelinck, M., Lambert, J. C., Callaerts, P., Dermaut, B., Dourlen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+models+of+tauopathies%3A+what+have+we+learned%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Alzheimers+Dis%22%5BJournal%5D)">Drosophila models of tauopathies: what have we learned.</a> Int J Alzheimers Dis. 2012, 970980(2012).</li>
<li>Marsh, J. L., Thompson, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+in+the+study+of+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Drosophila in the study of neurodegenerative disease.</a> Neuron. 52, 169-178 (2006).</li>
<li>Reiter, L. T., Bier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Drosophila+melanogaster+to+uncover+human+disease+gene+function+and+potential+drug+target+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Ther+Targets%22%5BJournal%5D)">Using Drosophila melanogaster to uncover human disease gene function and potential drug target proteins.</a> Expert Opin Ther Targets. 6, 387-399 (2002).</li>
<li>Valenta, T., Hausmann, G., Basler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+many+faces+and+functions+of+beta-catenin%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">The many faces and functions of beta-catenin.</a> EMBO J. 31, 2714-2736 (2012).</li>
<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cancer%3A+the+next+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li>
<li>Pagliarini, R. A., Xu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetic+screen+in+Drosophila+for+metastatic+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A genetic screen in Drosophila for metastatic behavior.</a> Science. 302, 1227-1231 (2003).</li>
<li>Wu, J. S., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+mosaic+analysis+with+a+repressible+cell+marker+%28MARCM%29+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol for mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) in Drosophila.</a> Nat Protoc. 1, 2583-2589 (2006).</li>
<li>Boccaccio, C., Comoglio, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasive+growth%3A+a+MET-driven+genetic+programme+for+cancer+and+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Invasive growth: a MET-driven genetic programme for cancer and stem cells.</a> Nat Rev Cancer. 6, 637-645 (2006).</li>
<li>Srivastava, A., Pastor-Pareja, J. C., Igaki, T., Pagliarini, R., Xu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basement+membrane+remodeling+is+essential+for+Drosophila+disc+eversion+and+tumor+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Basement membrane remodeling is essential for Drosophila disc eversion and tumor invasion.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 2721-2726 (2007).</li>
<li>Wang, W., Eddy, R., Condeelis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cofilin+pathway+in+breast+cancer+invasion+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">The cofilin pathway in breast cancer invasion and metastasis.</a> Nat Rev Cancer. 7, 429-440 (2007).</li>
<li>Brand, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GFP+as+a+cell+and+developmental+marker+in+the+Drosophila+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">GFP as a cell and developmental marker in the Drosophila nervous system.</a> Methods Cell Biol. 58, 165-181 (1999).</li>
<li>Brand, A. H., Dormand, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+GAL4+system+as+a+tool+for+unravelling+the+mysteries+of+the+Drosophila+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">The GAL4 system as a tool for unravelling the mysteries of the Drosophila nervous system.</a> Curr Opin Neurobiol. 5, 572-578 (1995).</li>
<li>Vidal, M., Cagan, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+models+for+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Genet+Dev%22%5BJournal%5D)">Drosophila models for cancer research.</a> Curr Opin Genet Dev. 16, 10-16 (2006).</li>
<li>Parks, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+generation+of+high-resolution+deletion+coverage+of+the+Drosophila+melanogaster+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Systematic generation of high-resolution deletion coverage of the Drosophila melanogaster genome.</a> Nat Genet. 36, 288-292 (2004).</li>
<li>Blair, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+mosaic+techniques+for+studying+Drosophila+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Genetic mosaic techniques for studying Drosophila development.</a> Development. 130, 5065-5072 (2003).</li>
<li>Xu, T., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+genetic+mosaics+in+developing+and+adult+Drosophila+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Analysis of genetic mosaics in developing and adult Drosophila tissues.</a> Development. 117, 1223-1237 (1993).</li>
<li>Xu, T., Wang, W., Zhang, S., Stewart, R. A., Yu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+tumor+suppressors+in+genetic+mosaics%3A+the+Drosophila+lats+gene+encodes+a+putative+protein+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Identifying tumor suppressors in genetic mosaics: the Drosophila lats gene encodes a putative protein kinase.</a> Development. 121, 1053-1063 (1995).</li>
<li>Rebay, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetic+screen+for+novel+components+of+the+Ras%2FMitogen-activated+protein+kinase+signaling+pathway+that+interact+with+the+yan+gene+of+Drosophila+identifies+split+ends%2C+a+new+RNA+recognition+motif-containing+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">A genetic screen for novel components of the Ras/Mitogen-activated protein kinase signaling pathway that interact with the yan gene of Drosophila identifies split ends, a new RNA recognition motif-containing protein.</a> Genetics. 154, 695-712 (2000).</li>
<li>Therrien, M., Morrison, D. K., Wong, A. M., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetic+screen+for+modifiers+of+a+kinase+suppressor+of+Ras-dependent+rough+eye+phenotype+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">A genetic screen for modifiers of a kinase suppressor of Ras-dependent rough eye phenotype in Drosophila.</a> Genetics. 156, 1231-1242 (2000).</li>
<li>Albini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+in+vitro+assay+for+quantitating+the+invasive+potential+of+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A rapid in vitro assay for quantitating the invasive potential of tumor cells.</a> Cancer Res. 47, 3239-3245 (1987).</li>
<li>Zicha, D., Dunn, G. A., Brown, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+direct-viewing+chemotaxis+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">A new direct-viewing chemotaxis chamber.</a> J Cell Sci. 99 (Pt 4), 769-775 (1991).</li>
<li>Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+developments+in+in+vivo+models+of+neoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">New developments in in vivo models of neoplasia.</a> Cancer Metastasis Rev. 10, 191-192 (1991).</li>
<li>Mueller, B. M., Romerdahl, C. A., Trent, J. M., Reisfeld, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+spontaneous+melanoma+metastasis+in+scid+mice+with+an+antibody+to+the+epidermal+growth+factor+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Suppression of spontaneous melanoma metastasis in scid mice with an antibody to the epidermal growth factor receptor.</a> Cancer Res. 51, 2193-2198 (1991).</li>
<li>Konantz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+xenografts+as+a+tool+for+in+vivo+studies+on+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Zebrafish xenografts as a tool for in vivo studies on human cancer.</a> Ann N Y Acad Sci. 1266, 124-137 (2012).</li>
<li>McIntyre, R. E., vander Weyden, L., Adams, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+gene+discovery+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Genet+Dev%22%5BJournal%5D)">Cancer gene discovery in the mouse.</a> Curr Opin Genet Dev. 22, 14-20 (2012).</li>
<li>Mattison, J., vander Weyden, L., Hubbard, T., Adams, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+gene+discovery+in+mouse+and+man%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Cancer gene discovery in mouse and man.</a> Biochim Biophys Acta. 1796, 140-161 (2009).</li>
<li>Miles, W. O., Dyson, N. J., Walker, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+tumor+invasion+and+metastasis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Modeling tumor invasion and metastasis in Drosophila.</a> Dis Model Mech. 4, 753-761 (2011).</li>
<li>Stefanatos, R. K., Vidal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+invasion+and+metastasis+in+Drosophila%3A+a+bold+past%2C+a+bright+future%5BTitle%5D)+AND+%22J+Genet+Genomics%22%5BJournal%5D)">Tumor invasion and metastasis in Drosophila: a bold past, a bright future.</a> J Genet Genomics. 38, 431-438 (2011).</li>
<li>Beaucher, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+brain+tumor+metastases+express+both+neuronal+and+glial+cell+type+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Drosophila brain tumor metastases express both neuronal and glial cell type markers.</a> Dev Biol. 301, 287-297 (2007).</li>
<li>Beaucher, M., Hersperger, E., Page-McCaw, A., Shearn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+ability+of+Drosophila+tumors+depends+on+MMP+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Metastatic ability of Drosophila tumors depends on MMP activity.</a> Dev Biol. 303, 625-634 (2007).</li>
<li>Joyce, J. A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironmental+regulation+of+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Microenvironmental regulation of metastasis.</a> Nat Rev Cancer. 9, 239-252 (2009).</li>
<li>Igaki, T., Pagliarini, R. A., Xu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+cell+polarity+drives+tumor+growth+and+invasion+through+JNK+activation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Loss of cell polarity drives tumor growth and invasion through JNK activation in Drosophila.</a> Curr Biol. 16, 1139-1146 (2006).</li>
<li>Uhlirova, M., Jasper, H., Bohmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-cell-autonomous+induction+of+tissue+overgrowth+by+JNK%2FRas+cooperation+in+a+Drosophila+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Non-cell-autonomous induction of tissue overgrowth by JNK/Ras cooperation in a Drosophila tumor model.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 13123-13128 (2005).</li>
<li>Uhlirova, M., Bohmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((JNK-+and+Fos-regulated+Mmp1+expression+cooperates+with+Ras+to+induce+invasive+tumors+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">JNK- and Fos-regulated Mmp1 expression cooperates with Ras to induce invasive tumors in Drosophila.</a> EMBO J. 25, 5294-5304 (2006).</li>
<li>Menut, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mosaic+genetic+screen+for+Drosophila+neoplastic+tumor+suppressor+genes+based+on+defective+pupation%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">A mosaic genetic screen for Drosophila neoplastic tumor suppressor genes based on defective pupation.</a> Genetics. 177, 1667-1677 (2007).</li>
<li>Wu, M., Pastor-Pareja, J. C., Xu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+between+Ras%28V12%29+and+scribbled+clones+induces+tumour+growth+and+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Interaction between Ras(V12) and scribbled clones induces tumour growth and invasion.</a> Nature. 463, 545-548 (2010).</li>
</ol>

Ben ifşa hiçbir şey yok.

Kanser geçmişte çok daha iyi bir anlayış bugün karmaşık bir hastalıktır. Ancak, hala çok öğrendim ve biz altında yatan mekanizmaları tam bir resim var önce açıklanması gerekir. Burada sunulan basit bir protokol mümkün genetik olarak bütün bir organizma içinde iyi huylu ve invaziv tümörleri neden ve bu modelde, tümör ilerlemesi ile ilişkili biyoloji çalışma kolaylaştırır. Drosophila ve diğer organizmalarda mevcut tekniklerin çoğu tümörogenez ve metastazı veya 23-27 yetişkin taşıyıcılara yerleştirildiğ...

Metastatik bir duruma bir iyi huylu tümörlerin ilerlemesi gövde 8 içinde mevcut koruyucu mekanizmaların kaçırma ile karakterize aşamalı bir işlemdir. Örneğin, vücut, tümör hücrelerinin, apoptoz ve bağışıklık sistemini kaçmasına Bazal Membran olarak adlandırılan özel bir hücre dışı matrisi (ECM) atılım ve çevredeki hücrelerin 8 tarafından uygulanan herhangi bir sosyal kontrol aşmak gerekir. Bu kanser hücreleri metastaz denilen bir süreçte uzak siteleri göç ve kolonize yeteneğini kazanmış bir adım akıllıca ilerlemesi geçer. Tümör hücresi vücut tarafından dayatılan engellerin üstesinden nasıl anlayışımız, ancak araştırma ortaya çıkan resim kanser hücreleri 11-13 normal gelişim süreçleri ve sinyal yollarının tekrar tekrar kullanılması bugüne kadar puan yapmış, hala emekleme döneminde olduğunu. Meyve Drosophila melanogaster bizim und müthiş katkıda bulunmuştur uçmakSon birkaç on yıl boyunca 14-17 geliştirmiştir gelişmiş genetik tekniklerin kullanımı ile normal büyüme ve gelişme hastalığı erstanding. Biz çeşitli onkogenler ve tümör baskılayıcı genlerin 18-22 daha iyi anlaşılması ulaştık mutajenizi ve ekspresyonu araçlarını kullanma. Bununla birlikte, tümör metastazı hücre kültürü modelleri 23,24 yanı sıra çeşitli ksenograft modelleri 25-27 temel olarak incelenmiştir çeşitli genetik lezyonlar arasındaki işbirliğinin bir sonucudur. Bunlar tamamen canlı bir organizmada bulunan koşullarını taklit yok gibi, bu modellerin güçlü olsa sınırlamaları var. Ayrıca, farelerde mevcut transgenik modeller hantal ve invaziv davranış 28,29 genetik analizi için elverişli değildir. Çeşitli çalışmalar Drosophila 30,31 tümör hücrelerinin işgali anlamaya çalıştılar. Bu teknikler öncelikle hosts birincil tümörlerin nakli kullanmak ve sonra tra izleme güveniyorkomşu dokuların 32,33 işgali için tümörleri nsplanted. MARCM 10 denilen güçlü bir tekniktir Drosophila 9 tümör işgali model Pagliarini ve Xu tarafından uyarlandı. Invazyon Bu zarif genetik modelleme bir aktive onkogen ve hücre polarite kaybı arasındaki işbirliğini kullandı. Bu modelleme gücü istilacı tümör böylece dokuların nakli ihtiyacını engellemeyi sağlam bir organizma içinde oluşturulan gerçeğinde yatmaktadır. Onkojenik işbirliği meydana getirmek için, Ras V12 gibi aktive edilmiş bir onkogen larva göz antennal disk hücre klonlarının ifade edilir. MARCM tekniğin bir sonucu olarak, bu klonlar, aynı zamanda kolay görselleştirme için yeşil floresan protein (GFP) ile işaretlenmiştir ve dev larva öldürücü, karalanmış ve büyük diskler gibi cep kutup mutantlar için homozigot yapılır. Sonuç GFP invaziv tümörleri olan etiketli sefalik karmaşık. Bu raporda Iikna etmek için nasıl göstermek ve sağlam bir larva bağlamında ve dışarı disseke sefalik kompleksi hem bu invaziv tümörleri görselleştirmek. Burada sunulan tümör indüksiyonu Drosophila ikinci kromozomu üzerinde reaktif kullanır. Tablo 2 de, aynı amaç için kullanılabilir X ve 3. kromozomlar üzerine stokların bir listesini sağlar. Bu basitleştirilmiş bir protokol progresyonla moleküler temelini anlamak isteyen araştırmacılar bu tekniği kolayca erişilebilir hale getireceğine inanıyoruz.

<table><tbody><tr><td>10X PBS (fosfat tamponlu salin) pH 7.2 stok çözeltisi</td><td>Invitrogen, Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soğutulmuş 1X PBS pH7.2 çalışma solüsyonu</td><td>Invitrogen, Sigma Aldrich</td><td></td><td>Taze ve buzdolabında saklayın, bir haftaya kadar kullanılabilir</td></tr><tr><td>Flynap</td><td>Carolina Biologicals Larvaları</td><td></td><td>uyuşturmak için gereken sinek anestezisi</td></tr><tr><td>Fiksatif</td><td>0.1M BORULAR, pH 7.2, %4 Paraformaldehit</td><td></td><td>Disseke sefalik kompleksi düzeltmek için gerekli</td></tr><tr><td>buz kovası</td><td>buz üzerinde birkaç</td><td></td><td>bakım solüsyonu. Ayrıca, soğutulmuş 1X PBS'de sefalik kompleksi inceleyin ve daha sonra bir Eppendorf tüpü</td></tr><tr><td>1.7ml Eppendorf tüpünde</td> buzun üzerine yerleştirin <td>Çeşitli</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cam slaytlar, kapak camı</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vectashield Montaj Ortamı veya başka herhangi bir montaj ortamı</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Halokarbon 200 veya 700 Oil</td><td>Polysciences Inc. veya Halocarbon.com</td><td></td><td>Halokarbon 200, larvaları bir floresan stereoskop üzerine görselleştirmek için monte etmek için kullanılır</td></tr><tr><td>Sally Hansen "Çivi Kadar Sert" oje</td><td>Herhangi bir genel ürün mağazasında</td><td></td> bulunabilir <td>Coverslip'in kenarlarını kapatmak için gereklidir</td></tr><tr><td>Bir Leica MZ16.5 floresan stereomikroskop veya başka bir floresan stereomikroskop</td><td>Leica ve diğerleri</td><td></td><td>Larvalarda GFP floresansını gözlemlemek için gereklidir</td></tr><tr><td>Dumont #5 forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pyrex 9 kuyulu spot plakası veya başka herhangi bir diseksiyon kabı</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Boya Fırçası</td><td>Herhangi bir genel ürün mağazasında</td><td></td><td></td></tr><tr> bulunabilir<td colspan="4">Tablo 1. Bu makalede sunulan deney protokolünü gerçekleştirmek için gerekli malzemeler.</td></tr></tbody></table>

arasında cephalic kompleksi genetik İndüksiyon ve benign ve İnvaziv vizüalizasyonun için protokol<em&gt; drosophila melanogaster</em

A Protocol for Genetic Induction and Visualization of Benign and Invasive Tumors in Cephalic Complexes of Drosophila melanogaster

Drosophila karmaşık hastalıkların 1-7 anlamamıza büyük katkı devam ediyor son birkaç yıldır ve bugün için normal gelişim ve hastalığın genetik temeli anlayışımızı aydınlatmıştır. Bir metastatik duruma iyi huylu tümörlerin ilerlemesi karmaşık bir olay 8 ve bizi daha iyi bu hastalığın 9 genetik temelini anlamak için Drosophila modellenmiştir. Burada genetik, neden gözlemlemek ve sonra Drosophila larvaları tümörlerin ilerlemesini analiz etmek için basit bir protokol mevcut. Tümör indüksiyon tekniği MARCM 10 sistemi tabanlı ve aktif bir onkogen, Ras V12 ve hücre polarite genlerinin kaybı (karalanmış, diskler büyük ve ölümcül dev larva) invaziv tümörleri 9 üretmek arasındaki işbirliğini patlatır edilir. Ben bu tümörler sağlam larvaları görüntülendi olabilir nasıl göstermek veo zaman nasıl bu daha fazla analiz için dışarı disseke edilebilir. Burada sunulan basitleştirilmiş protokolü mümkün bu tekniğin tümör işgali bir genin rolünü anlamak isteyen araştırmacılar tarafından kullanılmak için yapmalıdır.

Protokol bir sonucu olarak, burada sunulan kullanıcı larva göz antennal hayali disk aktifleştirilmiş onkojeni aşırı ifade edenler tarafından iyi huylu tümörler teşvik edebilecektir. Kullanıcı aynı zamanda bir hücre kutup gen için mutant hücre klonları içinde aktive edilmiş bir onkojeni aşırı ifade ile göz antennal disk invaziv tümörler teşvik edebilecektir. Tümörler kolayca bütün larvaları ya da larva vücut boşluğuna (Şekil 1) üzerinden kesilir edilmiştir sefalik kompleksleri &quot;yeşil floresan&quot; ...

RAS V12 ve karalanmış, tümör hücreleri de invaziv davranışlar sergileyen Drosophila tümör büyüme neden gibi hücre polarite genlerindeki mutasyonlar gibi bir aktive onkogen arasındaki işbirliği. Burada iyi huylu ve invaziv tümörlerin indüksiyon ve gözlem için basit bir protokol verilmektedir.

Arasında Cephalic Kompleksi Genetik İndüksiyon ve Benign ve İnvaziv vizüalizasyonun için Protokol<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila has illuminated our  understanding of the genetic basis of normal development and disease for the  past several decades and today it continues ...

Bu prosedürün genel amacı, drosophila'da iyi huylu ve invaziv tümörler indüklemek ve ardından larval sefalik kompleksi diseke ederek bunları görselleştirmektir. Süreç, istenen suşlar arasında çaprazlamalar yapılması ve invaziv veya iyi huylu tümörler taşıyan larval progeninin izole edilmesiyle başlar. Bir sonraki adım ise seçilen larvaların diseke edilmesidir.Sefalik kompleksi açığa çıkarmak için, öncelikle bunları yolun üçte ikisine kadar kesip sabitleyin ve ardından içlerini dışarı çevirin. Sonrasında yağ cisimciği ve bağırsak dokuları temizlenir, ardından ventral sinir kordonuna hâlâ bağlı olan sinirler ve larval epidermis de koparılır. Son adım, sefalik kompleksle görüntüleme yapmak veya onu sonraki uygulamalar için sabitlemektir.Sonuç olarak, floresan mikroskobunun kullanımıyla GFP etiketli invaziv veya benign tümörler gösterilebilir. Bu yöntem, kanser biyolojisindeki bazı temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Örneğin, sağlam bir organizmada tümör ilerlemesini hangi genlerin inhibe edebileceğini anlamak isteyebilirsiniz.Gerekli genetik stoklar elde edildikten sonra, test edici suşun başlangıç kültürünü hazırlayın. Ayrıca test edilen stok için de bir başlangıç kültü

a-protocol-for-genetic-induction-visualization-benign-invasive-tumors

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu protokol, mikroenjeksiyon ve yüksek çözünürlüklü görüntüleme kullanımı...

Mitoz incelenmesi için Mikroenjeksiyon Teknikleri Drosophila melanogaster Sinsityal Embriyo

Mezoskopik floresan tomografi doku kesit floresan mikroskopi penetrasyon sınırları ötesinde faaliyet göstermektedir. Tekniği çok projeksiyon aydınlatma ve foton bir taşıma açıklamasına dayanmaktadır. Biz, in vivo morfolojilerinden tüm vücut 3B görselleştirme, GFP ifade kanat hayali diskler...

Mezoskopik Floresans Tomografi için In-vivo Görüntüleme Geliştirme Drosophila</em

Biz sahnelenen hazırlamak için prosedürü...

Tüm montaj Embriyonik Sinir Sistemi Görselleştirme Drosophila Embriyolar

Bu protokol Drosophila göz / antennal hayali diskleri (EAD) floresan işaretli, genetik olarak tanımlanmış klonal tümörleri oluşturmak için nasıl gösterir. Üçüncü evre larvaları ve nasıl görselleştirmek ve gen ifadesi değişikliklerini ve tümör yayılmasını ölçmek için bunları işlemek için EAD ve beyin teşrih açıklamaktadır.

<em&gt; Drosophila</em&gt; Hayali Disk Tümör Modeli: Genetik Mozaikler kullanma Gen İfade ve Tümör invazivliğinin Görselleştirme ve

Biz diseksiyon, tespit ve steroid hormon biyosentezi ve düzenleyici mekanizma çalışmaya Drosophila larvaları ve yetişkin kadınlarda Sterpidojenik organların immün için bir protokol açıklar. steroidojenik organlara ek olarak, böyle germ çizgili kök hücreleri gibi steroidojenik organların innervasyon olarak steroidojenik hedef hücreleri görselleştirmek.

Sineği boyanmasına ile steroidogenik organları ve İnteraktif Organlar görselleştirme için Protokoller<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Bu çalışma, geç evre-16 Drosophila melanogaster embriyolarının motor nöron projeksiyonlarını görselleştirmek için standart bir immünohistokimya yöntemini ayrıntılarıyla anlatıyor . FasII antikoru ile lekelenmiş sabit embriyoların filleted hazırlığı, motor akson yol bulma ve sinirsel gelişim sırasında hedef tanıma için gerekli genlerin karakterize edilmesi için güçlü bir araç sağlar.

Embriyonik Motor Nöronlarının Aksonal Projeksiyon Paterninin Görselleştirilmesi<em&gt; Drosophila</em

Drosophila imaginal disk epitelyumunda mozaik klon analizi, tümörigenezin genetik ve hücresel mekanizmalarını incelemek için güçlü bir model sistemidir. Burada, GAL4-UAS sistemini kullanarak Drosophila kanat imaginal disklerinde tümörleri indüklemek için bir protokolü tarif eder ve tümör fenotiplerini sınıflandırmak için bir tanı yöntemi sunmaktayız.

Tümörlerin İndüksiyon ve Teşhisi<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Disk Epiteli

Bu protokol, meyve sineği metamorfoza uğrarken Drosophila abdominal epitelde hücre oryantasyonu ve doku büyüme dinamiklerinin görüntülenmesi ve analizi için tasarlanmıştır. Burada açıklanan metodoloji Drosophila veya diğer model organizmalarda farklı gelişimsel aşamaların, dokuların ve hücre altı yapıların incelenmesine uygulanabilir.

Pupal Evrelerinde Gelişen Drosophila Epitelinde Doku Oryantasyonu ve Büyüme Dinamiğinin Görüntülenmesi ve Analizi

Mikro bilgisayarlı tomografi kullanılarak gelişimin herhangi bir aşamasında bozulmamış Drosophila melanogaster'ın görselleştirilmesine izin veren bir protokol sunulmaktadır.

Mikro bilgisayarlı Tomografi kullanılarak Drosophila melanogaster'ın Tüm Hayvan Görüntülemesi

Bu protokol, neoplazinin çeşitli yönlerini incelemek için Drosophila tümörlerinin yetişkin konakçıların karnına ilk ve devam eden kuşak allotransplantasyonu için ayrıntılı rehberlik sağlar. Bir otoenjektör aparatı kullanarak, araştırmacılar geleneksel, manuel yöntemlerle elde edilenlere kıyasla daha iyi verimlilik ve tümör verimi elde edebilirler.

Programlanabilir Otomatik Nanolitre Enjektör ile Drosophila melanogaster'de Tümör Allotransplantasyonu

Erken Drosophila embriyosunda, birçok organel hareketlidir. Prensip olarak, belirli floresan problar aracılığıyla canlı olarak görüntülenebilirler, ancak yumurta kabuğu embriyoya doğrudan uygulamayı önler. Bu protokol, bu tür probların mikroenjeksiyon yoluyla nasıl tanıtılacağını ve daha sonra parçacık  görüntü velosimetrisi yoluyla toplu organel hareketinin nasıl analiz edileceğini açıklar.

Drosophila Embriyolarında Lipid İçeren Organellerin Sitoiskelete Bağımlı Ticaretinin Görselleştirilmesi

Öğrenin Drosophila melanogaster'da iyi huylu ve invaziv tümörleri genetik olarak indüklemeyi ve larval baş kompleks diseksiyonu ile görselleştirmeyi. Bu yöntem onkolojide tümör davranışlarını incelemeye yardımcı olur.

Arasında Cephalic Kompleksi Genetik İndüksiyon ve Benign ve İnvaziv vizüalizasyonun için Protokol

Daha fazla video keşfet