Name: Serbestçe Fareler davranmak içinde delici yol-kıvrımlarının Synapse Uzun vadeli Potentiation (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 13 s
Description: Öğrenin serbestçe davranan farelerde uzun süreli potansiyasyonu (LTP) kaydetme yöntemini. Bu teknik, öğrenme ve hafıza mekanizmalarını incelemek için transgenik fare modellerinde sinirfizyolojik süreçleri araştırmada kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dr Joseph Bronzino, Dr Hamis Ebu-Hassaballah, Sayın RJ Austin-LaFrance ve Bayan Jessica Koranda: Yazarlar aşağıdaki kabul etmek istiyoruz.

Bu protokol, 3 ve 18 yaş ve 30-50 g yaklaşık olarak vücut ağırlığının her ay) fareler için uygundur. Fareler The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME) &#39;den temin edilebilir. Tüm cerrahi ve deneysel protokolleri Trinity College Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmış ve Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım NIH Kılavuzu&#39;na uygun idi. 1.. Hayvan Hazırlama ve Cerrahi Prosedürleri <ol><li> Ketamin (25 mg / ml), ksilazin (2.5 mg / ml) ve &#39;e asepromazin (0.5 mg / ml) içeren bir kokteylin anestezi hazırlayın. Daha sonra, geri çekme refleksi pedal kullanan olarak kararlı bir anestezi derinliği sağlamak için 0.2 ml / kg enjeksiyonlar her 45 dakikada ilave karnın sağ alt kadranda 1 ml / kg vücut ağırlığı enjekte edilir. </li><li> Bir elektrikli tıraş makinesi kullanarak kafatası üzerinde kürk traş edilerek ameliyat için anestezi fare hazırlayın. Tıraş alan kulak ortasına gözlerin orta içermelidir. Whiske tıraş için değil emin olunBu fare namlu duyu sisteminin bir parçası olarak rs. </li><li> Kafasına traş bölgeye Betadine ardından izopropil alkol uygulamak için pamuklu çubuk kullanmayın. Daha sonra, aynı zamanda pamuklu kullanarak kurumasını gözler önlemek için göze bir mineral yağ, az miktarda uygulanır. </li><li> Stereotaksik çerçeve cihazın üzerine hayvanın başını bağlamaya bebek sıçan kulak manşetleri yerine normal kulak çubuklarını kullanın. Bunu yapmak için, önce sol kulak Manşeti sol kulağını monte edin. Sonra hafifçe aşağı tek elle hayvanın kafasını destekleyen ve diğer elinizle kulak manşet ilerleyen sağ manşet üzerine sağ kulağını kolaylığı. Sonraki, hayvanın vücudunun altında bir ısıtma pedi yerleştirin ve vücut ısısını korumak için 86 ° F olarak ayarlayın. </li><li> Ardından, yan baş tarafına taşımak deneyerek ikili sertliği kontrol edin. Baş katı ve yan yana taşınamaz ama kolayca aşağı yukarı mil etrafında ve zaman hayvan düzgün stereotaksik çerçeve üzerine monte edilir. </li><li> Yavaşça dinlenmeburun / diş çubuğunda fare burun montaj ön dişler burun / diş bar diş açıklığı içinde yavaşça ama güvenli bir dinlenme emin yapma. </li><li> Steril bir neşter kullanılarak, kulak ortasına gözlerin ortasından başlayarak bir orta hat kesi yapmak. Neşter 45 ° açıyla ve aşırı kanamaya neden olacak gibi kafatası ile altta yatan fasya üzerinden değil, kesmek için yeterli basınç uygulayın edilebilir olduğundan emin olun. </li><li> Fasya ayırmak ve kafatası açığa çıkarmak için pamuklu çubuk kullanmayın. Kafatası bregma görülecek ve lambda (Şekil 1A) açıkça görünür olmalıdır. Hayvan Bregma ve lambda yerler aynı dorsoventral (DV) pozisyonu (+ 0.1 mm) olduğu gibi burun / diş çubuğunu ayarlayarak kafatası düz konumda olduğundan emin olun. </li><li> Açıktaki alanına steril tuzlu su içinde bir miktar uygulanır ve nazikçe kafatası temizlemek için pamuklu kullanın. Sonra tamamen kuru hava kafatası için 2-3 dakika bekleyinDevam etmeden önce. </li><li> Bregma ve lambda DV pozisyonunu ölçmek için sol steryotaksik koluna bir iğne monte edin. Bu iki yerlerinden DV konumlandırma birbirinden 0.1 mm arasında olmalıdır. Eğer değilse, stereotaksik çerçeve burun bar kadar ayarlanabilir ve bu aşağı elde etmek. </li><li> Anterior-posterior (AP), yan (LAT) ve dorsoventral (DV) ölçümleri kaydetmek için bregmaya üzerinde iğne yerleştirin. İğne sadece kafatası dokunur ve nüfuz etmediğinden emin olun. </li><li> Lambda göre hipokampus açısal paket ve kıvrımlarının (DG) medial delici yolu (MPP): Bu tür hedef yapılar için koordinatlarını belirlemek için, 1 &quot;sterotaksik in Fare Beyin Koordinatlar&quot; gibi bir fare beyin atlası, kullanın bregma ve sırasıyla (ayrıca bakınız Tablo 1). Sonra, kafatası üzerinde bu noktaları işaretlemek için ince uçlu bir kalem veya kurşun kalem kullanın. </li><li> Ayrıca, kafatasının karşı tarafta iki noktalarını işaretleyin. Bu noktalar which şasi (GND) ve referans (Ref) olarak hizmet edecek olan orta hatta yaklaşık 3 mm olmalı ve (Şekil 1A, aynı zamanda Tablo 1) birbirlerine göre uzunlamasına yerleştirilmiş. </li><li> Sol stereotaksik kolundan iğne işareti kaldırmak ve bir stereotaksik montaj ile donatılmış bir elektrik diş matkap ile değiştirin. Her işaretli nokta üzerinde matkap yerleştirin ve çapı yaklaşık 0.5 mm küçük çapak delik açmak. Sondaj, tekrarlayan yukarı ve aşağı hareket kullanmak ve matkap beyin yüzeyini açığa kafatası nüfuz olup olmadığını sık sık kontrol ettiğinizde. </li><li> Yavaşça ama sıkıca onlar sadece penetre olmadan kortikal yüzeye temas edecek (Şekil 1A (# 0-80 paslanmaz çelik makine vida 1/8, baş Mercimek oluklu) kontralateral delikler (GND ve REF) her bir vida elektrot sürücü .) Bu iki vida elektrotlar zemin ve referans olarak hizmet vermektedir. </li><li> Elektro Mount elektrotlarıde sol ve sağ steryotaksik kollarda sahipleri, sırasıyla. </li><li> Daha sonra bir elektrofizyolojik diferansiyel amplifikatör (= 1.000 kazancı, bant geçiren filtre = 1 Hz-3 kHz) ile uyarılmış yanıtların görsel incelenmesi için bir sayısal osiloskop akım izolasyon ve kayıt elektrot terminali ile bir elektrofizyolojik stimülatörü uyarıcı elektrot terminali bağlayın. Ayrıca, diferansiyel amplifikatöre GND ve REF elektrot terminali bağlayın. </li><li> Ve yavaşça görsel 600-800 uA bir uyarıcı şok uyarılmış yanıt izleme sırasında 0.5 mm artışlarla elektrotları hem düşük. Onlar kendi hedef DV konuma ulaşmak ve basmakalıp bir sinyal osiloskop (Şekil 1B) üzerinde gözlenen kadar her elektrot düşürmeye devam ediyor. </li><li> Daha sonra, yerinde elektrot terminali tutmak için bir kap yapmak için diş akrilik çimento kullanmak, cilde temas herhangi bir diş çimento silinmelidirhemen. Diş çimento tamamen temiz bir kemirgen kafesine stereotaksik çerçeve hayvan aktarmak tedavi edildikten sonra. Çekirdek sıcaklığını korumak için bir ısıtma lambası veya ped kullanın. </li><li> Bu bilinç kavuşur kadar hayvana her saat izleyin. Fluniksin bir enjeksiyon, bir analjezik olarak da uygulanabilir. </li></ol> 2. LTP İndüksiyon <ol><li> Hayvan 5-7 gün cerrahi kurtarmak için izin verin. Ses yalıtım malzemesi ile donatılmış bir Faraday kafesi (122 cm x 43 cm x 43 cm) ve elektrot uyarıcı / kayıt kurulum neden bağlanan bir 5 kanallı döner komütatör kapsayan kayıt ortamında hayvan yerleştirin. </li><li> Hayvan (1,17 adıma bakın) uyarıcı ve kayıt araçlarına elektrotları bağlamadan önce kayıt ortamında 1-2 saat boyunca gelmesini bekleyin. </li><li> Çıkış 400 iA stimülatörü kontrolleri ayarlayın ve emin inci hale uyarılmış 10 bir ortalama genliği kayıtuyaranlar arasında en az 10 saniye geçtikten at. Uyarılmış yanıtı ölçmek için Şekil 1C &#39;de gösterilen yöntem. 600, 800, 1000, 1200, ve 1400 uA için bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Uyaran yoğunluk karşı uyarılmış yanıtın ortalaması genlik çizilerek bir giriş / çıkış eğrisi oluşturun. Bu grafiğinden ölçülen azami amplitüd% 50&#39;sine karşılık gelir uyaran yoğunluğunu belirler. Deneyin geri kalan kısmı için% 50 yoğunluk kullanın. </li><li> Daha sonra,% 50 uyaran yoğunluk kullanılması, 5 ortalama genliği yanıtları 15 dakika boyunca her dakika uyarılmış kaydederek bir taban çizgisi elde edilir. Yine emin uyaranlar arasında en az 10 sn sona erdiği zaman emin olun. </li><li> Daha sonra, medial delici yol 5 Hz&#39;lik bir çekim hızı ile 400 Hz teslim 10 pals 10 patlamaları oluşan tetanik uyarımı sağlar. Islak köpek sallar gibi nöbet belirtileri için yakından hayvan izleyin. Hayvan nöbet experim varsaent sona erdirilecek ve bu hayvanın tüm veriler çalışma sonuçlarının dışında tutulmalıdır. </li><li> Daha sonra, 5 ortalama genliği yanıtları 30 dakika boyunca her dakika posttetanization uyarılmış kayıt devam etmektedir. Bundan sonra, taban hattından yüzde değişim (Şekil 2) hesaplanmasıyla aşama 2.5 &#39;de elde edilen genlik taban değerindedir, bu genlik karşılaştırın. </li><li> Deneylerin sonucunda takiben, hayvan Amerikan Veteriner Hekimleri Birliği Ötenazi üzerine Yönergeleri ile tutarlıdır izofluran bir yöntem inhalasyon yoluyla ötenazi. </li></ol>

<ol><li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+mouse+brain+in+stereotaxic+coordinates%22">The mouse brain in stereotaxic coordinates</a>. , Compact 2nd edn, Elsevier Academic Press. (2004).</li>
<li>Bliss, T. V. P., Lomo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-lasting+potentiation+of+synaptic+transmission+in+the+dentate+area+of+the+anesthetized+rabbit+following+stimulation+of+the+perforant+path%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Long-lasting potentiation of synaptic transmission in the dentate area of the anesthetized rabbit following stimulation of the perforant path.</a> J. Physiol. 232, 331-356 (1973).</li>
<li>Blaise, J. H., Bronzino, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+stimulus+frequency+and+age+on+bidirectional+synaptic+plasticity+in+the+dentate+gyrus+of+freely+moving+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Effects of stimulus frequency and age on bidirectional synaptic plasticity in the dentate gyrus of freely moving rats.</a> Exp. Neurol. 182, 497-506 (2003).</li>
<li>Blaise, J. H., Koranda, J. L., Chow, U., Haines, K. E., Dorward, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+isolation+stress+alters+bidirectional+long-term+synaptic+plasticity+in+amygdalo-hippocampal+synapses+in+freely+behaving+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Neonatal isolation stress alters bidirectional long-term synaptic plasticity in amygdalo-hippocampal synapses in freely behaving adult rats.</a> Brain Res. 1193, 25-33 (2008).</li>
<li>Koranda, J. L., Masino, S. A., Blaise, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bidirectional+synaptic+plasticity+in+the+dentate+gyrus+of+the+awake+freely+behaving+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Bidirectional synaptic plasticity in the dentate gyrus of the awake freely behaving mouse.</a> J. Neurosci. Methods. 167, 160-166 (2008).</li>
<li>Cooke, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophosphorylation+of+alphaCaMKII+is+not+a+general+requirement+for+NMDA+receptor-dependent+LTP+in+the+adult+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Autophosphorylation of alphaCaMKII is not a general requirement for NMDA receptor-dependent LTP in the adult mouse.</a> J. Physiol. 574, 805-818 (2006).</li>
<li>Davis, S., Bliss, T. V., Dutrieux, G., Laroche, S., Errington, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+duration+of+long-term+potentiation+in+the+hippocampus+of+the+freely+moving+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Induction and duration of long-term potentiation in the hippocampus of the freely moving mouse.</a> J. Neurosci. Methods. 75, 75-80 (1997).</li>
<li>Jones, M. W., Peckham, H. M., Errington, M. L., Bliss, T. V., Routtenberg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity+in+the+hippocampus+of+awake+C57BL%2F6+and+DBA%2F2+mice%3A+interstrain+differences+and+parallels+with+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity in the hippocampus of awake C57BL/6 and DBA/2 mice: interstrain differences and parallels with behavior.</a> Hippocampus. 11, 391-396 (2001).</li>
<li>Zhang, T. A., Tang, J., Pidoplichko, V. I., Dani, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Addictive+nicotine+alters+local+circuit+inhibition+during+the+induction+of+in+vivo+hippocampal+synaptic+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Addictive nicotine alters local circuit inhibition during the induction of in vivo hippocampal synaptic potentiation.</a> J. Neurosci. 30, 6443-6453 (2010).</li>
<li>Tang, J., Dani, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+enables+in+vivo+synaptic+plasticity+associated+with+the+addictive+drug+nicotine%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Dopamine enables in vivo synaptic plasticity associated with the addictive drug nicotine.</a> Neuron. 63, 673-682 (2009).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Bu protokol, biz özgürce davranıyor farelerde DG LTP eğitim için güvenilir ve basit bir yöntem ortaya koymuştur. Uyanık farelerde LTP çok sayıda çalışma yapılmıştır 3,4 edilmiş olsa da, çok az öncelikle farelerde sınırlı kafatası gayrimenkul ve ortalama ağırlığı göre elektrot headstages ağırlığı ile ortaya teknik karmaşıklık uyanık farelerde yürütülmüştür Fareler 5. Özgürce microdrive elektrot sistemleri veya jonksiyon alan etkili transistör mutlaka hayvanın 6-10 elektrot yükü yükü ekler...

Genleri manipüle etmek teknolojisinin gelişmesi hemen hemen her nörodejeneratif ve nörolojik hastalıkların transgenik ve nakavt fare modellerini üretti. Bu, daha önce fare hayvan modelinde daha büyük kemirgen türlerinde kullanılan elektrofizyolojik araştırma tekniklerinin çevirisini gerektirmiştir. Böyle bir teknik, çeşitli araştırma nörofizyolojik nöropatolojik bozukluklar dahil sinir ağları içinde sinaptik bağlantıların etkinliğini test etmek için kullanımı, uzun süreli potansiyasyon (LTP) &#39;dir. Bu protokol özgürce fareler davranmak LTP güvenilir elektrofizyolojik inceleme teknikleri anlatılmaktadır. Diğerleri üzerinde bu protokolün avantajı, basit ve uygulanması kolay olduğunu, bunun pahalı bilgisayar kontrollü microdrive sistemleri ne de alan etkili transistör headstages kullanımını ne gerektirmez aynı zamanda çok daha az maliyetlidir ve bilgimize göre, kronik elektrofizyolojik kayıtlar t ilk video protokolo özgürce fareler davranıyor LTP çalışma. Bu amaçla, biz bu makalede özgürce davranmak farelerde uzun süreli potensiyalizasyon eğitim için basit yöntemler açıklanmaktadır. Bu metodolojileri kolayca nöropatolojik bozuklukların transgenik ve nakavt fare modelleri ile tercüme edilebilir.

<table><tbody><tr><td>Ketamin (100 mg / ml)</td> <td>Henry Schein</td><td>10177</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin (20 mg / ml)</td> <td>Henry Schein</td><td>33197</td><td></td></tr><tr><td>Asepromazin (10 mg / ml)</td> <td>Henry Schein</td><td>2177</td><td></td></tr><tr><td>Dental akrilik toz</td><td>Lang Dental Manufacturing Co.</td><td>1330CLR</td><td></td></tr><tr><td>Dental akrilik sıvı</td><td>Lang Dental Manufacturing Co.</td><td>1306CLR</td><td></td></tr><tr><td>Tungsten tel (0.127 mm)</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>TGW0515</td><td></td></tr><tr><td>Paslanmaz Çelik Hipodermik Boru (0.286 mm)</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>832400</td><td></td></tr><tr><td>Fluniksin (50 mg / ml)</td> <td>Henry Schein</td><td>14165</td><td></td></tr><tr><td>Epoxilyte</td><td>Superior Essex</td><td>EP 6001-M</td><td></td></tr><tr><td>Paslanmaz çelik tel ek (0.2 mm)</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>792900</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaksik çerçeve aparatı</td><td>Kopf Instruments</td><td>Model 902</td><td></td></tr><tr><td>Kulak manşetleri (kulak kapakları)</td><td>Kopf Instruments</td><td>Model 921</td><td></td></tr><tr><td>Elektrofizyolojik stimülatör</td><td>Astro-Med, Inc.</td><td>S88</td><td></td></tr><tr><td>Dijital osiloskop</td><td>BK Precision Corp.</td><td>2542</td><td></td></tr><tr><td>Akım izolasyon ünitesi</td><td>Astro-Med, Inc.</td><td>PSIU-6</td><td></td></tr><tr><td>Diferansiyel amplifikatör</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>DAM-50</td><td></td></tr><tr><td>Komütatör</td><td>Plastikler Bir</td><td>SLC6</td><td></td></tr><tr><td>Diş matkabı</td><td>Çalma</td><td>58650</td><td></td></tr></tbody></table>

serbestçe fareler davranmak içinde delici yol-kıvrımlarının synapse uzun vadeli potentiation

Long-term Potentiation of Perforant Pathway-dentate Gyrus Synapse in Freely Behaving Mice

Sinaptik etkinliğinin uzun süreli potansiyasyon çalışmaları, potansiyel bir temel hücresel mekanizma, öğrenme ve bilgi depolama gibi cazip hale özelliklere sahip olan bir aktivite bağımlı sinaptik fenomen, uzun hipokampus, amigdala çeşitli nöronal devrelerin fizyolojisini aydınlatmak için kullanılmıştır ve diğer limbik ve kortikal yapıları. Bu düşünceyle, nörolojik hastalıkların transgenik fare modelleri öğrenme, duygu ve bilgi alan nöron ağları normal ve anormal sinaptik iletişim genlerin rolü daha büyük bir anlayış geliştirmek için uzun vadeli kuvvetlenme (LTP) çalışmaları yürütmek için faydalı platformlarda temsil işleme. Bu makalede, güvenilir serbestçe davranmaya fare LTP uyarılması için yöntemleri anlatır. Bu metodolojiler transjenik çalışmalarında kullanılabilir ve serbestçe nörodejeneratif hastalıkların nakavt fare modelleri davranıyor.

. Tablo 1. Bu protokolde kullanılan DG ve MPP için koordinatları Şekil 1A kafatası hedef yapıların işaretleri gösterir göstermektedir. Ayrıca zemin ve referans elektrotların konumu vardır gösterildiği Şekil 1B temsilcisi tepki izleri hem ön-uyarılmış göstermektedir ve aynı hayvanda posttetanization. Posttetanization yanıtı. Şekil 1C genlik yanıtı ölçmek için kullanılan bir yöntemi göstermektedir LTP indüksiyonu 2 göstergesidir pretetanization...

Nörolojik hastalıklar Transgenik ve nakavt fare modelleri, normal ve anormal Nörofizyolojideki genlerin rolü üzerinde çalışılması için yararlıdır. Bu makalede, Uzun süreli potansiyasyon, transgenik olarak, öğrenme ve hafıza altında yatan ve nöropatoloji fare modelleri davranıyor serbestçe nakavt olabilir hücresel mekanizma üzerinde çalışmak için de kullanılabilir yöntemleri açıklanmaktadır.

Serbestçe Fareler davranmak içinde delici yol-kıvrımlarının Synapse Uzun vadeli Potentiation

Studies of long-term potentiation of synaptic efficacy, an activity-dependent synaptic phenomenon having properties that make it attractive as a potential ...

Bu prosedürün genel amacı, serbestçe hareket eden bir fare modelinde LTP kaydının gerçekleştirilmesini göstermektir. Bu işlem, öncelikle perent yoluna ve dentat girusa mikro elektrotların cerrahi olarak implante edilmesiyle sağlanır. İkinci adım ise, perent yolunun tek darbeli stimülasyonuna yanıt olarak dentat girustaki bazal uyarılmış yanıtların kaydedilmesidir.Ardından, bir stimülasyon protokolü takip edilerek LTP indüklenir. Son adım, postsinaptik yanıtların kaydedilmesi ve bunların bazal değerlerle karşılaştırılmasıdır. Nihayetinde popülasyon spike amplitüdü artmıştır.Uyarılmış yanıt ölçümleri, LTP'nin ardışık indüksiyonunu göstermek için kullanılır. Bu tekniğin in vitro dilim preparasyonu gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, serbestçe hareket eden fare modelinin, nörofarmakolojik ilaçların veya genetik manipülasyonların insan nörolojik hastalıklarının fare modelleri üzerindeki etkilerini test etmek için fizyolojik açıdan en uygun platformu sağlamasıdır. Bu prosedüre, farenin başının üstündeki tüyleri gözlerin hemen üzerindeki bölgeden kulakların hemen önüne kadar tıraş ederek başlayın; fare barrel duyusal sisteminin bir parçası oldukları için bıyıkları tıraş etmediğinizden emin olun.Ardından, tıraş edilen bölgeyi önce izopropil alkol, sonra Betadine ile temizleyin ve gözlerin kurumasını önlemek için pamuklu çubuklar yardımıyla gözlere az miktarda mineral yağ uygulayın. Fareyi stereotaksik cihaza aktarın. Hayvanın başını sabitlemek için standart kulak barları yerine yavru sıçan kulak kelepçeleri kullanın; öncelikle sol kulağı sol kulak kelepçesine sabitleyin.Ardından, bir elinizle hayvanın başını destekleyip diğer elinizle kulak manşetini ilerleterek sağ kulağı yavaşça sağ manşete yerleştirin. Bundan sonra, vücut sıcaklığını korumak için hayvanın vücudunun altına bir ısıtıcı ped yerleştirin ve bunu 86 degrees Fahrenheit değerine ayarlayın. Daha sonra, başı yanlara doğru hareket ettirmeye çalışarak bilateral rijiditeyi kontrol edin; baş rijit olduğunda ve yanlara doğru hareket ettirilemediğinde, ancak yukarı ve aşağı kolayca dönebildiğinde hayvan stereotaktik çerçeveye uygun şekilde monte edilmiş demektir.Ardından, farenin burnunu diş çubuğu düzeneğinin üzerine yerleştirin ve kesici dişlerin diş çubuğunun diş açıklığına nazikçe ancak güvenli bir şekilde oturduğundan emin olun. Steril bir bistüri kullanarak, iki göz arasından başlayıp kulakların ortasına kadar uzanan bir orta hat insizyonu yapın. Aşırı kanamaya neden olacağı için bistürinin 45 derecelik bir açıyla tutulduğundan ve alttaki fasyayı kesecek kadar, ancak kafatasına zarar vermeyecek kadar basınç uygulandığından emin olun.Ardından, fasyayı ayırmak için pamuklu çubuklar ve kafatasını açığa çıkarmak için kavisli hemostatlar kullanın. Kafatası işaretleri, bgma ve lambda net bir şekilde görünür olmalıdır. Bgma ve lambda aynı DV konumunda olacak şekilde diş çubuğunu ayarlayarak hayvanın kafatasının düzlendiğinden emin olun.Ardından, açığa çıkan kafatasını az miktarda steril salin ile temizleyin ve işleme devam etmeden önce kafatasının tamamen havada kuruması için iki ila üç dakika bekleyin. Bundan sonra, sol stereotaksik kola bir iğne monte edin. bgma ve lambda'nın DV konumlarını ölçmek için.Birbirlerine 0,1 mm mesafede olduklarından emin olun. Eğer değilse, bunu sağlamak için stereotaksik çerçeve burun çubuğunu yukarı ve aşağı ayarlayın. Ardından iğneyi B bgma üzerine konumlandırın ve AP L-A-T-N-D-V ölçümlerini kaydedin.İğnenin kafatasına sadece değdiğinden ve onu delmediğinden emin olun. Hedef yapıların lambda ve bgma'ya göre koordinatlarını belirlemek için bir fare beyin atlası kullanın. Bizim durumumuzda bunlar, angular bundle içindeki medial perent yolu ve hipokampusun dentate gyrus'udur.Ardından, bu noktaları kafatası üzerinde işaretlemek için ince uçlu bir kalem veya kurşun kalem kullanın. Sonra, kafatasının kontralateral tarafında iki nokta daha işaretleyin. Topraklama görevi görecek olan bu noktalar, orta hatdan yaklaşık üç milimetre uzaklıkta ve birbirlerine göre boylamsal olarak konumlandırılmalıdır.Ardından, iğne işaretleyicisini sol stereotaksik koldan çıkarın ve yerine stereotaksik bir bağlantı aparatıyla donatılmış elektrikli bir diş matkabı takın. Matkabı işaretlenmiş her noktanın üzerine konumlandırın ve yaklaşık 0,5 millimeter çapında küçük bur havuzları açın. Delme işlemi sırasında, tekrarlayıcı bir aşağı-yukarı hareket uygulayın ve matkabın kafatasını delip beyin yüzeyini açığa çıkarıp çıkarmadığını sık sık kontrol edin; kontralateral deliklerin her birine, kortikal yüzeye nüfuz etmeden sadece temas edecek şekilde, nazik ama kararlı bir şekilde bir vida elektrot yerleştirin.Bu iki vida elektrot, toprak ve referans olarak hizmet eder. Ardından, uyarıcı ve kayıt elektrotlarını sırasıyla sol ve sağ stereotaksik kollardaki elektrot tutuculara yerleştirin. Sonrasında, uyarıcı elektrot terminallerini akım izolasyonlu bir elektrofizyolojik stimülatöre, kayıt elektrot terminalini ise bir elektrofizyolojik diferansiyel amplifikatöre ve ardından uyandırılmış yanıtların görsel incelemesi için bir dijital osiloskoba bağlayın.Ardından, toprak ve referans elektrot terminallerini diferansiyel amplifikatöre bağlayın; uyarıcı elektrodu medial peririnal yoluna, kayıt elektrodunu ise dentat girusa 0,5 mm'lik artışlarla yavaşça ve dikkatlice indirin; tek bir pals uyarısına verilen evoke yanıtı izlemek için osiloskop kullanın. Elektrotları, ilgili hedef DV konumlarına ulaşana ve osiloskopta stereotipik bir sinyal gözlenene kadar kademeli olarak indirmeye devam edin. Elektrot terminallerini yerinde tutacak bir kapak yapmak için dental akrilik siman kullanın.Cilde temas eden her türlü dental siman derhal silinmelidir. Dental siman tamamen kürlendikten sonra, hayvanı stereotaksik çerçeveden temiz bir kemirgen kafesine aktarın ve vücut sıcaklığını korumak için bir ısıtıcı lamba veya ped kullanın. Hayvan bilincini geri kazanana kadar her saat başı gözlemleyin.Hayvanın cerrahi işlemden sonra beş ila yedi gün boyunca iyileşmesine izin verildikten sonra analjezik olarak fuxin enjeksiyonu uygulanabilir. Hayvanı, ses yalıtım malzemesiyle donatılmış bir faraday kafesi ve uyarıcı kayıt düzeneğine giden elektrotu bağlayan beş kanallı döner bir komütatörden oluşan kayıt ortamına yerleştirin. Elektrotları uyarıcı ve kayıt cihazlarına bağlamadan önce hayvanın kayıt ortamına bir ila iki saat boyunca alışmasını sağlayın.Ardından, stimülatör kontrollerini 400 µA çıkış verecek şekilde ayarlayın. Stimülasyonlar arasında en az 10 saniye süre bırakarak ortalama 10 uyarılmış yanıtın amplitüdünü kaydedin ve bu prosedürü 600, 800, 1000, 1200 ve 1400 µA için tekrarlayın. Daha sonra, uyarılmış yanıtların amplitüdünü belirlemek için bu şekilde gösterilen yöntemi kullanın.Uyarılan yanıtın ortalama genliğini uyaran yoğunluğuna karşı grafiğe dökerek bir girdi-çıktı eğrisi oluşturun. Ardından, ölçülen maksimum genliğin %50'sine karşılık gelen uyaran yoğunluğunu belirleyin ve deneyin geri kalanı için bu yoğunluğu kullanın. Şimdi, uyaranlar arasında en az 10 saniye süre bırakarak, 15 dakika boyunca her dakika beş uyarılan yanıtın ortalama genliğini kaydederek bir baz hattı elde edin.Ardından, medial perent yoluna Titanic stimülasyonu uygulayın. Bu sırada, ıslak köpek sarsıntıları da dahil olmak üzere, hayvanı nöbet belirtileri açısından yakından izleyin. Hayvan nöbet geçirirse deney sonlandırılmalı ve bu hayvandan elde edilen tüm veriler çalışma sonuçlarından hariç tutulmalıdır.Ardından, 30 dakika boyunca her dakika beş uyarılmış yanıtın ortalama genliğini kaydetmeye devam edin. İşlem sonrasında, bazal değere göre yüzde değişimi hesaplayarak bu genliği daha önce elde edilen bazal genlik ile karşılaştırın. Burada fare kafatasındaki elektrotların bağıl konumlarının diyagramatik gösterimi ve hem işlem öncesi hem de sonrası uyarılmış yanıtların tipik izleri gösterilmektedir.Bu şekil, serbestçe hareket eden bir farede, teknikte uzmanlaşıldıktan sonra, dentat girusun medial periferik yol sinapsındaki LTP indüksiyonunu göstermektedir. Bu teknik, doğru şekilde uygulandığında iki saat içinde tamamlanabilir. Bu prosedür uygulanırken, anestezi derinliğinin korunduğundan emin olmak için hayvanın sık sık kontrol edilmesi gerektiğini hatırlamak önemlidir.Bu videoyu izledikten sonra, serbestçe hareket eden bir farede LTP kaydı yapmak amacıyla mikro elektrotların kronik implantasyonu için stereotaktik cerrahinin nasıl gerçekleştirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

long-term-potentiation-perforant-pathway-dentate-gyrus-synapse-freely

Research

JoVE Journal

Behavior

Davranış

Bu makale, sıçan ve transgenik farelerin hipokampal dilimler sinaptik değişiklikler, beynin yaşlanma ve Alzheimer hastalığı gibi nörodejeneratif hastalıklar, yaşa bağlı ile ilgili çalışma için hazırlamak için prosedürler sıralanıyor.

Yaşlanma ve Amiloid Patoloji sırasında sinaptik değişiklikler Çalışması Sıçanlar ve Transgenik Farelerde akut Hipokampal Dilimleri hazırlanması

Kaynak: Zhao, Z. et al. Fare dentat gyrus'un yüksek frekanslı stimülasyon ile aktivasyonu için invaziv bir yöntem. J. Vis. Uzm. (2018)Bu video, bir fare hipokampal dentat girusuna yüksek frekanslı derin beyin stimülasyonu sağlama protokolünü göstermekte ve nöronal aktivasyon, sinaptik plastisite ve nörojenez üzerindeki etkilerini detaylandırmaktadır.

Fare dentat gyrusunda nöronal aktivasyonu ve nörojenezi geliştirmek için yüksek frekanslı stimülasyon

Bu makale hazırlamak ve korumak için tam bir metodoloji...

Uzun vadeli potansiyelize bir çok Kararlı ve tekrarlanabilir Kayıt için geliştirilmiş Hazırlık ve Hipokampal Fare Dilimleri korunması

Dilim yama klemp tekniği içsel özelliklerini ve uyarıcı ya da inhibitör sinapslarda plastisite öğrenme kaynaklı değişiklikleri analiz etmek için etkili bir yöntemdir.

Dilim yama klemp tekniği öğrenme kaynaklı plastisite analiz etmek için

Bu iletişim kuralı, farelerde güvenilir bir HFS yöntemi ayarlamak gösterilmiştir. Hipokampal dentat gyrus boyunca nöronların elektriksel olarak HFS doğrudan ve dolaylı olarak içinde vivotarafından uyarılır. Nöronal aktivite ve moleküler sinyal c-fos ve Notch1 immünfloresan boyama, sırasıyla incelenir; neurogenesis tarafından bromodeoxyuridine tahlil etiketleme sayılabilir.

Yüksek frekanslı stimülasyon tarafından fare dentat Gyrus aktivasyonu için invaziv bir yöntem

Bu yöntem, yaşayan farelerin Hippocampus optik erişim sağlayan kronik bir hazırlık açıklar. Bu hazırlık, birkaç hafta boyunca nöronal yapısal plastisite ve aktivite-uyarılmış hücresel plastisite uzunlamasına optik görüntüleme gerçekleştirmek için kullanılabilir.

Canlı fareler içinde dorsal hipokampal CA1 uzunlamasına Iki foton görüntüleme

Biz postitudinal hipokampal beyin dilimleri ve uzunlamasına konumlandırılmış kayıt ve stimülasyon elektrotlar in vivo hücre dışı postinaptik potansiyelleri uyandırmak ve göstermek için kullanılan kayıt ve stimülasyon elektrotlar uzunlamasına interlamellar CA1 boyunca uzun vadeli sinaptik plastisite.

Elektrofizyolojik Alan Kaydı ile Interlamellar Hipokampus CA1'de Uzun Süreli Sinaptik Plastisitenin Araştırılması

Bu makale, farelerde yatay hipokampal beyin dilimleri elde etmek için sistematik bir protokolü tanımlamayı amaçlamaktadır. Bu metodolojinin amacı, dentat girus ile ilgili nörolojik süreçleri değerlendirmek için perforant yol ve yosunlu lif yolu gibi hipokampal lif yollarının bütünlüğünü korumaktır.

Fare Beyninin Yatay Hipokampal Dilimleri

Burada, ex vivo beyin dilimlerinde tutulan dorsal lateral genikülat çekirdekten röle nöronlarında nöronal içsel uyarılabilirliğin uzun vadeli plastisitesini indüklemek için bir protokol açıklıyoruz.

Dorsal lateral genikülat çekirdeğin nöronlarında içsel nöronal uyarılabilirliğin uzun süreli plastisitesinin indüklenmesi

Lokomotor aktivite (LMA) farelerde davranış basit ve kolay uygulanabilir bir ölçüsüdür. Video izleme yazılımı (VTS) ve LMA Kaplin LMA analizi manuel, çizgi geçiş yöntemi ile karşılaştırıldığında, özellikle, özgüllük ve duyarlılık geliştirilmesi için izin verir. Ayrıca VTS fare LMA uzun vadeli izleme sağlar.

Fare Kısa ve Uzun Vadeli Lokomotor Aktivite video Takip Yazılımı ile Analiz

Öğrenin serbestçe davranan farelerde uzun süreli potansiyasyonu (LTP) kaydetme yöntemini. Bu teknik, öğrenme ve hafıza mekanizmalarını incelemek için transgenik fare modellerinde sinirfizyolojik süreçleri araştırmada kullanılır.

Serbestçe Fareler davranmak içinde delici yol-kıvrımlarının Synapse Uzun vadeli Potentiation

Daha fazla video keşfet