Tibial Sinir transeksiyonu - Farelerde denervasyon bağlı İskelet Kas Atrofi için bir Standart Model

Bu videonun genel amacı, farelerde iskelet kası atrofisinin tibial sinir transeksiyon modelini göstermektir. Bu, siyatik sinirin ve üç dalının, tibial, sylve peroneal sinirlerin izole edilmesiyle gerçekleştirilir. İzole edildikten sonra tibial sinir kesilir.

Denervasyondan sonra, yara kapatılır ve hayvanın durumu yakından izlenir. Sonuçta, denervasyondan sonra kas kütlesinde ilerleyici bir azalma gösteren örnekler elde edilir. Denervasyona bağlı iskelet kası atrofisinin tibial sinir transeksiyonu modeli, sıçanlarda iyi doğrulanmış bir modelde yaygın olarak kullanılır ve bu, siyatik sinir transeksiyonu ile ilişkili olandan çok daha az morbiditeye sahiptir.

Bu modeli, burada göstereceğimiz farelerde kullanılmak üzere uyarladık. Bu, araştırmacının genetik olarak tasarlanmış farelerin varlığından yararlanmasına ve hayvanda minimal morbiditeye neden olurken iskelet kası kütlesinin düzenlenmesi için çok önemli olan proteinlerin yokluğunda kas atrofisi sürecini incelemesine olanak tanır. İlk olarak, ayak parmağını sıkıştırarak yeterli anesteziyi onayladıktan sonra farenin ağırlığını kaydedin, siyatik çentiği palpasyonla tanımlayın ve lateral uyluk ve kalçayı oradan dize kadar tıraş edin.

Ardından, alanı tekrarlanan alkol ve proiyot uygulamalarıyla temizleyin. Steril eldiven giyerken fareyi ameliyat veya diseksiyon mikroskobu altında yan yatırın. Siyatik çentiği palpasyonla tanımlayın.

Lateral uyluğun derisini siyatik çentikten dize kadar kesin. Cildi nazikçe açın. İnce makas kullanarak derinin hemen altındaki lateral uyluğun düz yüzeysel kası olan biceps femoris kasını tanımlayın.

Biceps femoris kasını kas lifleri boyunca ayırın ve bir yaylı ekartör yerleştirin. Siyatik siniri ve dallarını ortaya çıkarmak için, biseps femoris kasının hemen altındaki siyatik siniri tanımlayın. Karakteristik parlak beyaz rengi ile tanımlanabilir ve çapı yaklaşık 0,8 milimetredir.

Siyatik çentikten dize kadar uzanır, popliteal fossa seviyesinde tibial, peroneal ve sal sinirlere dallanır. Ultra ince forseps ve yaylı mikro diseksiyon makası ile tibiaları peroneal ve sal sinir dallarından nazikçe ayırın. Tibial sinir en büyük daldır ve genellikle merkezidir.

Siyatik sinirin ve dallarının nazikçe ele alınması bu prosedürün başarısı için çok önemlidir. Sal ve perineal sinir dallarının hasar görmemesine veya gerilmemesine dikkat edin. Bu dallar hasar görür veya gerilirse, bu onların hedeflerini de yok edecektir.

Siniri ultra ince forseps ile sadece dış adventisyel tabaka üzerinde tutmak ve siniri gevşek tutmak, geçici denervasyon için sinir ezilmesini ve traksiyon yaralanmasını önleyecektir İki ila dört hafta içinde beklenen tam reasyon ile, tam ve kalıcı denervasyon için tibial siniri ultra ince forseps ile 15 saniye boyunca ezin. Tibial siniri mikro diseksiyon makası ile mümkün olduğunca distal olarak kesin. Tam denervasyon gerekiyorsa popliteal damarlardan dikkatlice kaçının.

Kesilen tibial sinirin ucunu 10 T naylon ile biseps femoris kasının ön yüzeyine dikin ve gastros ve soleus kaslarının anormal reasyonunu önlemek için biceps femoris'i beş T Vicryl ile yeniden yaklaştırın. Denervasyon tamamlandıktan sonra, cildi çalışan beş elli Vicryl sütür ile kapatın. Hazır olduğunuzda, solunan anestezikleri kapatın, ancak oksijen akışını koruyun.

Bir analjezik tek başına uygulandıktan sonra, fareyi yatak takımı olmayan ılık ve temiz bir kafese koyun. Ambule olana kadar fareyi doğrudan gözlem altında tutun. Tamamen iyileştiğinde, fareyi bol miktarda yumuşak yatak takımına sahip temiz, sağlam bir alt kafese aktarın.

Dekübit topuk ülserlerinin gelişimi veya çiğneme kanıtı için ameliyat uzuvunu ve ayağı günlük olarak inceleyin, küçük problemler topikal antibiyotikler veya odin gibi antiseptiklerle yönetilebilir. Hayvanın ötenazisini gerektiren son nokta göstergeleri kilo kaybı, zayıf öz bakım kanıtı ve kambur duruştur. Ayrıca bir ila iki haftalık yara bakımı ile iyileşmeyen yara bozulması veya ülseri olan hayvanlar da sakrifiye edilmelidir.

Ek olarak, aşırı acı çeken herhangi bir hayvan Postoperatif zaman noktasında, analiz için istenen dokular toplanır. Ötenaziden sonra, hem operatif hem de kontralateral kontrol bacaklarının medial yönünü tıraş edin ve diseksiyon mikroskobu altında çalışarak alkolle temizleyin, medial baldır derisini bir neşter ile ayak bileğinden dize kadar ve ameliyat uzuvunda ayak bileği çevresinde çevresel olarak kesin. Ardından, cildi kastan nazikçe çekin ve proksimal olarak uyluğa doğru çekin.

Bacağın tüm kaslarını ortaya çıkarmak için, bacağın arka tarafında dizden ayak bileğine kadar uzanan baldır kası olan gastro kasını tanımlayın. Daha sonra, biceps femoris kasının dizin medial tarafındaki gastro kasının proksimaline distal girişini bulun. Distal girişinde, biseps femoris ince ve filmsi görünür ve makas ve künt uç diseksiyonu kullanılarak gastro'nun en proksimal kısmını kaplar.

Biceps femoris'in distal girişini gastros kasından nazikçe ayırın. Kalkaneusa distal girişini ekleyin, gastros kası aşil tendonuna doğru sivrilir. Beyaz ve sinirli görünen aşil tendonunu tanımlayın.

Aşil tendonunu forseps ile tutun. Mide kasını tutmamaya veya ezmemeye ve aşil tendonunu kalkaneus girişinden ayırmamaya dikkat edin. Hala tendonu tutan makas kullanarak, soluk kırmızı gastro kasını daha derin kırmızı soleustan distal girişten dizdeki kökenine doğru çok nazik bir çekiş kullanarak nazikçe kaldırın.

İşlemi kolaylaştırmak için, gastro'nun kökenini medial ve lateral femur kondillerinden ayırarak gastro'yu bacaktan diseke edin. Makas kullanarak. Kası ezmemeye dikkat edin.

Soleus artık gastrosun görüş alanı altında hemen açıkça görülecektir. Sous'u aşil tendonu üzerindeki yerleştirilmesinden arka baldırdaki kökenine kadar kaldırın. Çıkarıldıktan sonra, kasları hassas bir ölçekte ayrı ayrı tartın.

Daha sonra, kasları dikey olarak bölün, yarısı ani dondurma ve sıvı nitrojen için ve yarısı histoloji için. Son olarak, kontrol gastro ve soleus kaslarını hasat etmek için bu prosedürleri derecelendirilmemiş kontrol tarafında tekrarlayın. Gastro kaslar denerve ve kontralateral kontrol arka ekstremitelerinden bir, iki veya dört haftada bir alındı ve oran olarak ifade edildi.

Denervasyon, zamanla ilerleyici bir kas kütlesi kaybına neden oldu. Burada görüldüğü gibi immüno-boyama sonrası miyo liflerinin kesit alanı ölçüldü. Hızlı seğirme tipi iki lif kahverengi ve yavaş seğirme tipi bir lif lekelenir, beyaz tip iki hızlı lekelenir.

Seğirme lifleri, denerve edilmiş kasta enine kesit alanında ilerleyici bir azalma gösterdi. Dört haftadan fazla Bu videoyu izledikten sonra, farelerde tibial sinir transeksiyonunu gerçekleştirebilmelisiniz. Bu, denervasyona bağlı iskelet kası atrofisinin tekrarlanabilir, sağlam ve iyi doğrulanmış bir modelini sağlar.