Name: Tibial Sinir transeksiyonu - Farelerde denervasyon bağlı İskelet Kas Atrofi için bir Standart Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-03T19:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 50 s
Description: Öğrenin, farelerde tibial sinir transeksiyonu ile denervasyona bağlı iskelet kas atrofisini incelemek için standart bir model oluşturmayı. Bu yöntem, kas kütlesi kaybını minimal morbidite ile değerlendirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma CIHR Nöromusküler Araştırma Ortaklığı (-; JAEB için 90959 JNM) hibe tarafından desteklenmiştir.

Bundan önce modelini kullanarak, araştırmacılar vücut yönetim kendi kurumun hayvan kullanımından cerrahi protokolü için onay almış olmalıdır. Model Araştırma Etik Kurulu, Hamilton Sağlık Bilimleri Kurumu, McMaster Üniversitesi (KKS # 10-04-24) tarafından onaylanmıştır ve Hayvan Bakım Kanada Konseyi önerileri ile tam uyum içinde gerçekleştirilir. 1. Fare Hazırlık <ol><li> Fare tartılır. 5 izofluran% veya% 2 halotan ile anestezi neden. Cerrah korumak için yeterli bir anestezik atma kullanılan devre sağlamalıdır. 2-3 dakika sonra hayvanın solunum yavaş olacaktır. Göz kırpma refleksi yoktur emin olun ve cerrahi anestezi (fare ile cevap yani) onaylamak için pençe en arasi bosluklari çimdik. Ameliyat sırasında, korneanın kurumasını önlemek için, göz oftalmik yağ uygulanır. </li><li> Siyatik gelen lateral uyluk ve kalça tıraşdiz çentik ve proviodine ile dezenfekte edin. Tıraş cerrahi alanın yeterli görselleştirme sağlamak ve sinir diseksiyonu ve transection müdahale en aza indirmek için kesi saç site ücretsiz devam edecektir. Üstün ve femur posterior olan siyatik çentik, palpasyonla tespit edilebilir. </li></ol> 2. Operatif Prosedürü <ol><li> 2% (halotan% 1) inhalasyon izofluran azaltın ve bir işletim ya da mikroskop altında yan (yukarı bakacak şekilde ameliyat için tasarlanmıştır tarafı), üzerinde fare yerleştirin. 3,5 kat büyütme, bir yetişkin için (20-25 g), fare için yeterli olduğu Alternatif olarak cerrahi cerrahi loupes ile yapılabilir. </li><li> Steril eldiven Don. Palpasyonla siyatik çentik belirleyin. Siyatik çentik gelen diz (yaklaşık 1 cm) için lateral uyluk bir neşter, insizyon deri kullanma. </li><li> Nazikçe cilt yayıldı. Biceps femoris kas belirlemek, hangi lateral uyluk düz yüzeysel kashemen derinin altında. Ince makas kullanarak, kas lifleri boyunca biceps femoris kas bölünmüş ve siyatik sinir ve dalları ortaya çıkarmak için bir yay retraktörü ile açık tutun. </li><li> Biceps femoris kas hemen derin siyatik sinir belirleyin. Bu karakteristik parlak beyaz renk ile tanımlanan ve çapı yaklaşık 0.8 mm olabilir. Bu popliteal fossa düzeyinde, tibial peroneal ve sural sinirler içine dallanma, siyatik çentik gelen diz çalışır. </li><li> Yavaşça ultra ince forseps ve yaylı Microdissecting makas ile peroneal ve sural sinir dallarından tibia ayırın. Tibial sinir en büyük dalıdır ve genellikle merkezi. Bu dalları ayıran sinir ezmek için değil önemlidir. Ultra ince forseps ile sadece dış adventicial katman üzerinde sinir Holding ve sinir gevşek (öğretti değil) tutarak, sinir ezilme ve çekiş yaralanmaları önlemek olacaktır. </li><li> Tam ve kalıcı bir denervati içinüzerinde, dikkatle popliteal damarlar kaçınarak, gibi distalde mümkün olduğunca makas Microdissecting ile tibial sinir kesti. Alternatif olarak, 2-4 hafta içinde beklenen tam reinnervation ile geçici denervasyon için, tibial sinir sadece kesilen 15 sn yerine için ultra ince forseps ile ezilebilir. (Periferik sinirler aşağıdaki yaralanma regrow ve hedef kas reinnervate olacaktır.) </li><li> Tam denervasyon gerekiyorsa, gastroknemius yeniden innervasyonu anormal önlemek için 5-0 Vicryl ile 10-0 Naylon ve yeniden yaklaşık biceps femoris ile biseps femoris kasının ön yüzeyine kesilen tibial sinir sonunda dikiş ve soleus kasları. </li><li> Bir çalışan 5-0 Vicryl dikiş ile cilt kapatın. </li></ol> 3. Operatif Bakım Mesaj <ol><li> Inhalasyon anestezi kapatın ama oksijen akışını sağlamak. Subkutan analjezik buprinorphine (veya yerine) yönetmek. </li><li> Olmayan temiz bir kafes için fareyi transferyatak anestezi uyanma sırasında. Ambulasyon kadar kafes içinde ve doğrudan gözlem altında bir ısınma battaniye tutun. </li><li> Bol yumuşak yatak yumuşak alt kafeste transferi ve ev (değil tel). </li><li> Dekübit topuk ülser veya çiğneme kanıtı gelişimi için cerrahi yara ve ayak durumu için günlük ameliyat bacak kontrol edin. Ufak sorunlar topikal antibiyotik ya da proviodine gibi antiseptikler ile tedavi edilebilir. Hayvan ötenazi gerektiren Endpoint göstergeleri kilo kaybı, kendine bakım kanıtı (karıştırdı kürk), ve kambur duruş vardır. Buna ek olarak, büyük yara bozulma veya topikal antibiyotiklerle 1-2 hafta içinde iyileşmek ya da ağrı görünmüyor ülseri ile hayvanların kurban edilmelidir. </li></ol> 4. Denerve Gastrocnemius ve Soleus Kas Hasat <ol><li> İstenilen sonrası ameliyat süresi noktada, CO 2 doz aşımı ile fare ve kurban tartın. </li><li> Hem de medial Tıraşoperatif ve karşı kontrol bacakları ve alkol ile temiz. Bir işletim ya da mikroskop altında fare yerleştirin, ya da alternatif büyütme için cerrahi görüntüleme loupes kullanın. </li><li> Operatif bacak üzerinde, bir diz ayak bileği neşter ve çevresel olarak ayak bileği etrafında ile medial buzağı cilt insizyon. Yavaşça kas kapalı ve proksimal uyluk doğru forseps ile cilt çekin. Bu, bacak bölgesinin tüm kas ortaya koyar. Diz bacak arka yönü üzerinde ayak bileği için çalışır ve cilt altında hemen yatıyor baldır kas gastroknemius kas, tanımlayın. Diz medial yönü üzerinde gastroknemius kas proksimal biseps femoris kas distal ekleme, tanımlayın. Distal ekleme de biseps femoris ince ve şeffaf görünür ve gastroknemius en proksimal kısmını örter. Makas ve künt sonunda diseksiyon kullanarak, yavaşça gazdan biceps femoris distal ekleme ayırmaktrocnemius kas. </li><li> Calcaneous içine distal ekleme de, gastroknemius kas Aşil tendonu içine tapers. Beyaz ve zinde görünen Aşil tendonu, tanımlayın. Tutun veya gastroknemius kas ezmek için özen, forseps ile Aşil tendonu tutun ve makas kullanarak kalkaneus ekleme gelen Aşil tendonu bölün. </li><li> Hala tendon tutarak, yavaşça diz aslına doğru distal ekleme (soleus ayrı ayrı hasat edilebilir) gelen, derin soleus (derin kırmızı) kapalı gastroknemius kas (soluk kırmızı) kaldırın. </li><li> Makas kullanarak medial ve lateral femur chondyles gelen gastroknemius kökeni bölerek bacak kapalı gastrocnemius parçalara ayır. Kas çok nazik çekiş bu süreci kolaylaştırır. Kas ezmek için dikkatli olun. </li><li> Soleus şimdi hemen gastroknemius sitenin altında, açıkça görülebilir. Için Aşil tendonu üzerindeki ekleme gelen soleus kaldırın onun veyaarka buzağı üzerinde igin. Soleus yanlışlıkla gastroknemius ile kaldırılırsa, yavaşça hasat örnekten ayırmak. Gastrokinemius (açık kırmızı) ve soleus (koyu kırmızı), renk farklılıkları nedeniyle hasat örnekte kolayca tanımlanabilir kalır. </li><li> , Bir hassas terazi üzerinde ayrı ayrı kas tartılır. </li><li> (Sonraki protein ve / veya RNA ekstraksiyonu için) sıvı azot içinde ek dondurma için dikey yarım kaslar ayrıldı ve histoloji (yani morfolojik değerlendirmesi, immünohistoloji) için yarım izopentan içinde% 10 formalin ile, ya da dondurulmuş sabitleme ya da sabitleme sıvı azot ile soğutulmuş istendiği gibi. </li><li> Kontrolü gastroknemius ve soleus kasları hasat için kontrol yukarıdaki adım 4.3, un-çalışan, taraftan tekrarlayın. </li></ol>

<ol><li>Fu, S. Y., Gordon, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contributing+factors+to+poor+functional+recovery+after+delayed+nerve+repair%3A+prolonged+denervation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Contributing factors to poor functional recovery after delayed nerve repair: prolonged denervation.</a> J. Neurosci. 15, 3886-3895 (1995).</li>
<li>Kobayashi, J., Mackinnon, S. E., Watanabe, O., Ball, D. J., Gu, X. M., Hunter, D. A., Kuzon, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+duration+of+muscle+denervation+on+functional+recovery+in+the+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">The effect of duration of muscle denervation on functional recovery in the rat model.</a> Muscle Nerve. 20, 858-866 (1997).</li>
<li>Bain, J. R., Veltri, K. L., Chamberlain, D., Fahnestock, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+functional+recovery+of+denervated+skeletal+muscle+after+temporary+sensory+nerve+innervation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Improved functional recovery of denervated skeletal muscle after temporary sensory nerve innervation.</a> Neuroscience. , 103-503 (2001).</li>
<li>Batt, J., Bain, J., Goncalves, J., Michalski, B., Plant, P., Fahnestock, M., Woodgett, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+gene+expression+profiling+of+short+and+long+term+denervated+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Differential gene expression profiling of short and long term denervated muscle.</a> FASEB J. 20, 115-117 (2006).</li>
<li>Sher, J., Cardasis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+fiber+types+in+the+adult+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurol.+Scand%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle fiber types in the adult mouse.</a> Acta Neurol. Scand. 54, 45-56 (1976).</li>
<li>Agbulut, O., Noirez, P., Beaumont, F., Butler-Browne, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myosin+heavy+chain+isoforms+in+postnatal+muscle+development+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Myosin heavy chain isoforms in postnatal muscle development of mice.</a> Biol. Cell. 95, 399-406 (2003).</li>
<li>Nagpal, P., Plant, P. J., Correa, J., Bain, A., Takeda, M., Kawabe, H., Rotin, D., Bain, J. R., Batt, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ubiquitin+ligase+nedd4-1+participates+in+denervation-induced+skeletal+muscle+atrophy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">The ubiquitin ligase nedd4-1 participates in denervation-induced skeletal muscle atrophy in mice.</a> PLoS ONE. 7, e46427(2012).</li>
<li>Plant, P. J., Bain, J. R., Correa, J. E., Woo, M., Batt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+caspase-3+protects+against+denervation-induced+skeletal+muscle+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Absence of caspase-3 protects against denervation-induced skeletal muscle atrophy.</a> J. Appl. Physiol. 107, 224-234 (2009).</li>
<li>Varejao, A. S., Meek, M. F., Ferreira, A. J., Patricio, J. A., Cabrita, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+evaluation+of+peripheral+nerve+regeneration+in+the+rat%3A+walking+track+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Functional evaluation of peripheral nerve regeneration in the rat: walking track analysis.</a> J. Neurosci. Methods. 108, 1-9 (2001).</li>
<li>Willand, M. P., Holmes, M., Bain, J., Fahnestock, M., de Bruin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+muscle+stimulation+after+immediate+nerve+repair+reduces+muscle+atrophy+without+affecting+reinnervation%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Electrical muscle stimulation after immediate nerve repair reduces muscle atrophy without affecting reinnervation.</a> Muscle Nerve. 48, 219-225 (2013).</li>
<li>Sterne, G. D., Coulton, G. R., Brown, R. A., Green, C. J., Terenghi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotrophin-3-enhanced+nerve+regeneration+selectively+improves+recovery+of+muscle+fibers+expressing+myosin+heavy+chains+2b%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Neurotrophin-3-enhanced nerve regeneration selectively improves recovery of muscle fibers expressing myosin heavy chains 2b.</a> J. Cell Biol. 139, 709-715 (1997).</li>
<li>Plant, P. J., North, M. L., Ward, A., Ward, M., Khanna, N., Correa, J., Scott, J. A., Batt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertrophic+airway+smooth+muscle+mass+correlates+with+increased+airway+responsiveness+in+a+murine+model+of+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Cell+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Hypertrophic airway smooth muscle mass correlates with increased airway responsiveness in a murine model of asthma.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 46, 532-540 (2012).</li>
<li>Bain, J. R., Mackinnon, S. E., Hunter, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+evaluation+of+complete+sciatic%2C+peroneal%2C+and+posterior+tibial+nerve+lesions+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Plast.+Reconstr.+Surg%22%5BJournal%5D)">Functional evaluation of complete sciatic, peroneal, and posterior tibial nerve lesions in the rat.</a> Plast. Reconstr. Surg. 83, 129-138 (1989).</li>
<li>Hare, G. M., Evans, P. J., Mackinnon, S. E., Best, T. J., Midha, R., Szalai, J. P., Hunter, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Walking+track+analysis%3A+utilization+of+individual+footprint+parameters%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Plast.+Surg%22%5BJournal%5D)">Walking track analysis: utilization of individual footprint parameters.</a> Ann. Plast. Surg. 30, 147-153 (1993).</li>
<li>McLean, J., Batt, J., Doering, L. C., Rotin, D., Bain, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+rate+of+nerve+regeneration+and+directional+errors+after+sciatic+nerve+injury+in+receptor+protein+tyrosine+phosphatase+sigma+knock-out+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Enhanced rate of nerve regeneration and directional errors after sciatic nerve injury in receptor protein tyrosine phosphatase sigma knock-out mice.</a> J. Neurosci. 22, 5481-5491 (2002).</li>
<li>Richner, M., Bjerrum, O. J., Nykjaer, A., Vaegter, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spared+nerve+injury+%28SNI%29+model+of+induced+mechanical+allodynia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">The spared nerve injury (SNI) model of induced mechanical allodynia in mice.</a> J. Vis. Exp. (54), e3092(2011).</li>
<li>Rogoz, K., Lagerstrom, M. C., Dufour, S., Kullander, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VGLUT2-dependent+glutamatergic+transmission+in+primary+afferents+is+required+for+intact+nociception+in+both+acute+and+persistent+pain+modalities%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">VGLUT2-dependent glutamatergic transmission in primary afferents is required for intact nociception in both acute and persistent pain modalities.</a> Pain. 153, 1525-1536 (2012).</li>
<li>Thornell, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sarcopenic+obesity%3A+satellite+cells+in+the+aging+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Clin.+Nutr.+Metab.+Care%22%5BJournal%5D)">Sarcopenic obesity: satellite cells in the aging muscle.</a> Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. 14, 22-27 (2011).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan edilir.

Denervasyon bağlı iskelet kas atrofi tibial sinir kesisi modeli sıçanlarda yaygın olarak kullanılan ve iyi onaylanmış modelidir. Biz araştırmacı genetik farenin varlığını yararlanmak ve kas kütlesi 7,8 düzenlenmesinde çok önemli proteinlerin yokluğunda in vivo olarak kas atrofisi süreci çalışma sağlar farenin olarak kullanımı Bu modeli adapte edilmiştir. Gastroknemius ve soleus kas, bu modelde denerve hem de böylece daha sonraki moleküler analiz için mükemmel kalitede mRNA ve proteini, kolayca ve hız...

Travmatik periferik sinir yaralanma, hastalık veya farmakolojik müdahale nedeniyle İskelet kası denervasyon, kas gönüllü kasılma fonksiyonu hemen kaybına neden olur. Kas eş zamanlı atrofi başlar ve zamanında, kaliteli reinnervation 1,2 oluşursa bu atrofi tersine çevrilebilir. Reinervasyon yokluğunda, myofiber atrofi ilerler ve geri dönüşü olmayan bir biyolojik kas değişiklikleri kas fibroz ve myofiber ölüm meydana gelir. Burada farelerde tibial sinir transection modeli, denervasyon-bağlı iskelet kas atrofisi ve fibrozis bir model, göstermektedir. Bu model gastroknemius ve soleus kaslarında in vivo kas atrofi altında yatan, fizyolojik hücresel ve moleküler biyolojik mekanizmaları incelemek için bilim adamları sağlar. Tarihsel sıçanlarda ağırlıklı olarak kullanılır iken, nakavt ve özellikle transgenik fare hatları, bu modelin daha yeni uygulama, araştırmacılar kendi rolünü değerlendirmenizi sağlarin vivo indüksiyon, geliştirme ve bakım veya alternatif çözümü, kas atrofi ve fibrozis ilgi özellikle protein (ler). Tibial sinir kemirgen bacak bir karma motor duyusal periferik sinir ve siyatik sinirin üç terminali dallarından biridir. Tibial sinir kesisi gastroknemius, soleus ve plantaris kas (ve posterior tibial, fleksör digitorum longus ve fleksör hallicus longus dahil olmak üzere ayağın üç küçük derin fleksör kaslar) denervates ve sıçanlarda 3,4 bir iyi standart ve onaylanmış model . Gastroknemius ve soleus kasları kolayca tibial sinir kesisi, sabit ve eğitim amacıyla kas RNA ve protein çıkarılması için dondurulmuş kas histoloji ve kas lifi morfometrik, veya flash değerlendirilmesi için işlenmiş, örneğin, sonrası seri zaman noktalarında disseke edilebilir kas atrofi düzenleyen hücresel sinyal ağları. Gastrocnemius kas karışık elyaf tipi kas (tip I ve tip II, tip II, ancak ağırlıklı olarak) ve soleus kasının ve böylece 5,6 değerlendirilmesi için hızlı ve yavaş hem kasılan kas sağlayarak, tip I lifleri büyük bir kısmı oluşmaktadır. Tibial sinir kesisi modeli (ay hafta) kısa vadeli (gün) 7 ve uzun vadeli hem de 4,8 de denervasyon bağlı kas atrofi süreci çalışmak için uygundur. Siyatik sinir transeksiyonu modeli (genellikle kemirgenlerde kullanılan denervasyon bağlı kas atrofi bir ikinci model) aksine, tibial sinir kesisi bir daha çekici model yapımı, hayvan daha az morbidite neden olur. Tibial sinir kesisi siyatik sinirin peroneal ve sural sinir dalları olduğu gibi bırakır ise siyatik sinir kesisi böylece koruyarak, 2 ambulasyon için hayvanın yeteneğini bozarak, bacak (diz altında) ve ayak tüm kasları denervateshedef kas ve duyusal toprakları. Fare plantar esnek yapamaz veya ayak invert, ancak kolayca ambulasyon yapabiliyor ve ağırlığı böylece önemli ölçüde modelin morbidite azalan, her iki arka ayakları üzerinde eşit taşımaktadır. Yürüyüş desen değerlendiren yürüme analizi çalışmaları tibial ve siyatik sinir yaralanmaları sonrasında sıçanlarda yapılan ve ayak izi ve yük daha tibia yaralanma 9,10 ile korunmuş olduğunu göstermektedir. Edilmiştir Çalışma tasarımı 3 gerektiriyorsa, ek olarak, tibial sinir transection modelinde, peroneal sinir daha sonra bir noktada seferber edilebilir ve gecikmiş reinnervation kaynağı olarak aktarılır. Buna karşılık, siyatik sinir kesisi modelinde gecikmeli reinnervation çok önemli modelin teknik zorluk artan ve yetenekli cerrahlar onun kullanımını sınırlayan, siyatik sinir açığı bir sinir greft kullanılması gerekmektedir. Ise tibial sinir transeksiyonu model rbu innervates tibial sinir ve baldır kasları hem hayvan cerrahi steril ameliyat tekniği ile operatörün aşinalık, equires cerrahlar değil, ya da çok hayvan cerrahi deneyimli kişiler, kolayca bu model ana böylece, manipülasyon için kolay erişilebilir ve tanımlanabilir .

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reaktifler ve Malzemeler</td></tr><tr><td>10-0 Naylon sütür</td><td>Ethicon</td><td>2850G</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Vicryl sütür</td><td>Ethicon</td><td>J553G</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Equipment</td></tr><tr><td>Spring mikro diseksiyon makası</td><td>İnce Cerrahi Aletler</td><td>15021-15</td><td></td></tr><tr><td>Ultra ince forseps</td><td>İnce Cerrahi Araçlar</td><td>11370-40</td><td></td></tr><tr><td>Kilitlenmeyen mikro iğne tutucu (sürücü)</td><td>İnce Cerrahi Aletler</td><td>12076-12</td><td></td></tr><tr><td>Yaylı ekartör</td><td>İnce Cerrahi Aletler</td><td>17000-02</td><td></td></tr></tbody></table>

tibial sinir transeksiyonu - farelerde denervasyon bağlı İskelet kas atrofi için bir standart model

Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice

Tibial sinir kesisi modeli kemirgenlerde denervasyon bağlı iskelet kas atrofisi bir, iyi tolere doğrulanmış ve tekrarlanabilir bir model. Geliştirildiği ve daha büyük boyutu nedeniyle sıçan yaygın olarak kullanılmasına rağmen, farelerde tibial sinir siyatik sinirin peroneal ve sural sinir dalları sağlam ve böylece muhafaza bırakarak, kolayca ezmeyin veya kesisi ya ile manipüle edilebilir yeterince büyük hedef kasları. Bu nedenle, bu model siyatik sinir transeksiyonu modeli daha az morbidite ve ambulasyon engel uyaran avantajları sunuyor ve aynı zamanda araştırmacılar genetik olarak farelerde kas atrofi süreci düzenleyen, fizyolojik hücresel ve moleküler biyolojik mekanizmalar çalışma sağlar. Tibial sinir gastroknemius, soleus ve plantaris kasları sağlar, bu yüzden onun transection hızlı kasılan tip II lifleri ve / veya yavaş kasılan tip oluşan Denerve iskelet kası çalışma izin Ilifler. Burada C57Black6 fare tibial sinir transeksiyonu modeli göstermektedir. Biz parafine gömülü histolojik bölümlerde kas ağırlık ve lif tipi özel kesit alanı ölçerek 1, 2, bir temsilci kas olarak, gastroknemius kas atrofi değerlendirmek ve 4 hafta sonrası denervasyon hızlı kasılan miyozin için immunohistokimyasal.

<html> Tibial sinir kesisi gastroknemius, soleus ve buzağı plantaris kasları denervates. Burada bir temsilci kas olarak, gastroknemius kas atrofi gelişimini değerlendirmek. Gastrokinemius kası, 1, 2 ya da 4 hafta boyunca denerve 2-3 aylık C57Black 6 fareleri (Jackson Laboratuarları) hasat edilmiştir. Kas ağırlıkları kademeli olarak zaman içinde tip II hızlı kasılan kas lifleri (Şekil 2), enine kesit alanı yapar (Şekil 1) azalır. Gastrokinemius karışık lif tipi kas (I ve tip II tip), ama ...

Tibial sinir kesisi modeli iskelet kas atrofi bir, iyi tolere doğrulanmış ve tekrarlanabilir bir model. Model cerrahi protokol C57Black6 farelerde açıklanan ve gösterilmiştir.

Tibial Sinir transeksiyonu - Farelerde denervasyon bağlı İskelet Kas Atrofi için bir Standart Model

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. ...

Bu videonun genel amacı, farelerde iskelet kası atrofisinin tibial sinir transeksiyon modelini göstermektir. Bu işlem, siyatik sinirin ve onun üç dalı olan tibial, syl ve peroneal sinirlerin izole edilmesiyle gerçekleştirilir. İzole edildikten sonra tibial sinir transektedilir.Denervasyon sonrası yara kapatılır ve hayvanın durumu yakından takip edilir. Sonuç olarak, denervasyon sonrası kas kütlesinde kademeli bir azalma gösteren örnekler elde edilir. Denervasyonla tetiklenen iskelet kası atrofisinin tibial sinir transection modeli, sıçanlarda yaygın olarak kullanılan ve iyi valide edilmiş bir modeldir ve siyatik sinir transectionu ile ilişkili olan modele göre çok daha düşük morbiditeye sahiptir.Bu modeli farelerde kullanım için uyarladık ve burada bunu göstereceğiz. Bu yöntem, araştırmacının genetiği değiştirilmiş farelerin varlığından yararlanmasına ve hayvanda minimal morbiditeye yol açarken, iskelet kası kütlesinin düzenlenmesi için kritik olan proteinlerin yokluğunda kas atrofisi sürecini incelemesine olanak tanır. İlk olarak, ayak parmağı sıkıştırma testi ile yeterli anesteziyi onayladıktan sonra farenin ağırlığını kaydedin, palpasyon yoluyla siyatik çentiği belirleyin ve lateral uyluk ile kalça bölgesini buradan dize kadar tıraş edin.Ardından, bölgeyi alkol ve pro-iyot ile tekrarlı uygulamalar yaparak temizleyin. Steril eldivenler giyerek, fareyi bir operasyon veya diseksiyon mikroskobu altında yan tarafına yatırın. Siyatik çentiği palpasyon yoluyla belirleyin.Dış uyluk derisini siyatik çentikten dize kadar kesin. Deriyi nazikçe iki yana açın. İnce makas kullanarak, derinin hemen altında bulunan dış uyluğun düz yüzeysel kası olan biceps femoris kasını tanımlayın.Biceps femoris kasını kas lifleri boyunca ayırın ve bir yaylı ekartör yerleştirin. Siyatik siniri ve dallarını açığa çıkarmak için biceps femoris kasının hemen altındaki siyatik siniri tanımlayın. Siyatik siniri, karakteristik parlak beyaz rengiyle tanımlanabilir ve çapı yaklaşık 0.8 milimetredir.Siyatik çentikten dize kadar uzanır ve popliteal fossa seviyesinde tibial, peroneal ve sal sinirlere ayrılır. Tibial siniri, peroneal ve sal sinir dallarından ultra ince penset ve yaylı mikro diseksiyon makasları ile nazikçe ayırın. Tibial sinir en büyük dal olup genellikle merkezde yer alır.Siyatik sinirin ve dallarının nazikçe ele alınması, bu prosedürün başarısı için temeldir. Sal ve perineal sinir dallarının zarar görmemesine veya gerilmemesine dikkat edin. Bu dalların zarar görmesi veya gerilmesi, hedef organlarının da denervasyonuna yol açacaktır.Ultra ince pensle siniri sadece dış adventisya tabakasından tutmak ve siniri gevşek bırakmak, geçici denervasyon için sinir ezilmesini ve traksiyon yaralanmasını önleyecektir. İki ila dört hafta içinde tam iyileşme beklendiği durumlarda, tam ve kalıcı denervasyon için tibial siniri ultra ince pensle 15 saniye boyunca ezin. Tibial siniri mikro disseksiyon makasıyla mümkün olduğunca distalden kesin. Tam denervasyon gerekiyorsa popliteal damarlardan dikkatlice kaçının.Transekte edilen tibial sinirin ucunu 10 T naylon ile biceps femoris kasının ön yüzeyine dikin ve gastroknemius ile soleus kaslarının aberrant reinnervasyonunu önlemek için biceps femoris kasını beş T Vicryl ile yeniden yaklaştırın. Denervasyon tamamlandığında, cildi sürekli beş sıfır Vicryl dikişi ile kapatın. Hazır olduğunuzda, inhale anestezik maddeyi kapatın ancak oksijen akışını sürdürün.Tek başına analjezik uygulandıktan sonra, fareyi altlığı olmayan, sıcak ve temiz bir kafeste barındırın. Fare hareket etmeye başlayana kadar doğrudan gözlem altında tutun. Tamamen iyileştiğinde, fareyi bol miktarda yumuşak altlığı olan, temiz ve düz tabanlı bir kafese aktarın.Operasyon yapılan ekstremite ve ayak, dekubitus topuk ülserlerinin gelişimi veya kemirme belirtileri açısından günlük olarak kontrol edilmelidir; küçük sorunlar, iyot gibi topikal antibiyotikler veya antiseptikler ile yönetilebilir. Hayvanın ötanazisini gerektiren bitiş noktası göstergeleri; kilo kaybı, yetersiz öz bakım belirtileri ve kambur duruştur. Ayrıca, yara açılması olan veya bir ila iki haftalık yara bakımına rağmen iyileşmeyen ülserleri olan hayvanlar da sakrifiye edilmelidir.Ek olarak, ameliyat sonrası zaman noktasında aşırı ağrı çeken hayvanlar ötanazi edilir ve analiz için istenen dokular toplanır. Ötanaziden sonra, hem ameliyat edilen hem de karşıt kontrol bacaklarının medial kısımlarını tıraş edin ve alkolle temizleyin; bir diseksiyon mikroskobu altında çalışarak, ameliyat edilen ekstremitede medial baldır derisini ayak bileğinden dize kadar ve ayak bileği çevresini dairesel olarak bir skalpel ile kesin. Ardından, deriyi kas üzerinden nazikçe çekerek proksimale, uyluğa doğru ayırın.Bacağın tüm kaslarını açığa çıkarmak için, bacağın posterior kısmında dizden ayak bileğine kadar uzanan baldır kası olan gastro kasını tanımlayın. Ardından, dizin medial kısmında, gastro kasının proksimalinde biceps femoris kasının distal insersiyosunu bulun. Biceps femoris, distal insersiyosunda ince ve film benzeri görünür ve makas ile künt uç diseksiyonu kullanılarak gastro kasının en proksimal kısmının üzerinde yer alır.Biceps femoris'in distal insersiyonunu gastroknemius kasından nazikçe ayırın. Distal insersiyonunun kalkaneusa eklenmesiyle birlikte, gastroknemius kası aşil tendonuna doğru daralır. Beyaz ve lifli görünen aşil tendonunu tanımlayın.Aşil tendonunu pensle tutun. Gastroknemius kasını tutmamaya veya ezmemeye dikkat ederek aşil tendonunu kalkaneus yapışma noktasından ayırın. Tendonu tutmaya devam ederek makas yardımıyla, çok nazik bir traksiyon uygulayarak, soluk kırmızı gastroknemius kasını distal yapışma noktasından dizdeki başlangıç noktasına doğru daha koyu kırmızı olan soleus kasından nazikçe kaldırın.Süreci kolaylaştırmak için, gastrocnemius kasının başlangıç noktasını medial ve lateral femur kondillerinden ayırarak kası bacaktan diseke edin. İşlem için makas kullanın. Kası ezmemeye dikkat edin.Soleus kası, gastrosun hemen altında artık net bir şekilde görülecektir. Soleus kasını, aşil tendonundaki yapışma noktasından alt baldırın arka kısmındaki başlangıç noktasına kadar kaldırın. Çıkardıktan sonra, kasları hassas bir teraziyle ayrı ayrı tartın.Ardından, kasları dikey olarak ikiye ayırın; yarısını şok dondurma ve sıvı azot için, diğer yarısını ise histoloji için kullanın. Son olarak, kontrol gastro ve soleus kaslarını toplamak için bu prosedürleri kontrol edilen etkilenmemiş tarafta tekrarlayın. Gastro kasları, denerve ve karşıt kontrol arka ekstremitelerden bir, iki veya dört hafta sonra toplanmış ve oran olarak ifade edilmiştir.Denervasyon, zamanla kas kütlesinde progresif bir kayba neden olmuştur. Miyo fiberlerin kesit alanı, burada görüldüğü gibi immün boyama sonrası ölçülmüştür. Hızlı kasılan tip iki fiberler kahverengi boyanırken, yavaş kasılan tip bir fiberler beyaz boyanmaktadır.Twitch lifleri, denerve edilen kaslarda kesit alanında progresif bir azalma göstermiştir. Dört hafta boyunca. Bu videoyu izledikten sonra, farelerde tibial sinir transeksiyonunu gerçekleştirebilmeniz gerekir. Bu yöntem, denervasyonla indüklenen iskelet kası atrofisinin tekrarlanabilir, sağlam ve iyi valide edilmiş bir modelini sağlar.

tibial-nerve-transection-standardized-model-for-denervation-induced

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Ayrılan Sinir Sakatlık hayvan modeli kalan sural sinir zedelemeden, siyatik sinirin kısmi denervasyon aşağıdaki tibial ve peroneal sinir dallarının lezyon periferik nöropatik ağrı bir fare modeli olarak burada açıklanmıştır. Mekanik allodini kaynaklanan davranış değişikliği von Frey filamentler miktarı.

Fare İndüklenmiş Mekanik allodini ayrılan sinir hasarı (SNI) Model

Kaynak: Brakkee, E. M., et al. Sıçanlarda Tibial Nöroma Transpozisyon Modelinde Cerrahi ve Davranışsal Test. J. Vis. Uzm.  (2023). Bu videoda, bir sıçan tibial nöroma transpozisyonu (TNT) modeli oluşturmak için bir prosedür gösterilmektedir. Anestezi uygulanmış bir sıçanın arka bacağındaki tibial siniri açığa çıkardıktan sonra, siniri kesin. Daha sonra, deri altı bir tünel oluşturun, kopan siniri tünelden geçirin ve yerine dikin. Reinnervasyon için bir hedefin yokluğunda, kopmuş sinirden...

Tibial Nöroma Transpozisyonunun Sıçan Modelinin Oluşturulması

Farede fasiyal sinir üzerinde bir kesi veya ezme aksotomisinin nasıl yapılacağını detaylandıran bir cerrahi protokol sunuyoruz. Fasiyal sinir aksotomisi, sinir yaralanmasına fizyolojik yanıtı incelemek ve terapötik teknikleri test etmek için kullanılabilir.

Farelerde Yüz Sinir Aksotomi: Sakatlık Motonöron Yanıtı Eğitim için Bir Model

Motor geri kazanımın değerlendirilmesi deneysel periferik sinir çalışmalarında kıyaslama sonucu ölçüsü olmaya devam etmektedir. Sıçandaki tibialis ön kasının izometrik tetanik kuvvet ölçümü, siyatik sinir kusurlarının yeniden yapılandırılmasından sonra fonksiyonel sonuçları değerlendirmek için paha biçilmez bir araçtır. Yöntemler ve nüanslar bu makalede ayrıntılı olarak açıklanmıştır.

Sıçandaki Tibialis Ön Kasının Maksimum İzometrik Tetanik Kuvvet Ölçümü

Diz ekstensor maksimal gücünün ölçülmesi yaşlanma, hastalık, yaralanma ve rehabilitasyona fonksiyonel adaptasyonları anlamak için zorunludur. In vivo diz uzatma izometrik tepe tetanik tork tekrar tekrar ölçmek için yeni bir yöntem sunuyoruz.

Farelerde Diz Ekstensör Kas fonksiyonunun in vivo ölçümü

Modifiye cerrahi, hem ortak peroneal hem de sural sinirleri yaralamak için sadece bir ligasyon ve bir kesi gerektiren fare veya sıçan korunmuş sinir yaralanması modeli için basitleştirilmiş bir yöntemdir.

Farelerde Nöropatik Ağrının Modifiye Edilmiş Korunmuş Sinir Yaralanması Cerrahisi Modeli

Bu protokol, tibial sinirin lezyonunu ve ardından proksimal sinir ucunun subkutan pretibial veya lateral pozisyona doğru transpozisyonunu gerektiren tibial nöroma transpozisyon modelini tanımlar. Nöroma ağrısı ve plantar hiperaljezinin davranışsal testleri, Von Frey monofilamentleri kullanılarak ölçülür.

Sıçanlarda Tibial Nöroma Transpozisyon Modelinde Cerrahi ve Davranışsal Test

Bu protokol, farelerde diz altı amputasyonun nasıl yapılacağını ve amputasyonla ilişkili ağrıyı tedavi etmek ve önlemek stratejilerini araştırmak ve amputasyonla ilişkili ağrı mekanizmalarını daha iyi anlamak için hemen hedefli kas reinnervasyonu (iTMR) yapılmasını gösterir.

Fare Arka Diz Altı Amputasyon Modeli ve Hemen Hedeflenmiş Kas Reinnervasyonu

Bu protokol, insan nöroma ağrısını taklit etmek ve cerrahi tedavileri değerlendirmek için duyu sinirlerini kullanan tekrarlanabilir bir sıçan modeli sunar ve translasyonel nöroma araştırmaları için değerli bir araç sunar.

Safen Sinir Yoluyla Hedeflenen Kas Reinnervasyonunu Kullanarak Nöroma Ağrısı Tedavi Seçeneklerini İncelemek için Yeni Cerrahi Kemirgen Modeli

İzole İskelet Kası Myo-mekanik Analizi

Öğrenin, farelerde tibial sinir transeksiyonu ile denervasyona bağlı iskelet kas atrofisini incelemek için standart bir model oluşturmayı. Bu yöntem, kas kütlesi kaybını minimal morbidite ile değerlendirir.

Tibial Sinir transeksiyonu - Farelerde denervasyon bağlı İskelet Kas Atrofi için bir Standart Model

Daha fazla video keşfet