Name: Yetişkin Zebra balığı Gavaging (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 9 s
Description: Keşfedin yetişkin Danio rerio gavage tekniğini, patojenik organizmaların oral-fekal yolla bulaşmasını incelemek için. Bu yöntem, çözeltilerin güvenli ve hassas dozlamasını sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Rockefeller Üniversitesi Karşılaştırmalı Biyobilim Merkezi bu projeye destek sağladı. Teknik yardım için Janelle Monnas teşekkür ederim.

1. Anestezik sıvısının hazırlanması <ol><li> , Bir stok çözeltisinden veya toz şeklinde ya da ikinci sistem su içinde 150 mg / MS-222, L içinde bir çözeltisi hazırlandı. </li><li> Bir pH metre kullanarak pH doğrulayın. </li><li> PH 7-7.5 arasında olana kadar sodyum bikarbonat tampon olarak gerekli. </li><li> Iyileşme süresi içeri kurtarmak için balık genellikle 1 dakikadan daha az olduğu için MS-222 ücretsiz sistem su tankı hazırlayın. </li></ol> 2. Gavaj Aparatı hazırlanması <ol><li> Ağzından balık bağırsak ampul yaklaşık uzunluğu biraz daha fazla açık 22-G implantasyon boru kesin. Başlangıçta, gerekli uzunluğu en iyi tahmin almak için kullanılan her yeni grup için bir balık anestezi öneririz. </li><li> Bu güvenli ve ayırma riski yoktur kadar ½ inç 22-G iğne üzerine kesme açık implantasyon boru itin. Bir ½ 22-C iğne mevcut değilse, uygulama için daha uzun bir iğne kestiroximately bu uzunluğu. </li><li> Tamamlandığında, kateter implantasyon boru 1 iğne ucundan cm, ya da balık küçük ise daha kısa uzanmalıdır. </li><li> 1-cc luerlok şırıngaya 22-G iğne hub takın. </li></ol> 3. Gavaj için hazırlanıyor <ol><li> Bir neşter bıçak ile bir süngeri bir oluk kesin. </li><li> MS-222 ücretsiz sistemi su sünger bekletin. </li><li> Düz bir yüzeye nemlendirilmiş sünger yerleştirin. </li><li> 22-G kateter tüp ve 1-cc şırınga içine sonda için uygun 5 ul çözüm hazırlayın. </li></ol> 4. Anestezi ve Gavaj <ol><li> Hızlı işlem öncesi en az 24 saat balık. </li><li> Onun düzeltilmesi refleks kaybeder ve bir kuyruk yüzgeci tutam yanıt vermiyor, ama operküler hareket tutar kadar MS-222 çözüm balık yerleştirin. Bu genellikle 2-3 dakika sürer. </li><li> Anestezi çözüm balık çıkarın ve içine yerleştirinBaş hafifçe sünger çıkıntılı ile sünger oluk, ama solungaçları sünger ile kaplı. </li><li> Dikey pozisyona sünger taşıyın. </li><li> 22-G kateter boru kullanarak Zebra balığı ağzına açın. </li><li> Ucu solungaçları (yaklaşık 1 cm ya da boru uzunluğu) Son kadar yavaşça boru takın. Implantasyon boru zorunda olması gerekmez. Direnç tüp solungaç kemer veya kalp isabet olabilir göstermektedir. </li><li> Direnç varsa, yavaşça, geri yeniden konumlandırmak ve yeniden deneyin. </li><li> Yavaş yavaş malzeme enjekte edilir. </li><li> Enjekte ederken, çözüm solungaçları veya ağız yoluyla çıkmak olmadığından emin olun. </li><li> Alım deposunun içine sünger ve yerden balık çıkarın. </li><li> Kurtarma tipik olarak en az 1 dakika içinde meydana gelir ve dik yüzme ve dengenin muhafaza balık tarafından belirtilir. </li><li> Aktif m kovma balık görselleştirme tarafından gösterildiği gibi yetersizliği için balık Monitörağzında, ya da hiç operküler hareketinden aterial. </li><li> Onlar iyileşti kez balık düzenli tanka iade edilebilir. </li></ol>

<ol><li>Royes, J. -A. B., Chapman, F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoyes%2C+J-AB+%22Preparing+Your+Own+Fish+Feeds%22">Preparing Your Own Fish Feeds</a>. , Department of Fisheries and Aquatic Sciences, Florida Cooperative Extension Service, Insitute of Food and Agricultural Sciences, University of Florida. (2009).</li>
<li>Gomez-Gil, B., Cabanillas-Ramos, J., Paez-Brambila, A., Roque, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+of+the+bioencapsulation+of+enrofloxacin+and+oxytetracycline+in+Artemia+fransciscana+Kellogg%5BTitle%5D)+AND+%22Aquaculture%22%5BJournal%5D)">Standardization of the bioencapsulation of enrofloxacin and oxytetracycline in Artemia fransciscana Kellogg.</a> Aquaculture. 196, 1-12 (1906).</li>
<li>Langdon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microparticle+types+for+delivering+nutrients+to+marine+fish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Aquaculture%22%5BJournal%5D)">Microparticle types for delivering nutrients to marine fish larvae.</a> Aquaculture. 227, 259-275 (2003).</li>
<li>Langdon, C., Nordgreen, A., Hawkyard, M., Hamre, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+wax+spray+beads+for+delivery+of+low-molecular+weight%2C+water+soluble+nutrients+and+antibiotics+to+Artemia%5BTitle%5D)+AND+%22Aquaculture%22%5BJournal%5D)">Evaluation of wax spray beads for delivery of low-molecular weight, water soluble nutrients and antibiotics to Artemia.</a> Aquaculture. 284, 151-158 (2008).</li>
<li>Zang, L., Morikane, D., Shimada, Y., Tanaka, T., Nishimura, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Protocol+for+the+Oral+Administration+of+Test+Chemicals+to+Adult+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">A Novel Protocol for the Oral Administration of Test Chemicals to Adult Zebrafish.</a> Zebrafish. 8, 203-210 (2011).</li>
<li>Goldsmith, J. R., Jobin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Think+Small%3A+Zebrafish+as+a+Model+System+of+Human+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedicine+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Think Small: Zebrafish as a Model System of Human pathology.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. , (2012).</li>
<li>Tysnes, K. R., Jorgensen, A., Poppe, T., Midtlyng, P. J., Robertson, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+expermients+on+use+of+zebrafish+as+a+laboratory+model+for+Giardia+duodenalis+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Parasitologica%22%5BJournal%5D)">Preliminary expermients on use of zebrafish as a laboratory model for Giardia duodenalis infection.</a> Acta Parasitologica. 57, 1-6 (2012).</li>
<li>Marie, B., Huet, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+a+toxic+cyanobacterial+bloom+%28Planktothris+agardhii%29+on+fish%3A+Insights+from+histopathological+and+quantitative+proteomic+assessments+following+the+oral+exposure+of+medaka+fish+%28Oryzias+latipes%29%5BTitle%5D)+AND+%22Aquatic+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Effects of a toxic cyanobacterial bloom (Planktothris agardhii) on fish: Insights from histopathological and quantitative proteomic assessments following the oral exposure of medaka fish (Oryzias latipes).</a> Aquatic Toxicology. 114-115, 39-48 (2012).</li>
<li>Canadian Council on Animal Care. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22CCAC+guidelines+on%3A+the+care+and+use+of+fish+in+research%2C+teaching+and+testing%22">CCAC guidelines on: the care and use of fish in research, teaching and testing</a>. , CCAC. Ottawa, Ontario, Canada. (2005).</li>
<li>Harper, C., Lawrence, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarper%2C+C+%22The+Laboratory+Zebrafish%22">The Laboratory Zebrafish</a>. , CRC Press. Boca Raton, Florida, USA. (2011).</li>
<li>De Tolla, L. J., Srinivas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+Care+and+Use+of+Fish+in+Research%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the Care and Use of Fish in Research.</a> ILAR Journal. 37 (4), (1995).</li>
<li>Topic Popovic, N., Strunjak-Perovic, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tricaine+methane-sulfonate+%28MS-222%29+application+in+fish+anaesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Ichthyology%22%5BJournal%5D)">Tricaine methane-sulfonate (MS-222) application in fish anaesthesia.</a> Journal of Applied Ichthyology. 28, 553-564 (2012).</li>
<li>Field, H. A., Kelley, K. A., Martell, L., Goldstein, A. M., Serluca, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+gastrointestinal+physiology+using+a+novel+intestinal+transit+assay+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+%26+Motility%22%5BJournal%5D)">Analysis of gastrointestinal physiology using a novel intestinal transit assay in zebrafish.</a> Neurogastroenterology & Motility. 21, 304-312 (2009).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Önem Bu teknik bir gelişmedir ve yetişkin zebrafish gavaging için iki daha önce açıklanan teknikleri üzerinde çeşitli avantajlar sağlamaktadır. İlk olarak, balık tutmaya bir sünger kullanımı iki kişi gerektiren bir önce açıklanan teknik aksine bir kişi, yordamı gerçekleştirmek için izin verir. 7 İkincisi, kateter implantasyon tüp nedeniyle ikincil travma en aza indirmek yardımcı olabilir, IV kateterler daha esnektir benzer künt uçlu şırınga kullanarak delinmesi. 7,8 Üçüncü...

Zebra balığı için sözlü bileşikler yönetmek için mevcut yöntemler yönetmek bileşikler besleme üzerine üst kaplı, jelatin diyetler 1 karışık, tuzlu su karidesi 2 içine bioencapsulated, lipid kapsüllü diyetler 3, mum sprey boncuk 4 ve gluten tabanlı diyetler ile karışık içerir. 5 Sınırlamalar oral bu yöntemler yüksek yıkama oranları ve bireysel balık tarafından eksik veya öngörülemeyen bileşik tüketimi içerir. Bulaşıcı hastalık çalışmalarında, balık uygulanan enfektif doz çalışmasında başarı için kritik olabilir bilerek çünkü bu değişkenler sorunludur. Ayrıca, önceki çalışma su banyoları uygulanan bazı bileşikler çalışılan olabilir bağırsak etkileri ortaya çıkmadan önce solungaçları Zebra balığı için toksik lezyon neden olduğunu göstermiştir. 6 Sonda ak ile bir ürünün kesin miktarda yönetmek için diğer laboratuvar hayvan türlerinde kullanılan standart bir yöntemdirbiyomedikal ve ilaç araştırma çalışma için nown konsantrasyon. Ancak son zamanlarda literatürde tarif edilmiştir zebrabalıkları gavaging için yöntemler vardır. Açıklanan bir teknik çözüm 5 ul teslim etmek için bir 2-20 ul pipet bağlanmış bir 24 G kateter kılıf kullanılarak, iki kişilik bir yöntemdir. Tarif 7 yöntem, birinci ve ikinci bir mortalite oranı% 8.7 ve% 39 oldu sırasıyla deneme; mortalitenin en gebe kadın bağlandı. İkinci sonda tekniği 5 medakas çözüm ul (Oryzias latipes). Mortalite 8 bilgiler bulunmuyordu ve sonda tarif değildi yerine tam süreci yönetmek için kullanılan künt uçlu sonda şırınga nitelendirdi. Kadar balığın vücut ağırlığının% 1 Hayvan Bakım ve Laboratuar Zebra balığı, günü Kanada Konseyi&#39;ne göre sonda ile verilebilir. 9,10 Amacımız com hassas cilt teslim bir tekrarlanabilir, güvenli ve etkili bir yöntem geliştirmektikilo sözlü her iki cinsten yetişkin zebrafish ve üreme her aşamasında. Bu prosedür, bir bileşiğin doğru oral dozlama gerekli olduğu herhangi bir çalışma için geçerli olacaktır.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Equipment</td></tr><tr><td>A sünger</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1-cc luer kilit şırınga</td><td>Becton Dickinson Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>22-G Micro-Renathane Implantasyon tüpü (kesik)</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 22-G iğne (gerekirse kesilir)</td><td>Becton Dickinson Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pH metre</td><td>Hanna probu</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 neşter bıçağı</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td colspan="4">Reagent/Material</td></tr><tr><td>MS-222 (Finquel)</td><td>Argent Laboratories</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

yetişkin zebra balığı gavaging

Gavaging Adult Zebrafish

Zebra balığı biyomedikal araştırma in vivo modelde önemli bir hale gelmiştir. Etkili yöntemler geliştirilmiş ve bilimsel araştırma için çözümler bileşikler veya acenteleri sunmak için kullanılmalıdır. Yetişkin zebrafish için sözlü bileşikler yönetmek için mevcut yöntemler balık gönüllü tüketimi değişkenlik nedeniyle yanlış. Bir sonda prosedürü biyomedikal araştırmalarda çalışma için Zebra balığı için enfeksiyöz ajanların hassas miktarlarda sunmak için geliştirilmiştir. Yaş 6 ay içinde Yetişkin Zebra balığı 150 mg / L ile anestezi edildi MS-222 tamponlu ve bir kesim 22-G iğne ucu bağlı esnek kateter implantasyonu boru kullanarak çözüm 5 ul zorla ağız yolundan verilmiştir. Borunun ucu solungaçları (yaklaşık 1 cm) uzamasına kadar esnek boru zebrabalıkları ağız boşluğu içine düşürülmüştür. Bu çözelti daha sonra yavaş yavaş bağırsak içine enjekte edildi. Bu yöntem, balık sorunsuz kurtarma ile, zamanın% 88 etkili olmuştur. Bubir kişi bir saat içinde 20-30 balık sonda gibi prosedürü de etkilidir. Bu yöntem, tam olarak yetişkin zebrabalıkları bulaşıcı hastalıklar çalışmalar ya da diğer bileşikler çalışmaları için ajanlar yönetmek için kullanılabilir.

Gebe kadın dahil olmak üzere balık, her iki cinste başarıyla (Şekil 1) zorla ağız yolundan verilmiştir edildi. Başarılı bir prosedür solungaçlar veya ağız çıkarken görülen herhangi bir sıvı ile bir dakikadan az sürer. Boru kateter çıkarıldıktan görülen kan ile, kuvvet olmadan, kolayca girer. Prosedür yaklaşık 10 dakika balık başına 30-45 saniye bir ortalama ile, 3 ile 4 balık sonda gerektiren, hızlıdır. Balığı herhangi bir çözümün en fazla 5 ul zorla ağız yolundan verilmişti...

Bir hayvan modeli olarak zebrabalıkları artan kullanımı bileşikler ve çözeltiler bilinen miktarlarda teslimat için etkili yöntemlerin geliştirilmesini gerektirmektedir. Aşağıda açıklanan sonda prosedür yetişkin zebrafish için güvenli ve verimli bir şekilde, güvenilir bir çözüm hassas hacimleri sözlü teslimat için izin verir.

Yetişkin Zebra balığı Gavaging

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

Bu videonun genel amacı, yetişkin zebra balıklarına sonda uygulama tekniğini göstermektir. Bu tekniği, oral-fekal yolla bulaşan patojenik organizmaları incelemek amacıyla geliştirdik. Yöntem, kesin miktarda solüsyon iletmek için kullanılabilir.Yetişkin zebra balıkları üzerinde yapılacak çalışma için. Tüm süreç dört adımdan oluşmaktadır. İlk adım, gavage aparatının hazırlanmasıdır.İkinci adım, balıkları litre başına 150 miligram tamponlanmış MS 222 ile anestezi altına almaktır. Üçüncü adım, balıklara hazırladığınız çözeltiyi gavage yoluyla vermektir. Son adım ise balıkların derlenme süreci ve yan etkilerin izlenmesidir.Gavage aparatını hazırlamak için, 22 gauge implantasyon tüpünü balık için uygun uzunlukta kesin, 22 gauge iğneye takın ve 1 ml lure lock şırıngaya sabitleyin. Çözeltiniz hazır olduğunda, aparatla aspire edilebilir. Zebra balığına uygulama yapmak için, balık süngere yerleştirildiğinde güvenli bir şekilde tutulması amacıyla, bir neşter ucu veya makasla süngere bir yarık açılmalıdır.Sünger, nemli kalması için önceden sistem suyunda bekletilmelidir. İşlem tamamlandıktan sonra balıkları yerleştirmek için anestezik içermeyen sistem suyundan oluşan bir derlenme tankı da hazı

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Standart embriyo mikroenjeksiyonu ve stereomikroskopi ekipmanları kullanılarak, zebrafish larvalarının mikrogavage işlemi için yeni bir yöntem sunuyoruz. Mikrogavage işleminin, çeşitli materyallerin kontrollü miktarlarda özellikle zebrafish larvalarının intestinal lümenine iletilmesi için kullanışlı, güvenli ve etkili bir teknik olduğunu gösteriyoruz.

Zebra balığı larvalarının Microgavage

Zebra balığı embriyo gelişim biyoloji araştırma için mükemmel bir model. Embriyogenez sırasında, zebra balığı örnek gözlem ve analiz için üç-boyutlu zorluklar sunuyor, bir yumurta sarısı kitle ile gelişir. Bu protokol situ (DİLERİZ) lekeli Zebra balığı embriyo örnekleri içinde bütün montaj iki-boyutlu düz monte hazırlıkları nasıl oluşturulacağı açıklanır.

Tüm Dağı ile Zebra balığı Embriyo örnekler Vitray gözlenmesi ve Analiz Daire Dağı Hazırlık<em&gt; In situ</em&gt; Melezleme

Kardiyovasküler araştırmalar için zebra balığının kullanımı, yetişkin kalpleri üzerinde yapılan araştırmalara doğru genişliyor. Bu uygulamalar için, kalp dokularının hızlı ve basit bir şekilde izole edilmesi, ölüm sonrası değişikliklerden kaçınmak ve yeterli sayıda numune elde etmek için anahtardır. Burada, yetişkin zebra balığı kalplerini incelemek için hızlı ve tekrarlanabilir bir yöntem açıklıyoruz.

Yüksek verim Uygulamaları Yetişkin Zebra Hearts Kurtarma

Burada, Zebra balığı seks farklılaşması ve bakım soruşturmaları kolaylaştıracaktır larva zebrabalıkları, gonadal doku izole etmek için bir protokol mevcut.

Larva Zebra balığı Gonadal Doku Diseksiyon

Bu iletişim kuralı fluorescently etiketli gıda yüksek üretilen iş moda larva zebra balığı bağırsak yoluyla transit süresini ölçmek için hedeftir.

Yüksek işlem hacmi ölçüm larva zebra balığı kullanarak Gut Transit süre

İskelet kas rejenerasyonu, kas distrofisi gibi birçok kas hastalığında bozulan doku yerleşik kas kök hücreleri tarafından yönlendirilir ve bu da kasın yenilenememesi ile sonuçlanır. Burada, kas hastalığının zebra balığı modellerinde kas yenilenmesinin incelenmesini sağlayan bir protokol açıklıyoruz.

Kas Hastalığının Zebra Balığı Modellerinde Kas Yenilenmesinin İncelenmesi

Bu protokol, karaciğer yenilenmesinin incelenmesini sağlamak için yetişkin zebra balıklarında karaciğerin ventral lobunun çıkarılması prosedürünü açıklar.

Yetişkin Zebra Balıklarında Kısmi Hepatektomi

Bu protokol, mikropsuz (GF) balık embriyoları elde etmek ve bunları larvalardan gençlik aşamasına kadar korumak için, örnekleme ve steril durumlarını tespit etme dahil olmak üzere birincil adımları özetlemektedir. Enfeksiyonlu GF modellerinin kullanılması, mikropların konak sağlığındaki rolünü anlamak için önemlidir.

Larvalardan Gençlik Dönemlerine Kadar Mikropsuz Zebra Balığı Modellerinin Üretimi, Bakımı ve Tanımlanması

Yetişkin Zebra balığı Tüm Böbrek İliği Nakli

Burada yetişkin zebrafish retroorbital enjeksiyon nasıl yapılacağını göstermektedir.

Yetişkin Zebra balığı retro-orbital Enjeksiyon

Keşfedin yetişkin Danio rerio gavage tekniğini, patojenik organizmaların oral-fekal yolla bulaşmasını incelemek için. Bu yöntem, çözeltilerin güvenli ve hassas dozlamasını sağlar.

Yetişkin Zebra balığı Gavaging

Daha fazla video keşfet